布魯氏菌導致奶牛流產(chǎn)的防控措施

文/吳心華 張 鑫 郭啟勇 柳國鎖 錢 軍 孫亞瓊

（寧夏大學農(nóng)學院）

布魯氏菌病是由布魯氏菌引起的一種慢性、人畜共患的傳染病，主要侵害生殖系統(tǒng)。奶牛感染后，以母牛發(fā)生流產(chǎn)和公牛發(fā)生睪丸炎為主要臨床癥狀。

1 病原特征

布魯氏菌為革蘭氏陰性短小桿菌，是細胞內寄生細菌，主要寄生在巨噬細胞內，為需氧菌，呈散在分布，無芽孢及鞭毛，有時能形成莢膜。布魯氏菌屬有6個菌種，即馬耳他布魯氏菌、流產(chǎn)布魯氏菌、豬布魯氏菌、沙林鼠布魯氏菌、綿羊布魯氏菌和犬布魯氏菌，前3 者分別有3 個、9個、5 個生物型。這6 個菌種生物型特征各有差別，習慣上稱馬耳他布魯氏菌為羊布魯氏菌，流產(chǎn)布魯氏菌為牛布魯氏菌。

布魯氏菌不產(chǎn)生外毒素，但可釋放毒性較強的內毒素，其中羊布魯氏菌毒素毒力最強，豬布魯氏菌次之，牛布魯氏菌較弱；主要有A、M型抗原，其中牛布魯氏菌以A型抗原為主；各型存在宿主的轉移。

布魯氏菌對外界環(huán)境的抵抗力較強，可在水和土壤中存活72～114 天，在糞便、尿液中存活45 天，在乳汁中存活60天，在陰冷處可存活6 個月；對高溫敏感，在60 ℃、30 min或70 ℃、5～10 min條件下可殺死該菌；對消毒劑抵抗力不強，2.0%燒堿溶液1 h滅活，0.1%新潔爾滅溶液5 min內可將其殺死。敏感藥物有利福平、卡那霉素、慶大霉素、磺胺類等，但這些藥物很難進入到巨噬細胞內，所以奶牛一旦感染該菌，一般不能徹底將其從體內清除，多成為終生帶菌者。

2 發(fā)病機理

布魯氏菌侵入牛體后，在幾日內即可侵入淋巴結，被其中的吞噬細胞吞噬。細菌在細胞內生長繁殖，形成原發(fā)性病灶，但不表現(xiàn)臨床癥狀。隨著細菌的大量繁殖，破壞了吞噬細胞后進入血液散播全身，引起菌血癥，繼而使牛出現(xiàn)體溫升高、出汗等臨床癥狀。同時，細菌又被吞噬細胞吞噬，隨后可再發(fā)生菌血癥。

侵入血液中的布魯氏菌可散至各個組織器官內。首先是進入胎盤和羊水，導致胎盤炎、子宮內膜炎。在絨毛膜上皮細胞內增殖時，使絨毛膜漸進性壞死，同時產(chǎn)生一層纖維素性膿性分泌物，逐漸使胎兒胎盤與母體胎盤脫離，引起胎兒營養(yǎng)障礙和胎兒病理變化，使孕牛流產(chǎn)。流產(chǎn)后，布魯氏菌會在數(shù)日內從子宮內消失。其次是進入乳腺、淋巴結、骨骼、關節(jié)、腱鞘、睪丸、附睪中，形成多發(fā)性病灶。

3 流行特征

該病一年四季均可發(fā)生，潛伏期為2 周～6 月，呈地方流行性。后備牛多數(shù)在8～10 月齡開始易感，隨著年齡的增加，易感性增強，達到性成熟時最易感。故此，在犢牛期注射疫苗是實現(xiàn)全群無病的最佳方法。初次感染牛群的流產(chǎn)率超過50.0%以上，傳播速度極快，通常在3～5 月內使牛群中80.0%的牛只感染。

4 癥狀

新感染的母牛主要表現(xiàn)為在懷孕5～8 月齡發(fā)生流產(chǎn)，尤其是頭胎母牛最容易發(fā)生流產(chǎn)，流產(chǎn)率高達60.0%以上，少數(shù)在懷孕期滿正常分娩，但犢牛多表現(xiàn)為弱胎、死胎、病胎。母牛流產(chǎn)后再次懷孕也會發(fā)生流產(chǎn)，一般比第一次流產(chǎn)時間要遲。母牛流產(chǎn)后體溫、飲食欲正常，常發(fā)生胎衣不下、子宮內膜炎。老疫區(qū)經(jīng)產(chǎn)母牛也會發(fā)生流產(chǎn)，隨胎次的增加，流產(chǎn)率下降，但會成為終生帶菌者，對牧場后備牛造成極大危害。感染的公牛常發(fā)生睪丸炎或關節(jié)炎、滑膜囊炎，有時可見陰莖紅腫，睪丸和附睪腫大，慢性病例可見腱鞘炎、關節(jié)炎、跛行?；疾」５膬鼍梢詡鞑ゴ瞬　?/p>

