基于幼苗光合及葉綠素?zé)晒鈪?shù)的3種咖啡耐低溫脅迫的綜合評(píng)判

黃麗芳 李金芹 王曉陽(yáng) 董云萍 龍宇宙 段志強(qiáng) 陳婷 閆林

摘要：【目的】探索低溫逆境脅迫對(duì)咖啡幼苗光合及葉綠素?zé)晒鈪?shù)的影響，為咖啡抗寒育種、引種栽培提供科學(xué)依據(jù)?！痉椒ā恳?種咖啡幼苗為材料在8℃下分別持續(xù)0、24、48、72h低溫脅迫試驗(yàn)，觀察葉片的葉綠素含量、氣體交換參數(shù)及葉綠素?zé)晒鈪?shù)等指標(biāo)的影響，利用隸屬函數(shù)對(duì)咖啡的抗寒性進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)?！窘Y(jié)果】（1）大粒種和小粒種咖啡幼苗隨著低溫脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)，葉綠素含量先上升后下降，中粒種咖啡幼苗總體是下降趨勢(shì)。（2）3種咖啡幼苗的凈光合速率下降是由非氣孔因素導(dǎo)致的，凈光合速率、蒸騰速率、氣孔導(dǎo)度、水分利用效率和氣孔限制值等光合參數(shù)在3種咖啡幼苗低溫處理間差異不顯著，處理和對(duì)照間差異顯著。（3）在葉綠素?zé)晒鈪?shù)方面，3種咖啡幼苗的初始熒光總體水平上均有所上升，表明其Psn中心遭到低溫脅迫的損傷程度較嚴(yán)重。非光化學(xué)猝滅系數(shù)呈先上升后下降趨勢(shì)，Psn最大光化學(xué)效率、光化學(xué)猝滅系數(shù)、表觀量子傳遞速率和實(shí)際光化學(xué)量子產(chǎn)量均下降，大粒種咖啡幼苗的下降幅度較中粒種和小粒種咖啡幼苗大，表明其葉片受低溫脅迫損傷程度大。采用隸屬函數(shù)法綜合評(píng)判3種咖啡的抗寒能力，小粒種咖啡幼苗的平均隸屬度最高，表明其抗寒能力較強(qiáng)，中粒種和大粒種咖啡幼苗的抗寒性則較弱?！窘Y(jié)論】綜合不同的光合及熒光指標(biāo)，運(yùn)用隸屬函數(shù)法能較全面地評(píng)判咖啡幼苗的抗寒性，避免了單一指標(biāo)評(píng)判的片面性，其鑒定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

