卵巢癌中相關(guān)長鏈非編碼RNA的研究進展

譚芳春，李力

卵巢癌是全球女性中第二常見的婦科惡性腫瘤，也是女性生殖系統(tǒng)最致命的腫瘤[1]。由于卵巢癌的高異質(zhì)性、易復(fù)發(fā)、生存率低等特點，其分子機制研究已經(jīng)成為全世界卵巢癌基礎(chǔ)研究的熱點。長鏈非編碼 RNA（long non-coding RNA，lncRNA）是長度超過200 bp的一組內(nèi)源性細(xì)胞RNA，許多研究顯示其可以通過參與細(xì)胞過程，例如細(xì)胞分裂、應(yīng)激反應(yīng)、分化、存活和衰老，進而調(diào)節(jié)多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移[2-5]。近年研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA的異常表達在卵巢癌發(fā)生過程中也起著主要的致病作用[6]。且有研究發(fā)現(xiàn)卡鉑+多西他賽方案治療卵巢癌會導(dǎo)致癌癥相關(guān)的lncRNA改變其原有的表達水平，表明lncRNA的表達水平經(jīng)過藥物作用后可能發(fā)生改變[7]。

1 LncRNA與惡性腫瘤

LncRNA在許多生物過程的作用如細(xì)胞增殖、分化和凋亡中的參與提示lncRNA在腫瘤發(fā)生過程中的基本作用。這些功能的進一步證據(jù)來源于與其正常樣本相比，lncRNAs在腫瘤樣本中失調(diào)的研究[8]。關(guān)于表達模式和功能在細(xì)胞水平上，lncRNA可分為致癌基因、腫瘤抑制基因和雙向lncRNA。致癌基因包括應(yīng)激誘導(dǎo)的長鏈非編碼RNA（LSINCT5）、轉(zhuǎn)移相關(guān)肺腺癌轉(zhuǎn)錄物1（MALAT-1）、尿路上皮癌抗原1（UCA1）和HOX轉(zhuǎn)錄物反義基因間RNA（HOTAIR）等；而母系表達基因3（MEG3）被歸入抑癌基因；H19和類固醇受體RNA激活劑（SRA）符合第三類，因為它們在一些腫瘤中過表達，但在其他腫瘤中下調(diào)[9]。

2 LncRNAs與卵巢癌

2.1 卵巢癌中l(wèi)ncRNA表達譜 近年，隨著對lncRNA的深入研究，發(fā)現(xiàn)lncRNA的異常表達在卵巢癌發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用[6]。LncRNA表達譜的研究為說明其在卵巢癌中的功能及作用提供了證據(jù)。Liu等[7]通過lncRNA表達譜分析發(fā)現(xiàn)，4 956個lncRNAs中，與卵巢癌親代細(xì)胞相比，卵巢癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞中有583個lncRNA上調(diào)，578個lncRNA下調(diào)，這表明lncRNAs在上皮性卵巢癌轉(zhuǎn)移中可能發(fā)揮作用。一項研究顯示，在高級別漿液性卵巢癌（SOC）的4種亞型（免疫反應(yīng)型、分化型、增殖型和間充質(zhì)型）中鑒定了455個特異性誘導(dǎo)的lncRNAs[10]。此外，最近的一項研究表明，與未經(jīng)處理的對照組相比，在雌激素處理的卵巢癌細(xì)胞中，有115個lncRNA具有顯著變化，其中大多數(shù)被預(yù)測會促進惡性腫瘤進展[11]。

2.2 卵巢癌中的致癌lncRNA 卵巢癌中的致癌lncRNA指的是相比于正常對照組而言，在卵巢癌組織或細(xì)胞系中被證實上調(diào)的lncRNA，已報道的有HOTAIR、H19、CCTA1、MALAT1、HOST2 等。

