RASSF1A基因在多種惡性腫瘤中的研究進展

張楊秋蓉 馮靜云 張婕 楊靜雅 羅金金 林堉嬌 盛苗苗

昆明理工大學(xué)醫(yī)學(xué)院650500

張楊秋蓉與馮靜云對本文有同等貢獻

0 引 言

腫瘤是一種常見病、多發(fā)病，其中惡性腫瘤是目前危害人類健康最嚴(yán)重的一類疾病。從全世界看，惡性腫瘤有日益增加的趨勢。每年全球新發(fā)惡性腫瘤約1 409 萬例，惡性腫瘤死亡病例約820 萬例[1]。長期以來，人們錯誤地認(rèn)為腫瘤是不治之癥。如今人們意識到，早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療可明顯改善腫瘤預(yù)后，甚至根治腫瘤。腫瘤的早發(fā)現(xiàn)有賴于定期健康查體、高危人群識別與風(fēng)險評估（家族史、不良生活習(xí)慣、環(huán)境污染、職業(yè)危害等）以及有針對性的監(jiān)測檢查理念與技術(shù)方法的不斷提升。不同的腫瘤診斷是臨床查體、實驗室化驗、影像學(xué)觀測與病理檢查等多元診斷有效綜合的選擇[2]。近年來隨著影像學(xué)的發(fā)展，CT、MRI、正電子發(fā)射計算機斷層顯像（PET-CT）等檢查技術(shù)被越來越廣泛地運用于臨床腫瘤學(xué)的診斷。而腫瘤標(biāo)志物的測定在腫瘤診斷過程中也越來越為臨床醫(yī)師所倚重。隨著分子病理學(xué)和分子免疫學(xué)的快速進展，特異性強、靈敏度高的分子和免疫診斷及預(yù)后指標(biāo)不斷涌現(xiàn)。因此進一步從分子水平闡明惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展機制，尋求有效的生物治療靶標(biāo)是改善惡性腫瘤預(yù)后的關(guān)鍵，也是提高國民健康、減少醫(yī)療支出的保障[3]。在各種內(nèi)外致癌因素的長期作用下，細(xì)胞癌變始于單個細(xì)胞，其過程可以分為3 個階段，即啟動、促進和演進階段。癌變分子機制主要包括癌基因激活、過度表達，抑癌基因突變、丟失，DNA 修復(fù)相關(guān)基因突變導(dǎo)致功能減弱或缺失，細(xì)胞凋亡機制障礙，微衛(wèi)星不穩(wěn)定，端粒酶過度表達和信號傳導(dǎo)調(diào)控紊亂等。其中癌基因的激活和抑癌基因的失活在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起著非常重要的作用。已在至少37 種腫瘤中發(fā)現(xiàn)了Ras 相關(guān)區(qū)域家族1A（Ras association domain family 1A，RASSF1A）基因甲基化，RASSF1A 基因可能是目前人類癌癥中描述最頻繁的甲基化基因[4]。本文介紹了RASSF1A 基因在不同惡性腫瘤中的異常甲基化，并綜述了近年來其在一系列惡性腫瘤中的相關(guān)作用及機制的研究進展，以期為惡性腫瘤的早期診斷、個體分子靶向治療及預(yù)后評估提供重要的指導(dǎo)依據(jù)。

1 RASSF1A 基因概述

Ras 相關(guān)區(qū)域家族（RASSF）由10 個成員組成（RASSF1～RASSF10），均包含一個特色的Ras 相關(guān)區(qū)域（RA 域）。RA 域分為兩類，一類位于C-末端（RASSF1～RASSF6），另一類位于N-末端（RASSF7～RASSF10）。RASSF1A 是RASSF 的成員，位于3 號染色體的短臂（3p21.3）上[5]。RASSF1A～RASSF1G 是因兩種啟動子的差異使用和可變剪接而產(chǎn)生的不同轉(zhuǎn)錄本。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，RASSF1A 含340 個氨基酸的開放閱讀框，其氨基末端與富含半胱氨酸的甘油二酯或氟波酯結(jié)合區(qū)（C1 結(jié)構(gòu)域）高度同源，故又稱蛋白激酶C 保守區(qū)；羧基末端與Ras 效應(yīng)蛋白Nore1 和Maxp1 高度同源[6]。RASSF1A 基因編碼的蛋白類似于Ras 效應(yīng)蛋白，可與DNA 修復(fù)蛋白XPA相互作用，還可抑制細(xì)胞周期蛋白D1 的積累，從而誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯。RASSF1A 基因缺失或表達異常與多種癌癥的發(fā)病機理有關(guān)，表明該基因具有腫瘤抑制功能[7]。

