木荷莖皮化學(xué)成分研究

黃新翔，何恩銘，廖佳若，李君豪，伊 雪，吳 春*

(1.廈門醫(yī)學(xué)院機(jī)能與臨床轉(zhuǎn)化福建省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 廈門 361023；2.福建省亞熱帶植物研究所／福建省亞熱帶植物生理生化重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 廈門 361006；3.廈門醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系，福建 廈門 361023)

藥材木荷為山茶科(Theaceae)木荷屬(Schima)植物木荷(Schima superba)的莖皮。木荷又名荷木、荷樹、木艾樹等，為亞熱帶常綠大喬木，主要分布于我國(guó)福建、廣東、浙江、安徽及云南等省[1]。木荷辛、溫、有大毒，具清熱解毒之功效，外敷用于治療疔瘡、無名腫毒等[2]。浙江民間曾用其莖皮與草烏同煮，熬汁涂抹于箭頭，獵殺野獸[2]。人接觸其莖皮可產(chǎn)生紅腫、發(fā)癢等癥狀。目前，從該植物分離的化學(xué)成分有三萜及皂苷類[3]、木脂素類[4]、黃酮類及其他類成分[5]。木荷莖皮70%乙醇提取物具有較強(qiáng)的抗真菌活性[6]。為了進(jìn)一步探明木荷莖皮的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，對(duì)乙酸乙酯萃取部位進(jìn)行化學(xué)成分研究，從中分離得到9個(gè)化合物，分別為三十烷酸(1)、棕櫚酸(2)、Dodecanoic acid(3)、松脂素(4)、槲皮素(5)、山柰酚(6)、Americanin A(7)、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷(8)及槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷(9)。

1 材料與儀器

核磁共振譜(NMR)采用BRUKER AV-400和AV-500型核磁共振儀測(cè)定；質(zhì)譜(ESI-MS)用Finnigan LCQ Advantage MAX型質(zhì)譜儀測(cè)定；分析型HPLC用Agilent 1260系列高效液相色譜儀(HPLC)；制備型HPLC用Agilent 1260系列制備液相色譜儀。柱色譜所用硅膠(300～400目和200～300目)由青島海洋化工廠提供；硅膠GF254薄層預(yù)制板為煙臺(tái)江友硅膠開發(fā)有限公司提供；Sephadex LH-20 (25～100 μm)由瑞士Fluka公司提供；ODS柱層析材料為YMC公司產(chǎn)品；分析型HPLC色譜柱為Welch Materials (XB-C18，4.6 mm × 250 mm，5 μm)及Agilent Zorbax (SB-C18，4.6 mm × 250 mm，5 μm)；制備型HPLC色譜柱為Cosmosil C18色譜柱(20 mm × 250 mm，5 μm)；所用色譜純、分析純?cè)噭┚晌麟]科學(xué)股份有限公司提供。

木荷莖皮采集于福建省三明市建寧縣，經(jīng)廈門醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系中藥教研室王明軍教授鑒定，標(biāo)本(NO.MH20160311)保存于廈門醫(yī)學(xué)院機(jī)能與臨床轉(zhuǎn)化福建省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室標(biāo)本室。

2 提取與分離

干燥木荷莖皮(3.0 kg)經(jīng)適當(dāng)粉碎，用5倍體積70%乙醇溶液回流提取3次，每次2 h，減壓濃縮至無醇味，用蒸餾水懸浮，用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，分別萃取3次，減壓濃縮，得石油醚部分(43 g)、乙酸乙酯部分(103 g)、正丁醇部分(60 g)及水層部分等浸膏。