如果流產(chǎn)后胎衣排出，則病牛迅速康復，又能懷孕，但可能再度流產(chǎn)；若胎衣未能及時排出，則可能發(fā)生慢性子宮內膜炎，引起不育。在新感染牛群里，多數(shù)母牛流產(chǎn)1 次。如果不增加新牛進入，疫情可以停止，病?？赡苡邪霐?shù)痊愈；一旦新進入母牛，還可以引發(fā)大批流產(chǎn)，所以要盡可能不進牛，做到牧場封閉、穩(wěn)定，通過性控繁殖、胚胎移植擴繁牛群。

5 實驗室診斷方法

5.1 樣品采集

無菌采取流產(chǎn)胎兒內臟器官、關節(jié)液、胎衣及流產(chǎn)母牛血液、羊水，送實驗室進行病原學診斷。若質疑飼料問題，均勻取樣后送實驗室進行化驗分析。

5.2 病原學診斷方法

細菌學分離、培養(yǎng)，再用聚合酶鏈式反應法（PCR）進行鑒定。

5.3 免疫學診斷方法

凝集試驗[試管凝集試驗（SAT）、緩沖凝集試驗）、補體結合試驗（CFT）、酶聯(lián)免疫吸附劑測定（ELISA）、熒光偏振試驗（FPA）、乳環(huán)試驗。

5.4 對病牛判定的規(guī)定

根據(jù)《布魯氏菌病防治技術規(guī)范》，對牛只進行判斷：（1）細菌學診斷陽性（染色鏡檢、分離鑒定、PCR），判為病牛；（2）血清學初篩試驗陽性反應，并有流行病學史和臨床癥狀或分離出布魯氏菌，判為病牛；（3）血清學正式試驗（SAT、CFT、cELISA）陽性，判為陽性牛。

6 鑒別診斷

表1為布魯氏菌病、衣原體病、牛病毒性腹瀉（BVD）/黏膜病（MD）、牛傳染性鼻氣管炎（IBR）、生殖道彎曲桿菌病、牛沙門氏菌病、李氏桿菌病、毛滴蟲病、新孢子蟲病、鉤端螺旋體病等導致的牛流產(chǎn)癥狀的鑒別、診斷。

7 防控技術

奶牛傳染性流產(chǎn)指由傳染性疾病導致的流產(chǎn)。防控方法有牛群凈化法、免疫法、環(huán)境消毒法、營養(yǎng)保健法和藥物治療法。

7.1 流產(chǎn)的防控理念

奶牛傳染性流產(chǎn)主要是生物性因素引起的，控制流產(chǎn)必須堅持以“養(yǎng)殖生態(tài)、健康循環(huán)”為基本準則，以“養(yǎng)殖區(qū)域自治”為原則，堅決執(zhí)行牛群凈化或免疫無病。

養(yǎng)殖生態(tài)健康循環(huán)主要包括自然生態(tài)循環(huán)、養(yǎng)殖區(qū)域生態(tài)循環(huán)、牛群生態(tài)循環(huán)、瘤胃生態(tài)循環(huán)和腸道生態(tài)循環(huán)。

養(yǎng)殖區(qū)域疫病自治自控是控制傳染性流產(chǎn)的有效手段。該方法是指在養(yǎng)殖區(qū)域內、以牧場為單元，所有牧場在執(zhí)行疫病防控時的標準一致、執(zhí)行一致、行動同步、牧場全覆蓋，堅決執(zhí)行自繁自養(yǎng)，定期檢疫，同步免疫，對病死牛尸體徹底無害化處理。

7.2 奶牛傳染性流產(chǎn)的防控技術

奶牛傳染性流產(chǎn)的防控方法一是牛群凈化；二是同步免疫；三是健康后備牛培育。奶牛流產(chǎn)防控技術路線見圖1。

表1 牛流產(chǎn)癥狀的鑒別、診斷

牛群凈化技術是指地區(qū)奶牛布魯氏菌病感染率低于5.0%，對所有陽性牛進行徹底無害化撲殺、焚燒、深埋技術。

同步免疫是指地區(qū)奶牛布魯氏菌病感染率大于5.0%，對所有牛進行強制免疫1 次后，不再免疫，以后只給所有自繁犢牛在3～6 月齡進行1 次免疫，連續(xù)10 年，直到可疑成年牛全部淘汰為止。