作為推定的腫瘤抑制基因，RASSF1A 在調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡和微管動力學(xué)以及維持基因組不穩(wěn)定性方面發(fā)揮作用，可通過多種途徑抑制細(xì)胞生長，促進細(xì)胞凋亡和衰老[8]。因此，RASSF1A 基因在控制一系列關(guān)鍵細(xì)胞功能的信號通路中十分重要。根據(jù)表達遺傳修飾機制，已知DNA 甲基化與人類癌癥的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[9]。啟動子區(qū)域中胞嘧啶-磷酸-鳥嘌呤島（CpG 島）的異常甲基化可抑制相應(yīng)基因的表達。RASSF1A 基因高甲基化可降低基因表達，并在功能上顯示類似于純合缺失或失活突變[10]。

2 RASSF1A 基因在呼吸系統(tǒng)高發(fā)腫瘤中的研究進展

2.1 鼻咽癌

鼻咽癌是一種罕見的惡性腫瘤，具有地理和種族分布特征。根據(jù)全球腫瘤流行病統(tǒng)計數(shù)據(jù)（GLOBOCAN）估計，2012 年全國約有86 700 例鼻咽癌新病例報告，導(dǎo)致死亡人數(shù)約50 800 人。東南亞每年鼻咽癌的發(fā)病率為0.015%～0.05%，而西方國家的發(fā)病率低于0.001%。遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是鼻咽癌患者死亡的主要原因。盡管CT 和MRI 是有效的，但均不能準(zhǔn)確地為鼻咽癌患者提供預(yù)后或預(yù)測生物治療靶標(biāo)的有效性。因此，尋找早期檢測鼻咽癌的新型非侵入性低成本生物標(biāo)志物對于臨床實踐具有重要意義。

研究結(jié)果顯示，鼻咽癌患者鼻咽癌組織、鼻咽刷牙樣本和血液樣本中的RASSF1A 啟動子甲基化明顯高于非腫瘤組織[11]。因此，RASSF1A 啟動子甲基化可作為組織和刷洗樣本的生物標(biāo)志物，用于鼻咽癌的臨床診斷。在未來，匹配良好的前瞻性研究對于確定鼻咽癌患者RASSF1A 啟動子甲基化的預(yù)后和診斷至關(guān)重要。

2.2 肺癌

肺癌是世界上最常見的惡性腫瘤之一。在中國，肺癌是癌癥死亡的主要原因。研究結(jié)果表明，早期診斷可顯著提高肺癌患者的5 年生存率，但由于臨床表現(xiàn)和病理特征的異質(zhì)性，目前尚無有效且廉價的方法可用于肺癌的早期檢測和篩查。對于疑似肺癌患者，早期通常進行纖維支氣管鏡檢查，通過支氣管肺泡灌洗可獲得細(xì)胞學(xué)檢查樣本，進而在第一時間獲得支氣管肺泡灌洗液。

相關(guān)研究結(jié)果顯示，早期肺癌患者的SHOX2和RASSF1A 甲基化水平均低于晚期肺癌患者[12]。最可能的解釋是由于早期腫瘤的侵襲性較低，使得進入支氣管系統(tǒng)的腫瘤細(xì)胞較少。作為評估肺病的重要方法，支氣管肺泡灌洗液的細(xì)胞學(xué)檢查已被廣泛使用，但其靈敏度較低（43%～48%），同時存在大量模棱兩可的病例。正如在上述研究中，對肺癌患者的支氣管肺泡灌洗液樣本進行細(xì)胞學(xué)檢查，其靈敏度僅為5.7%，有81.3%的樣本結(jié)果為陰性，同時有13.0%的樣本結(jié)果是模凌兩可的；而對肺泡灌洗液樣本進行SHOX2 和RASSF1A 甲基化聯(lián)合檢測可將靈敏度從5.7%提高至71.5%，對于細(xì)胞學(xué)上的可疑和陰性樣本，基因檢測陽性率分別達93.8%和66.0%[12]。與細(xì)胞學(xué)檢查相比，聯(lián)合檢測支氣管肺泡灌洗液樣本中SHOX2 和RASSF1A 甲基化可提高肺癌的檢出率，并具有較高的靈敏度和特異性，有助于肺癌的早期診斷。