取乙酸乙酯部分浸膏(103 g)，經(jīng)硅膠柱色譜，環(huán)己烷-乙酸乙酯(100:0、95:5、90:10、80:20、70:30、60:40、50:50、40:60、20:80、0:100)梯度洗脫得流分，經(jīng)TLC檢測(cè)后合并為10個(gè)組分(Fr.1～Fr.10)。Fr.1經(jīng)硅膠柱色譜，石油醚-乙酸乙酯(90:10～0:100)梯度洗脫，洗脫流分5～9中有白色粉末析出，經(jīng)過抽濾洗滌得到化合物1(13.5 mg)。洗脫流分17～22中有白色晶體析出，重結(jié)晶后得到化合物3(11.0 mg)。Fr.3經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇(3:1)洗脫，洗脫流分12～18中有晶體析出，重結(jié)晶得化合物2 (18.3 mg)。洗脫流分25得到化合物4(10.6 mg)。Fr.4經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇(1:1)洗脫，得到化合物5 (26.9 mg)和7(21.1 mg)。Fr.5經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇(1:1)洗脫，得化合物6(16.7 mg)。Fr.7經(jīng)過ODS開放柱色譜，甲醇-水(5:5、1:0)洗脫得到10個(gè)流分，其中流分8經(jīng)制備HPLC分離純化得到化合物8 (15.9 mg)。Fr.9經(jīng)ODS開放柱色譜，甲醇-水(5:5、1:0)洗脫得到15個(gè)流分，流分11經(jīng)過Sephadex LH-20凝膠柱色譜，純甲醇洗脫得到11個(gè)流分，其中流分5經(jīng)制備型HPLC分離純化得到化合物9 (23.7 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末(丙酮)，ESI-MSm/z:451[M-H]-，結(jié)合13C NMR 和1H NMR得分子式C30H60O2。13C NMR (75 MHz, C5D5N)，δC177.9顯示1個(gè)羧基碳信號(hào)，其余碳信號(hào)主要集中在δC30.0～32.0之間，提示該分子為含一個(gè)羧基的脂肪酸類化合物。1H NMR(400 MHz, C5D5N)δH: 0.87(3H, t,H3-30), 1.45～1.38(m, -CH2), 2.50(2H, t,J=7.4 Hz,H2-2);13C NMR(75 MHz, C5D5N)δH: 175.4(C-1),34.5(C-2), 32.6(C-3), 30.0-29.8(C-4-C-27), 25.9(C-28),22.5(C-29), 14.0(C-30)?；衔颪MR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道的三十烷酸數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物1為三十烷酸。

化合物2：白色晶體(石油醚-丙酮)，mp 62～63 ℃，ESI-MSm/z: 279[M+Na]+，結(jié)合13C NMR和1H NMR得分子式C16H32O2。13C NMR (125 MHz，CDCl3)，δC176.1顯示1個(gè)羧基碳信號(hào)，其余碳信號(hào)集中在δC30.0～33.0之間，提示該分子為含一個(gè)羧基的脂肪酸類化合物。1H NMR(500 MHz，CDCl3)δH:2.40(2H, t,J=7.8 Hz, H2-2), 1.69(2H, m, H2-3)推測(cè)為4個(gè)相鄰羧基碳上的氫信號(hào)；0.90(3H, t,J=6.2 Hz,H3-16)為3個(gè)甲基氫信號(hào)。13C NMR(125 MHz, CDCl3)δC: 176.1(C-1), 32.9(C-2), 31.7(C-3), 29.0-30.5(C-4-C-13), 31.9(C-14), 22.8(C-15), 14.0(C-16),13.8(C-18)?；衔颪MR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道的棕櫚酸數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物2為棕櫚酸。

化合物3：白色晶體(乙酸乙酯)，mp 44～45 ℃，ESI-MSm/z: 199[M-H]-，結(jié)合13C NMR 和1H NMR得分子式C12H24O2。13C NMR (125 MHz，CDCl3)，δC177.4顯示1個(gè)羧基碳信號(hào)，其余碳信號(hào)集中在δC30.0～34.0之間，提示該分子為含一個(gè)羧基的脂肪酸類化合物。1H NMR(500 MHz, CDCl3)δH: 2.37(2H,t,J=7.6 Hz, H-2 ), 1.70(2H, m, H-3)推測(cè)為4個(gè)相鄰羧基碳上的氫信號(hào)；0.89(3H, t,J=6.2 Hz, H-12)為3個(gè)甲基氫信號(hào)。13C NMR(125 MHz, CDCl3)δC:177.4(C-1), 33.5(C-2), 32.7(C-3), 29.8(C-4), 29.6(C-5),29.6(C-6), 29.5(C-7), 29.3(C-8), 29.2(C-9), 24.5(C-10),22.7(C-11), 14.3(C-12)?；衔颪MR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道的Dodecanoic acid數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物3為Dodecanoic acid。

