蒺藜的性狀與其質(zhì)量關(guān)系研究*

李瑞海，賈天柱

（遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，遼寧 大連 116600）

性狀描述是對(duì)中藥品種進(jìn)行真?zhèn)舞b別的一個(gè)過(guò)程，但性狀鑒別只能解決中藥是與不是的問(wèn)題，而不能解決質(zhì)量好壞的問(wèn)題。雖然通過(guò)長(zhǎng)期的經(jīng)驗(yàn)積累，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)可初步判斷中藥質(zhì)量好壞，但這種經(jīng)驗(yàn)是一個(gè)非量化值，不客觀，也沒(méi)有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)基礎(chǔ)，更沒(méi)有和藥典相關(guān)成分含量高低的關(guān)聯(lián)。本研究力求將蒺藜的性狀描述和其成分含量關(guān)聯(lián)起來(lái)，進(jìn)而從中藥的性狀來(lái)判斷所含有效成分的高低，初步判斷其質(zhì)量的優(yōu)劣。本研究收集了18批蒺藜樣品，根據(jù)藥典蒺藜項(xiàng)下的性狀，建立了蒺藜的性狀描述，對(duì)樣品性狀描述分組并利用感官評(píng)分法對(duì)其性狀描述進(jìn)行量化評(píng)分，同時(shí)利用比色法對(duì)蒺藜的黃酮和皂苷成分進(jìn)行含量測(cè)定，利用相似性公式進(jìn)行計(jì)算，找出相似性，從而揭示蒺藜性狀外觀與主要成分的聯(lián)系。本研究試圖從性狀外觀上找到與蒺藜質(zhì)量的聯(lián)系和關(guān)系，進(jìn)而從性狀外觀上初步判斷蒺藜質(zhì)量的好壞，為蒺藜經(jīng)驗(yàn)鑒定和中藥炮制品質(zhì)量提供一定的理論基礎(chǔ)，也為其他中藥材的此類(lèi)研究提供了一定的思路[1-3]。

1 儀器與材料

UV5200分光光度計(jì)（日立日本）；HC-2062離心機(jī)（中科安徽）；QS64超聲提取器（奧特賽恩斯天津）；UV SL2.1工作站（日立日本）；SF-130B粉碎機(jī)（上海冠聯(lián)）；微波爐（格蘭仕P70F23P-G5）。

18個(gè)蒺藜購(gòu)于全國(guó)多個(gè)地區(qū)，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)王榮祥教授鑒定符合藥典要求；蒺藜苷元對(duì)照品（25R-Spiro-stan-4-ene-3,12-dione，實(shí)驗(yàn)室自制，純度≥98%）、蘆丁對(duì)照品（大連美侖，批號(hào)20180403，純度99.5%）；鹽酸等試劑均為分析純（國(guó)藥集團(tuán)公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的制備

取蒺藜苷元，加甲醇制成0.021mg·mL-1溶液，取蘆丁加稀乙醇制成0.015mg·mL-1溶液。

2.2 供試品溶液的制備

2.2.1 取蒺藜樣品 細(xì)粉0.5g，精密稱(chēng)定，置圓底瓶中，精密加甲醇50mL，稱(chēng)定重量，加熱回流2h，放冷，再稱(chēng)重，甲醇補(bǔ)失重，搖勻，濾過(guò)，精吸續(xù)濾液10mL，回收至干，殘?jiān)诱〈硷柡偷乃?0mL，用水飽和正丁醇提取5次，每次10mL，合并正丁醇液，用氨試液洗2次，每次5mL，正丁醇液蒸干，殘?jiān)?0%甲醇移至并定容至50mL量瓶中，搖勻即得[4]。

2.2.2 取蒺藜樣品 細(xì)粉0.4g，精密稱(chēng)定，加石油醚25mL索氏提取器提取4h，石油醚棄去，藥渣干燥，加甲醇25mL回流4h，甲醇液蒸至干，用稀乙醇定容至25mL容量瓶中，搖勻，即得[5]。

2.3 測(cè)定方法

2.3.1 精密量取蒺藜苷元3mL或2.2.1項(xiàng)下供試品各2～4mL置具塞試管中，揮干溶劑，精密加高氯酸5ml，搖勻，置60℃水浴保溫15min，取出后立即冰水浴冷卻至室溫，以同法為空白，在285nm波長(zhǎng)處測(cè)定。

