我國朱槿曲葉病毒病及其傳播介體煙粉虱分布調(diào)查

陳婷　湯亞飛　何自?！卫A　齊國君

摘要：【目的】明確我國朱槿植株上木爾坦棉花曲葉病毒（Cotton leaf curl Multan virus， CLCuMuV）引起的朱槿曲葉病發(fā)生情況及煙粉虱隱種種群組成，為朱槿曲葉病的早期監(jiān)測(cè)及基于控制傳播介體的病毒防控提供科學(xué)依據(jù)?！痉椒ā?017年11月—2018年8月，從我國廣東、廣西、海南、云南、福建、新疆、內(nèi)蒙、山東、浙江和四川等10省（區(qū)）32市（縣）的城市綠化區(qū)域（公園、公路旁綠化區(qū)域）及花卉市場(chǎng)采集朱槿曲葉病疑似病株及健康朱槿植株葉片，運(yùn)用PCR進(jìn)行CLCuMuV檢測(cè)，并利用mtCOⅠ基因序列對(duì)采自田間朱槿植株上的單頭煙粉虱進(jìn)行隱種鑒定及UPGMA聚類分析?！窘Y(jié)果】我國廣東、廣西、海南、云南和福建5省（區(qū)）綠化朱槿被CLCuMuV侵染發(fā)病的比率較高，平均為44.43%～81.95%，高于新疆（4.39%）和內(nèi)蒙古（0.63%）的發(fā)病率，而山東、浙江和四川的朱槿植株暫未發(fā)現(xiàn)CLCuMuV感染。在大部分采樣點(diǎn)，煙粉虱種群密度較低，除內(nèi)蒙古的平均蟲株率為15.00%外，其他?。▍^(qū)）的平均蟲株率均低于5.00%。對(duì)采集的煙粉虱隱種鑒定結(jié)果表明，煙粉虱種群包括MEAM1、MED、AsiaⅡ7、AsiaⅡ1和AsiaⅠ等5個(gè)隱種，其中AsiaⅡ7和MEAM1為優(yōu)勢(shì)種群，所占比例分別為44.7%和32.5%?！窘Y(jié)論】目前我國南方地區(qū)朱槿曲葉病發(fā)病率較高，其傳毒介體煙粉虱AsiaⅡ7和MEAM1為優(yōu)勢(shì)種群。隨著朱槿盆栽花卉貿(mào)易及苗木跨區(qū)調(diào)運(yùn)，CLCuMuV有向內(nèi)地逐漸擴(kuò)散的趨勢(shì)，應(yīng)采取相應(yīng)措施提早防范木爾坦棉花曲葉病毒在我國棉區(qū)發(fā)生流行。

關(guān)鍵詞： 朱槿;木爾坦棉花曲葉病毒;煙粉虱;發(fā)生分布

中圖分類號(hào)： S436.81 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：2095-1191（2020）11-2697-09

Distribution investigation of Cotton leaf curl Multan virus on Hibiscus rosa-sinensis and Bemisia tabaci Gennadius in China

CHEN Ting， TANG Ya-fei， HE Zi-fu， LYU Li-hua*， QI Guo-jun*

（Plant Protection Research Institute， Guangdong Academy of Agricultural Sciences/Guangdong Provincial Key