化 合 物4：無 色 油 狀 物，ESI-MSm/z:381[M+Na]+，結(jié)合13C NMR 和1H NMR得分子式C20H22O6。1H NMR(400 MHz, CD3OD)δH: 6.89(2H, d,J=2.1 Hz, H2-2, 2′), 6.75(2H, dd,J=8.0, 1.3 Hz, H2-6,6′), 6.70(2H, d,J=8.0 Hz, H2-5, 5′), 4.60(2H, d,J=4.1 Hz, H2-7, 7′), 4.19(2H, dd,J=8.9, 6.9 Hz, H2-9a, 9′a),3.86(6H, s, -OCH3×2), 3.82(2H, dd,J=9.0, 3.8 Hz,H2-9b, 9′b), 3.19(2H, m, H2-8, 8′)。13C NMR(75 MHz,CD3OD)δC: 55.3(C-8, 8′), 56.4(3, 3′-OCH3), 72.4(C-9,9′), 86.9(C-7, 7′), 111.4(C-2, 2′), 117.0(C-5, 5′),120.2(C-6, 6′), 133.7(C-1, 1′), 148.3(C-4, 4′),149.3(C-3, 3′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道的松脂素?cái)?shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物4為松脂素。

化合物5：黃色無定型粉末，三氯化鐵反應(yīng)呈黃綠色。ESI-MSm/z: 301[M-H]-。結(jié)合1H NMR 和13C NMR得分子式為C15H10O7，不飽和度Ω=11，提示該化合物可能為黃酮類化合物。1H NMR譜在低場(chǎng)區(qū)顯示1個(gè)游離氫信號(hào)δH12.50(1H, s, 5-OH)；δH6.19(1H, d,J=2.0 Hz, H-6)和6.41(1H, d,J=2.0 Hz,H-8) 為A環(huán)上兩個(gè)氫信號(hào)；δH6.88(1H, d,J=8.4 Hz,H-5′)、7.53(1H, dd,J=8.4, 2.0 Hz, H-6′)和7.68(1H, d,J=2.0 Hz, H-2′)為芳香環(huán)ABX耦合體系上的氫信號(hào)，提示B環(huán)為1,3,4-三取代。13C NMR和DEPT-135譜顯示該化合物共有15個(gè)碳信號(hào)，13C NMR(125 MHz, DMSO-d6)δC: 175.8(C-4), 164.4(C-7),161.6(C-5), 156.9(C-9), 148.3(C-4'), 147.0(C-2),145.8(C-3'), 136.7(C-3), 122.3(C-1'), 120.6(C-6'),116.4(C-5'), 115.6(C-2'), 103.2(C-10), 98.3(C-6),93.6(C-8)?；衔? NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道的槲皮素?cái)?shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物5為槲皮素。

化合物6：黃色無定型粉末，三氯化鐵反應(yīng)呈黃綠色。ESI-MSm/z: 287[M+H]+。結(jié)合1H NMR 和13C NMR得分子式C15H10O6，不飽和度Ω=11，提示該化合物可能為黃酮類化合物。在1H NMR譜低場(chǎng)區(qū)顯示1個(gè)游離氫信號(hào)δH12.47(1H, s, -OH)；δH6.17(1H, d,J=2.1 Hz, H-6)、6.41(1H, d,J=2.1 Hz, H-8)為A環(huán)上兩個(gè)氫信號(hào)；δH6.92(2H, d,J=8.4 Hz)、7.75(2H, d,J=8.4 Hz)為芳香環(huán)的AA′BB′耦合體系上的氫信號(hào)，提示B環(huán)是1,4-二取代。13C NMR和DEPT-135譜顯示該化合物共有15個(gè)碳信號(hào)，δC176.3為C環(huán)上C-4位羰基碳信號(hào)。1H NMR(500 MHz, DMSO-d6)δH: 6.17(1H, d,J=2.1 Hz, H-6),6.41(1H, d,J=2.1 Hz, H-8), 7.75(2H, d,J=8.4 Hz,H2-2',6'), 6.92(2H, d,J=8.4 Hz, H2-3',5'), 12.47(1H,br.s, 5-OH)。13C NMR(125 MHz, DMSO-d6)δC:176.3(C-4), 164.3(C-7), 160.1(C-5), 159.6(C-4'),156.8(C-9),146.1(C-2), 135.5(C-3), 129.0(C-2',6'),121.9(C-1'), 115.3(C-3',5'), 102.5(C-10), 98.6(C-6),93.9(C-8)?；衔? NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道的山柰酚基本一致，故鑒定該化合物6為山柰酚。

