TP-IgM 抗體檢測在梅毒輔助診斷中的應(yīng)用研究

陳 雪，楊學茹，喬小霞

梅毒感染是一種基于血液傳播、性行為傳播的慢性傳染病，近年來的發(fā)病率呈現(xiàn)出上升趨勢。血清梅毒螺旋體TP-IgM 抗體檢測是近幾年提出的梅毒輔助診斷的實驗室檢測方法，在梅毒診斷中表現(xiàn)出良好的應(yīng)用價值［1］。本文以54 份梅毒患者血清標本作為研究對象，比較分析血清梅毒螺旋體TP-IgM與TRUST 兩種診斷方法在梅毒早期診斷和治療效果評估方面的差異，以探究TP-IgM 抗體檢測在梅毒輔助診斷中的應(yīng)用價值?，F(xiàn)將研究結(jié)果，作如下報告。

1 資料與方法

1.1 一般資料：收集2018 年6 月-2018 年12 月收治的梅毒螺旋體顆粒凝集試驗（TPPA）陽性且臨床癥狀和流行病學史初診且未經(jīng)治療的梅毒患者54例作為梅毒組，另取同期本院健康體檢者30 例作為正常對照組，本人簽署知情同意書。梅毒組中男性29例、女性25 例，年齡為21～68 歲，平均年齡（43.13±5.88）歲；正常對照組中男性17 例、女性13 例，年齡為20～71 歲，平均年齡（42.69±6.14）歲。2 組研究對象在性別、年齡等基礎(chǔ)資料分布中差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 納入標準：①梅毒組TPPA 陽性，符合臨床梅毒診斷標準；②年齡≥18 周歲；③全程配合并完成相關(guān)檢查。正常對照組TPPA 陰性，梅毒組和正常對照組均排除：①合并艾滋病、乙肝、丙肝等傳染??；②合并濕疹、多形紅斑、花斑癬等皮膚??；③合并其他自身免疫性疾病；④合并其他全身感染性疾病。

1.3 主要試劑及儀器：所用試劑TRUST 為上海榮盛生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，TPPA 所用試劑為日本富士生物制品株式會社生產(chǎn)，TP-IgM ELISA 試劑盒購于北京熱景生物技術(shù)有限公司。酶標儀為芬蘭雷柏MK3，洗板機為MK2，振蕩器為KJ-201BD 水平旋轉(zhuǎn)儀。所有操作嚴格依照試劑盒說明進行。

1.4 方法

1.4.1 標本采集：入組即取研究對象外周血標本分離血清5 mL，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4.2 TRUST 試驗：先取TRUST 試劑于卡片3 個圓圈中分別滴加1 滴；再加待檢血清50 ul 及陰陽性對照各1 滴涂勻，（100±5）r/min 震搖8 min，觀察結(jié)果；陽性反應(yīng)為出現(xiàn)明顯的紅色凝聚物，陰性反應(yīng)為均勻的抗原顆粒。

1.4.3 TPPA 試驗：取100 μL 血清稀釋液加入到微量反應(yīng)板的1～4 孔，每孔25 μL；再將25 μL 血清加入到第1 孔，按照倍比稀釋的方式從第1 孔一直至第4 孔；在第3 孔和第4 孔中分別加入25 μL 未致敏粒子和致敏粒子，利用微型振蕩器混合30 s，加蓋，37 ℃水浴靜置2 h 后觀察結(jié)果。結(jié)果判定標準：（++）為凝集均勻且呈膜狀展開；（+）為粒子環(huán)顯著增大，外周邊緣呈鋸齒狀凝集；（+／-）為粒子如小環(huán)狀圓形且外周邊緣均勻平滑；（-）為粒子呈現(xiàn)紐扣狀圓形聚集，且外周均勻平滑。

1.4.4 TP-IgM 檢測：樣品對應(yīng)微孔板編號（陰性3孔、陽性2 孔、空白對照1 孔），先加入樣品稀釋液100 μL。分別在對應(yīng)孔中加入待測樣品/陰性、陽性對照各10 μL 37 ℃水浴30 min，充分洗滌6 次。每孔加入酶標試劑100 μL，37 ℃水浴30 min、清洗6次。每孔加入顯色劑A、B 各50 μL，混勻后于37 ℃避光顯色10 min 后每孔加入終止液50 μL。用酶標儀測定各孔的吸光度值，樣品孔的A 值≥臨界值則判定為陽性。

1.5 統(tǒng)計學方法：本文數(shù)據(jù)處理采用SPSS 22.0 軟件進行處理，計量資料采用±s 表示，組間比較采用t 檢驗，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 治療前不同梅毒期患者梅毒血清學檢測結(jié)果：54 例TPPA 陽性初診患者中TP-IgM 陽性45 例，假陰性9 例，敏感性83.3%；TRUST 陽性31 例，假陰性23 人，敏感性57.4%。其中經(jīng)臨床癥狀及流行病學診斷潛伏期患者37 例，TP-IgM、TRUST 敏感性分別為78.4%、45.9%；一期梅毒患者12 例，TP-IgM、TRUST 敏感性為91.7%、75%；二期梅毒患者5 例，敏感性均為100%；30 例健康者中TP-IgM、TPPA 檢測結(jié)果均為陰性，特異性為100%，TRUST 陽性2例，特異性93.8%，見表1。

