甲狀腺癌組織CXCR4、Ki-67表達(dá)與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系研究

湯一冰 王萬鐵

(1.溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院病理科 溫州 325000；2.溫州醫(yī)科大學(xué)病理生理教研室 溫州 325035)

甲狀腺癌屬于臨床常見的內(nèi)分泌系統(tǒng)惡性腫瘤之一，其發(fā)生率與放射線接觸史、高碘飲食、遺傳等因素密切相關(guān)，或由甲狀腺腺瘤、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫等其他良性結(jié)節(jié)疾病發(fā)展所致[1～2]。多數(shù)甲狀腺癌患者術(shù)后預(yù)后較好，但部分患者會出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移或淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)，甚至危及生命安全。趨化因子受體4(CXCR4)是一種參與腫瘤細(xì)胞生長、轉(zhuǎn)移、侵襲等的趨化因子，而Ki-67與子宮內(nèi)膜癌等多種腫瘤的預(yù)后密切相關(guān)，是腫瘤細(xì)胞增殖活性標(biāo)志物之一，兩者與甲狀腺癌患者的關(guān)系是臨床研究的熱點(diǎn)[3～4]。本研究旨在分析甲狀腺癌組織Ki-67、CXCR4表達(dá)與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年7月～2019年10月在我院行手術(shù)治療的90例甲狀腺癌患者癌組織標(biāo)本，將其設(shè)為研究組，收集癌旁組織標(biāo)本作為良性組。90例患者中，女52例，男38例；年齡24～73歲，平均年齡(45.24±4.96)歲；病理類型：分化型癌80例(濾泡狀腺癌27例，乳頭狀腺癌37例，髓樣癌16例)，未分化型癌10例；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移58例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移32例；癌灶特點(diǎn)：多結(jié)節(jié)48例，單結(jié)節(jié)42例；無包膜侵犯47例，有包膜侵犯43例；病理分期：Ⅰ～Ⅱ期46例，Ⅲ～Ⅳ期44例。入組患者均經(jīng)病理、影像學(xué)檢查確診為甲狀腺癌且術(shù)前未接受放化療治療，臨床資料完整。另外選擇同期在我院行手術(shù)治療的90例甲狀腺良性病變患者病理標(biāo)本設(shè)為對照組，其中女49例，男41例；年齡23～75歲，平均年齡(45.18±5.01)歲。3組基本資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，有可比性。

1.2 方法

將獲取的標(biāo)本使用10%甲醛固定，石蠟包埋，連續(xù)切片，切片厚度為4μm，以免疫組化S-P三步法染色法對CXCR4、Ki-67實(shí)施染色。使用購買自上海長島生物科技有限公司的試劑盒，操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明實(shí)施。以已知陽性切片作為陽性對照，以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照組。

1.3 結(jié)果判定

Ki67以細(xì)胞核呈黃色、褐色和棕黃色分布為陽性，CXCR4以細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)呈黃色、褐色和棕黃色分布為陽性。染色強(qiáng)度：0分：無色；1分：淡黃色；2分：棕黃色；3分：褐色。在400倍高倍顯微鏡下，每張切片隨機(jī)選擇5個視野，計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)，結(jié)果取平均值。0分：陽性細(xì)胞數(shù)≤5%；1分：陽性細(xì)胞數(shù)6%～25%；2分：陽性細(xì)胞數(shù)26%～50%；陽性細(xì)胞數(shù)>50%。按照陽性細(xì)胞數(shù)和染色強(qiáng)度兩者得分乘積對陽性強(qiáng)度進(jìn)行計(jì)算：陰性(-)：≤1分；弱陽性(+)：2～3分；中陽性(++)：4～6分；強(qiáng)陽性(+++)：>6分。

1.4 觀察指標(biāo)

(1)比較3組Ki-67、CXCR4陽性表達(dá)率；(2)分析Ki-67、CXCR4陽性表達(dá)率與甲狀腺癌臨床病理特征關(guān)系，其包括年齡、性別、病理類型、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、癌灶特點(diǎn)、有無包膜侵犯、病理分期等；(3)分析Ki-67、CXCR4表達(dá)與甲狀腺癌患者疾病進(jìn)展時間(TTP)的相關(guān)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 3組Ki-67、CXCR4陽性表達(dá)率比較

研究組Ki-67、CXCR4陽性表達(dá)率高于良性組、對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；良性組Ki-67、CXCR4陽性表達(dá)率與對照組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表1 3組Ki-67、CXCR4陽性表達(dá)率比較[n(%)]

組別Ki-67CXCR4研究組(n=90)61(67.78)64(71.11)良性組(n=90)11(12.22)a19(21.11)a對照組(n=90)7(7.78)a16(17.78)aχ297.19969.187P0.0000.000

