響應(yīng)面優(yōu)化濁點萃取聯(lián)合HILIC測定大鼠血清中四種抗艾滋病藥

安 瓊，楊建霞，趙秀麗，王貞香

（河西學(xué)院中西醫(yī)結(jié)合研究所//甘肅省河西走廊特色資源利用省級重點實驗室，甘肅張掖 734000）

更昔洛韋、司他夫定、拉米夫定和齊多夫定作為抗艾滋病常用藥，是艾滋病“雞尾酒”療法［1-3］的主要組成藥物，“雞尾酒”療法是由美籍華裔科學(xué)家何大一于1996年提出，是通過兩種或兩種以上的抗病毒藥物聯(lián)合使用來治療艾滋病的方法。該療法的應(yīng)用可以減少藥物單獨使用而產(chǎn)生抗藥性，最大限度地抑制病毒的復(fù)制，延長患者生命，提高患者生活質(zhì)量。但由于雞尾酒療法是多種藥物混合服用，多數(shù)對宿主細(xì)胞有一定的毒性，副作用的大小與患者具體服用的藥物有關(guān)。因此，有必要監(jiān)測抗艾滋病藥的血藥濃度，對降低毒副作用，制定個體化用藥方案具有重要意義。目前文獻(xiàn)報道，對于單個抗艾滋病藥血藥濃度的測定方法較多［4-5］，但同時測定多個艾滋病藥物的報道較少。在已報道的單個抗艾滋病藥的血藥濃度檢測方法中，血樣樣品前處理（蛋白沉淀法［6］、氮氣吹干法［7］、固相萃?。?］和液液萃取［9］等方法）步驟較復(fù)雜，分析時間較長，樣品富集效果不理想。液相色譜—質(zhì)譜法［10-13］，雖然有較高的靈敏度，但儀器的價格較貴，不易普及。濁點萃取技術(shù)（cloud point extraction，CPE）是利用表面活性劑的濁點現(xiàn)象與增溶性達(dá)到富集待分離物質(zhì)的一種新型液—液萃取技術(shù)［14］。它的原理是以表面活性劑膠束水溶液的溶解性和濁點現(xiàn)象為基礎(chǔ)，通過改變實驗參數(shù)（如：溶液的pH值、離子強(qiáng)度、溫度、表面活性劑濃度等）引發(fā)相分離，從而達(dá)到疏水性物質(zhì)與親水性物質(zhì)分離的目的，該法有機(jī)溶劑使用量少，萃取率較高、富集因子大、操作簡便。本研究基于CPE，以Triton X-114作為萃取介質(zhì)，以單因素法考察了Triton X-114濃度、平衡溫度、平衡時間、PH、鹽濃度等對更昔洛韋、齊多夫定、司他夫定、拉米夫定等四種抗艾滋病藥萃取效率的影響。用響應(yīng)面法進(jìn)一步優(yōu)化Triton X-114濃度、鹽濃度與PH等濁點萃取相關(guān)參數(shù)。建立了以阿昔洛韋作為內(nèi)標(biāo)，同時測定對大鼠血清中更昔洛韋、齊多夫定、司他夫定和拉米夫定抗艾滋病藥的親水作用色譜法（hydrophilic interaction chromatography，HILIC）。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 儀器 Agilent 1260高效液相色譜儀（美國安捷倫科技有限公司），紫外檢測器，Ze month CN（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱，一個20 μL的手動進(jìn)樣閥，KH-3000DB數(shù)控型超聲波清洗器（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司），十萬分之一天平（上海奧豪斯Discovery專業(yè)性分析天平），HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋，（常州國華電器有限公司），80-2B低速臺式離心機(jī)，（無錫市瑞江分析儀器有限公司），PH計（METLER TOLEDO），MIX-28漩渦混合器。

1.1.2 試劑乙腈（色譜純，山東禹王試劑廠），甲醇（色譜純，山東禹王試劑廠），醋酸銨（分析純，萊陽市雙雙化工有限公司）、Triton X-114（Re?agent Grade，純度98%），NaCl（分析純，深圳市恒迪源潤達(dá)實業(yè)有限公司），HCl（成都聯(lián)禾化工醫(yī)藥有限責(zé)任公司），水為重蒸水。