健康后備牛培育技術：犢牛出生后倒立，排出犢牛呼吸道、消化道羊水；初乳巴殺滅菌后灌服；常乳巴殺滅菌后飼喂；建立后備牛隔離區(qū)；定期檢疫，淘汰陽性?；蜃⑸銩19疫苗。

7.3 布魯氏菌病凈化技術

7.3.1 凈化標準

同時滿足以下要求，視為達到非免疫凈化標準（控制標準）：（1）牛群抽檢，布魯氏菌抗體檢測陰性；（2）連續(xù)2 年以上無臨床病例；（3）現(xiàn)場綜合審查通過。

7.3.2 凈化評估實驗室檢測方法

凈化評估實驗室檢測方法見表2。

7.4 布魯氏菌病免疫無病技術

7.4.1 疫苗種類

布魯氏菌病活疫苗（A19），在2～8 ℃儲存，有效期12 個月。必須在接種疫苗的當天取出，稀釋后的疫苗于當天使用。

7.4.2 疫苗使用方法

詳細閱讀說明書，按照要求用生理鹽水稀釋疫苗干粉，使用時搖勻。

7.4.3 疫苗使用注意事項

（1）加強個人防護

雖然疫苗是弱毒，但大量接觸疫苗仍可以引起人的感染。人感染后呈現(xiàn)無癥狀到有感冒樣癥狀，出現(xiàn)癥狀不超過3 個月，病癥比較輕，不會產(chǎn)生長期性致病癥狀。頻繁感染者在第一次康復后再接觸疫苗可出現(xiàn)變態(tài)反應。因此，對工作人員的防護及對其他人員和環(huán)境的生物安全應引起足夠的重視，做好相應的防護措施，如注射疫苗時需要穿防護服，佩戴口罩和眼鏡。

圖1 奶牛流產(chǎn)防控技術路線

表2 凈化評估實驗室檢測方法

（2）免疫密度

確保100.0%免疫密度對保證預防效果非常重要。對任何布魯氏菌疫苗而言，免疫密度的高低在很大程度上會影響預防效果，對牛群中母牛具有特異性抗布魯氏菌感染的能力非常重要。一旦牛群中出現(xiàn)沒有免疫保護能力的易感母牛，則會降低病原的清除和防止擴散效果。

A19疫苗在體內存活的時間多數(shù)母牛為60 天左右，少數(shù)可達90 天。

（3）疫苗體外排菌

A19疫苗注射后，部分奶?？梢詮娜橹信啪?jīng)正常消毒后的牛奶不會引起人的感染。

（4）免疫抗體

目前，免疫抗體不能與感染抗體完全區(qū)別。采用A19疫苗注射免疫后1 個月，80.0%以上牛的免疫抗體達到檢測水平；3～8 月齡犢牛免疫后，6 個月抗體基本低于檢測水平；成年牛免疫后，抗體可持續(xù)一年半。

（5）免疫保護與保護期

免疫期一般是指抗體緩慢下降的時間。一般注射疫苗后，在6 個月抗體低于檢測水平。在實驗條件下，A19疫苗的保護率達80.0%以上，免疫期為5 年。A19疫苗的注射免疫保護率略高于口服，但要注意懷孕母牛不能注射；免疫抗體反應明顯高于口服，部分母?？沙掷m(xù)1 年。

免疫保護率隨著時間的延長而下降，表現(xiàn)為先緩慢下降，至一定時間后呈現(xiàn)快速下降。

免疫程序影響保護率，在奶牛性成熟前免疫效果最好，一旦奶牛進入性成熟后，注射弱毒疫苗會造成環(huán)境污染，增加人畜被感染的風險。

（6）重復免疫可提高保護率

為獲得高度免疫保護力，建議在重流行區(qū)內加強免疫，但必須做好人的防護，以免人被感染。在使用A19疫苗上，除3～8 月齡犢牛采用常規(guī)劑量（≥600 億菌/頭）免疫外，其余牛只采用10 億菌/頭的劑量加強免疫。