Laboratory of High Technology for Plant Protection ， Guangzhou ?510640， China）

Abstract：【Objective】The objective of this study was to identify the occurrence of Cotton leaf curl Multan virus （CLCuMuV） and the Bemisia tabaci Gennadius on Hibiscus rosa-sinensis plants in China， provide early warning and monitoring for the cotton leaf curl disease caused by this virus， and provide a basis for preventing the outbreak of the vector and diseases.【Method】Using PCR method， the CLCuMuV detection on suspected diseased plants and healthy plants of hibiscus collected from urban green areas（park， roadside green areas） and flower markets in 32 cities/counties of 10 provinces/regions（Guangdong，Guangxi，Hainan，Yunnan，F(xiàn)ujian，Xinjiang，Inner Mongolia，Shandong，Zhejiang and Sichuan） of China in 2017-2018 were detected. mtCOⅠgene sequence was used for identification of whitefly collected from the hibiscus， and the UPGMA phylogenetic tree was constructed by using MEGA 5.0. 【Result】 The hibiscus infected CLCuMuV were serious in five provinces（regions）：Guangdong， Guangxi， Hainan， Yunnan and Fujian ， the average incidence rate was 44.43%-81.95%， which was higher than Xinjiang（4.39%） and Inner Mongolia（0.63%）. Hibiscus had not been found infected CLCuMuV in Shandong， Zhejiang and Sichuan. In most of the sampling sites， the population density of whitefly was low. The average whitefly in Inner Mongolia was 15.0%， and other provinces（regions） was lower than 5.00%. The collected whiteflies were identified based on mtCOⅠgene sequence， the results showed that there were five cryptic species， including MEAM1， MED， AsiaⅡ7 ， AsiaⅡ1 and AsiaⅠ. AsiaⅡ7 and MEAM1 were the dominant species， the proportions were 44.7% and 32.5% respectively. 【Conclusion】CLCuMuV has been occurring seriously on hibiscus in southern China at present， the whitefly AsiaⅡ7 and MEAM1 are the dominant species on hibiscus. With the cross-regional transport of the CLCuMuV-infected hibiscus plants， CLCuMuV has a gradual spread and epidemic trend in China.

Key words： Hibiscus rosa-sinensis; Cotton leaf curl Multan virus; Bemisia tabaci Gennadius ; occurrence and distribution

Foundation item： National Natural Science Foundation of China（31871937， 32001973）; Guangdong Natural Science Foundation（2020A1515011098）; ?Guangzhou Science and Technology Project（201904010173）