對照品：阿昔洛韋（純度HPLC ≥98%，批號Y31A6C2934），拉米夫定（純度≥98%，批號J11M6F1）均購自上海源葉生物科技有限公司，更昔洛韋（純度≥97.7%，批號100380-201103），齊多夫定（純度≥97.7%，批號100672-200401）均購自中國食品藥品檢定研究院，司他夫定（純度≥98%，批號100693-200601）。

司他夫定片（北京雙鷺?biāo)帢I(yè)股份有限公司，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H20041993），更昔洛韋分散片（湖北東信藥業(yè)有限公司，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H20110082），拉米夫定片（安徽貝克生物制藥有限公司，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H20103618），齊多夫定片（東北制藥集團(tuán)沈陽第一制藥有限公司，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H20020323）。

1.1.3 實驗動物 SPF級Wistar雄性大鼠（200±20）g，來自甘肅省獸研所，動物編號SCXK（甘）2015-0001。飼養(yǎng)于甘肅中醫(yī)藥大學(xué)科研實驗動物中心SPF級環(huán)境，實驗動物所有操作取得了甘肅中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物倫理委員會批準(zhǔn)（倫理審批號：2019-198）

1.2 方 法

1.2.1 溶液的制備 對照品溶液：精密稱取更昔洛韋、司他夫定、齊多夫定、拉米夫定的對照品適量，配置成約500 μg/mL的溶液，作為標(biāo)準(zhǔn)溶液儲備液，4 ℃的儲存?zhèn)溆?。?nèi)標(biāo)溶液：精密稱取內(nèi)標(biāo)物阿昔洛韋適量，配置成約500 μg/mL的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液儲備液，4 ℃的儲存?zhèn)溆?。?biāo)準(zhǔn)樣品的的制備：將特定濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液溶解在200 μL大鼠血清中制備標(biāo)準(zhǔn)溶液，使標(biāo)準(zhǔn)樣品中更昔洛韋、司他夫定、齊多夫定、拉米夫定的最終濃度分為0.01、0.1、1.0、2.5、5.0和10.0 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)血清樣品，冷藏備用。質(zhì)控樣品的制備：通過溶解適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液到250 μL的大鼠血清中，獲得質(zhì)控樣品。質(zhì)控樣品中更昔洛韋、司他夫定、齊多夫定、拉米夫定的濃度分別為0.025、2.5、8.0 μg/mL，將此樣品均勻分成5份，儲存在-20 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 給藥方案與樣品采集 參照用藥說明，按大鼠體質(zhì)量（200±20）g換算劑量，對A組每只大鼠給予司他夫定片0.22 mg/d和拉米夫定片0.37 mg/d，B組大鼠給予齊多夫定片0.72 mg/4 h、拉米夫定片0.37 mg/d和更昔洛韋分散片3.67 mg/8 h，C組大鼠給予齊多夫定片0.72 mg/4 h和更昔洛韋分散片3.67 mg/8 h，D組給予司他夫定0.22 mg/d、拉米夫定片0.37 mg/d和齊多夫定片0.72 mg/4 h；每組動物連續(xù)給藥3 d待血藥濃度達(dá)到穩(wěn)定時采樣進(jìn)行實驗分析。參考文獻(xiàn)報道［15-16］在半衰期附近取5個時間點（30 min、1、2、3、4 h）對大鼠進(jìn)行眼眶采血，2 500 r/min（r=5 cm）離心獲得血清樣品，-25 ℃冷藏備用。

1.2.3 濁點萃取處理條件 取各實驗組大鼠血清各200 μL，分別放入1.5 mL的離心管內(nèi)，加入2 μL阿昔洛韋（內(nèi)標(biāo)溶液100 μg/mL）和400 μL濃度為5.0%的Triton X-114及20 μL氯化鈉溶液（1 mol/L），調(diào)節(jié)pH為5.0，旋渦振蕩混合5 min，40 ℃恒溫水浴平衡20 min，3 500 r/min（r=5 cm）離心5 min，快速分離棄去上層水相。在下層膠束相，加入200 μL乙腈，渦旋混合3 min，3 000 r/min（r=5 cm）離心，取上清液經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過后，取20 μL續(xù)濾液作為待測樣品注入HPLC儀進(jìn)行測定。

