濟(jì)南地區(qū)自然人群幽門螺桿菌感染情況及其免疫分型研究

韓玉剛,崔云朋,李 靜,田偉田,曲輝臨△

1.山東電力中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東濟(jì)南 250001；2.山東省職業(yè)衛(wèi)生與職業(yè)病防治研究院，山東濟(jì)南 250002

幽門螺桿菌(Hp)是一種單極、多鞭毛、末端鈍圓、螺旋形彎曲的革蘭氏陰性桿菌[1]。Hp定居于人胃黏膜上皮，感染率在發(fā)達(dá)國(guó)家可達(dá)50%，發(fā)展中國(guó)家甚至更高，是慢性胃炎、消化性潰瘍、胃黏膜相關(guān)性淋巴組織淋巴瘤以及胃腺癌等疾病發(fā)病機(jī)制中的重要因素[2]。1994年，國(guó)際癌癥研究署將Hp感染定為Ⅰ類致癌原[3]。為了解濟(jì)南地區(qū)Hp感染情況，本研究采用免疫印跡法對(duì)2 557例于山東電力中心醫(yī)院進(jìn)行健康體檢的濟(jì)南地區(qū)居民進(jìn)行Hp免疫分型檢測(cè)，以明確不同年齡、性別自然人群的Hp感染率及其表型的分布特征。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年1-12月于山東電力中心醫(yī)院接受健康體檢者2 557例為研究對(duì)象，其中男1 775例，女782例；年齡19～91歲，平均(49±13)歲。所有受檢者根據(jù)年齡分為5組，其中<30歲組187例、30～<40歲組487例、40～<50歲組759例、50～<60歲組625例、≥60歲組499例。

1.2儀器與試劑 Hp抗體分型檢測(cè)試劑盒(免疫印跡法)由深圳伯勞特生物制品有限公司提供。

1.3方法 受檢者采集靜脈血3 mL，分離血清，采用免疫印跡法進(jìn)行檢測(cè)，操作過程嚴(yán)格按照說明書要求。將試劑盒從冰箱取出室溫平衡10～15 min，在放有印跡膜的反應(yīng)槽中加入應(yīng)用液和待檢血清，置搖床上室溫?fù)u動(dòng)30 min，棄去反應(yīng)槽液體，加入洗滌應(yīng)用液反復(fù)洗滌3次，加入酶聯(lián)試劑后室溫?fù)u動(dòng)30 min，棄去反應(yīng)槽液體，加入洗滌應(yīng)用液反復(fù)洗滌3次，加入顯色劑置搖床上室溫?fù)u動(dòng)5 min，顯色；待陽性帶顯色清晰，蒸餾水沖洗3次終止反應(yīng)，將印跡膜上的顯色區(qū)帶與試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)區(qū)帶進(jìn)行比較，檢測(cè)細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白[CagA-116 000(116 000為相對(duì)分子質(zhì)量，其他抗體類同)]、空泡毒素A(VacA-95 000和VacA-91 000)、尿素酶A(UreA-30 000)和尿素酶B(UreB-66 000)水平。相關(guān)抗體顯色程度低于質(zhì)控帶判斷為陰性，反之則為陽性。

分型判斷標(biāo)準(zhǔn)，(1)Hp Ⅰ型：僅CagA、VacA任意一種或兩種抗體同時(shí)陽性；(2)Hp Ⅱ 型：僅UreA和UreB任意一種或兩種抗體同時(shí)陽性，而CagA、VacA抗體為陰性；(3)Hp陰性：CagA、VacA、UreA和UreB抗體均為陰性[4]。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1不同性別受檢者Hp感染情況 男、女Hp總感染率分別為56.4%和59.6%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；男、女Hp Ⅰ型感染率分別為33.5%和35.8%，Hp Ⅱ型感染率分別為56.1%和59.2%，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