0 引言

【研究意義】煙粉虱（Bemisia tabaci Gennadius）傳雙生病毒（Whitefly-transmitted geminiviruses，WTGV）病是世界范圍內(nèi)廣泛發(fā)生流行的主要病害之一，對(duì)多種重要經(jīng)濟(jì)作物生產(chǎn)造成嚴(yán)重?fù)p害，具傳毒介體煙粉虱在雙生病毒的侵染傳播過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。棉花曲葉病是棉花上的一種毀滅性病害，已給南亞地區(qū)棉花生產(chǎn)造成巨大損失（Maharshi et al.，2017），木爾坦棉花曲葉病毒（Cotton leaf curl Multan virus，CLCuMuV）是引起該病害的主要病原之一（Briddon and Markham，2000;Ahmed et al.，2011），已入侵我國并在多種錦葵科植物上有報(bào)道（董迪等，2010;Cai et al.，2010;湯亞飛等，2013，2015a，2015b）。CLCuMuV可侵染中間寄主，并通過介體煙粉虱傳播到棉花作物上（Maharshi et al.，2017），一旦攜毒煙粉虱擴(kuò)散蔓延至棉花主產(chǎn)區(qū)，其暴發(fā)流行將對(duì)我國的棉花生產(chǎn)造成毀滅性危害。在我國，朱槿是CLCuMuV主要寄主植物（何自福等，2012;陳婷等，2016a），因此，探明我國朱槿曲葉病的發(fā)生分布情況及煙粉虱隱種種群結(jié)構(gòu)及區(qū)域分布，分析CLCuMuV流行傳播及發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)該病毒早期預(yù)警及基于控制傳播介體的防控具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】國際上已鑒定出引起棉花曲葉病的雙生病毒有10種，其中CLCuMuV及其伴隨的衛(wèi)星分子是20世紀(jì)90年代在南亞地區(qū)引起棉花曲葉病的主要病原微生物（Briddon et al.，2003;Mansoor et al.，2003;Sattar et al.，2013）。雖然朱槿曲葉病在印度北部最早報(bào)道于1950年，但直到2005年Rajeshwari等才通過系統(tǒng)發(fā)育分析明確了印度朱槿上的病毒分離物與CLCuMuV的相似性在95%～97%。在我國，2006年在廣東省的朱槿上最先發(fā)現(xiàn)CLCuMuV（毛明杰等，2008），現(xiàn)已在廣西、海南、福建、云南和江蘇等地發(fā)現(xiàn)該病毒侵染為害黃秋葵（董迪等，2010）、棉花（Cai et al.，2010;湯亞飛等，2015a）、垂花懸鈴花（湯亞飛等，2013）、朱槿（章松柏等，2013;張暉等，2015）和紅麻（湯亞飛等，2015b）等錦葵科植物。Du等（2015）分析了我國與南亞CLCuMuV的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系，推斷從南亞輸入的朱槿為入侵我國的CLCuMuV來源。煙粉虱是CLCuMuV的唯一傳播昆蟲介體（劉銀泉和劉樹生，2012）。在南亞棉花曲葉病暴發(fā)區(qū)域，煙粉虱隱種包括MEAM1及AsiaⅡ1、AsiaⅠ、AsiaⅡ5、AsiaⅡ7和AsiaⅡ8（Dinsdale et al.，2010;Ashfaq et al.，2014）。在我國華南地區(qū)，朱槿上的煙粉虱隱種主要為MEAM1和AsiaⅡ7隱種（陳婷等，2016a）。室內(nèi)傳毒試驗(yàn)證明入侵隱種MEAM1和MED不傳播CLCuMuV，本地隱種AsiaⅡ1和AsiaⅡ7可傳播CLCuMuV致使棉花染?。≒an et al.，2018;Chen et al.，2019）。【本研究切入點(diǎn)】朱槿作為重要的園林綠化植物及家庭盆栽花，種植十分廣泛，目前華南地區(qū)朱槿已普遍感染CLCuMuV（陳婷等，2016a），并已形成長(zhǎng)期而穩(wěn)定的毒源庫（何自福等，2012），隨著攜毒朱槿苗木跨區(qū)調(diào)運(yùn)和傳毒介體煙粉虱擴(kuò)散，CLCuMuV向我國棉區(qū)傳播擴(kuò)散的潛在風(fēng)險(xiǎn)急劇增大，但目前尚無針對(duì)我國朱槿曲葉病發(fā)病率、煙粉虱隱種組成及發(fā)生分布情況的調(diào)查研究報(bào)道。【擬解決的關(guān)鍵問題】全面普查我國城市綠化區(qū)和花卉市場(chǎng)朱槿植株上CLCuMuV侵染情況及煙粉虱隱種的發(fā)生與分布，明確該病毒和傳毒煙粉虱隱種在我國的發(fā)生為害情況，以期為朱槿曲葉病的早期監(jiān)測(cè)及基于控制傳播介體的病毒防控提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

1. 1. 1 樣品來源 2017年11月—2018年8月，從我國10?。▍^(qū)）32市（縣）的城市綠化區(qū)域（公園、公路旁綠化區(qū)域）及花卉市場(chǎng)采集朱槿葉片，用于CLCuMuV檢測(cè)。田間朱槿植株上的煙粉虱樣品共計(jì)351頭，采集自7?。▍^(qū)）18市（縣）。采集地信息見表1。

1. 1. 2 主要試劑及儀器 植物細(xì)胞組織基因組試劑盒EF111-12（北京全式金生物技術(shù)有限公司）;PCR Mixer（日本TaKaRa公司）;其他試劑均為國產(chǎn)分析純。引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成;由上海英駿生物技術(shù)有限公司完成測(cè)序。主要儀器設(shè)備：Mastercycler梯度PCR儀（德國Eppendorf公司）、Gel Doc XR凝膠成像系統(tǒng)（美國Bio-Rad公司）和DYY-12電泳儀（北京六一儀器廠）。

