超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定小麥粉中福美雙殘留量

曹 秀，胡永建，劉秀娟，余明霞，楊亞琴，鐘紅艦

（河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所，鄭州 450002）

福美雙（thiram），化學(xué)名稱為四甲基秋蘭姆二硫化物，是硫代氨基甲酸鹽類保護(hù)性廣譜殺菌劑，對(duì)多種病原真菌具有抑制作用[1]。福美雙主要用于種子和土壤處理[2]，也可直接噴霧于水果、蔬菜、糧食作物上，以防止其在貯存和運(yùn)輸過(guò)程中發(fā)生腐爛。但福美雙具有較高的蓄積性，對(duì)哺乳類動(dòng)物有一定的毒性[3-6]。

福美雙在小麥、水稻等作物上被研究廣泛[7-8]，我國(guó)已制定了小麥中福美雙最大殘留限量的食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)[9]。然而，福美雙在小麥粉中殘留研究尚未見(jiàn)報(bào)道。小麥粉中福美雙殘留可能來(lái)源于生產(chǎn)過(guò)程中受到小麥中殘留福美雙的污染[10]，或者企業(yè)在小麥粉中非法添加福美雙，以抑制有害微生物繁殖，防止小麥粉發(fā)生霉變。因此，對(duì)小麥粉中福美雙殘留檢測(cè)方法的研究很有必要。

目前，福美雙的檢測(cè)方法有：比色法[8]、光譜法[11-12]、氣相色譜法[1]、頂空氣相色譜法[13]、高效液相色譜法[14]和高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[7,15-16]。比色法是間接測(cè)定福美雙的方法，選擇性差，且易受多種離子的干擾，不能滿足日益嚴(yán)格的殘留檢測(cè)要求；光譜法和氣相色譜法只能測(cè)定硫代氨基甲酸鹽類農(nóng)藥總量，不能確定單一福美雙的含量，缺乏專一性；高效液相色譜法靈敏度和選擇性較差，且整個(gè)操作過(guò)程繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)；高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法選擇性強(qiáng)，靈敏度高，能滿足低殘留檢測(cè)的要求。

本文建立了超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速定量測(cè)定小麥粉中福美雙殘留量的方法。對(duì)比不同溶劑對(duì)小麥粉中福美雙的提取效率，調(diào)節(jié)儀器的參數(shù)，建立了快速測(cè)定小麥粉中福美雙樣品的前處理和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析方法。該方法前處理過(guò)程簡(jiǎn)單，儀器分析速度快，準(zhǔn)確度高，可滿足市場(chǎng)監(jiān)管和日常檢測(cè)的需求。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

小麥粉，市購(gòu)；福美雙（純度99.0%），德國(guó)Dr.Ehrenstofer公司；乙腈、甲醇、二氯甲烷和三氯甲烷（色譜純），美國(guó)Fisher公司；乙醇（分析純），國(guó)藥試劑；甲酸（色譜純），上海麥克林公司；乙酸銨（分析純），國(guó)藥試劑；試驗(yàn)用水均為超純水。

1.2 儀器與設(shè)備

超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，配有電噴霧離子源（ESI），美國(guó)Waters公司；BS224S分析天平（精確至0.000 1 g），德國(guó)Sartorius公司；AE 240分析天平（精確至0.000 01g），日本Mettler公司；Milli-Q@Synthesis純水儀，Millipore公司；SK-1快速混勻器，金壇市中大儀器廠；GL-21B高速冷凍離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；QGC-36T氮吹儀，上海全島公司。

1.3 方法

1.3.1 福美雙標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

福美雙標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1.00 mg/mL）：稱取福美雙10 mg標(biāo)準(zhǔn)品于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度。放置于冰箱冷凍，有效期1年。

福美雙標(biāo)準(zhǔn)中間液（10.00 μg/mL）：移取0.1 mL福美雙標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度。放置于冰箱冷凍，有效期6個(gè)月。

福美雙標(biāo)準(zhǔn)工作液（1.00 μg/mL）：移取1 mL福美雙標(biāo)準(zhǔn)中間液于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度。放置于冰箱冷凍，有效期6個(gè)月。

1.3.2 樣品處理

稱取1 g（精確至0.000 1 g）小麥粉試樣，置于50 mL離心管中，加入20 mL提取溶劑，渦旋5 min，使試劑與試樣充分混勻后，超聲提取30 min，再渦旋混勻2 min，在8 000 r/min、4℃條件下離心5 min。精密移取10 mL上清液于試管中，氮吹至干。殘留物用2 mL甲醇＋水（體積比1∶1）溶解，超聲渦旋，混勻后過(guò)0.45 μm油膜過(guò)濾，濾液待上機(jī)分析。

1.3.3 色譜及質(zhì)譜檢測(cè)條件

色譜柱：ACQUITY UPLC@BEH C18色譜柱（2.1 mm×50 mm，1.7 μm）；柱溫：40℃；進(jìn)樣量1 μL；流動(dòng)相：A相為乙腈，B相為0.05%甲酸水溶液；流速：0.3 mL/min；采用梯度洗脫模式：0～4.0 min，40%A相、60%B相；4.0～5.5 min，75%A相、25%B相；5.5～6.5 min，40%A相、60%B相。