3 RASSF1A 基因在消化系統(tǒng)高發(fā)腫瘤中的研究進展

3.1 食管癌

食管癌在大多數(shù)情況下病程發(fā)展迅速且預(yù)后不良，已成為世界上最嚴(yán)重的腫瘤疾病之一。食管癌具有兩種主要的組織學(xué)亞型：食管鱗狀細(xì)胞癌（esophageal squamous cancer, ESCC） 和食管腺癌。ESCC 是亞洲人群的主要亞型，而食管腺癌則在白種人群中更為常見。近年來，雖然早期診斷和多模式治療已取得了一定的進展，但食管癌的預(yù)后仍然很差。食管癌患者的總體5 年生存率＜20%，大多數(shù)患者在確診的第1 年內(nèi)死亡[13]。

在ESCC 中已檢測到多個遺傳和遺傳外改變，但ESCC 的致癌性及進展的精確分子機制仍然未知。雜合性缺失分析結(jié)果顯示，3p21.3 是食管癌等癌癥中常見的一個區(qū)域。已在多種癌癥中觀察到基因在該區(qū)表達下調(diào)，這意味著不同腫瘤的正負(fù)調(diào)節(jié)[14]。腫瘤抑制基因啟動子區(qū)CpG 島甲基化導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄沉默是公認(rèn)的共同機制。RASSF1A 基因失活的最常見機制是其啟動子序列中CpG 島的高甲基化。RASSF1A 基因高甲基化與基因表達的缺失高度相關(guān)，而5-雜氮-2'-脫氧胞苷處理的去甲基化可使基因表達恢復(fù)，表明RASSF1A 基因高甲基化是其沉默的原因之一。RASSF1A 基因失活可刺激肺癌細(xì)胞的錨定依賴性生長，野生型RASSF1A 基因轉(zhuǎn)染高甲基化的肺癌可抑制腫瘤生長，提示RASSF1A 可用作腫瘤抑制基因。據(jù)文獻報道，RASSF1A 基因甲基化可能在ESCC 中起著重要作用。因此，研究RASSF1A 基因甲基化的功能后果及其在ESCC 中的致癌作用具有重要意義[15-16]。

3.2 胃癌

胃癌是起源于胃黏膜上皮的惡性腫瘤，其癥狀與胃炎、胃潰瘍等胃慢性疾病癥狀相似。目前，我國胃癌的早期診斷率仍較低。胃癌發(fā)生是一個多步驟過程，不僅包括基因突變，還包括表觀遺傳改變。其中最重要的是DNA 甲基化，其不僅影響腫瘤抑制基因，還可能參與細(xì)胞周期調(diào)控、DNA 修復(fù)、致癌物質(zhì)代謝、細(xì)胞與細(xì)胞相互作用、細(xì)胞凋亡和血管生成。作為癌細(xì)胞的重要標(biāo)志，啟動子甲基化被認(rèn)為是滅活癌癥相關(guān)基因的主要機制之一，伴隨著遺傳改變，最終導(dǎo)致胃癌的發(fā)生[17]。

目前已發(fā)現(xiàn)越來越多的癌癥相關(guān)基因，特別是腫瘤抑制基因在胃癌中被甲基化。隨著對RASSF1A基因研究的不斷深入，人們發(fā)現(xiàn)RASSF1A mRNA在胃癌組織中的表達水平明顯低于正常胃黏膜組織，這表明RASSF1A 基因參與了胃癌的發(fā)生。RASSF1A 基因啟動子高甲基化可能是導(dǎo)致其表達失活的重要原因，也是胃癌發(fā)生發(fā)展過程中的頻發(fā)分子事件，并與胃癌的進展演變相關(guān)。胃癌組織中RASSF1A mRNA 的表達水平隨分化程度的降低、臨床分期的增加而明顯降低，預(yù)示了胃癌的惡性程度高，臨床分期晚。因此檢測胃癌組織中RASSF1A 基因甲基化有助于評價胃癌的分級及判斷腫瘤是否存在轉(zhuǎn)移。此外，RASSF1A 基因失活廣泛存在于各種上皮細(xì)胞腫瘤中，且失活與其啟動子區(qū)高甲基化密切相關(guān)，故干預(yù)RASSF1A 基因的表達有可能在胃癌防治中起一定作用[18]。