表1 治療前不同梅毒期患者梅毒血清學檢測結(jié)果（%）

2.2 不同期梅毒患者規(guī)范治療3 個月、6 個月、12個月后隨訪結(jié)果：54 例初診患者規(guī)范治療12 個月后TP-IgM 陽性率降為3.7%，轉(zhuǎn)陰率為96.3%；TRUST 陽性率降為12.9%，轉(zhuǎn)陰率為89.2%。潛伏期梅毒組治療后進行血清學檢測隨訪：3 個月、6 個月和12 個月TP-IgM 轉(zhuǎn)陰率分別75.7%、89.1%和97.3% ；TRUST 轉(zhuǎn)陰率分別為75.7%、75.7% 和89.2%。同期對一期梅毒患者隨訪TP-IgM 轉(zhuǎn)陰率分別為66.7%、83.3%和100%；TRUST 轉(zhuǎn)陰率分別58.3%、66.7%和91.7%。二期梅毒組隨訪TP-IgM 轉(zhuǎn)陰率則分別為40%、60.0%、80.0%；TRUST 轉(zhuǎn)陰率分別為20.0%、40%和60.0%。梅毒患者經(jīng)過正規(guī)治療12 個月后體內(nèi)TP-IgM 抗體陽性率下降較TRUST更明顯，見表2。

表2 潛伏期、一期、二期梅毒患者3 個月、6 個月、12 個月后隨訪結(jié)果［n，%］

3 討論

梅毒作為一種嚴重威脅人類健康的慢性傳染病，近年來其發(fā)病率呈現(xiàn)快速上升的蔓延趨勢。研究顯示在感染梅毒2 周后即可產(chǎn)生高表達的特異性抗體TP-IgM［2］，非特異性抗體產(chǎn)生較晚，一般在感染后5～7 周產(chǎn)生，隨著疾病發(fā)展和治療后逐漸消失［3］。

本次研究亦發(fā)現(xiàn)在初診未經(jīng)治療的梅毒患者Tp-IgM 抗體和TRUST 均出現(xiàn)不同程度陽性反應(yīng)，隨著正規(guī)治療后二者陽性率都趨于降低，與相關(guān)研究相一致。但是本次研究顯示潛伏期和一期Tp-IgM的檢測陽性率高于TRUST，敏感性更高，而在二期時2 者檢測陽性率已無差異性，提示在早期梅毒實驗室診斷中，檢測Tp-IgM 比TRUST 更敏感。TRUST作為非梅毒螺旋體抗體檢測試驗，由于產(chǎn)生較晚，容易產(chǎn)生假陰性，對于一些有自身免疫性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、風濕熱和系統(tǒng)性硬化及水痘、麻風和病毒性肝炎、腎病綜合征等患者［4］均有可能引起交叉陽性反應(yīng)。所以對于正規(guī)療程治療后TRUST 仍然為陽性患者，很難判斷是否需要繼續(xù)治療。提示TPIgM 在療效判斷方面比TRUST 更敏感。

本次研究通過54 例初診患者分別在治療前和正規(guī)治療的相應(yīng)療程中于3 個月、6 個月、12 個月進行了TP-IgM 和TRUST 指標的檢測，發(fā)現(xiàn)在早期梅毒的不同分期治療過程中，TP-IgM 比TRUST 轉(zhuǎn)陰率更明顯。一期梅毒治療后抗體轉(zhuǎn)陰最快，在隨訪12 個月即全部轉(zhuǎn)陰，這可能與患者治療前體內(nèi)TPIgM 水平［5］及病程短、治療及時有關(guān)；潛伏期和二期梅毒轉(zhuǎn)陰較慢，隨訪12 個月均未全部轉(zhuǎn)陰，可能與病程長而治療較晚，也可能因為隨訪時間短，體內(nèi)尚有未清除的病原體有關(guān)。所以作為判斷治療效果轉(zhuǎn)歸指標，特異性的TP-IgM 要比非特異性的TRUST敏感性更高?，F(xiàn)階段一些實驗室主要將檢測TP-IgG和TRUST 結(jié)合來進行梅毒實驗室血清學診斷和治療效果觀察指標，減少了單獨運用其中一項指標作為判斷產(chǎn)生的誤診和漏診［6］，但是由于IgG 抗體對于一部分患者即使經(jīng)過足夠治療，其仍能長期存在，甚至終生不消失［7］，而運用TRUST 法作為梅毒治療效果觀察又具有其非特異性的局限性。所以在梅毒診治中運用TP-IgG 和TRUST 相結(jié)合檢測還是存在誤診和治療轉(zhuǎn)歸指向性缺陷［8］。本研究通過不同時期梅毒TP-IgM、TRUST 的檢測陽性率比較分析認為，TP-IgM 抗體檢測可以彌補TP-IgG 和TRUST 檢測的不足，對于梅毒早期診斷及治療轉(zhuǎn)歸判斷方面能夠提供更好更有效的診斷依據(jù)，所以建議有條件的實驗室應(yīng)開展此實驗。