（7）疫苗質量

在性狀上，布魯氏菌疫苗為黃、白色真空凍干品，易溶于水。在安全性上，布魯氏菌疫苗具有非常寬的安全范圍，加大劑量不會出現(xiàn)安全問題。若出現(xiàn)安全問題，多是由于疫苗被污染造成的。在效力上，活菌數(shù)及細菌活力是其主要指標，影響疫苗成活率的因素包括疫苗生產(chǎn)日期，是否低溫保存、及時使用，免疫時是否避免接觸抗生素等。

（8）帶菌免疫

如果牛群已經(jīng)被布魯氏桿菌感染，再進行注射布魯氏桿菌弱毒疫苗的結果是不能完全清除體內已有的細菌，但可有效抑制細菌的擴散；感染母牛免疫后，可激發(fā)抗體水平上升，其流產(chǎn)率和病原傳播能力大大減少。

7.4.4 免疫程序

（1）A19疫苗的免疫程序

在疫病流行區(qū)域，要同步對成年牛進行一次性免疫，以后不再免疫。以后只能給3～4 月齡犢牛首次免疫，5～6 月齡2 次免疫，以后不再免疫。

（2）疫區(qū)牛群的免疫技術

建議全部進行封閉擴繁，自繁自育，對病牛加大力度撲殺+加速可疑病牛的自然淘汰速度+免疫。

在生產(chǎn)中，對空懷牛采用A19疫苗進行注射免疫，終身不免疫，下一步只能加速淘汰。但重點工作是將6 月齡前犢牛變成不易感染母牛，分別在第3、5月齡注射A19疫苗，這樣的免疫要持續(xù)10 年以上，直至帶菌牛全部淘汰為止。進口育成牛A19疫苗注射1 次。

（3）新進種母牛免疫技術

新進本地的種母牛容易被當?shù)貛Ь８腥?，為預防感染，可以進行疫苗注射。免疫前，在飲水里添加益康電解質多維，在第5天對所有新進牛注射疫苗。

（4）效果評價

免疫1 個月后檢測全部牛的血清，呈現(xiàn)陽性的需要在每個月進行檢測，直至呈現(xiàn)陰性，主要監(jiān)測免疫抗體反應以及抗體轉陰率的變化情況。

（5）免疫風險控制

注射布魯氏桿菌弱毒疫苗，存在人員被感染的可能，最好是由疫苗銷售方組織專業(yè)人員注射疫??；注射疫苗后，每天要消毒4 次，徹底消滅空氣中可能的布魯氏桿菌；泌乳牛不能注射疫苗，防止排菌造成擠奶員被感染。

7.4.5 疫苗注射應激反應的預防措施

（1）免疫副作用

在對奶牛進行疫苗注射時，常出現(xiàn)免疫副作用，表現(xiàn)為急性過敏、慢性過敏和內毒素中毒反應。

急性過敏反應是由于免疫球蛋白E（IgE）和堿性粒細胞與肥大細胞釋放的微粒引起的，常于注射后數(shù)分鐘內發(fā)生，表現(xiàn)為全身肌肉震顫，出大汗，心率增快，呼吸困難，眼睛周圍皮膚、會陰部皮膚腫脹等，注射腎上腺素即可緩解。

慢性過敏反應是由抗原抗體復合物附著于補體而激活補體反應所致。該反應可能發(fā)生于局部或者全身，與疾病臨床癥狀相同，但是反應遲緩，注射腎上腺素即可緩解。

內毒素中毒反應是由于疫苗內含有內毒素引起。一般臨床表現(xiàn)為注射疫苗后采食量減少，產(chǎn)奶量下降，胚胎早期死亡，流產(chǎn)；偶爾嚴重者，在注射疫苗數(shù)小時內就出現(xiàn)休克，甚至急性死亡。在臨床上，為了減少內毒素反應，嚴禁在同一日內注射2 種以上的革蘭氏陰性細菌疫苗。一旦發(fā)現(xiàn)內毒素中毒，立即注射腎上腺素，或者地塞米松、氟尼辛葡甲胺、美達佳，靜脈注射高糖、葡萄糖酸鈣、維生素C、復方氯化鈉，配合強心利尿藥物。

（2）防止免疫應激措施

為了防止免疫應激的發(fā)生，注射疫苗前3 天，日糧減少1/3，同時增加瘤胃調控劑、電解質和多種維生素；進行潛在性免疫反應牛的預防。在注射疫苗前2 h，對精神不佳、食欲不好的懷孕母牛，先肌內注射腎上腺素4.0 mL，黃體酮10.0 mL，30 min后開始注射疫苗，在1 h內完成。