3.3 膽管癌

膽管癌指源于肝外膽管包括肝門區(qū)至膽總管下端的一種高度惡性上皮腫瘤。膽管癌的遺傳改變包括p53、APC、c-erbB-2、K-Ras 和頻繁的p16INK4A改變。染色體3p21 的等位丟失在人類癌癥中較為常見，雖然在染色體3p21 上存在多種腫瘤抑制基因，但RASSF1A 被認(rèn)為是該區(qū)的主要腫瘤抑制基因[19]。

RASSF1A 含有RA 域，其中具有蛋白質(zhì)功能效應(yīng)的Ras 還參與了正常細(xì)胞中的信號傳導(dǎo)。RASSF1A基因可能參與了膽管癌的發(fā)生發(fā)展及浸潤轉(zhuǎn)移過程，兩者存在一定的相關(guān)性。相關(guān)研究結(jié)果表明，RASSF1A 基因在肝外膽管癌組織中的轉(zhuǎn)錄表達缺失率明顯高于癌旁組織，且與肝外膽管癌的淋巴轉(zhuǎn)移及TNM 分期相關(guān)。甲基化特異性PCR 和DNA 測序結(jié)果也證實啟動子區(qū)CpG 島高甲基化是RASSF1A基因表達缺失的主要機制之一。RASSF1A 的腫瘤抑制功能表現(xiàn)為其在細(xì)胞系中外源性重新表達后，集落形成減少，抑制不依賴貼壁的生長和腫瘤形成。此外，啟動子高甲基化的膽管癌中提示RASSF1A 基因轉(zhuǎn)錄失活。因此，深入研究RASSF1A 基因可能對膽管癌預(yù)后具有重要意義。

3.4 肝癌

肝細(xì)胞癌是最常見的惡性腫瘤之一，也是全球癌癥相關(guān)死亡的主要原因之一。有充分證據(jù)表明，乙型和丙型肝炎病毒感染、黃曲霉毒素B 暴露和大量飲酒是肝細(xì)胞癌的重要危險因素。也有文獻描述了與肝細(xì)胞癌發(fā)展相關(guān)的許多遺傳異常。除遺傳改變外，基于DNA 甲基化的機制已被證明有助于腫瘤抑制基因的失活。異常甲基化基因可用作早期檢測、腫瘤分類和治療反應(yīng)的生物標(biāo)志物，例如靶向治療、表觀遺傳因子和傳統(tǒng)化療藥物。腫瘤患者外周血或組織中的甲基化信號是早期診斷、預(yù)測治療反應(yīng)和預(yù)后的潛在生物標(biāo)志物[20]。

Abd-Elfatah 和Gad-Allah[21]的研究結(jié)果顯示，RASSF1A 基因的啟動子區(qū)在75.9%的非腫瘤肝組織和82.8%的肝細(xì)胞癌組織中發(fā)生了甲基化，截止值為4%甲基化速率，表明RASSF1A 基因啟動子的甲基化頻率高；當(dāng)使用顯著性更高的20%甲基化速率截止值時，僅有24.1%的非腫瘤肝組織和49.4%的肝細(xì)胞癌組織被認(rèn)為存在RASSF1A 基因啟動子的甲基化。該結(jié)果表明，肝細(xì)胞癌的癌旁組織中存在RASSF1A 基因啟動子的中等甲基化。此外，與相應(yīng)的非腫瘤肝組織相比，肝細(xì)胞癌組織中RASSF1A基因啟動子的甲基化速率顯著增加，表明這種表觀遺傳改變參與了肝癌的發(fā)生發(fā)展。

3.5 結(jié)直腸癌

結(jié)直腸癌是胃腸道中常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率和病死率在消化系統(tǒng)惡性腫瘤中僅次于胃癌、食管癌和原發(fā)性肝癌。自2000 年以來，結(jié)直腸癌的發(fā)病率和死亡率均呈逐年上升趨勢。結(jié)直腸癌早期癥狀不明顯，多發(fā)于中年以上男性。