1. 2 試驗(yàn)方法

1. 2. 1 朱槿曲葉病發(fā)病率調(diào)查及葉片取樣 在每個(gè)地區(qū)選取3～5個(gè)調(diào)查點(diǎn)，記錄朱槿的發(fā)病株及健康株，計(jì)算發(fā)病率。每個(gè)調(diào)查點(diǎn)公園綠化區(qū)調(diào)查面積100 m2，道路綠化區(qū)調(diào)查長(zhǎng)度約100 m。調(diào)查標(biāo)準(zhǔn)：朱槿全株葉片黃化、葉片向上卷曲、葉脈腫大明顯，并且產(chǎn)生葉耳、開花少或不開花為病株，全株葉片無上述癥狀即為健康植株（湯亞飛等，2015b）。在每個(gè)調(diào)查點(diǎn)分別采集7株顯癥朱槿葉片和未顯癥葉片，放入塑料密封袋中，標(biāo)記采集地點(diǎn)及時(shí)間。所有采集的樣品帶回實(shí)驗(yàn)室，放入-80 ℃超低溫冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1. 2. 2 朱槿上煙粉虱成蟲采集 朱槿曲葉病調(diào)查及取樣時(shí)用吸蟲器采集煙粉虱成蟲。將采集的標(biāo)本放入裝有95%乙醇的2 mL離心管中，帶回實(shí)驗(yàn)室，置于-20 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1. 2. 3 朱槿葉片CLCuMuV檢測(cè) 從-80 ℃超低溫冰箱取出樣本，采用植物細(xì)胞組織基因組試劑盒EF111-12提取朱槿植株葉片總DNA，具體操作按試劑盒說明進(jìn)行。采用CLCuMuV特異引物CL-F、CL-R和β衛(wèi)星分子特異引物beta-F、beta-R（表2）分別進(jìn)行PCR檢測(cè)。PCR反應(yīng)體系及擴(kuò)增程序參見湯亞飛等（2015a）的方法。

1. 2. 4 煙粉虱隱種鑒定 將保存的煙粉虱樣本取出，參考Frohlich等（1999）的方法對(duì)單頭煙粉虱DNA提取擴(kuò)增，進(jìn)行隱種鑒定。吸取30～40 μL裂解液[裂解液濃度：5 mmol/L Tris（pH 8.0），0.5 mmol/L EDTA，0.5% NP-40，1 mg/mL蛋白酶K;裂解液體積：5 mmol/L Tris （pH 8.0） 5 μL，0.5 mmol/L EDTA 1 μL，0.5% NP-40 5 μL，ddH2O 989 μL]，單頭煙粉虱置于其中1滴裂解液中。用0.2 mL PCR管底部將蟲體充分研磨勻漿，將勻漿液吸入1.5 mL離心管內(nèi)。再吸取另外1滴裂解液清洗Parafilm膜，將清洗液與勻漿液混合后置于65 ℃水浴15～25 min，隨后95 ℃ 10 min，使蛋白酶K失活，短暫低速離心后即可用于PCR。利用煙粉虱mtCOⅠ基因通用引物C1-J-2195和TL2N-3014（表2）對(duì)單頭煙粉虱DNA進(jìn)行PCR檢測(cè)，PCR反應(yīng)體系及擴(kuò)增程序參見陳婷等（2016b）的方法。將獲得的煙粉虱mtCOⅠ基因序列，利用DNASTAR進(jìn)行序列拼接，并通過序列同源性比對(duì)分析對(duì)煙粉虱隱種進(jìn)行鑒定。

1. 2. 5 煙粉虱系統(tǒng)發(fā)育分析 將測(cè)序所得煙粉虱mtCOⅠ基因序列在NCBI中進(jìn)行BLAST分析。利用MEGA 5.0進(jìn)行UPGMA聚類分析，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹。

1. 3 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)使用Excel 2010進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2. 1 朱槿曲葉病發(fā)病率調(diào)查結(jié)果