關(guān)鍵詞：咖啡;低溫脅迫;光合作用;葉綠素?zé)晒鈪?shù);抗寒能力

中圖分類(lèi)號(hào)：S 571.2

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1008-0384（ 2020） 10-1063-08

0 引言

【研究意義】咖啡屬植物約有100多種，通常所指的咖啡分為阿拉比卡咖啡（C arabica Linne）（俗稱(chēng)小粒種咖啡）、甘弗拉咖啡（C.canephora Pierre）（俗稱(chēng)中粒種咖啡）、利比利卡咖啡（C.libericaBull ex Hiem）（俗稱(chēng)大粒種咖啡）[1-3]。中國(guó)咖啡主產(chǎn)區(qū)為海南、云南，但冬季常有低溫危害，通常限制了咖啡的開(kāi)花、坐果、引起咖啡顆粒過(guò)小、不飽滿、缺陷豆比例上升，影響咖啡的產(chǎn)量和品質(zhì)[4]，嚴(yán)重的可導(dǎo)致植株的死亡，給咖啡生產(chǎn)帶來(lái)巨大損失，制約了我國(guó)咖啡產(chǎn)業(yè)發(fā)展。2013-2014年采收季，咖啡種植面積最大的普洱市受災(zāi)2.43萬(wàn)hm2，經(jīng)濟(jì)損失巨大。低溫脅迫下作物光合能力的強(qiáng)弱可從光合指標(biāo)和葉綠素?zé)晒鈪?shù)等多方面反映[5]。光合作用是植物合成有機(jī)物和獲取能源的根本途徑，關(guān)系著植物的生長(zhǎng)狀況、品質(zhì)優(yōu)劣[6-7]。葉綠素?zé)晒鈪?shù)的變化可在一定程度上反映環(huán)境因子的變化及其對(duì)植物光合生理產(chǎn)生的影響，已被廣泛應(yīng)用于植物光合機(jī)理和逆境生理等研究領(lǐng)域?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】在咖啡逆境生理方面，衛(wèi)新中等[8]通過(guò)外源ABA處理低溫脅迫下（4～5℃）整株和離體的小粒種咖啡葉片，表明了ABA與咖啡抗冷性密切相關(guān)。高敏等[9]研究了低溫霜凍天氣對(duì)咖啡杯品的影響，結(jié)果顯示霜凍前咖啡杯品平均得分高于霜凍后，寒害程度越重，咖啡杯品得分越低，品質(zhì)下降越多。郭玉華等[10]從光合特性方面探討了夜間低溫對(duì)小粒種咖啡和大粒種咖啡的影響，闡明了小粒種咖啡相對(duì)比較耐寒。這與其較強(qiáng)的非輻射耗散能力、較大的胡蘿卜素/葉綠素及較強(qiáng)的恢復(fù)能力有關(guān)。Ramalho等[11-12]研究了冷脅迫條件下不同基因型咖啡的礦物質(zhì)含量動(dòng)態(tài)變化，以及不同冷脅迫時(shí)期咖啡植株的氧化應(yīng)激反應(yīng)等。Fortunato等[13]以小粒種和中粒種以及2份雜交種的咖啡苗為材料，研究了在冷條件下抗氧化系統(tǒng)的生物化學(xué)及分子特性，結(jié)果表明，中小粒種雜交種的冷馴化能力最強(qiáng)，小粒種次之。目前，對(duì)植物的抗寒性進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)常采用隸屬函數(shù)法，已在烏菜[14]、梨[15]、怪柳[16]以及彩葉藤本植物[17]上進(jìn)行了研究?！颈狙芯壳腥它c(diǎn)】關(guān)于主栽的3種咖啡的抗寒性鑒定，低溫脅迫對(duì)咖啡幼苗光合及熒光特性的綜合評(píng)判鮮見(jiàn)報(bào)道。【擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題】本研究采用人工低溫脅迫方法對(duì)3種咖啡材料進(jìn)行處理，測(cè)定光合及葉綠素?zé)晒鈪?shù)的變化，采用隸屬函數(shù)法綜合評(píng)價(jià)其抗寒性，篩選抗寒性強(qiáng)的咖啡種質(zhì)材料，以期探明低溫脅迫下咖啡的光合特性，為咖啡抗寒選育種、引種栽培提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試材料來(lái)自中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院香料飲料研究所，小粒種咖啡為云南省主栽品種卡蒂姆CIFC7963，中粒種咖啡為海南省主栽品種熱研4號(hào)，大粒種咖啡為大韓。培養(yǎng)到苗齡10～11月，選取健康狀況良好、長(zhǎng)勢(shì)一致的植株轉(zhuǎn)移至人工氣候箱中進(jìn)行低溫處理。每種咖啡為1個(gè)處理，每個(gè)處理3株，重復(fù)3次。

1.2 試驗(yàn)方法

試驗(yàn)設(shè)置8℃低溫脅迫，以O(shè)h為對(duì)照（CK），光照強(qiáng)度為200 μmol.m^-2.s^-1，時(shí)間設(shè)置為12 h/12 h，相對(duì)濕度保持70%左右。分別在低溫脅迫0、24、48、72 h時(shí)進(jìn)行光合和葉綠素?zé)晒庵笜?biāo)的測(cè)定。

葉綠素含量（ Chl）測(cè)定：應(yīng)用SPAD儀進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定時(shí)選擇咖啡完全展開(kāi)的功能葉片的中部，于主脈兩側(cè)共讀取6個(gè)讀數(shù)，每個(gè)處理重復(fù)測(cè)定5個(gè)葉片，并計(jì)算平均值。