目前，已有許多關(guān)于結(jié)直腸癌相關(guān)基因甲基化狀態(tài)的報道。甲基化特異性PCR 檢測結(jié)果顯示，抑癌基因RASSF1A 在結(jié)直腸癌細(xì)胞系、各種類型的實體瘤及結(jié)直腸癌患者血清中均存在較高的啟動子甲基化。RASSF1A 可通過抑制JNK 途徑誘導(dǎo)G1期細(xì)胞周期停滯。早期對于RASSF1A 的研究結(jié)果顯示，微管穩(wěn)定性通過激活的K-Ras 而增強，因此RASSF1A 可通過多重途徑調(diào)節(jié)微管穩(wěn)定，參與微管蛋白的動力學(xué)?？傊私Y(jié)直腸癌發(fā)生中眾所周知的信號通路外，RASSF1A 甲基化可能是異常Ras信號傳導(dǎo)的替代機制。隨著對RASSF1A 基因研究的深入，將為結(jié)直腸癌的發(fā)生機制、分子水平監(jiān)測及基因治療提供新的參考依據(jù)[22]。

4 RASSF1A 基因在生殖泌尿系統(tǒng)高發(fā)腫瘤中的研究進展

4.1 子宮內(nèi)膜癌

子宮內(nèi)膜癌（endometrial cancer, EC）位列全球女性最常見癌癥第7 位，其發(fā)病率呈上升趨勢，故需更好地了解分子事件在癌癥發(fā)生中的作用。作為婦科惡性腫瘤，EC 具有由異常遺傳和表觀遺傳改變以及環(huán)境因素驅(qū)動的多因素特征。目前基因表達變異以及癌癥相關(guān)基因的突變或缺失可能無法完全解釋子宮內(nèi)膜的癌變，其對染色質(zhì)產(chǎn)生影響的同時卻未改變DNA 突變基因表達的表觀遺傳引起了人們的注意。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，啟動子異常甲基化是子宮內(nèi)膜腫瘤發(fā)生的早期和廣泛的改變。RASSF1A 基因是腫瘤抑制基因之一，其啟動子常在EC 中甲基化失活。RASSF1A 基因的這種表觀遺傳沉默表明其可能與EC 的發(fā)病機制有關(guān)。

人類RASSF1A 基因位于染色體3p21.3 上，含有8 個外顯子，可產(chǎn)生7 個轉(zhuǎn)錄本。RASSF1A 基因啟動子的異常甲基化已被確定為是RASSF1A 表達失活的主要原因，從而導(dǎo)致早期良性腫瘤向后期浸潤性癌的惡性轉(zhuǎn)化。RASSF1A 基因啟動子甲基化可能是EC 的發(fā)病機制之一，RASSF1A 蛋白表達減少或缺失對EC 的發(fā)生、發(fā)展具有重要作用。研究結(jié)果顯示，RASSF1A 是EC 的重要指標(biāo)，具有高靈敏度（100%）和特異性（97.2%）。EC 中RASSF1A 基因啟動子的甲基化率明顯高于正常子宮內(nèi)膜；EC 中RASSF1A 蛋白陽性表達率明顯低于正常子宮內(nèi)膜[23]。因此，RASSF1A 基因啟動子甲基化可能與EC的發(fā)生和發(fā)展相關(guān)。RASSF1A 有望成為EC 的分子標(biāo)志物，為EC 的早期診斷及生物靶向治療提供理論依據(jù)。

4.2 卵巢癌

卵巢癌是女性生殖器官常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率僅次于子宮頸癌和子宮體癌。卵巢癌中以上皮癌最為多見，其次是惡性生殖細(xì)胞瘤。其中卵巢上皮癌死亡率占婦科腫瘤首位，對女性生命造成了嚴(yán)重威脅，但對其分子發(fā)病機制仍知之甚少。有證據(jù)表明，遺傳和表觀遺傳事件在卵巢癌中均發(fā)揮作用，表觀遺傳變化發(fā)生于致癌過程的早期，其包括DNA 甲基化和組蛋白修飾。許多基因通過DNA 甲基化在卵巢癌中沉默，如RASSF1A 基因。

Bondurant 等[24]研究發(fā)現(xiàn)，卵巢良性腫瘤組織、卵巢癌患者血清以及健康志愿者血清中均未發(fā)生RASSF1A 基因甲基化；卵巢癌組織中RASSF1A 基因的甲基化狀況與血清中出現(xiàn)RASSF1A 基因甲基化關(guān)系密切；卵巢癌患者中的RASSF1A 基因甲基化改變與腫瘤的臨床分期、細(xì)胞分化程度、組織學(xué)類型無明顯相關(guān)性，但與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[24]。因此，分析血清DNA 中RASSF1A 基因異常甲基化有可能成為輔助卵巢癌診斷的有效方法之一。