1.2.4 HILIC法色譜條件 以Ze month CN（250 mm×4.6 mm，5 μm）為固定相，流動相組成：A為甲醇，B為乙腈，C為0.1%的乙酸銨水溶液；流動相比例為A：B：C=（5：5：90），流速0.5 mL/min，柱溫35 ℃，檢測波長275 nm。

1.2.5 數(shù)據(jù)分析 用orgin8.0繪圖，用Design-Ex?pert8.05進(jìn)行響應(yīng)面分析。

2 結(jié)果

2.1 濁點萃取條件優(yōu)化

2.1.1 TritonX-114濃度對濁點萃取的影響TritonX-114的濃度決定了萃取分離的效果、膠束相體積和富集倍率（富集倍率=濁點萃取前溶液體積/膠束相體積），在實驗中考察了TritonX-114濃度（質(zhì)量分?jǐn)?shù)在1%～7%）對萃取率的影響，結(jié)果如圖1所示，當(dāng)濃度為5%時萃取效果最佳，濃度低于3%不能達(dá)到很好的分層，濃度高于6%膠束相體積較大，粘度高不利于測定。

圖1 TritonX-114濃度對濁點萃取的影響Fig.1 Influence of tritonx-114 concentration on turbidity point extraction

2.1.2 離子強(qiáng)度對濁點萃取的影響 CPE體系中離子強(qiáng)度增加，可使?jié)狳c溫度降低，表面活性劑的疏水性增強(qiáng)，從而加速CPE相的分離，提高萃取效率。實驗中以NaCl作為鹽，考察了不同濃度的（0.1、0.2、0.3、0.4和0.5 mol/L）NaCl對分析物萃取效率的影響，結(jié)果如圖2所示，當(dāng)體系中NaCl溶液濃度為0.3 mol/L時，體系分層最快，且萃取結(jié)果穩(wěn)定，當(dāng)濃度高于0.3 mol/L時表面活性劑的疏水性增加，膠束相體積減小，粘度增大，較難分層和分離。

圖2 NaCl濃度對濁點萃取的影響Fig.2 Influence of NaCl concentration on turbidity point extraction

2.1.3 pH對濁點萃取的影響 pH值可以改變藥物的存在狀態(tài)，藥物以分子狀態(tài)存在時，較容易分配到膠束相中，獲得較好的萃取效率。在本研究中考察了不同的pH（3.0、4.0、5.0、6.0、7.0）對分析物萃取效果的影響，結(jié)果如圖3所示，當(dāng)體系PH為5.0時分層明、體系比較穩(wěn)定、萃取效果較好，當(dāng)pH大于5.0時，膠束處于溶液上層，樣品出現(xiàn)渾濁，不利相的分離。

圖3 PH對濁點萃取的影響Fig.3 Influence of PH on turbidity point extraction

2.1.4 平衡溫度對濁點萃取的影響 對于非離子表面活性劑，溫度對增溶量的影響與增溶質(zhì)緊密相關(guān)；當(dāng)溫度升高時會使疏水基團(tuán)疏水性增強(qiáng)，促進(jìn)膠束的形成，尤其當(dāng)溫度升高至濁點溫度時，膠束數(shù)量明顯增多，體積增大，增溶量顯著提高。此外，溫度升高會使疏水基團(tuán)脫水，導(dǎo)致膠束外殼變的緊密，極性增溶物的增溶能力下降。實驗中考察了溫度在20 ℃～50 ℃范圍內(nèi)對濁點萃取的影響，結(jié)果如圖4，當(dāng)溫度在40 ℃時分析物萃取效果最佳；當(dāng)平衡溫度較表面活性劑濁點低時，兩相系統(tǒng)難以形成；當(dāng)溫度過高時，膠束粘度過大，不利于分離。

2.1.5 平衡時間對濁點萃取的影響 平衡時間影響膠束集團(tuán)形成的穩(wěn)定性，平衡時間過短膠束結(jié)合不緊密，在后續(xù)操作中易遭到破壞，平衡時間過長則膠束分子結(jié)合緊密不利于目標(biāo)萃取物的分離。實驗中考察不同水浴平衡時間（10、15、20、25、30、35、40 min）對分析物濁點萃取效果的影響，結(jié)果顯示在10～20 min時隨著時間的增加濁點萃取效率增加，20 min時達(dá)到最好，當(dāng)時間高于20 min則膠束相體積變小，萃取效率會隨著平衡時間的延長而下降（圖5）。