化合物7：黃色無定型粉末，ESI-MSm/z: 329[M+H]+，結(jié)合1H NMR 和13C NMR得分子式C18H16O6。1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δH: 9.60( 1H,d,J=7.5 Hz, H-9′), 7.62(1H, d,J=16.0 Hz, H-7′),7.37(1H, d,J=2.1 Hz, H-2), 7.27(1H, dd,J=2.1, 8.0 Hz,H-6), 7.03(1H, d,J=8.0 Hz, H-5), 6.99(1H, d,J=2.0 Hz, H-2′), 6.98(1H, d,J=7.9 Hz, H-5′), 6.82(1H, dd,J=2.0, 7.9 Hz, H-6′), 6.76(1H, dd,J=7.6, 16.0 Hz,H-8′), 4.87(1H, d,J=8.0 Hz, H-7), 4.15(1H, m, H-8),3.76(1H, dd,J=4.5, 12.3 Hz, H-9), 3.55(1H, dd,J=4.5,12.3 Hz, H-9);13C NMR(75 MHz, DMSO-d6)δC:194.2(C-9′), 153.3(C-7′), 146.3(C-4), 145.9(C-3),145.3(C-4′), 143.9(C-3′), 127.4(C-1′), 127.2(C-1),126.8(C-8′), 123.0(C-6′), 118.9(C-5′), 117.3(C-2′),116.8(C-5), 115.5(C-2), 78.7(C-8), 75.6(C-7),60.0(C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道的Americanin A基本一致，故鑒定化合物7為Americanin A。

化合物8：黃色無定型粉末，三氯化鐵反應(yīng)呈黃綠色。ESI-MSm/z: 465 [M+H]+，結(jié)合1H NMR 和13C NMR得分子式為C21H20O12，不飽和度Ω=12，提示該化合物可能為黃酮類化合物。1H NMR低場(chǎng)區(qū)顯示A環(huán)上的兩個(gè)氫信號(hào)[δH6.16(1H, d,J=1.4 Hz,H-6)、6.35(1H, d,J=1.4 Hz, H-8)]；δH6.85(1H, d,J=8.2 Hz, H-5′)、7.58(1H, dd,J=8.2, 1.8 Hz, H-6′)和7.84(1H, d,J=1.8 Hz, H-2′)為芳香環(huán)的ABX耦合系統(tǒng)，提示B環(huán)是1,3,4-三取代；δH5.12(1H, d,J=7.2 Hz)為糖端基碳上氫信號(hào)。13C NMR(75 MHz, DMSO-d6)δC: 179.4(C-4), 166.3(C-7), 162.0(C-5), 157.1(C-9),156.3(C-2), 149.4(C-4'), 145.0(C-3'), 133.7(C-3),122.3(C-1'), 121.2(C-6'), 116.3(C-5'), 115.2(C-2'),105.2(C-1"), 101.6(C-10), 99.2(C-6), 94.5(C-8),78.1(C-5"), 77.3(C-3"), 75.3(C-2"), 70.2(C-4"),62.1(C-6")。將化合物NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報(bào)道的槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷進(jìn)行比對(duì)基本一致，故鑒定化合物8為槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物9：黃色無定型粉末，三氯化鐵反應(yīng)呈黃綠色。ESI-MSm/z: 447 [M-H]-。結(jié)合1H NMR和13C NMR得分子式為C21H20O11，不飽和度Ω=12，提示該化合物可能為黃酮類化合物。在1H NMR低場(chǎng)區(qū)顯示A環(huán)上兩個(gè)氫信號(hào) [δH6.18(1H, d,J=1.9 Hz, H-8)、6.36 (1H, d,J=1.9 Hz, H-6)]；δH6.86(1H, d,J=8.1 Hz, H-5′)、7.25(1H, dd,J=8.1, 2.0 Hz, H-6′)和7.30(1H, d,J=2.0 Hz，H-2′)為一組芳香環(huán)的ABX耦合系統(tǒng)氫信號(hào)，提示B環(huán)為1,3,4-三取代；δH5.25(1H,d,J=1.6 Hz)為糖基碳上氫信號(hào)。13C NMR(75 MHz,DMSO-d6)δC: 177.6(C-4), 164.0(C-7), 161.5(C-5),157.8(C-2), 157.5(C-9), 149.0(C-4'), 145.3(C-3'),134.7(C-3), 121.6(C-6'), 121.0(C-1'), 116.4(C-5'),116.1(C-2'), 104.8(C-10), 103.8(C-1″), 99.3(C-6),94.8(C-8), 71.2(C-3″), 71.6(C-4″), 70.6(C-2″),70.4(C-5″), 17.5(C-6″)。將化合物NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報(bào)道的槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷比對(duì)基本一致，故鑒定化合物9為槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷。

4 結(jié)論

本研究通過多種色譜方法從木荷莖皮70%乙醇提取物中分離鑒定了9個(gè)化合物，其中化合物1～4為首次從木荷中分離得到，化合物5、7、9為首次從木荷屬植物中分離得到。