采用便捷式光合系統(tǒng)分析儀LI-6400（ LI-COR，USA）測(cè)定各咖啡幼苗的第三或第四片完全展開(kāi)葉片的凈光合速率（Pn）、蒸騰速率（Tr）、胞間CO2濃度（ Ci）和氣孔導(dǎo)度（Gs）等指標(biāo)，并計(jì)算水分利用效率（ WUE）和氣孔限制值（Ls），WUE=Pn/Tr，Ls=1-Ci/Ca。測(cè)定條件：溫度為測(cè)定時(shí)幼苗所處溫度，光強(qiáng)度1 000 μmol.m^-2s^-1，流速為500 μmol.s^-1，CO2氣體由小鋼瓶提供，控制濃度為400 μmol.mol^-1，每個(gè)處理分別測(cè)定3次。

葉綠素?zé)晒鈪?shù)：采用熒光葉室6400-40測(cè)定不同梯度處理的咖啡幼苗葉綠素?zé)晒鈪?shù)。測(cè)定光化光強(qiáng)度為188 μmol.m^-2s^-1，強(qiáng)飽和脈沖光強(qiáng)度為2 400 μmol.m^-2s^-1，脈沖光時(shí)間為0.8 s。測(cè)定前先將葉片暗適應(yīng)20～30 min，后測(cè)定初始熒光（Fo）、PSII最大光化學(xué)效率（FJFm）;光適應(yīng)下PSII實(shí)際光化學(xué)量子產(chǎn)量（φPSII）、非光化學(xué)猝滅系數(shù)（qN）、光化學(xué)猝滅系數(shù)（ qP）和電子傳遞速率（ETR），每個(gè)處理分別測(cè)定3次。

咖啡耐寒性綜合評(píng)價(jià)參考劉杜玲等[18]的方法，抗寒系數(shù)=（低溫脅迫后72 h指標(biāo)測(cè)定值/對(duì)照指標(biāo)測(cè)定值）×100%。

采用模糊綜合評(píng)判方法中的隸屬度公式，綜合評(píng)價(jià)不同咖啡的耐寒性。參照陳明輝等[19]的方法，計(jì)算隸屬函數(shù)值和平均隸屬度。與耐寒性呈正相關(guān)的指標(biāo)用公式（1）計(jì)算，與耐寒性呈負(fù)相關(guān)指標(biāo)的用反隸屬函數(shù)公式（2）計(jì)算：

在所有參試材料中的最小值和最大值。隸屬函數(shù)平均值越大，則耐寒性越強(qiáng)。

1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

所有數(shù)據(jù)均為3次重復(fù)的均值，采用Excel 2007和SPSS25.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，采用LSD檢驗(yàn)（a=0.05）進(jìn)行顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1低溫脅迫對(duì)咖啡葉片葉綠素含量和光合參數(shù)的影響

由表1可知，大粒種和小粒種咖啡隨著低溫脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)，葉綠素（ Chl）含量呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì);大粒種和中粒種咖啡Chl含量在各處理間的差異不顯著（P>0.05），小粒種咖啡各處理間差異達(dá)顯著冰平（P<0.05），48h比CK上升了28.72%。不同咖啡品種在8℃低溫脅迫過(guò)程中Chl含量的變化程度不同。

3個(gè)品種在低溫脅迫過(guò)程中，處理組的光合速率（ Pn）與CK的差異達(dá)到顯著水平，大粒種和中粒種咖啡處理間差異不顯著，小粒種咖啡處理72 h時(shí)與CK和24 h處理差異達(dá)顯著水平（P<0.05），比CK下降了97.54%;3種咖啡的Tr、WUE、Ls和Gs幾乎都呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，大粒種咖啡的Tr和WUE各處理間差異不顯著（P>0.05），中粒種和小粒種咖啡的Tr含量和WUE含量均在72 h時(shí)相對(duì)顯著于CK處理，小粒種咖啡的Tr和WUE降幅最大，比CK下降了82.33%和86.60%;3種咖啡的Ls在低溫脅迫3個(gè)處理間的差異均不顯著，只有中粒種咖啡的CK與各處理達(dá)到顯著差異水平（P<0.05）;大粒種咖啡的Gs含量72 h時(shí)降到最小值，與CK相比，下降了80%。3種咖啡的胞間C02濃度（Ci）均呈上升的趨勢(shì)，低溫處理72 h與CK差異達(dá)顯著水平（P<0.05）。