圖4 平衡溫度對濁點萃取的影響Fig.4 Influence of equilibrium temperature on turbidity point extraction

圖5 平衡時間對濁點萃取的影響Fig.5 Influence of equilibrium time on turbidity point extraction

2.2 響應(yīng)面分析

2.2.1 響應(yīng)面因素選取 根據(jù)單因素實驗的結(jié)果，采用響應(yīng)面法進(jìn)一步對萃取效率影響較大的因素，進(jìn)一步優(yōu)化。根據(jù)Box-Behnken的中心組合設(shè)計原理，以TritonX-114濃度（X1）、NaCl濃度（X2）和pH（X3）為自變量，以4種抗艾滋病藥物總萃取率（T）為響應(yīng)值設(shè)計了3因素3水平共17個實驗點的響應(yīng)面分析實驗，水浴平衡溫度為40 ℃，平衡時間為20 min；實驗因素和水平的選取見表1。

2.2.2 響應(yīng)面模型擬合與顯著性分析 以TX-114濃度，NaCl濃度，PH為自變量，萃取率為因變量，進(jìn)行Box-Behnken中心復(fù)合設(shè)計優(yōu)化實驗，實驗共設(shè)計進(jìn)行17組，設(shè)計結(jié)果見表2，其中實驗序號由Design-Expert 8.05自動產(chǎn)生。

根據(jù)表2實驗結(jié)果，應(yīng)用SPSS 22統(tǒng)計分析軟件，以評價指標(biāo)為因變量分別將各因素作為自變量進(jìn)行多項式回歸擬合，建立響應(yīng)曲面二次多元回歸方程，對二項式方程中的各項系數(shù)進(jìn)行t檢驗，刪除P＞0.1的項，以達(dá)到簡化模型的目的，擬合模型如下：

表1 因素考察水平表Table 1 The factor evaluation level table

表2 Box-Behnken中心組合實驗設(shè)計及結(jié)果Table 2 The design and results of Box-Behnken center combinatorial experiment

式中Y為預(yù)測萃取率（R2=0.9960，P＞0.001），對結(jié)果進(jìn)行顯著性分析，分析結(jié)果見表3。

響應(yīng)面模型分析結(jié)果中顯示：該模型的F=191.97，P＜0.0001，說明獲得的回歸方程極顯著，即該模型在整個的回歸區(qū)域內(nèi)擬合的很好；模型的多元相關(guān)系數(shù)模型的多元相關(guān)系數(shù)R2=0.9960，說明模型的相關(guān)性較好，預(yù)測模型擬合程度高，能很好地預(yù)測實際的處理效果；模型校正決定系數(shù)=0.990 8，說明該模型可以解釋99.08% 的響應(yīng)值變化，實驗誤差小，數(shù)據(jù)合理；失擬項P=0.062 7 ＞0.05，失擬項不顯著，說明方程擬合充分，回歸方程高度顯著，可以較好地描述各因素與響應(yīng)值之間的真實關(guān)系［17］。

運用Origin 8.0軟件根據(jù)上述回歸方程模型繪制曲面響應(yīng)效應(yīng)圖，得到對應(yīng)的等高線圖（圖6，8，10）與曲面響應(yīng)效應(yīng)三維圖形（圖7，9，11）并根據(jù)響應(yīng)結(jié)果進(jìn)行分析。從三維曲面效應(yīng)圖可知，響應(yīng)曲面為向內(nèi)高度卷曲的凸面，曲面較陡峭，等高線圖趨向于橢圓形且密集，說明TrionX-114，NaCl與pH對濁點萃取存在明顯的交互影響作用，與方差分析結(jié)果保的預(yù)測保持一致。pH與TrionX-114的最適值均正，pH與NaCl抑制，在回歸方程中AB和AC項系數(shù)為正，BC項系數(shù)為負(fù)號，TrionX-114、NaCl與pH對4種抗艾滋病藥的萃取，做主要的貢獻(xiàn)。根據(jù)模型分析預(yù)測，獲得濁點萃取最佳條件為：TX-114濃度為5.23%，NaCl為0.32 mol/L，pH值為5.25。