4.3 乳腺癌

自20 世紀(jì)70 年代末起, 我國乳腺癌的發(fā)病率一直呈上升趨勢，已成為我國女性發(fā)病率最高的一類癌癥。乳腺癌的發(fā)病機制非常復(fù)雜，對于RASSF1A 基因在乳腺癌中的研究，國外已有相關(guān)報道并正在進行深入探討。研究結(jié)果顯示，RASSF1A基因啟動子甲基化為乳腺癌中的頻發(fā)事件，其發(fā)生率隨年齡增長而升高，在乳腺癌發(fā)生中起重要作用。

RASSF1A 基因表達缺失可能參與了乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程，故RASSF1A 基因有可能成為乳腺癌患者預(yù)后的良好標(biāo)志物之一。RASSF1A 基因幾乎在全身正常組織器官中均有表達，但在多種實體腫瘤中表達缺失。其主要通過穩(wěn)定微管、調(diào)控細(xì)胞周期以及增加細(xì)胞凋亡來抑制腫瘤細(xì)胞的生長。RASSF1A 基因甲基化發(fā)生在乳腺癌早期，與腫瘤的TNM 分期、侵襲性及預(yù)后有關(guān)。RASSF1A 在乳腺癌組織中低表達，而在癌旁組織中高表達。文獻報道RASSF1A 在癌旁組織中的表達陽性率明顯高于乳腺癌組織（86.7%比35.0%，P＜0.05）；RASSF1A 的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級、脈管侵犯、人類表皮生長因子受體2 和Ki-67 表達有關(guān)，其高表達與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級和c-erbB-2 蛋白表達呈負(fù)相關(guān)[25]。RASSF1A 啟動子甲基化可為部分乳腺癌患者提供重要的預(yù)后信息，并在乳腺腫瘤的臨床行為中起重要作用。檢測基因的甲基化狀態(tài)有望成為一項具有可操作性的對乳腺癌預(yù)后生物標(biāo)志物進行前瞻性評估的項目[26]。

4.4 前列腺癌

前列腺癌是發(fā)生于前列腺的上皮性惡性腫瘤。2012 年我國腫瘤登記地區(qū)前列腺癌的發(fā)病率為9.92/10 0000，位列男性惡性腫瘤發(fā)病率的第6 位。前列腺癌發(fā)病率隨著年齡的增長而增長，高峰年齡為70～80 歲。前列腺癌的病因在很大程度上仍未定義。然而，越來越清楚的是，各種腫瘤抑制基因的表觀遺傳失活可能在前列腺癌等多種癌癥發(fā)展中起關(guān)鍵作用。

腫瘤抑制因子RASSF1A 可能是目前人類癌癥中描述最頻繁的甲基化基因。RASSF1A 啟動子的甲基化率與前列腺癌發(fā)生風(fēng)險顯著相關(guān)。RASSF1A 可抑制關(guān)鍵細(xì)胞周期調(diào)節(jié)劑細(xì)胞周期蛋白D1，最終抑制前列腺癌細(xì)胞的增殖及侵襲潛力[27]。另有研究結(jié)果顯示，RASSF1A 啟動子甲基化率與前列腺癌風(fēng)險增加呈明顯正相關(guān)。此外，前列腺癌患者前列腺組織中RASSF1A 基因的甲基化率與前列腺癌患者的Gleason 評分、血清前列腺特異性抗原和腫瘤分期呈顯著正相關(guān)，表明RASSF1A 啟動子甲基化率可用于前列腺癌的早期診斷及疾病預(yù)后預(yù)測。

5 RASSF1A 基因在神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤中的研究進展

5.1 神經(jīng)母細(xì)胞瘤

神經(jīng)母細(xì)胞瘤是兒童中最常見的實體瘤，占兒童癌癥的8%～10%和兒童癌癥死亡的15%。雖然嬰兒局部成神經(jīng)細(xì)胞瘤可自發(fā)消退或成熟，但兒童播散性腫瘤可抵抗多模式強化治療。