2.2 低溫脅迫對(duì)咖啡葉片葉綠素?zé)晒鈪?shù)的影響

由表2可知，在低溫脅迫過(guò)程中，大粒、中粒和小粒種咖啡的初始熒光（Fo）含量呈先上升后下降的趨勢(shì)，在48 h時(shí)達(dá)到最大值，分別比對(duì)照上升了19.59%、17.03%和8.26%，且Fo均未達(dá)到顯著狀態(tài)（P<0.05）。各供試材料在低溫脅迫后的FJFm、光化學(xué)猝滅系數(shù)（qP）、表觀量子傳遞速率（ETR）和PSII實(shí)際光化學(xué)量子產(chǎn)量（φPSII）均下降，且隨脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)，下降幅度均增大，大粒種4個(gè)指標(biāo)的降幅都為最大值，達(dá)到31.08%、88.68%、85.77%和88.24%。3種咖啡低溫處理24、48、72 h的qP、ETR和φPSII與CK差異達(dá)到顯著水平（P<0.05），小粒種咖啡的Fv/Fm在低溫脅迫72 h時(shí)與前面3個(gè)處理的差異迭到顯著水平。大粒種和小粒種咖啡的非光化學(xué)猝滅系數(shù)（qN）表現(xiàn)為先升高后降低的趨勢(shì)，小粒種咖啡處理24 h和48 h與CK相比達(dá)到顯著水平（P<0.05），72h與CK差異不顯著。

2.3不同種咖啡各單項(xiàng)指標(biāo)的抗寒系數(shù)

由表3各單項(xiàng)指標(biāo)的抗寒系數(shù)可看出，不同咖啡幼苗抗寒系數(shù)值所反映的抗寒性不同。3種咖啡幼苗經(jīng)過(guò)8℃低溫脅迫72 h時(shí)，與CK組相比，各指標(biāo)在低溫脅迫后均有不同程度的變化，大粒種咖啡的Chl、Pn和Ls抗寒系數(shù)為最大值，中粒種咖啡的Tr、Ci、WUE、 Gs、 qP、qN、 ETR、Fo、Fv/Fm和φPSII抗寒系數(shù)為最大值，小粒種咖啡的Pn、Tr、Ci、WUE、Gs和Fo抗寒系數(shù)為最小值，說(shuō)明同一種質(zhì)各指標(biāo)的抗寒系數(shù)存在較大差異，同一指標(biāo)在不同種質(zhì)間也存在明顯差異，反映出不同種質(zhì)對(duì)低溫脅迫的敏感程度不相同。

2.4 各抗寒指標(biāo)間的相關(guān)性分析

表4的相關(guān)分析表明，Chl含量與qP、qN、φPSII呈極顯著正相關(guān)（P<0.01），與FJFm呈顯著正相關(guān)（P<0.05）;Pn與Tr、WUE、Ls、Gs、qP、ETR、Fv/Fm呈極顯著正相關(guān)（P<0.01）;T與Gs、qP、ETR、Fv/Fm呈極顯著正相關(guān)（P< 0.01）;Ci與Pn、WUE、Ls、qP、ETR、FJFm呈極顯著負(fù)相關(guān)（P<0.01）;WUE與Ls、qP、ETR、Fv/Fm，Ls與qP、ETR、FJFm呈極顯著正相關(guān)（P

2.5 不同種咖啡單項(xiàng)指標(biāo)主成分分析

主成分分析結(jié)果表明（表5），各因子特征值中，前3個(gè)因子的貢獻(xiàn)率分別為48.23%、20.37%和16.23%，累積貢獻(xiàn)率達(dá)84.83%。因此，抽取前3個(gè)因子，可將原來(lái)各單項(xiàng)指標(biāo)轉(zhuǎn)換成3個(gè)綜合指標(biāo)（分別用Al、A2、A3表示）。Al在Pn、qP、ETR和Fv/Fm上有較高載荷量，A2在Chl、qN和φPSII上有較高載荷量，A3在Ci和Gs上有較高載荷量。

