毛果算盤子不同極性部位的抗炎作用研究

覃日宏，應(yīng)雨綺，李周東，林勝深，李宣錦，高鑫

（廣西中醫(yī)藥大學(xué)賽恩斯新醫(yī)藥學(xué)院，廣西 南寧）

0 引言

毛果算盤子為大戟科植物毛果算盤子(Glochidioneriocarpum Champ.) 的干燥地上部分，該植物在廣西資源豐富，分布廣泛，其主治清熱利濕，散瘀消腫，解毒止癢；用于治療生漆過敏，水田皮炎，皮膚瘙癢，蕁麻疹，濕疹，剝脫性皮炎，跌打損傷[1-2]，目前，對毛果算盤子的抗炎研究已有所報(bào)道[3]，但是關(guān)于其不同提取部位的抗炎作用的研究及篩選尚未見報(bào)道，研究中藥不同部位的藥效是中醫(yī)藥研發(fā)的一個(gè)新思路。本文對毛果算盤子不同極性部位的抗炎作用進(jìn)行體外給藥進(jìn)行研究，確定有效極性部位，為其進(jìn)一步開發(fā)及臨床應(yīng)用提供有效依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)藥材與方法

1.1 儀器

AUY220 電子天平（日本島津）、RE-52AA 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)。

1.2 試劑

二甲苯（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20170601）、卡拉膠（如吉生物科技，批號(hào)：190110）、石油醚（廣東光華科技股份有限公司，批號(hào)：20140319）、乙酸乙酯（西隴科學(xué)，批號(hào)：120702-1）、正丁醇（上海申博有限公司，批號(hào)：1406101）、丙二醇（西隴科學(xué)，批號(hào)：180102-1）、吐溫-80（西隴科學(xué)，批號(hào)：170305）、復(fù)方醋酸曲安奈德溶液（廣東恒誠有限公司，批號(hào)：1904401）、甲醇（西隴科學(xué)，批號(hào)：190104-1）。

1.3 動(dòng)物

小鼠為昆明種，SPF 級(jí)，20±2g（由長沙市天勤生物技術(shù)有限公司提供），許可證號(hào)：SCXK（2014-0011）♂。

1.4 藥材

毛果算盤子藥材采自廣西隆林，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)賽恩斯新醫(yī)藥學(xué)院苑敏副教授鑒定，為大戟科植物毛果算盤子(Glochidioneriocarpum Champ.) 的干燥地上部分。毛果算盤子提取工藝：取毛果算盤子1kg 干燥地上部分處理成約0.5cm 小段，置回流裝置中加70%乙醇浸泡30min，加熱回流60min，過濾，取濾液，濾渣加70%乙醇繼續(xù)回流提取30min，過濾，取濾液，合并兩次濾液，減壓濃縮至無醇味后加適當(dāng)?shù)乃钩苫鞈乙?，依次用乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行萃取，剩下部位為水部位，將萃取液減壓濃縮后至水域濃縮成膏狀，分別得乙酸乙酯部位（A1）、正丁醇部位（A2）、水部位（A3），置-20℃冰箱中保存，備用。臨用前配制成相應(yīng)的濃度，每個(gè)溶液均內(nèi)含體積分?jǐn)?shù)為7.0% 的藥用丙二醇，作透皮吸收、含浸膏分別8% 聚山梨酯-80 助溶。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法

1.5.1 對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響

取小白鼠（♂）80 只，放置實(shí)驗(yàn)環(huán)境適應(yīng)3 天，體重18～22g，隨機(jī)分成8 個(gè)組：復(fù)方醋酸曲安奈德溶液組，生理鹽水對照組，A1、A2、A3 高、低劑量組（相當(dāng)于原藥材相當(dāng)于原藥材1.2g/mL、0.6g/mL）。8 組小鼠均用微量移液器移取二甲苯，分別在右耳廓前后兩面均勻凃抹二甲苯致炎(0.04mL/ 只)，致炎0.5、1、2 小時(shí)后，8 組小鼠分別用相應(yīng)濃度的藥物在右耳廓涂藥，用藥量為4mL/kg，模型組同時(shí)凃抹相同劑量的生理鹽水，4 小時(shí)后將6 組小鼠頸椎脫臼處死，逐只剪下雙耳，用8mm 打孔器分別在左右耳相同部位打下耳片，在電子分析天平稱重，以兩耳片的重量差為炎癥腫脹度，并計(jì)算腫脹抑制率。腫脹度=右耳重量(mg)－左耳重量(mg)；腫脹抑制率(%)=[( 模型組平均腫脹度－給藥組平均腫脹度)/ 模型組平均腫脹度×100%。