2.3 HILIC色譜條件的優(yōu)化

2.3.1 選擇流動相的組成 在等度洗脫程序下，分別以甲醇-水，甲醇-水（0.01 mol/L乙酸銨），甲醇-水（0.05 mol/L乙酸銨），甲醇-水（0.10 mol/L乙酸銨），乙腈-水，甲醇-乙腈-水，分別作為流動相，實驗結(jié)果表明用甲醇-乙腈-水做為流動進(jìn)行洗脫時血清中4種藥物可達(dá)到較好的分離，且不受血清成分的干擾。然后考察不同濃度乙酸銨對色譜峰的影響，實驗結(jié)果如圖12所示，用0.01 mol/L的乙酸銨時，色譜峰獲得的峰形較好，再升高濃度對峰形影響不大，而高濃度的鹽離子對色譜損害較大，因此選用低濃度的鹽溶液進(jìn)行洗脫。

表3 顯著性分析表Table 3 The significance analysis

圖6 TX-114與NaCl濃度影響等高線效應(yīng)圖Fig.6 Contour effect diagram of TX-114 and NaCl concentration

圖7 TX-114與NaCl濃度影響三維曲面效應(yīng)圖Fig.7 Effects of TX-114 and NaCl concentration on 3d surface

圖8 pH與TX-114濃度影響等高線效應(yīng)圖Fig.8 Contour effect diagram of pH and TX-114 concentration

圖9 pH與TX-114濃度影響三維曲面效應(yīng)圖Fig.9 Effect of pH and TX-114 concentration on 3d surface

圖10 pH與NaCl濃度影響等高線效應(yīng)圖Fig.10 Contour effect diagram of pH and NaCl concentration

圖11 pH與NaCl濃度影響三維曲面效應(yīng)圖Fig.11 Influence of pH and NaCl concentration on 3d surface effect diagram

2.3.2 選擇流動相比例 設(shè)置流動相甲醇-乙腈-水（0.01 mol/L乙酸銨）比例分別為：3∶3∶94；5∶3∶92；5∶5∶90；7∶7∶86；10∶10∶80，隨著有機(jī)溶劑的增加化合物的保留時間縮短，當(dāng)甲醇和乙腈濃度高于5%時，由于化合物保留時間縮短，性質(zhì)相近的化合物色譜峰重疊，實驗選擇甲醇-乙腈-水（0.01 mol/L乙酸銨）比例為5∶5∶90為流動相洗脫條件（圖13）。

2.3.3 流速對流速的選擇，隨著流速的增加（0.4、0.5、0.6、0.8和1.0 mL/min）分析時間縮短。但是，流速大于0.5 mL/min時血清對藥物分析干擾較大保留時間相近的藥物色譜峰會重疊；流速低于0.5 mL/min分析時間延長，因此，在本實驗的過程中，以0.5 mL/min作為最佳流速。

2.3.4 柱溫實驗設(shè)置柱溫在20 ℃、25 ℃、30 ℃、35 ℃、40 ℃的條件下分別進(jìn)行實驗，根據(jù)實驗結(jié)果顯示，隨著溫度的增加化合物的分離度增加，當(dāng)溫度達(dá)到30 ℃時，分離度最好，溫度高于30 ℃，則血清干擾增加，不利于藥物分離，且溫度過高會造成化合物分解變性，不利于分析。

2.4 HILIC方法的驗證

2.4.1 專屬性 取空白血清樣品和標(biāo)準(zhǔn)加入樣品，按2.3項下萃取條件萃取，然后按2.4項下的色譜條件分析樣品，結(jié)果如圖14（空白血清和加標(biāo)血清）所示，血清樣品的基質(zhì)不干擾分析物的測定。

圖12 流動相組成優(yōu)化結(jié)果Fig.12 The results of optimized mobile phase composition

2.4.2 線性關(guān)系及定量下限（LLOQ）精密量取更昔洛韋、司他夫定、拉米夫定、齊多夫定、阿昔洛韋對照品系列溶液10 μL，于1.5 mL離心管中加入血清至90 μL分別稀釋成約0.01、0.1、1.0、2.5、5.0、10.0 μg/mL的溶液，按2.3項下樣品萃取方法進(jìn)行處理，在優(yōu)化的色譜條件下分別測定分析物的色譜峰的峰面積，然后以標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液的濃度X為自變量，標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積和內(nèi)標(biāo)色譜峰的峰面積Y為因變量，擬合線性回歸方程。將標(biāo)準(zhǔn)曲線項下的溶液稀釋，當(dāng)N/S≥5時，計算LLOQ。4種分析物的定量下限為0.01 μg/mL，表明4種分析物在濃度0.01～10.0 μg/mL線性良好（表4）。