注：a與研究組相比，P<0.05。

2.2 Ki-67、CXCR4陽性表達(dá)率與甲狀腺癌臨床病理特征關(guān)系

甲狀腺癌患者病理分期Ⅲ～Ⅳ期Ki-67、CXCR4陽性表達(dá)率高于病理分期Ⅰ～Ⅱ期，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移Ki-67、CXCR4陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，且有包膜侵犯Ki-67陽性表達(dá)率高于無包膜侵犯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 Ki-67、CXCR4陽性表達(dá)率與甲狀腺癌臨床病理特征關(guān)系[n(%)]

臨床病理特征例數(shù)(n)Ki-67(n=61)CXCR4(n=64)陽性χ2P陽性χ2P性別女5235(67.31)男3826(68.42)0.0130.91135(67.31)29(76.32)0.8670.352年齡(歲)≤454832(66.67)>454229(69.05)0.0580.81031(64.58)33(78.57)2.1340.144病理分期Ⅰ～Ⅱ期4626(56.52)Ⅲ～Ⅳ期4435(79.55)4.8310.02826(56.52)38(86.36)9.7490.002病理類型分化型8056(70.00)未分化型105(50.00)0.8410.20257(71.25)7(70.00)0.0830.935癌灶特點(diǎn)多結(jié)節(jié)4829(60.42)單結(jié)節(jié)4232(76.19)2.552011033(68.75)31(73.81)0.8420.359包膜侵犯有3226(81.25)無5835(60.34)4.1270.04225(78.13)39(67.24)1.1980.276淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有4339(90.70)無4722(46.81)19.5060.00037(86.05)27(57.45)8.9410.003

2.3 Ki-67、CXCR4表達(dá)與甲狀腺癌患者TTP的相關(guān)性分析

甲狀腺癌患者的中位TTP為37.89個月(95%CI為27.90～43.27)，其中Ki-67陽性者與陰性者中位TTP分別為30.98個月(95%CI為21.89～38.125)、47.78個月(95%CI為36.38～59.17)；其中CXCR4陽性者與陰性者中位TTP分別為30.29個月(95%CI為28.40～32.19)、43.12個月(95%CI為37.19～51.18)。經(jīng)Log-rank檢驗(yàn)顯示，Ki-67、CXCR4陽性者TTP較陰性者高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=8.249、11.223，P=0.004、0.001)，見圖1～2。

圖1 CXCR4表達(dá)與甲狀腺癌患者TTP關(guān)系

圖2 Ki-67表達(dá)與甲狀腺癌患者TTP關(guān)系

3 討論

甲狀腺癌發(fā)病率約占全身惡性腫瘤的1%～2%，且發(fā)病率呈明顯上升趨勢。手術(shù)是臨床治療甲狀腺癌的常用手段，但部分患者術(shù)后易出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，預(yù)后較差[5]。隨著分子生物學(xué)深入研究，腫瘤的侵襲性與轉(zhuǎn)移性是由多種因素相互作用的復(fù)雜動態(tài)過程而逐漸受到臨床重視，與抑癌基因、癌基因、細(xì)胞運(yùn)動因子、粘附分子、水解酶類等作用相關(guān)。

趨化因子是由多種細(xì)胞產(chǎn)生的促炎細(xì)胞因子，具有趨化細(xì)胞運(yùn)動作用，參與多種疾病的發(fā)生與進(jìn)展。CXCR4是趨化因子家族成員之一，其與趨化因子基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1生物軸可刺激多種信號通路活化，經(jīng)聚合腫瘤細(xì)胞肌動蛋白絲，促進(jìn)假偽足形成，進(jìn)而形成局部血管，提升細(xì)胞運(yùn)動、侵襲、遷移能力，參與腫瘤的生長、浸潤和轉(zhuǎn)移[6～7]。Ki-67屬于增殖細(xì)胞表達(dá)的抗原，其水平高低與細(xì)胞周期及細(xì)胞增殖密切相關(guān)，半衰期約為1h，脫離細(xì)胞周期后迅速降解，能準(zhǔn)確反映腫瘤細(xì)胞增殖活性，是一種判斷腫瘤惡性程度和預(yù)測預(yù)后的重要指標(biāo)[8～10]。本研究中，甲狀腺癌患者病理分期Ⅲ～Ⅳ期移Ki-67、CXCR4陽性表達(dá)率高于病理分期Ⅰ～Ⅱ期，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)Ki-67、CXCR4陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，且有包膜侵犯Ki-67陽性表達(dá)率高于無包膜侵犯，提示Ki-67、CXCR4與甲狀腺癌的發(fā)生、進(jìn)展密切相關(guān)，兩者高表達(dá)提示患者預(yù)后可能不良。本研究中，Ki-67、CXCR4陽性者TTP較陰性者高，可能是因Ki-67、CXCR4高表達(dá)可經(jīng)增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞侵襲力、增殖活性等多種機(jī)制，促進(jìn)患者病情進(jìn)展，導(dǎo)致患者無病生存期縮短。

綜上所述，Ki-67、CXCR4在甲狀腺癌中呈高表達(dá)，檢測兩者可評估甲狀腺癌惡性程度與術(shù)后疾病進(jìn)展時間，可成為甲狀腺潛在的指標(biāo)靶點(diǎn)和預(yù)測預(yù)后指標(biāo)。