（3）免疫反應的急救措施

一般反應：個別牛在接種后出現(xiàn)輕度精神萎靡或不安，食欲減少和體溫稍高等情況。針對該情況無需治療，將其置于適宜環(huán)境下1～2天，癥狀即可自行減輕或消失，不必采取治療措施。

急性反應：極少數(shù)牛在免疫后可能出現(xiàn)急性過敏反應，氣喘，呼吸加快，眼結膜充血，發(fā)抖，皮膚發(fā)紫，口吐白沫，頻繁排糞，后肢不穩(wěn)或倒地抽搐。若搶救不及時，很可能造成死亡。一般需要盡快進行肌注鹽酸異丙嗪500.0 mg；肌注地塞米松磷酸鈉30.0 mg，孕牛不用；皮下注射0.1%鹽酸腎上腺素5.0 mg。

最急性反應：迅速皮下注射0.1%鹽酸腎上腺素5.0 mg，20 min后根據(jù)緩解程度，可重復進行同劑量再注射1 次；肌注鹽酸異丙嗪500.0 mg。

對出現(xiàn)休克癥狀的病牛，迅速將去甲腎上腺素10.0 mg加入10%葡萄糖進行靜脈注射，并依次將20.0%葡萄糖酸鈣注射液1 000.0 mL、復方氯化鈉500.0 mL、氫化可的松100.0 mL、維生素C 5.0 g、維生素B63.0 g、5.0%碳酸氫鈉液500.0 mL進行靜脈注射。

7.4.6 異地母牛的布魯氏菌病控制技術

對于未從疫區(qū)引進的抗體陽性母牛，無論是否進行免疫，一律不準移動、購入，更不能移入牧區(qū)。

對于選定的國外母牛，需要經(jīng)過檢疫合格后，轉移至隔離場隔離45 天，并按照國家規(guī)定再次檢疫。在隔離場經(jīng)過45 天的隔離觀察，通過檢疫合格的牛只可以裝車，運輸至目的地。

（1）運輸前處理

在運輸前不要更換日糧，避免由此引起的應激；剛斷奶犢牛必須習慣在料槽中采食及在水槽中飲水后，才能考慮被運輸；斷奶犢牛在運輸前3～4 周應開始采食干草或谷物，運輸前7～10 天自由采食干草；允許牛只自由飲水，直到運輸前的2～3 h后飲水限量（若在裝載前進行處理或挑選，容許再次補水）；在運輸前至少12 h，盡量減少使用或不飼喂具有通便作用的谷物和豆類；對運輸前的牛只，減少采食青綠牧草和高水分的飼料，盡量飼喂干飼料；日糧中添加銅、硒和鋅能減少牛在運輸過程中的應激反應；若可能的話，在運輸前接種疫苗和采取驅蟲措施；病牛、體況差或被皮毛濕漉的牛不宜進行運輸。

（2）運輸過程中注意事項

使用降低應激反應的操作技術；裝載空間密度不易過大；當卡車啟動、轉彎或停留時，采用隔艙來緩解牛只的應激、緊張；避免拖車負載過輕，以減少牛只應激和挫傷；保障拖車內通風良好；安排牛只在長途中適當休息；避免在崎嶇道路上運輸，并一直提供良好的墊料；在休息期間和目的地，為牛只提供飼料和水，并關注其福利；盡量為牛只提供遮陰條件；在炎熱天氣，超載會加劇牛只的應激反應，并增加其到達目的地后的恢復時間。

（3）帶牛消毒

種母牛進入新牧場前，對牛舍及運動場要提前進行消毒。牛只進入第2天，選擇無刺激的消毒藥，對新進牛只及圈舍全部進行消毒，1 天1 次，連續(xù)5 天。

8 預防人的感染

特別需要注意的是布魯氏菌可以通過不同渠道傳播給人，一是接觸傳播，包括接觸病牛及其排出物，如糞便、尿液、汗液、精液、陰道分泌物、血膿等以及病牛胎兒的羊水、胎衣、死胎、病死牛尸體等；二是空氣傳播、塵埃傳播，病菌可通過侵入人體呼吸道、傷口、消化道、眼結膜等，而使人致病。

預防措施：一是牛場內禁止抽煙、吃東西、喝水、玩手機，減少接觸感染的可能性；二是建立專人專管機制，禁止獸醫(yī)、用具、車輛等的交叉使用；三是擠奶員、獸醫(yī)進場工作時，應戴眼鏡、手套、口罩、穿防護服。出牛場時，要用酒精噴霧消毒。四是及時無害化處理獸醫(yī)垃圾和繁殖垃圾，如將胎衣、死胎等倒入腐蝕窖或集中在冷庫，焚燒。