2.2不同年齡受檢者Hp感染情況 Hp總感染率為57.4%，其中Hp Ⅰ型感染率為34.2%，Hp Ⅱ型為57.0%。感染率最高為50～<60歲組，為61.1%，其中Hp Ⅰ型為35.8%，Hp Ⅱ型為61.0%；<30歲組Hp感染率為48.1%，其中Hp Ⅰ型為30.5%，Hp Ⅱ型為47.1%，為感染率最低組。Hp Ⅰ型感染率在各年齡組間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。40～<50和50～<60歲組的Hp總感染率和Hp Ⅱ型感染率與<30歲組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

2.3不同年齡組Hp免疫分型陽性率比較 同一年齡組中，均以UreA-30 000抗體陽性率最高，各年齡組分別為96.7%、97.0%、98.5%、99.0%、96.1%；以VacA-91 000抗體陽性率最低，各組分別為43.3%、47.3%、46.2%、40.8%、43.1%。同一年齡組中，其他各型抗體陽性率與UreA-30 000陽性率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而不同年齡組同一免疫分型的陽性率比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表1 不同性別受檢者Hp感染情況[n(%)]

注：Hp Ⅰ型陽性和Hp Ⅱ型陽性者中包括二者均為陽性者。

表2 不同年齡組受檢者Hp感染情況[n(%)]

注：Hp Ⅰ型陽性和Hp Ⅱ型陽性者中包括二者均為陽性者；與<30歲組比較，*P<0.05。

表3 不同年齡組Hp免疫分型陽性率比較[n(%)]

注：與同一年齡組UreA-30 000比較，*P<0.05。

3 討 論

Hp是一種微需氧革蘭陰性菌，與慢性胃炎、消化性潰瘍及胃癌的發(fā)生密切相關(guān)[2-4]，我國(guó)Hp感染率較高，但各地報(bào)道的感染率不同，引起的病變程度也不同。部分患者感染后僅表現(xiàn)為胃炎或無明顯胃部病變，而部分患者可表現(xiàn)為消化性潰瘍甚至胃癌[5-7]。究其原因，除了患者個(gè)體差異、胃黏膜損傷等因素外，Hp的不同毒力因子在Hp的致病性中也發(fā)揮著重要作用[8]。

Hp有多種毒力因子，目前研究最多，且與嚴(yán)重胃部疾病相關(guān)的兩種毒力因子為CagA和VacA。CagA是Hp Cag致病島上CagA基因的編碼產(chǎn)物，是一種致癌蛋白，也是Hp感染導(dǎo)致宿主產(chǎn)生炎性反應(yīng)的重要效應(yīng)蛋白，可誘導(dǎo)上皮細(xì)胞產(chǎn)生IL-8、激活NF-κB信號(hào)通路、重塑細(xì)胞骨架及參與細(xì)胞基座的形成，通過細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)引起胃黏膜上皮細(xì)胞增殖及萎縮，與消化性潰瘍和胃癌的發(fā)生密切相關(guān)[7-8]。VacA是除CagA外被廣泛研究的毒力因子，其可通過誘導(dǎo)胃黏膜上皮細(xì)胞空泡化、引起線粒體釋放細(xì)胞色素C導(dǎo)致細(xì)胞凋亡、引發(fā)促炎性反應(yīng)并結(jié)合細(xì)胞膜受體等多種作用，導(dǎo)致定植部位胃黏膜上皮細(xì)胞損傷[7]。Hp尿素酶作為Hp的定植因子和毒力因子，在Hp感染過程中起發(fā)揮著特殊作用。尿素酶不僅存在于Hp的細(xì)胞質(zhì)中，還是Hp主要的細(xì)胞膜表面蛋白，在Hp血清學(xué)檢測(cè)中是主要的標(biāo)志性抗原之一，Hp尿素酶由多個(gè)亞單位構(gòu)成，其中UreA-30 000和UreB-66 000能使機(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)烈的免疫應(yīng)答，并生成相應(yīng)的抗體[9]。

