AFP-L3、AFP、GP73、ALP聯(lián)合檢測(cè)對(duì)原發(fā)性肝癌的診斷價(jià)值研究

孫艷華 夏瑞雪 王寧 鮑越

目前，血清腫瘤標(biāo)志物已成為諸多惡性腫瘤疾病早期診斷與鑒別的主要手段之一，現(xiàn)階段常用甲胎蛋白(AFP)作為原發(fā)性肝癌診斷的血清標(biāo)志物，但因該標(biāo)志物單獨(dú)檢測(cè)缺乏較高的敏感度與特異度，故還應(yīng)與其他標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)[3]。堿性磷酸酶(ALP)是一種在膽汁淤積性疾病中大幅度升高的標(biāo)志物，相關(guān)研究表明，ALP在原發(fā)性肝癌患者中的表達(dá)也明顯升高。血清高爾基蛋白73(Golgi protein 73，GP73)是一種新的腫瘤標(biāo)志物，在健康人體中呈低表達(dá)，一旦肝臟受到損傷或發(fā)生炎癥時(shí)將有一定程度升高，故其在原發(fā)性肝癌中也有表達(dá)[3-4]。本研究回顧分析我院近兩年確診的50例原發(fā)性肝癌患者臨床資料，觀察其血清甲胎蛋白異質(zhì)體(AFP-L3)、AFP、GP73、ALP表達(dá)情況，旨在分析四者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)原發(fā)性肝癌的診斷價(jià)值。

資料與方法

一、病例資料

采用分層整群抽樣回顧性分析的方法，抽取解放軍聯(lián)勤部隊(duì)第九八一醫(yī)院2017年10月至2018年10月確診的原發(fā)性肝癌患者50例作為肝癌組，抽取同期在本院確診并接受治療的50例肝硬化患者作為肝硬化組，同期在本院確診并接受治療的50例慢性乙型肝炎患者作為乙肝組，同期在我院接受常規(guī)體檢的健康人群50例作為健康對(duì)照組。肝癌組男34例，女16例；年齡45～75歲，平均(61.02±7.21)歲。肝硬化組男32例，女18例；年齡44～75歲，平均(60.56±7.38)歲。乙肝組男29例，女21例；年齡45～76歲，平均(60.87±7.52)歲。健康對(duì)照組男33例，女17例；年齡45～75歲，平均(61.01±7.19)歲。四組受檢者性別、年齡等一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

二、入選標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)入組者臨床資料均完整；(2)原發(fā)性肝癌患者均符合《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范(2011年版)》[5]中原發(fā)性肝癌相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；(3)慢性乙型肝炎、肝硬化患者均符合《慢性乙型肝炎防治指南(2015更新版)》[6]相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)臨床資料不完整；(2)合并其他重要器官功能不全者；(3)合并血液系統(tǒng)疾病、免疫系統(tǒng)疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病者；(4)治療期間死亡者。

三、方法

全部受檢者均接受外周靜脈采血4 mL，采集后將血液樣本放置在促凝管內(nèi)，靜置2 h待其凝聚后經(jīng)4 000 r/min離心15 min，將血清分離后放置在-80 ℃的冰箱內(nèi)保存待檢。使用上海康朗生物科技有限公司提供的試劑盒，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)受檢者GP73水平；使用美國(guó)貝克曼公司提供的DXC800型全自動(dòng)生化分析儀，使用瑞士羅氏公司提供的Elecsys2010試劑盒，采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)受檢者血清AFP表達(dá)；使用貝克曼DXC800全自動(dòng)生化分析儀，應(yīng)用微量離心柱法檢測(cè)受檢者血清AFP-L3水平，期間先將結(jié)合AFP部分洗凈，后離心，并分離AFP-L3，AFP-L3檢測(cè)相關(guān)材料由北京熱景生物技術(shù)有限公司提供；使用相同的全自動(dòng)生化分析儀及其配備試劑盒檢測(cè)患者血清ALP表達(dá)。其中AFP>20 ng/mL為陽(yáng)性，ALP>110 U/L為陽(yáng)性，GP73≥150 μg/L為陽(yáng)性。聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性診斷期間，各血清標(biāo)志物只要有一項(xiàng)為陽(yáng)性即可判定陽(yáng)性。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié) 果

一、血清AFP-L3、AFP、GP73、ALP表達(dá)

4組中，健康對(duì)照組血清AFP-L3、AFP、GP73、ALP表達(dá)最低，其次為乙肝組、肝硬化組，肝癌組各血清標(biāo)志物表達(dá)最高，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