離子源：電噴霧離子源，正離子掃描模式；毛細(xì)管電壓：0.5 kV；霧化氣溫度：400℃；霧化氣流量：800 L/h；監(jiān)測(cè)模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式。福美雙的質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表1。

表1 多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式下福美雙的質(zhì)譜參數(shù)

2 結(jié)果與分析

2.1 流動(dòng)相的優(yōu)化

本研究考察了甲醇＋0.05%甲酸水溶液、甲醇＋5 mmol/L乙酸銨溶液、乙腈＋0.05%甲酸水溶液等流動(dòng)相體系對(duì)福美雙的色譜峰及離子化的影響。結(jié)果表明，甲醇、乙腈作為強(qiáng)洗脫相，洗脫效果良好，沒(méi)有顯著差異。但以甲醇為有機(jī)相時(shí)，系統(tǒng)壓力高，而乙腈因黏度低使得系統(tǒng)壓力降低，因此選用乙腈作為有機(jī)相。以5 mmol/L乙酸銨溶液和0.05%甲酸水溶液作為流動(dòng)相時(shí)都能獲得比較好的峰形。由于長(zhǎng)期使用乙酸銨作為流動(dòng)相時(shí)易損壞色譜柱，且用0.05%甲酸水溶液作為水相時(shí)，保留時(shí)間更短。因此，本次試驗(yàn)中，采用乙腈＋0.05%甲酸水溶液作為流動(dòng)相，福美雙標(biāo)準(zhǔn)溶液圖譜見(jiàn)圖1。

圖1 福美雙（100 ng/mL）標(biāo)準(zhǔn)溶液圖譜

2.2 提取溶劑的選擇

利用福美雙溶于甲醇、三氯甲烷等有機(jī)溶劑的特點(diǎn)，試驗(yàn)中選取了乙腈、甲醇、乙醇、二氯甲烷和三氯甲烷對(duì)小麥粉中福美雙進(jìn)行提取。采用在空白小麥粉基質(zhì)中添加適量福美雙標(biāo)準(zhǔn)品，經(jīng)1.3.2方法處理，5種提取溶劑加標(biāo)回收率分別為15.6%、82.2%、106.0%、87.4%、92.6%。甲醇、乙醇、二氯甲烷和三氯甲烷對(duì)小麥粉中福美雙殘留物都有較好的提取效果。經(jīng)甲醇、乙醇、二氯甲烷和三氯甲烷提取的小麥粉試樣出現(xiàn)了不同程度的溶脹，提取液變得黏稠，而經(jīng)乙腈提取的小麥粉試樣，提取液澄清，提取效果差。由于二氯甲烷和三氯甲烷毒性大，乙醇揮發(fā)性小，不易氮吹至干，耗時(shí)長(zhǎng)。因此，本試驗(yàn)選用甲醇作為提取溶劑。

2.3 方法的線性范圍和定量限

2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

移取適量的福美雙標(biāo)準(zhǔn)中間工作液（1.00 μg/mL），用甲醇＋水（體積比1∶1）溶液依次稀釋成質(zhì)量濃度分別為5、10、25、50、100 ng/mL標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，分別進(jìn)樣測(cè)定。以標(biāo)準(zhǔn)工作溶液質(zhì)量濃度x為橫坐標(biāo)，以定量離子色譜峰面積y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。其線性方程為y=809.6x-3 194.5，相關(guān)系數(shù)為0.999 3，定量限為0.02 mg/kg。

2.3.2 添加回收率和方法精密度

在空白小麥粉中添加3個(gè)濃度水平的福美雙，以甲醇為提取溶劑，按照1.3.2方法進(jìn)行添加回收率試驗(yàn)，每個(gè)添加水平按試驗(yàn)方法平行測(cè)定3次，計(jì)算添加回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見(jiàn)表2。空白小麥粉色譜圖和小麥粉加標(biāo)色譜圖見(jiàn)圖2和圖3。

表2 添加回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=5）

圖2 空白小麥粉色譜圖

圖3 小麥粉加標(biāo)色譜圖

小麥粉空白基質(zhì)樣品在添加水平分別為0.02、0.05和0.10 mg/kg時(shí)進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，平均回收率為70.52%～85.20%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為8.74%～9.42%。說(shuō)明該方法對(duì)小麥粉中福美雙的測(cè)定有良好的準(zhǔn)確度和精密度，符合殘留分析的要求。

2.4 實(shí)際樣品測(cè)定

采用優(yōu)化后的前處理方法和儀器分析條件對(duì)市場(chǎng)中隨機(jī)購(gòu)買的30批次小麥粉試樣中福美雙藥物殘留進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)1批次小麥粉樣品檢出福美雙，福美雙殘留量為0.275 mg/kg。

3 結(jié)論

本研究采用甲醇提取小麥粉樣品中的福美雙，建立了小麥粉中福美雙殘留量的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法。正離子多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式測(cè)定，標(biāo)準(zhǔn)曲線外標(biāo)法定量。該方法對(duì)小麥粉中福美雙進(jìn)行了定性和定量分析，方法具有較高的回收率、良好的精密度和較高的準(zhǔn)確度；且該方法前處理操作簡(jiǎn)單、快速，適用于批量樣品處理，能夠滿足小麥粉中福美雙殘留量的快速檢測(cè)要求。