2.3.2 分別取蘆丁3mL和2.2.2項(xiàng)下供試品2～4mL于25mL的容量瓶中加 1mL的5%NaNO2搖勻5min，加1mL的10%硝酸鋁，搖勻靜置5min，加10mL的0.1%NaOH溶液，用水至容量瓶刻度，靜置15min，同法作為空白，在波長(zhǎng)510nm下測(cè)定[6]。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密量取蒺藜苷元對(duì)照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分別置具塞試管中，按2.3.1項(xiàng)下285nm測(cè)定。另精密吸取蘆丁對(duì)照品 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，置于25mL的容量瓶中，按2.3.2項(xiàng)下方法制備，在510nm處測(cè)量吸收度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見(jiàn)圖1。得回歸方程、線性范圍和相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表1、2。

圖1 蒺藜苷元和蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Standard curve of Tribulus terrestris aglycone and Rutin

表1 蒺藜苷元和蘆丁的質(zhì)量和吸收度Tab.1 Quality and absorption of Tribulus terrestris aglycone and Rutin

表2 蒺藜苷元和蘆丁的回歸方程、線性范圍和相關(guān)系數(shù)Tab.2 Regression equation,linear range and correlation coefficient of Tribulus terrestris and Rutin

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取蒺藜苷元、蘆丁對(duì)照品，按2.3項(xiàng)下方法測(cè)量吸收度，連續(xù)測(cè)定吸光度6次，結(jié)果見(jiàn)表3，RSD為0.83、0.92%，表明儀器的精度良好。

表3 精密度試驗(yàn)結(jié)果Tab.3 Precision test results

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取1號(hào)樣品6份，按2.2項(xiàng)下方法制備樣品，按2.3項(xiàng)下方法測(cè)量吸收度，結(jié)果見(jiàn)表4，RSD（n=6）分別為1.17%，0.72%，說(shuō)明本方法重復(fù)性良好。

表4 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果（mg·g-1）Tab.4 Repeatability test results（mg·g-1）

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，按2.2項(xiàng)下方法制備，在0，10，20，30，40，60min 時(shí)間點(diǎn)測(cè)定吸光度，結(jié)果見(jiàn)表 5，RSD（n=6）分別為 1.06%，1.07%，表明對(duì)照品在60min內(nèi)測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定可靠。

表5 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果Tab.5 Stability test results

2.8 加樣回收試驗(yàn)

精密稱(chēng)取已知含量的樣品0.25g（測(cè)定蘆丁含量取 0.2g），加入蒺藜苷元 7.60mg（測(cè)定蘆丁 2.77mg），按2.2項(xiàng)下方法制備，按2.3項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度，計(jì)算含量及回收率，結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果Tab.6 Test results of sample adding and recovery

2.9 蒺藜飲片性狀與主要成分的相關(guān)性分析

2.9.1 各產(chǎn)地樣品含量測(cè)定 精密稱(chēng)取各產(chǎn)地樣品適量，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.3項(xiàng)下方法測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表7。

表7 蒺藜樣品中總皂苷和總黃酮成分測(cè)定結(jié)果（mg·g-1）Tab.7 Determination results of total saponins and flavonoids in Tribulus terrestris samples（mg·g-1）

2.9.2 蒺藜飲片性狀描述的確定和評(píng)分 根據(jù)18批蒺藜飲片樣品，參照2015版《中國(guó)藥典》蒺藜性狀的描述，分組并評(píng)分，即“本品為不規(guī)則的段（A），根呈黑褐色，密生須根（B）。莖干質(zhì)硬（C），表面深綠色（D），無(wú)毛，被長(zhǎng)柔毛或長(zhǎng)硬毛（E）。葉多破碎皺縮（F），展開(kāi)可見(jiàn)矩圓形或斜短圓形（G），被柔毛（H）。有時(shí)可見(jiàn)黃色小花（I），可見(jiàn)單一或5個(gè)放射狀排列分果瓣（J），背部黃綠色（K），隆起，有縱棱及多數(shù)小刺，并有對(duì)稱(chēng)的長(zhǎng)刺和短刺各1對(duì)（L），氣微，味苦、辛(M）”。將18批樣品，隨機(jī)取等量（200g），平鋪在桌面上，將其分成A～M部分進(jìn)行評(píng)分。對(duì)于每一部分評(píng)分的標(biāo)準(zhǔn)是，如果不具有相應(yīng)性狀特點(diǎn)的則計(jì)0分，具有的則計(jì)1分，如果具有且相對(duì)較多的時(shí)則記2分，結(jié)果列于表4。