2.6 不同種咖啡抗寒性的綜合評(píng)判

由單一指標(biāo)評(píng)價(jià)植物的抗寒性具有片面性，因此，用多個(gè)指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)咖啡的抗寒性才較為可靠。不同種咖啡抗寒性綜合評(píng)判結(jié)果表明：Ci與其他指標(biāo)呈負(fù)相關(guān)，起負(fù)面作用，其值越高，抗寒性越低，利用反隸屬函數(shù)，而其他指標(biāo)對(duì)咖啡抗寒起正向作用，采用隸屬函數(shù)法，咖啡品種抗寒性平均隸屬函數(shù)綜合評(píng)價(jià)表現(xiàn)為小粒種>中粒種>大粒種。小粒種咖啡的平均隸屬函數(shù)值最高，為0.16，耐寒性最強(qiáng)，中粒種和大粒種咖啡的平均隸屬度差異不大，耐寒性較弱，分別是0.11和0.10（表6）。

3 討論與結(jié)論

3.1 低溫脅迫與葉片相對(duì)葉綠素含量

葉綠素含量的多少與植物葉片光合作用能力強(qiáng)弱有直接關(guān)系，葉綠素含量越高，代表植物捕獲光能的能力越強(qiáng)。葉綠素捕獲光能的能力還受溫度的影響[20]，溫度影響植物體代謝進(jìn)程，從而影響合成Chl的原料供給，造成Chl含量升高或者降低[21]。本研究低溫脅迫期間中粒種咖啡葉片的Chl含量總體是下降趨勢(shì)，低溫導(dǎo)致葉綠素合成過(guò)程受到阻礙如光合酶的活性受到抑制，或是葉綠體超微結(jié)構(gòu)被破壞，使植物葉片內(nèi)Chl含量降低[22-23]。而大粒種和小粒種葉片的Chl含量呈現(xiàn)先上升后下降，可能是由于在適當(dāng)?shù)牡蜏丨h(huán)境下咖啡通過(guò)自身調(diào)節(jié)適應(yīng)溫度的變化，誘導(dǎo)咖啡光合色素含量升高，但當(dāng)?shù)蜏貢r(shí)間延長(zhǎng)，超出其承受范圍，導(dǎo)致光合色素分解，葉綠素含量降低，這與大葉冬青[24]、草地早熟禾[25]、紫色小白菜[7]對(duì)低溫的響應(yīng)一致。

3.2 咖啡幼苗抗寒性與光合參數(shù)

低溫直接影響植物光合器官結(jié)構(gòu)和能量生成、利用能力，間接影響光合作用，光合作用的強(qiáng)弱通過(guò)光合參數(shù)反映[5，26]。小粒種咖啡幼苗在正常處理以及低溫脅迫48 h時(shí)Pn均最大，說(shuō)明小粒種咖啡幼苗的光合能力較強(qiáng)。本研究隨著低溫脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)，3種咖啡幼苗的Pn、Tr和Gs呈不同程度的下降趨勢(shì)，而Ci升高，表明Pn下降是因?yàn)槿~綠素、光化學(xué)活性、無(wú)機(jī)磷和RuBP羧化的限制，導(dǎo)致細(xì)胞間隙CO，積累，由非氣孔因素導(dǎo)致的[27-28]。Tr、Gs、WUE和Ls都大幅下降，表明低溫脅迫下植物葉片氣孔開(kāi)張度變小，導(dǎo)致植株WUE和Ls也隨之減少，從而減小了蒸騰拉力。Pn、Tr、WUE、Gs和Ls等光合參數(shù)大多在3種低溫處理間差異不顯著，處理和對(duì)照間差異顯著，也許是由于咖啡是熱帶作物，突然遭到低溫脅迫，光合系統(tǒng)受損，各光合參數(shù)顯著降低，而隨著脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)，植株逐漸適應(yīng)低溫環(huán)境，光合參數(shù)值下降趨勢(shì)變緩。