對(duì)我國10?。▍^(qū)）32市（縣）朱槿葉片攜毒檢測(cè)結(jié)果（表3）表明，廣東、廣西、海南、福建和云南5?。▍^(qū)）的朱槿感染CLCuMuV情況較重，朱槿曲葉病發(fā)病率較高，平均發(fā)病率分別為81.95%、66.26%、58.75%、51.05%和44.43%;新疆花卉市場(chǎng)及花卉生產(chǎn)大棚的朱槿僅有少量感染曲葉病，平均發(fā)病率為4.39%;內(nèi)蒙古花卉市場(chǎng)的朱槿有極少量感染曲葉病，發(fā)病率僅為0.63%。此外，山東城市綠化區(qū)及浙江、四川花卉市場(chǎng)的朱槿植株未發(fā)現(xiàn)曲葉病?？梢姡煌貐^(qū)朱槿感染CLCuMuV的程度明顯不同，其中廣東、廣西、海南、福建和云南5?。▍^(qū)）的朱槿發(fā)病率高于新疆和內(nèi)蒙古地區(qū)，而山東、浙江和四川暫未發(fā)現(xiàn)朱槿感染CLCuMuV。

2. 2 朱槿上煙粉虱蟲株率調(diào)查結(jié)果

朱槿植株上的煙粉虱發(fā)生調(diào)查結(jié)果（表3）表明，10?。▍^(qū)）32市（縣）中有7?。▍^(qū)）18市（縣）的朱槿上有煙粉虱發(fā)生，但煙粉虱蟲株率相對(duì)較低。廣東、海南、廣西、云南和福建5?。▍^(qū)）園林綠化朱槿上煙粉虱平均蟲株率分別為1.84%、0.98%、1.33%、1.90%和4.05%;新疆花卉市場(chǎng)及花卉生產(chǎn)大棚的煙粉虱平均蟲株率為2.25%;內(nèi)蒙古呼和浩特花卉市場(chǎng)的朱槿上煙粉虱平均蟲株率為15.0%。山東城市綠化區(qū)及浙江、四川花卉市場(chǎng)的朱槿植株上未發(fā)現(xiàn)煙粉虱?？梢姡?6.25%的采樣地點(diǎn)有煙粉虱發(fā)生，但煙粉虱種群密度較低，平均蟲株率低于5.00%，且不同地區(qū)的煙粉虱發(fā)生情況略有差異。

2. 3 朱槿上煙粉虱隱種種類及比例

利用mtCOⅠ基因片段序列對(duì)煙粉虱隱種進(jìn)行鑒定，結(jié)果（表4）表明，7?。▍^(qū)）18市（縣）共發(fā)現(xiàn)5個(gè)煙粉虱隱種，主要包括入侵隱種MEAM1、MED和本地隱種AsiaⅡ7、AsiaⅡ1和AsiaⅠ。在采集到的煙粉虱混合隱種種群中，本地隱種AsiaⅡ7為優(yōu)勢(shì)種，所占比例達(dá)44.7%，其次是入侵隱種MEAM1，所占比例為32.5%，再次為入侵隱種MED，所占比例為19.4%，AsiaⅠ和AsiaⅡ1本地隱種的數(shù)量較少，所占比例分別為2.9%和0.6%。從不同?。▍^(qū)）煙粉虱隱種組成情況看，廣東主要是MEAM1和AsiaⅡ7;海南有4個(gè)隱種，包括AsiaⅠ、AsiaⅡ7、MEAM1和MED;云南和福建均只有AsiaⅡ7;廣西為AsiaⅡ7和AsiaⅡ1;新疆主要為MED，還有少量的AsiaⅡ7和MEAM1;內(nèi)蒙古主要為MED。