HOTAIR的敲除抑制了細(xì)胞增殖，降低了細(xì)胞的侵襲能力并恢復(fù)了順鉑耐藥細(xì)胞的順鉑敏感性[12]。已有研究證明HOTAIR在卵巢癌干細(xì)胞（CSCs）中的表達比在非CSCs中高[13]。HOTAIR敲除誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞系中的細(xì)胞周期停滯和凋亡[14]。HOTAIR的下調(diào)可顯著減少CSCs的遷移和侵入，并顯著減少異種移植小鼠中的腫瘤生長和肺轉(zhuǎn)移[15]?？紤]到CSCs在腫瘤發(fā)生和耐藥中的作用，其可能成為抗癌治療的靶點[16]。

H19的過表達與細(xì)胞增殖、腫瘤發(fā)生、細(xì)胞周期進程以及細(xì)胞遷移有關(guān)[17-18]。Let-7是下調(diào)細(xì)胞生長和運動的癌基因表達的腫瘤抑制劑miRNA，有研究證明H19可通過抑制let-7的介導(dǎo)在增強卵巢癌腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲中發(fā)揮作用[19]。H19在大多數(shù)漿液性上皮腫瘤中表達，提示這種lncRNA可作為輔助性腫瘤標(biāo)志物用于診斷、分期和隨訪患有此類疾病的患者[20]。研究表明H19的沉默會導(dǎo)致G2/M期細(xì)胞凋亡和誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯[21]。此外，在大多數(shù)卵巢癌腹水患者中檢測到H19 RNA。

CCAT1的表達可以通過與CCAT1啟動子區(qū)結(jié)合的c-Myc直接誘導(dǎo)。CCAT1在胃癌細(xì)胞系中的表達水平升高，從而增強了癌細(xì)胞的增殖和遷移[22]。lncRNA-CCAT1在具有不同轉(zhuǎn)移潛能的卵巢癌細(xì)胞中差異表達。由于小干擾RNA（siRNA）介導(dǎo)的CCAT1沉默導(dǎo)致卵巢癌細(xì)胞侵襲能力下降，可以推斷CCAT1可能增強這些細(xì)胞的侵襲能力[6]。

HOST2的過表達已經(jīng)在卵巢癌衍生的細(xì)胞系和原發(fā)性腫瘤中被普遍證實。此外，與培養(yǎng)的卵巢表面上皮細(xì)胞相比，其在所有4種主要的卵巢癌亞型中上調(diào)[23]。此外，HOST2可能通過抑制miRNA let-7b的腫瘤抑制功能來增強上皮性卵巢癌中的腫瘤細(xì)胞的遷移、侵襲和增殖[24]。

敲除MALAT1可抑制人骨肉瘤細(xì)胞的增殖和侵襲并抑制其轉(zhuǎn)移潛能。已證明MALAT1的功能是通過磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）信號通路介導(dǎo)的[25]。FAL1的致癌活性歸因于其對p21的抑制作用，此外，F(xiàn)AL1控制表觀遺傳阻遏物BMI1的穩(wěn)定性以改變許多基因的轉(zhuǎn)錄，包括CDKN1A[26]。在卵巢癌細(xì)胞系中使用siRNA下調(diào)AB073614顯著減少細(xì)胞增殖和侵襲，導(dǎo)致細(xì)胞周期的G1期細(xì)胞停滯并顯著增加細(xì)胞凋亡。這種lncRNA的功能可能通過靶向細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2（ERK1/2）和AKT介導(dǎo)的信號通路發(fā)揮作用[27]。ANRIL通過表觀遺傳調(diào)節(jié)其鄰近的腫瘤抑制基因CDKN2A/B的表達。ANRIL在SOC組織中過表達，且這種過表達與晚期國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）分期、高組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后差相關(guān)[28]。體外研究證實了ANRIL在SOC侵襲/轉(zhuǎn)移中的重要作用。PVT1過表達細(xì)胞系中PVT1表達的抑制顯著導(dǎo)致凋亡反應(yīng)。研究表明PVT1可能通過增加p53和基質(zhì)金屬蛋白酶1的組織抑制劑的表達來參與“卡鉑+多西他賽”組合化療的抗癌活性[7]，這意味著該lncRNA在卵巢癌發(fā)展中有重要作用。UCA1是膀胱癌細(xì)胞生長的調(diào)節(jié)因子[29]，研究顯示UCA1在卵巢癌組織中的表達升高，并顯示UCA1 RNA在SKOV-3細(xì)胞中的表達可增加這些細(xì)胞的遷移、侵襲和順鉑耐藥性，已顯示UCA1的這種功能是通過SRPK1和凋亡途徑蛋白介導(dǎo)的[30]。