3.3 咖啡幼苗抗寒性與葉綠素?zé)晒鈪?shù)

葉綠素?zé)晒夥治黾夹g(shù)在植物應(yīng)答逆境脅迫過(guò)程中被廣泛用于抗性種質(zhì)的評(píng)價(jià)和抗性機(jī)理研究，有助于探明光合機(jī)構(gòu)受逆境脅迫傷害的部位和程度[29]。Fo是PSn反應(yīng)中心完全開(kāi)放狀態(tài)時(shí)的熒光強(qiáng)度[19]，低溫條件下，PSII反應(yīng)中心遭受類(lèi)囊體膜損傷或者不易逆轉(zhuǎn)的破壞等，都會(huì)導(dǎo)致Fo上升，受損程度與Fo增加量成正比[30]。本研究中，3種咖啡幼苗的F?？傮w水平上均有所上升，小粒種咖啡幼苗的幅度較小，大粒種咖啡和中粒種咖啡幼苗的上升幅度較大，表明其PSII中心遭到低溫脅迫的損傷程度較嚴(yán)重。qN反映了光系統(tǒng)Ⅱ反應(yīng)中心非輻射能量耗散能力的大小，3種咖啡幼苗在低溫脅迫24 h時(shí)qN均呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，暗示植物已通過(guò)啟動(dòng)光保護(hù)反應(yīng)來(lái)避免過(guò)量光傷害，隨低溫脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)，qN含量又有所降低，PSII反應(yīng)中心開(kāi)放度減小，光合電子傳遞活性減弱，與陳梅[31]、周福平[32]的試驗(yàn)結(jié)果一致。FJFm是植物抗寒性的主要指標(biāo)，在多種植物研究中發(fā)現(xiàn)抗寒力弱的品種（系）比抗寒力強(qiáng)的下降更快速[33]。φPSII、qP和ETR顯著下降說(shuō)明低溫減弱QA的氧化能力及Psn的電子傳遞能力，導(dǎo)致碳同化降低，光合系統(tǒng)受損[6]。大粒種咖啡幼苗的Fv/Fm、qP、ETR和φPSn下降幅度都最大，表明其葉片受低溫脅迫損傷程度越大，國(guó)內(nèi)學(xué)者對(duì)不結(jié)球白菜和甜瓜的研究表明，耐寒性弱的品種（系）光化學(xué)效率和有效性電子傳遞能力比不耐寒的要低，光合受抑程度較重，本研究結(jié)果也證實(shí)了這一點(diǎn)[34-35]。

綜上所述，8℃低溫脅迫可嚴(yán)重抑制咖啡幼苗的光合作用和生長(zhǎng)，PSII反應(yīng)中心受到損傷，前期咖啡幼苗可以通過(guò)啟動(dòng)光保護(hù)反應(yīng)及減小葉片氣孔開(kāi)張度及蒸騰拉力來(lái)避免過(guò)量的光傷害，但隨著脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)，光合電子傳遞活性減弱，損傷程度加劇。采用主成分分析法和隸屬函數(shù)法對(duì)各抗寒性不同的光合及熒光指標(biāo)進(jìn)行綜合分析發(fā)現(xiàn)，3種咖啡幼苗的抗寒能力由強(qiáng)到弱依次為：小粒種咖啡>中粒種咖啡>大粒種咖啡，中粒種和大粒種咖啡幼苗耐寒性差異并不大，這和生產(chǎn)實(shí)踐中的結(jié)果較一致。在今后的工作中，還應(yīng)從與耐寒性相關(guān)的特異基因與蛋白質(zhì)表達(dá)等方面開(kāi)展更深入的研究，從實(shí)際生產(chǎn)和理論基礎(chǔ)兩個(gè)層面系統(tǒng)解釋與完善咖啡的抗寒機(jī)理。

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作者簡(jiǎn)介：黃麗芳（1985-），女，碩士，助理研究員，研究方向：咖啡遺傳育種（E-mail： hlf032@163.com）

通信作者：閆林（1980-），女，博士，研究員，研究方向：咖啡種質(zhì)資源與遺傳育種（E-mail： yanlin2575@163.com）