2.4.3 穩(wěn)定性 取儲存在-20 ℃下的高、中、低濃度的質(zhì)控樣品，分別在0、5、10 d進(jìn)樣分析，記錄分析物各自的的峰面積，計算RSD。結(jié)果分析物在高、中、低濃度下的峰面積的RSD分別為3.8%、1.6%、2.2%，結(jié)果顯示樣品在-20 ℃冷藏10 d是穩(wěn)定的。

2.4.4 精密度 取質(zhì)控樣品的溶液（濃度為0.025、2.5、8.0 μg/mL），每個濃度的溶液5份。在優(yōu)化的色譜條件下，1 d內(nèi)對該樣品連續(xù)進(jìn)樣5次，每次進(jìn)樣10 μL，測定4種分析物色譜峰的峰面積，計算日內(nèi)精密度（RSD）小于3.5%；在連續(xù)5 d內(nèi)每天進(jìn)樣分析，測定4種分析物色譜峰的峰面積，測定日間精密度，計算RSD小于5.0%，該方法精密度良好（表5）。

圖13 流動相比例優(yōu)化結(jié)果Fig.13 The results of mobile phase proportional optimization

表4 分析物的標(biāo)準(zhǔn)曲線、線性范圍、檢出限、治療范圍Table 4 The results of linearity，LLOQ and therapeutic range of drugs in human serum

表5 日間精密度、日內(nèi)精密度和平均回收率Table 5 Intra-day precision，inter-day precision and extraction recovery

2.4.5 提取回收率 使用內(nèi)標(biāo)加入法考察目標(biāo)分析物的提取回收率，計算方程為：R為提取回收率，RS血清樣品處理之前分析物色譜峰的峰面積，Ri血清樣品處理之前內(nèi)標(biāo)物色譜峰的峰面積，ri血清樣品處理之后內(nèi)標(biāo)物色譜峰的峰面積，rs血清樣品處理之后加入待測物色譜峰的峰面積。通過測定3個不同濃度（0.025、2.5、8.0 μg/mL）的血清樣品的水平評價濁點萃取萃取法的提取回收率，每個濃度重復(fù)進(jìn)樣5次。結(jié)果見表5，4種分析物的提取回收率大于75%。

2.5 大鼠血清樣品的分析

根據(jù)給藥方案，對大鼠給藥，取血清200 μL加入內(nèi)標(biāo)，按2.3項下萃取條件萃取，然后按2.4項下的色譜條件分析樣品，測得血藥濃度見表6，色譜圖見圖15。

3 討論

本文首次將濁點萃取技術(shù)與親水作用色譜法聯(lián)用，用于抗艾滋病藥物血清樣品的分離分析，濁點萃取技術(shù)的優(yōu)點在于可以對目標(biāo)物質(zhì)進(jìn)行富集應(yīng)用于血清樣品的前處理，可以大大降低血樣中微量物質(zhì)的監(jiān)測分析難度；應(yīng)用響應(yīng)面法對濁點萃取條件進(jìn)行優(yōu)化，在最佳的萃取條件下，對大鼠血清中的目標(biāo)化合物更昔洛韋、司他夫定、拉米夫定和齊多夫定等藥物有較好的富集作用。構(gòu)建的親水作用色譜法可同時分析測定大鼠血清中的4種抗艾滋病藥。該方法簡化了血液樣本的前處理過程，萃取效率高，能夠達(dá)到較好的分離效果，操作簡單，可為抗艾滋病藥物的血藥濃度監(jiān)測與分析提供新的技術(shù)支持。

表6 不同時間大鼠血清分析物的含量Table 6 Contents of serμm analytes in rats at different time

表6 不同時間大鼠血清分析物的含量Table 6 Contents of serμm analytes in rats at different time

圖14 血清和加標(biāo)血清親水作用色譜圖Fig.14 HILIC Chromatogram of blank serum and standard serum

圖15 四種給藥方案下血清樣品親水作用色譜圖Fig.15 The chromatograms of real serum samples