基于焦銻酸鈉沉淀法的膦甲酸鈉乳膏鈉鹽鑒別方法研究

彭 茗，宋冬梅，樂 健

(上海市食品藥品檢驗所化學室，國家藥品監(jiān)督管理局化學藥品制劑質(zhì)量分析重點實驗室，上海 201203)

膦甲酸鈉(foscarnet sodium)是一種廣譜抗病毒藥[1]，化學名稱為膦甲酸三鈉鹽六水合物，分子式為CNa3O5P·6H2O。膦甲酸鈉乳膏是一種乳劑型基質(zhì)的乳膏，用于免疫功能損害病人對阿昔洛韋耐藥的單純皰疹病毒性皮膚、黏膜感染[2]。

膦甲酸鈉乳膏的現(xiàn)行質(zhì)控標準收載于新藥轉正標準第55冊，標準號為國家食品藥品監(jiān)督管理局國家藥品標準WS1-(X-134)-2004Z[3]。該標準中鈉鹽鑒別采用醋酸氧鈾鋅沉淀法。醋酸氧鈾鋅沉淀法系2005年版及以往版本《中華人民共和國藥典》(簡稱藥典)附錄中鈉鹽鑒別(2)的方法[4]，但由于醋酸氧鈾鋅具有放射性，自2010年版藥典起，將鈉鹽鑒別(2)改為焦銻酸鈉沉淀法[5]。焦銻酸鈉沉淀法是一種高靈敏度的鈉離子檢查方法，含鈉離子的供試品溶液在堿性條件下可以與焦銻酸鉀反應，生成白色致密的焦銻酸鈉沉淀。此方法曾被應用于血鈉檢測[6-7]、食品摻假檢測[8]等領域中。

本研究改進了膦甲酸鈉乳膏鈉鹽鑒別方法。乳膏經(jīng)熾灼灰化處理后，采用焦銻酸鈉沉淀法，方法的專屬性和耐用性良好，可取代現(xiàn)行質(zhì)量標準中的鈉鹽鑒別方法。

1 儀器和試藥

CWF11/13型高溫馬弗爐(英國Carbolite公司)；Acculab型電子天平(精度0.01 g)和CP224S型電子天平(精度0.000 1 g)由德國Sartorius公司提供。膦甲酸鈉乳膏(規(guī)格0.15 g∶5 g，批號180403、181001和181101，上海現(xiàn)代制藥股份有限公司)；膦甲酸鈉原料(物料編號01.01.506-p-1801001)、空白基質(zhì)(由聚山梨酯80、三乙醇胺、丙二醇、羥苯乙酯、純化水、單硬脂酸甘油酯、硬脂酸、十八醇、白凡士林和輕質(zhì)液狀石蠟組成，上海現(xiàn)代制藥股份有限公司)；碳酸鉀(純度99.0%，批號20130222，國藥集團化學試劑有限公司)；焦銻酸鉀(分析純，批號150701，上海四赫維化工有限公司)；氫氧化鉀(分析純，批號20121218，上海凌峰化學試劑有限公司)。焦銻酸鉀試液按照2015年版藥典四部通則8002配制。

2 方法和結果

2.1 供試品溶液的制備 稱取膦甲酸鈉乳膏約3.3 g(相當于膦甲酸鈉100 mg)，置石英坩堝中，于加熱板上緩緩熾灼至完全炭化，再置高溫馬弗爐中，于800 ℃熾灼使完全灰化，放冷，加水2 ml使殘渣溶解，作為供試品溶液。

2.2 鈉鹽鑒別方法 將2.1項下供試品溶液轉移至小燒杯中，加15%碳酸鉀溶液2 ml，并加玻璃珠若干粒，置加熱板上煮沸，無沉淀生成；再加焦銻酸鉀試液4 ml，加熱至沸；置冰水中冷卻，即有致密的白色沉淀生成。

2.3 方法學驗證

2.3.1 靈敏度考察 稱取膦甲酸鈉原料500 mg，于800 ℃熾灼，殘渣加水10 ml溶解，搖勻，作為對照品儲備液。分別量取對照品儲備液1、0.5、0.2和0.1 ml，分別置4個小燒杯中，分別加水1、1.5、1.8和1.9 ml，搖勻，分別作為靈敏度實驗溶液(1)、(2)、(3)和(4)，再按2.2項下方法進行實驗。結果靈敏度實驗溶液(1)～(3)均生成明顯的白色致密沉淀，而靈敏度實驗溶液(4)生成比較少量的白色沉淀(見圖1)。因此，膦甲酸鈉原料的焦銻酸鈉沉淀法鈉鹽鑒別的靈敏度為5 mg(按膦甲酸鈉原料計)。