表4 蒺藜性狀評(píng)分與含量權(quán)衡值Tab.4 Trait trade-offs，content similarity of Tribulus terrestris

表5 蒺藜性狀與含量的相似度Tab.5 Trait trade-offs，content similarity of Tribulus terrestris

2.9.3 樣品總皂苷與總黃酮含量差異權(quán)衡方法 為了避免樣品所含總皂苷、總黃酮的量差異較大而引起的比較結(jié)果的誤差（即含量大的成分影響較大，而含量小的影響較小的狀況），將樣品的每一個(gè)總皂苷或總黃酮的含量均除以18個(gè)樣品當(dāng)中相應(yīng)的總皂苷或總黃酮含量最大的數(shù)值，得權(quán)衡值，見(jiàn)公式（1），結(jié)果見(jiàn)表4，利用公式（2）[7]，將18個(gè)蒺藜飲片性狀的A-M評(píng)分值和總皂苷與總黃酮含量的權(quán)衡值進(jìn)行比較，相似度計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表5。

式中 n：某一生物堿含量；contentnmax：同一生物堿含量最高值。

式中 x：性狀評(píng)分值或生物堿權(quán)衡值；y：總堿權(quán)衡數(shù)值。

3 結(jié)果與討論

從實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，本品為不規(guī)則的段（A），莖干質(zhì)硬（C），展開(kāi)可見(jiàn)矩圓形或斜短圓形（G），被柔毛（H）。有時(shí)可見(jiàn)黃色小花（I），可見(jiàn)單一或5個(gè)放射狀排列分果瓣（J），隆起，有縱棱及多數(shù)小刺，并有對(duì)稱(chēng)的長(zhǎng)刺和短刺各1對(duì)（L）等性狀描述在18個(gè)產(chǎn)地蒺藜樣品當(dāng)中均有，沒(méi)有變化的趨勢(shì)，因此不能夠進(jìn)行相似性計(jì)算。

與總皂苷含量變化相比，背部黃綠色（K）為73%，氣微，味苦、辛（M）為82%相似度很高，說(shuō)明果實(shí)發(fā)黃綠色和苦、辛味濃的蒺藜總皂苷含量的相對(duì)較高。而B(niǎo)、D、E、F和I等這些性狀與總皂苷相似度非常低，說(shuō)明這些性狀與總皂苷含量沒(méi)有關(guān)系。

與總黃酮含量變化相比，表面深綠色（D）86%，葉多破碎皺縮（F）80%，相似度極高，達(dá)到80%以上，說(shuō)明莖表面深綠色（D）和葉多破碎皺縮（F）的蒺藜總黃酮含量相對(duì)要高，B、E、I、K和M等這些性狀與總黃酮相對(duì)較低，說(shuō)明這些性狀與總黃酮含量關(guān)系不大。

總成分是總皂苷和總黃酮的權(quán)衡值加和，代表蒺藜的總的有效成分。與之相關(guān)較大的是莖表面深綠色（D）55%，葉多破碎皺縮（F）75%和（果實(shí)）背部黃綠色（K）56%，說(shuō)明具有這3個(gè)性狀的蒺藜藥材質(zhì)量相對(duì)較好。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)含量測(cè)定方法采用的是比色法，目前含測(cè)常見(jiàn)方法高效液相色譜法，該法只能以一個(gè)或者是幾個(gè)成分去評(píng)價(jià)藥材的質(zhì)量，相對(duì)比較片面。而比色法卻能從某類(lèi)成分總體的含量去評(píng)價(jià)藥材的質(zhì)量，因而更具有客觀的代表性，且本研究針對(duì)蒺藜藥材含有皂苷和黃酮，這兩類(lèi)成分是蒺藜的主要活性成分，采用比色法測(cè)定皂苷和黃酮，且實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有一定的代表意義和參考價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)方法學(xué)考察結(jié)果表明，比色法簡(jiǎn)便易行，適合皂苷和黃酮的含量測(cè)定。

本研究對(duì)蒺藜18個(gè)產(chǎn)地性狀描述每一項(xiàng)分別打分，每個(gè)描述和總皂苷、總黃酮和總成分含量之間的關(guān)系進(jìn)行相似度計(jì)算，揭示性狀和含量之間的關(guān)系。對(duì)于蒺藜的性狀描述的客觀量化并與成分相關(guān)性進(jìn)行了初步的探討和嘗試，對(duì)中藥性狀描述的客觀、量化相關(guān)研究具有一定的借鑒作用。