RASSF1A 基因甲基化常見于臨床診斷為神經(jīng)母細(xì)胞瘤的嬰兒或兒童，而CASP8 和DCR2 基因甲基化僅在兒童腫瘤中常見。當(dāng)根據(jù)腫瘤的倍性狀態(tài)分類時，發(fā)現(xiàn)RASSF1A 和PCDHB 基因甲基化僅與臨床診斷為二倍體腫瘤患兒的MYCN 擴增和MYCN 異常有關(guān)；此外還發(fā)現(xiàn)RASSF1A 和PCDHB基因甲基化分別與三倍體和二倍體腫瘤患兒的預(yù)后有關(guān)，且與二倍體腫瘤患兒的MYCN 擴增有關(guān)[28]。因此基于患者年齡和腫瘤倍性狀態(tài)，RASSF1A 甲基化可能具有兩種生物學(xué)作用。

5.2 顱內(nèi)原始神經(jīng)外胚層腫瘤

顱內(nèi)原始神經(jīng)外胚層腫瘤（primitive neuroectodermal tumor,PNET）是兒童中最常見的惡性胚胎腦腫瘤，成神經(jīng)管細(xì)胞瘤（medulloblastoma, MB）為其主要亞型。MB 與幕上原始神經(jīng)外胚層腫瘤（supertentorial primitive neuroectodermal tumor, SPNET）雖在組織學(xué)上相似，但兩者在其他方面仍有許多不同。臨床上MB 占兒科腦腫瘤的25%左右，而SPNET 僅占10%左右，但MB 患者的5 年生存率（50%～70%）優(yōu)于SPNET 患者（20%～30%）[29]。此外，MB 的遺傳組成似乎也與SPNET 不同。異染色體17q 是MB 的特征，而染色體14q 和19q 的丟失在SPNET 中更常見。DNA 微陣列分析結(jié)果進一步揭示了MB 與SPNET 之間基因表達譜的差異，意味著兩者是生物學(xué)上的不同實體。

MB 和SPNET 在組織學(xué)上類似于分布在大腦不同解剖部位的顱內(nèi)PNET。有證據(jù)表明，啟動子CpG 島的高甲基化是多種人類癌癥中常見的表觀遺傳事件。Chang 等[30]采用甲基化特異性PCR 檢測了25 個原發(fā)性MB、9 個原發(fā)性SPNET、3 個MB 和2 個SPNET 細(xì)胞株中RASSF1A、FHIT 和sFRP1 啟動子區(qū)的甲基化狀態(tài)。結(jié)果顯示，在2 個正常小腦和5 個正常腦組織樣本中，均未檢測到上述3 種基因的啟動子高甲基化；相比之下，在100%的原發(fā)性MB、67%（6/9）的原發(fā)性SPNET 和所有SPNET 細(xì)胞株中均檢測到RASSF1A 的啟動子高甲基化，且SPNET 組的RASSF1A 啟動子高甲基化率顯著低于MB 組。此外，還在22%（2/9）和11%（1/9）的SPNET細(xì)胞株中分別檢測到FHIT 和sFRP1 的啟動子高甲基化，但在所研究的MB 中未檢出FHIT 和sFRP1 的啟動子高甲基化。由此可見，RASSF1A 的啟動子高甲基化是顱內(nèi)PNET 的常見事件，而FHIT 和sFRP1在一小部分SPNET 中受表觀遺傳學(xué)影響。

6 結(jié) 語

RASSF1A 基因為RASSF 家族成員，其以三磷酸鳥苷依賴性方式結(jié)合Ras 繼而誘導(dǎo)由Ras 介導(dǎo)的凋亡。該基因的缺失或表達改變與多種癌癥的發(fā)病機理有關(guān)，表明該基因具有腫瘤抑制功能。作為腫瘤抑制基因，RASSF1A 在調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡和微管動力學(xué)以及維持基因組不穩(wěn)定性方面發(fā)揮作用，可通過多種途徑抑制細(xì)胞生長、促進細(xì)胞凋亡和衰老。由于腫瘤抑制基因的表觀遺傳失活在多種惡性腫瘤的發(fā)展中起關(guān)鍵作用，因此可通過對RASSF1A 基因的深入研究，為多種惡性腫瘤的治療研究提供方向和新的分子靶點，同時利用其相關(guān)關(guān)系對腫瘤治療的預(yù)后進行評定。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突