目前Hp按是否表達(dá)CagA和VacA分為兩型：Ⅰ型為致病性較強(qiáng)的產(chǎn)細(xì)胞毒素菌株[CagA和(或)VacA陽性]；Ⅱ型為毒性較弱的不產(chǎn)細(xì)胞毒素菌株(CagA和VacA陰性)，這類菌株感染后一般只引起慢性淺表性胃炎或無臨床表現(xiàn)。Hp感染后特異性地定植于胃上皮細(xì)胞并在局部增殖，刺激機(jī)體產(chǎn)生炎性反應(yīng)及免疫反應(yīng)，產(chǎn)生可檢測(cè)的全身性抗體，且具有其特異性，如CagA與相對(duì)分子質(zhì)量為128 000和116 000的免疫區(qū)帶相關(guān)，而VacA則對(duì)應(yīng)相對(duì)分子質(zhì)量為95 000和91 000的區(qū)帶。因此通過免疫印跡法對(duì)Hp進(jìn)行免疫分型檢測(cè)，有助于判定感染Hp的不同致病類型，對(duì)Hp感染患者的跟蹤與治療有重要意義。

國(guó)內(nèi)外研究表明，Hp感染與社會(huì)經(jīng)濟(jì)、衛(wèi)生狀況等密切相關(guān)，Hp的感染率在發(fā)達(dá)國(guó)家為30%～50%，我國(guó)自然人群Hp感染率在50%以上，且經(jīng)濟(jì)條件落后、衛(wèi)生條件差的地區(qū)感染率更高[9]。Hp的檢測(cè)方法包括組織學(xué)檢測(cè)、快速尿素酶檢測(cè)、核素標(biāo)記的尿素呼氣試驗(yàn)、免疫印跡法及分子生物學(xué)檢測(cè)等方法，其中免疫印跡法具有簡(jiǎn)便、快捷、重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)，尤其適合于大規(guī)模的體檢及流行病學(xué)調(diào)查。本研究對(duì)濟(jì)南地區(qū)2 557例于山東電力中心醫(yī)院進(jìn)行健康體檢的自然人群進(jìn)行了Hp及其免疫分型檢測(cè)，結(jié)果顯示Hp總感染率為57.4%，男、女分別為56.4%和59.6%；其中Hp Ⅰ型為34.2%，Hp Ⅱ型為57.0%。本研究Hp Ⅰ型感染率與國(guó)內(nèi)其他地區(qū)報(bào)道相近，而總感染率和Hp Ⅱ型感染率高于國(guó)內(nèi)平均水平[7,10]，因此推測(cè)本地區(qū)總檢出率的增高主要是由于Hp Ⅱ型的高感染率引起。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，Hp Ⅱ型UreA抗體檢出率明顯高于UreB抗體，因此本地區(qū)高檢出率的UreA抗體決定了Hp的高感染率。

本研究不同年齡組Hp感染率存在差異，其中感染率最低為<30歲組，Hp總感染率為48.1%，Hp Ⅰ型為30.5%，Hp Ⅱ型為47.1%；而感染率最高為50～<60歲組，Hp感染率為61.1%，Hp Ⅰ型為35.8%，Hp Ⅱ型為61.0%；比較不同年齡組的Hp感染率發(fā)現(xiàn)，Hp總感染率和Hp Ⅱ型感染率有隨年齡增大而升高的趨勢(shì)，但≥60歲組檢出率有所下降，與相關(guān)報(bào)道一致，可能與該組多為離退休老干部，文化水平與家庭生活層次較高、衛(wèi)生條件較好有關(guān)[9]。

綜上所述，本地區(qū)Hp的感染率高，主要以Hp Ⅱ型感染為主，且不同年齡、性別人群的感染率不同，臨床應(yīng)將Hp感染作為防治的重點(diǎn)，根據(jù)流行病學(xué)資料，有針對(duì)性地開展預(yù)防、治療及跟蹤隨訪工作，從根本上降低消化系統(tǒng)潰瘍和惡性腫瘤的發(fā)生率，提高本地區(qū)居民的身體素質(zhì)和健康水平。