2. 4 朱槿上煙粉虱系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果

為比較我國朱槿上煙粉虱與其他煙粉虱隱種間的關(guān)系，利用MEGA 5.0構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹。選取NCBI上已登錄的煙粉虱部分隱種的mtCOⅠ基因序列作為參考序列，包括AsiaⅡ7（KM821541和DQ116650）、AsiaⅡ1（KR020527）、AsiaⅠ（KR 110156）、MEAM1（AJ550176）和MED（FN557454和KT235801），結(jié)合本研究獲得的我國18個(gè)市（縣）朱槿上24條不同的煙粉虱mtCOⅠ基因序列，并以溫室白粉虱（AF418672）和非洲伯粉虱（AJ784260）為外群，進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹構(gòu)建。結(jié)果（圖1）顯示，煙粉虱mtCOⅠ基因序列根據(jù)隱種分成7個(gè)組，本研究所得到的5個(gè)煙粉虱隱種基因序列均與已報(bào)道隱種各自聚為一組，全國各地不同地點(diǎn)的同一隱種均聚為一組。2個(gè)外群各自聚為一組。

3 討論

3. 1 我國朱槿曲葉病調(diào)查

本研究對(duì)我國10?。▍^(qū)）朱槿上的CLCuMuV進(jìn)行調(diào)查及檢測(cè)，結(jié)合目前我國對(duì)CLCuMuV的相關(guān)報(bào)道發(fā)現(xiàn)，自2006年首次在廣州市發(fā)現(xiàn)CLCuMuV侵染的朱槿表現(xiàn)出曲葉病癥狀以來，短短幾年時(shí)間就在廣東、廣西、福建和海南等地普遍發(fā)現(xiàn)朱槿曲葉病。2007—2009年，CLCuMuV引起的朱槿曲葉病在廣西南寧擴(kuò)散蔓延加?。至值?，2011）;2008年，在南寧的田間發(fā)現(xiàn)CLCuMuV侵染的棉花植株（Cai et al.，2010）。2011—2012年，在福建廈門、福州和寧德等地的公路綠化帶發(fā)現(xiàn)CLCuMuV引起的朱槿曲葉病株（章松柏等，2013）。2012年，在江蘇南京的朱槿（張暉等，2015）和海南的紅麻（湯亞飛等，2015b）上鑒定出CLCuMuV。在國外，早在1980年就有在印度北部朱槿上發(fā)生曲葉病的報(bào)道（Mali，1980），且在印度南部種植的101個(gè)朱槿品種中有75個(gè)品種極易感染CLCuMuV（Rajeshwari et al.，2005）;2012年，在菲律賓也發(fā)現(xiàn)CLCuMuV侵染朱槿，且與我國廣東的該病毒分離物GD01（KP762786）的相似度最高（She et al.，2017）?？梢?，CLCuMuV正在經(jīng)歷由點(diǎn)到面的發(fā)展、擴(kuò)散。調(diào)查表明廣東、廣西、海南、云南和福建5?。▍^(qū)）的朱槿曲葉病發(fā)生率較高，個(gè)別城市的朱槿曲葉病發(fā)生率高達(dá)100.00%。廣東、廣西、海南、云南和福建地區(qū)處于朱槿的適生區(qū)域，氣候環(huán)境利于朱槿生存，并且與前人預(yù)測(cè)的棉花曲葉病在我國的潛在適生區(qū)相吻合（齊國君等，2016）。通過走訪各市（縣）花卉市場(chǎng)的賣主和苗圃花農(nóng)得知，朱槿苗木大多由廣東或福建調(diào)運(yùn)而來，隨后經(jīng)過枝條扦插繁殖而擴(kuò)大種植。山東、浙江和四川暫未發(fā)現(xiàn)CLCuMuV，可能是因?yàn)檎{(diào)運(yùn)的朱槿苗木中未攜帶CLCuMuV，而新疆和內(nèi)蒙古花卉市場(chǎng)發(fā)現(xiàn)的朱槿曲葉病植株可能來自于從發(fā)病地區(qū)調(diào)運(yùn)的帶病植株。因此，應(yīng)密切關(guān)注CLCuMuV的流行發(fā)生趨勢(shì)，以防造成更嚴(yán)重的危害。