二、陽(yáng)性檢出情況

4組受檢者中，肝癌組血清AFP-L3、AFP、GP73、ALP陽(yáng)性檢出率及聯(lián)合陽(yáng)性檢出率最高，其次為肝硬化組、肝炎組，健康對(duì)照組最低，均未檢出陽(yáng)性，組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

三、診斷價(jià)值

相較于各血清標(biāo)志物單獨(dú)檢測(cè)，聯(lián)合檢測(cè)用于原發(fā)性肝癌診斷的特異性綜合價(jià)值更高。見(jiàn)表3。

討 論

普通人群血清AFP表達(dá)一般不超過(guò)20 ng/mL，但若是在干細(xì)胞受到刺激或發(fā)生癌變的情況下，部分未分化肝細(xì)胞將恢復(fù)合成AFP的功能，導(dǎo)致血清中AFP含量增加，且隨著患者病情的加重，其表達(dá)也呈遞增趨勢(shì)[7.8]。本研究結(jié)果顯示，相較于其他良性肝病及健康對(duì)照組受檢者而言，原發(fā)性肝癌患者血清AFP表達(dá)更高，在兩組良性肝病組患者中，血清AFP表達(dá)雖有不同程度升高，但表達(dá)仍偏低，故認(rèn)為單獨(dú)為原發(fā)性肝癌患者檢測(cè)其血清AFP表達(dá)情況并不能直接作為早期診斷鑒別依據(jù)，還應(yīng)聯(lián)合其他標(biāo)志物診斷[9]。

血清GP73是一種新的血清腫瘤標(biāo)志物，當(dāng)肝臟受到炎性刺激時(shí)將升高，故在肝癌患者血清中可見(jiàn)較高的GP73表達(dá)[10]。除血清GP73外，AFP-L3、ALP也是近年來(lái)備受關(guān)注的惡性腫瘤疾病血清腫瘤標(biāo)志物。前者是AFP的異質(zhì)體，可經(jīng)肝癌細(xì)胞特異性合成并分泌，該標(biāo)志物的表達(dá)在臨床上多用于判斷患者早期血管浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)，其在血清中的表達(dá)可隨疾病惡化程度發(fā)生變化，即腫瘤惡化程度越嚴(yán)重，患者血清內(nèi)AFP-L3表達(dá)越高，故在實(shí)際應(yīng)用中多將其用于早期原發(fā)性肝癌病情判斷及良惡性鑒別中[11]。ALP在機(jī)體多個(gè)組織內(nèi)均可檢測(cè)到，且以肝臟及骨骼中含量最高。ALP在肝細(xì)胞內(nèi)可緊密結(jié)合肝細(xì)胞膜且不易釋放，若肝細(xì)胞發(fā)生普通的損傷性疾病則ALP表達(dá)并不會(huì)明顯升高，只有當(dāng)肝細(xì)胞發(fā)生惡性病變并誘發(fā)膽汁淤積性疾病時(shí)，患者血清中的ALP表達(dá)才會(huì)大幅度升高，故推斷ALP也可作為原發(fā)性肝硬化早期診斷腫瘤標(biāo)志物之一[12]。本研究結(jié)果顯示，4組受檢者中，健康對(duì)照組血清AFP-L3、ALP表達(dá)最低，其次為乙肝組、肝硬化組，肝癌組二者表達(dá)最高，提示AFP-L3與ALP在不同人群中表達(dá)不同，可作為原發(fā)性肝癌診斷血清標(biāo)志物。但值得注意的是，ALP表達(dá)的變化可能還會(huì)受到其他因素的影響，故單獨(dú)檢測(cè)其水平用于診斷原發(fā)性肝癌特異度較低，故還應(yīng)聯(lián)合其他標(biāo)志物進(jìn)行。本研究聯(lián)合檢測(cè)了50例原發(fā)性肝癌患者的血清AFP-L3、AFP、GP73、ALP水平，對(duì)比其陽(yáng)性檢出率及診斷價(jià)值發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性檢出率最高，且在診斷原發(fā)性肝癌特異度、敏感度等方面更具優(yōu)勢(shì)，表明較單獨(dú)檢測(cè)，聯(lián)合檢測(cè)的實(shí)施更能確保原發(fā)性肝癌診斷的準(zhǔn)確性。

表1 4組血清AFP-L3、AFP、GP73、ALP表達(dá)比較(±s)

表2 4組血清AFP-L3、AFP、GP73、ALP單獨(dú)檢測(cè)及聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性率比較[n(%)]

表3 各血清標(biāo)志物單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)用于原發(fā)性肝癌診斷價(jià)值分析(%)