2.3.2 專屬性實驗 稱取空白基質(zhì)3.58 g，置石英坩堝中，按2.1項下方法制備空白溶液，再按2.2項下方法進行實驗，結果未生成白色致密沉淀(見圖2)。另取空白基質(zhì)3.32 g和膦甲酸鈉原料0.102 1 g，置石英坩堝中，按2.1項下方法制備空白加樣溶液，再按2.2項下方法進行實驗，結果生成致密的白色沉淀(見圖2)。說明空白基質(zhì)無干擾，方法專屬性良好。

圖1 靈敏度實驗中溶液(4)的俯視圖和側面圖A：俯視圖；B：側面圖

2.3.3 耐用性實驗 取批號為180403的膦甲酸鈉乳膏樣品，分別稱取1.66、3.36和6.80 g，分別置石英坩堝中，按2.1項下方法制備供試品溶液，再按2.2項下方法進行實驗，結果均生成致密的白色沉淀，說明樣品的取樣量在50%～200%的范圍內(nèi)，均呈正反應，耐用性良好。另取批號為180403的樣品，分別稱取3.43、3.36和3.38 g，分別置石英坩堝中，按2.1項下方法制備供試品溶液，熾灼溫度分別設為600 ℃、700 ℃和800 ℃，再按2.2項下方法進行實驗。結果在600 ℃的熾灼溫度下，樣品不能完全灰化(見圖3A)，對結果造成干擾；700 ℃和800 ℃的熾灼溫度均能使樣品完全灰化(見圖3B、C)，結果均生成致密的白色沉淀，說明本方法的熾灼溫度在700 ℃～800 ℃的范圍內(nèi)，耐用性良好。

圖2 專屬性實驗中空白溶液和空白加樣溶液的俯視圖和側面圖A：空白溶液的俯視圖；B：空白溶液的側面圖；C：空白加樣溶液的俯視圖；D：空白加樣溶液的側面圖

圖3 膦甲酸鈉乳膏經(jīng)熾灼后的照片A：熾灼溫度為600 ℃；B：熾灼溫度為700 ℃；C：熾灼溫度為800 ℃

2.4 樣品檢測 分別取批號為180403、181001和181101的膦甲酸鈉乳膏樣品3.36、3.36和3.54 g，分別按2.1項下方法制備供試品溶液，再按2.2項下方法進行實驗，結果均生成致密的白色沉淀，即鈉鹽鑒別(2)均呈正反應。

3 討 論

9.0版歐洲藥典[9]和42版美國藥典[10]均收載了膦甲酸鈉原料，其中鈉鹽鑒別均采用焦銻酸鈉沉淀法，且均將樣品直接溶于水后制備供試品溶液，無需熾灼。因此，作者曾考慮將乳膏直接用水分散后離心，取水層作為供試品溶液進行鈉鹽鑒別(2)的實驗。但由于水層為下層，不易獲取澄清的下層溶液，且渾濁的下層溶液對結果造成干擾。另嘗試取水層濾過，取濾液作為供試品溶液，分別使用濾紙以及孔徑為0.45和0.22 μm的濾膜過濾。結果用0.45 μm的濾膜過濾較困難，不易獲得鑒別實驗需要的2 ml體積，且濾液不澄清；用0.22 μm的濾膜雖濾液澄清，但極難過濾，不具可操作性。綜上，用水直接分散樣品后離心、過濾制備供試品溶液的方法不可行。

2015年版藥典四部通則中鈉鹽鑒別(1)采用焰色反應法，即觀察鈉元素特征的鮮黃色火焰。作者曾采用空白基質(zhì)對焰色反應法的專屬性進行考察，結果多種處理方法下的空白基質(zhì)或空白溶液經(jīng)灼燒后均能產(chǎn)生鮮黃色火焰，對該乳膏劑的焰色法鈉鹽鑒別產(chǎn)生干擾(見表1)。因此藥典通則鈉鹽鑒別(1)，即焰色反應法鑒別不適用于膦甲酸鈉乳膏。

表1 空白基質(zhì)火焰法鑒別鈉鹽的干擾情況

本研究采用經(jīng)典的焦銻酸鈉沉淀法，解決了現(xiàn)行膦甲酸鈉乳膏國家標準鈉鹽鑒別方法無法獲得試劑的問題，且方法專屬性強、操作簡單，采用常規(guī)試劑和設備即可完成實驗，無需使用復雜的儀器，適合于該產(chǎn)品質(zhì)量標準的制訂。需注意的是，在熾灼裝有乳膏的石英坩堝時，應將加熱板溫度盡量調(diào)低，待乳膏漸漸融化并緩緩蒸干后，再將加熱板溫度調(diào)高進行炭化，否則融化的乳膏在較高的加熱溫度下會濺出坩堝外，影響實驗的實際取樣量。