3. 2 我國朱槿上煙粉虱調(diào)查

煙粉虱是CLCuMuV的主要傳播途徑之一，監(jiān)測(cè)植株上的傳毒媒介是預(yù)防棉花曲葉病毒病發(fā)生的關(guān)鍵。傳毒煙粉虱隱種在棉花曲葉病流行中具有不可忽視的作用。室內(nèi)傳毒已驗(yàn)證AsiaⅡ1和AsiaⅡ7煙粉虱可將棉花上的CLCuMuV傳播至紅麻、黃秋葵和棉花等錦葵科植物引起曲葉病（陳婷等，2016b;Pan et al.，2018;Chen et al.，2019）。巴基斯坦的棉花曲葉病發(fā)生地調(diào)查發(fā)現(xiàn)，曲葉病發(fā)病率高的地區(qū)煙粉虱主要是AsiaⅡ1隱種，而發(fā)病率低地區(qū)的煙粉虱主要是MEAM1隱種（Ahmed et al.，2011）。AsiaⅡ1隱種是引起棉花曲葉病在巴基斯坦田間流行的主要煙粉虱隱種。本研究對(duì)朱槿上煙粉虱的發(fā)生及隱種鑒定結(jié)果表明，我國朱槿上的煙粉虱共5個(gè)隱種，包括入侵隱種MEAM1、MED和本地隱種AsiaⅡ7、AsiaⅡ1、AsiaⅠ，其中，本地隱種AsiaⅡ7和入侵隱種MEAM1所占比例最高。因此，煙粉虱AsiaⅡ7隱種是我國CLCuMuV在田間擴(kuò)散的途徑之一。

煙粉虱AsiaⅡ7最早在廣州市報(bào)道（邱寶利等，2006），MEAM1雖然是世界性的入侵隱種，對(duì)另一本地隱種ZHJ1（AsiaⅡ3）具有較強(qiáng)的取代能力（Liu et al.，2007），但MEAM1與AsiaⅡ7的競(jìng)爭(zhēng)能力尚未知。但與蔬菜等作物相比，AsiaⅡ7在園林植物上適合度更高（林莉等，2010;Qiu et al.，2011），對(duì)棉花、黃秋葵等錦葵科寄主植物的趨性也較番茄、茄子等蔬菜作物更強(qiáng)（陳婷等，2019）。因此，即使入侵隱種MEAM1是我國南方地區(qū)的主要煙粉虱隱種（陳婷等，2016b），AsiaⅡ7隱種獨(dú)特的生態(tài)位，可能是該隱種與MEAM1雖然同時(shí)存在于朱槿植株上，但AsiaⅡ7隱種是朱槿植株上的優(yōu)勢(shì)煙粉虱隱種所致。用UPGMA方法構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹表明，我國各地的AsiaⅡ7煙粉虱基因序列聚為一支，究其原因是：對(duì)于地理距離較近的種群，可能因小氣候環(huán)境較相似及自然擴(kuò)散作用促進(jìn)各種群間的基因交流;而如庫爾勒等地理距離相對(duì)較遠(yuǎn)的地理種群也聚為一支的現(xiàn)象，很可能是這些煙粉虱種群隨南方地區(qū)引進(jìn)的花卉苗木調(diào)運(yùn)至當(dāng)?shù)?，溫室大棚的環(huán)境適宜其生存，且因數(shù)量較少不易被察覺。

3. 3 朱槿曲葉病毒病與煙粉虱的相關(guān)性及其發(fā)生流行風(fēng)險(xiǎn)