2.3 卵巢癌中的抑癌lncRNA 與正常卵巢上皮組織相比，上皮性卵巢癌組織中GAS5的表達較低，GAS5的表達下調(diào)被認(rèn)為與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤結(jié)節(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)[31]。此外，外源性GAS5的低表達抑制增殖、減少細(xì)胞遷徙與侵襲、增強細(xì)胞凋亡，其也能夠破壞線粒體膜電位并增強BAX、BAK、cleaved-caspase-3和cleaved-caspase-9表達，因此被認(rèn)為是上皮性卵巢癌患者的新型治療靶點[31]。

HOXA11-AS內(nèi)的外顯子變異體rs17427875（A＞T）已被證明與SOC風(fēng)險降低有關(guān)[32]。此外，與常見等位基因A相比，次級等位基因T在上皮性卵巢癌細(xì)胞中的表達與增殖、遷移和侵襲的減少有關(guān)。此外，相比于等位基因A，HOXA11-AS次級等位基因T的穩(wěn)定表達在更大程度上降低了原發(fā)性腫瘤在小鼠異種移植模型中的發(fā)生率。此外，與正常卵巢組織相比，卵巢癌組織中HOXA11-AS表達水平顯著降低，這意味著該lncRNA在卵巢癌中抑制腫瘤的作用可能因T等位基因的增加而增加[32]。

MEG3是一種能夠激活p53并阻止腫瘤發(fā)生和多種癌癥發(fā)展的lncRNA。然而，由于強化的啟動子高甲基化，在大多數(shù)上皮性卵巢癌組織和細(xì)胞系中其表達下調(diào)或消失[33]。另外，MEG3的異位表達抑制了卵巢癌細(xì)胞的增殖和生長，并增強了它們的凋亡，因此推斷MEG3啟動子甲基化可能導(dǎo)致上皮性卵巢癌的發(fā)生[33]。

ZNF300P1已被定性為人類鋅指蛋白ZNF300的假基因（共享89%的同一性）[34]。它的啟動子已被證明在卵巢癌組織中經(jīng)常被高甲基化和沉默[33]。ZNF300P1也被證明參與調(diào)節(jié)人卵巢表面上皮細(xì)胞中的重要細(xì)胞周期和細(xì)胞運動過程，且由于細(xì)胞極性的喪失，其下調(diào)導(dǎo)致細(xì)胞增殖和集落形成減少[34]。

2.4 卵巢癌中的雙向lncRNA NEAT1在卵巢癌中上調(diào)[35]。值得注意的是，其在高級別SOC的增殖亞型中被抑制[10]。病態(tài)肥胖患者脂肪來源的干細(xì)胞（ADSC）分泌的NEAT1水平顯著高于健康對照者來源的ADSC分泌的NEAT1水平。已經(jīng)表明，當(dāng)卵巢癌細(xì)胞與病態(tài)肥胖患者的ADSC共同培養(yǎng)時，卵巢癌細(xì)胞的腫瘤遷移增加[10]。此外，NEAT1在這些ADSC中的沉默導(dǎo)致卵巢癌腫瘤細(xì)胞遷移減少，可知肥胖癥中NEAT1的分泌增加會加強卵巢癌細(xì)胞的侵襲性[36]。

3 結(jié)語和展望

綜上所述，許多l(xiāng)ncRNA在卵巢癌中表現(xiàn)出失調(diào)，其表達水平與疾病預(yù)后、患者的生存期和治療反應(yīng)有關(guān)，這些研究成果已為其成為卵巢癌生物學(xué)標(biāo)志物提供了依據(jù)，但目前關(guān)于lncRNAs在細(xì)胞增殖、凋亡和轉(zhuǎn)移中的作用機制的報道較少?？傮w而言，卵巢癌中l(wèi)ncRNA功能的多樣性和廣泛性意味著未來針對lncRNA的靶向治療將從根本上改善卵巢癌患者的預(yù)后。