棉花曲葉病的發(fā)生已被證實(shí)與介體煙粉虱種群豐度具有相關(guān)性（Ahmed et al.，2011），田間調(diào)查表明巴基斯坦棉花主產(chǎn)區(qū)旁遮普和信德的煙粉虱豐度分別高于經(jīng)濟(jì)閾值水平的15%和4%，且隨著煙粉虱數(shù)量的增加，各省份的棉花曲葉病均顯著增加（Ahmed et al.，2011）。室內(nèi)傳毒驗(yàn)證表明，25頭印度本地隱種煙粉虱將CLCuMuV從朱槿傳播到朱槿上的效率為20%，蟲量增加至50頭時(shí)，傳播效率增加到70%（Rajeshwari et al.，2005），說明帶毒蟲量的高低直接影響朱槿曲葉病的流行程度。本研究中，煙粉虱優(yōu)勢(shì)種為傳毒隱種AsiaⅡ7，但除廣州市外，其他地區(qū)的潛在傳毒煙粉虱隱種的數(shù)量均較少，各地?zé)煼凼x株率大都在5.00%以下。推測(cè)這些地點(diǎn)CLCuMuV主要是隨朱槿苗木的運(yùn)輸傳入或煙粉虱攜帶病毒隨苗木傳入，而后經(jīng)AsiaⅡ7煙粉虱小范圍傳播擴(kuò)散。其他未調(diào)查到煙粉虱及煙粉虱優(yōu)勢(shì)隱種為MEAM1和MED的曲葉病發(fā)生地，可能是扦插感染病毒的朱槿枝條所致，具體情況需進(jìn)一步研究。

雖然目前調(diào)查表明傳毒隱種煙粉虱數(shù)量不多，但朱槿已作為一種重要的園林綠化植物在我國南方大面積種植（劉小冬等，2008），苗木跨區(qū)調(diào)運(yùn)和種植苗木溫室大棚的增加，可能會(huì)加速病毒和媒介煙粉虱從南方向內(nèi)地?cái)U(kuò)散。因此，在朱槿盆栽花卉貿(mào)易及苗木跨區(qū)調(diào)運(yùn)過程中應(yīng)加強(qiáng)對(duì)CLCuMuV及煙粉虱的檢測(cè)等相關(guān)措施，提早防范木爾坦棉花曲葉病毒病在我國棉區(qū)發(fā)生流行。

4 結(jié)論

我國多個(gè)地區(qū)的朱槿已感染CLCuMuV，木爾坦棉花曲葉病毒病在南方地區(qū)的廣東、廣西、海南、云南和福建5省（區(qū)）朱槿上發(fā)生嚴(yán)重。我國7省（區(qū)）中18個(gè)市（縣）采樣點(diǎn)朱槿上有煙粉虱發(fā)生，鑒定出的煙粉虱有5個(gè)隱種，其中AsiaⅡ7和MEAM1為優(yōu)勢(shì)種群。隨著朱槿盆栽花卉貿(mào)易及苗木跨區(qū)調(diào)運(yùn)，CLCuMuV有向內(nèi)地逐漸擴(kuò)散的趨勢(shì)，應(yīng)采取相應(yīng)措施提早防范木爾坦棉花曲葉病毒在我國棉區(qū)發(fā)生流行。

致謝：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)馬德英教授、云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)環(huán)境資源研究所諶愛東研究員、云南農(nóng)業(yè)大學(xué)張曉明副教授、福建農(nóng)林大學(xué)杜振國副教授、廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所于永浩研究員等在樣品收集中給予大力支持和幫助，謹(jǐn)此致謝！

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（責(zé)任編輯 麻小燕）

收稿日期：2020-09-23

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31871937，32001973）;廣東省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2020A1515011098）;廣州市科技計(jì)劃項(xiàng)目（201904010173）

作者簡(jiǎn)介：*為通訊作者：呂利華（1964-），研究員，主要從事農(nóng)業(yè)害蟲防治研究工作，E-mail：lhlu@gdppri.com;齊國君（1985-），副研究員，主要從事入侵生物防控研究工作，E-mail：qigj@gdppri.com。陳婷（1986-），主要從事入侵昆蟲生物學(xué)研究工作，E-mail：chent@gdppri.com