1.5.2 對角卡拉膠致小鼠足腫脹的影響

取小白鼠（♂）80 只，放置實(shí)驗(yàn)環(huán)境適應(yīng)3 天，體重18～22g，隨機(jī)分成8 個(gè)組：復(fù)方醋酸曲安奈德溶液組，生理鹽水對照組，A1、A2、A3 高、低劑量組（相當(dāng)于原藥材相當(dāng)于原藥材1.2g/mL、0.6g/0）。實(shí)驗(yàn)者手抓小鼠將右后足跖放于藥液中浸泡180s，模型組浸泡于純凈水中。給藥后60min 小鼠右后足跖腱膜下緩慢注射1%卡拉膠(用生理鹽水配制)0.02mL/只致炎，致炎后1h、2h 后用前面同樣方法再分別給藥2 次，致炎3h 后脫頸椎處死各小鼠，于膝關(guān)節(jié)處剪下兩后足，分別稱左、右足重量，右后足減左后足重量的差值即為腫脹度；作t 檢驗(yàn)，比較藥物與對照組之間的差異。腫脹抑制率(%)=[( 模型組平均腫脹度－給藥組平均腫脹度)/ 模型組平均腫脹度×100%。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響與空白對照組相比，A2高、低劑量對二甲苯所引起的小鼠耳腫脹均有顯著的抑制作用（P＜0.05），抑制率22.55%、17.67%，結(jié)果見表1。

2.2 對卡拉膠致小鼠足腫脹的影響與空白對照組相比，A3 高、低劑量，A2 高劑量、對1% 卡拉膠所引起小鼠足腫脹都有顯著的抑制作用（P＜0.05），抑制率分別為44.98%、44.10%、28.38%。結(jié)果見表2。

表1 GEH 對二甲苯至小鼠耳腫脹的影響（，n=10）

表1 GEH 對二甲苯至小鼠耳腫脹的影響（，n=10）

注：與空白組對比：* P＜0.05，** P＜0.01,***P＜0.001

組別 劑量（g/mL） 腫脹度（g） 抑制率（%）NS 對照組 — 0.0168±0.0025 —復(fù)方醋酸曲安奈德溶液組 原液 0.0114±0.0054* 32.06 A1 高劑量組 1.2 0.0148±0.0051 12.08 A1 低劑量組 0.6 0.0154±0.0031 8.69 A2 高劑量組 1.2 0.0130±0.0041* 22.55 A2 低劑量組 0.6 0.0138±0.0022* 17.67 A3 高劑量組 1.2 0.0164±0.0055 2.38 A3 低劑量組 0.6 0.0168±0.0013 0.24

表2 GEH 對1%卡拉膠膠致小鼠足腫脹的影響n=10）

表2 GEH 對1%卡拉膠膠致小鼠足腫脹的影響n=10）

注：與空白組對比：* P＜0.05，** P＜0.01,***P＜0.001

組別 劑量（g/mL） 腫脹度（g） 抑制率（%）NS 對照組 — 0.0229±0.0077 —復(fù)方醋酸曲安奈德溶液組 原液 0.0128±0.0064** 44.10 A1 高劑量組 1.2 0.0212±0.0047 7.42 A1 低劑量組 0.6 0.0189±0.0084 17.47 A2 高劑量組 1.2 0.0164±0.0044* 28.38 A2 低劑量組 0.6 0.0169±0.0148 26.20 A3 高劑量組 1.2 0.0126±0.0081** 44.98 A3 低劑量組 0.6 0.0128±0.0067** 44.10

3 討論

炎癥初期以毛細(xì)血管擴(kuò)張、通透性增加、組織液滲出和水腫為特征，急性期以局部血管擴(kuò)張、通透性繼續(xù)增加為特征?；瘜W(xué)致炎劑二甲苯可引起組胺激肽、纖維蛋白溶解酶等炎性介質(zhì)釋放， 進(jìn)而引起局部毛細(xì)血管通透性增加及炎癥細(xì)胞浸潤， 最終引發(fā)耳部急性滲出性炎性水腫[4]；具有刺激性的角叉菜膠注入大鼠足跖后，可使大鼠的足跖局部毛細(xì)血管充血、水腫， 引發(fā)足跖體積增加， 同時(shí)伴有紅、腫、熱、痛等癥狀[5]。

本實(shí)驗(yàn)采用70%乙醇提取毛果算盤子的有效成分，依次用石油醚（石油醚無萃取物，因此不做為抗炎活性篩選部位）、乙酸乙酯、正丁醇三種溶劑進(jìn)行萃取，剩余部位作為水部位；用傳統(tǒng)的1%卡拉膠致小鼠腳腫脹、二甲苯致小鼠耳廓腫脹觀察毛果算盤子不同極性部位對小鼠的抗炎作用，結(jié)果顯示水部位和正丁醇高劑量對1%卡拉膠致小鼠腳腫脹具有明顯的抑制作用，正丁醇高、低劑量二甲苯致小鼠耳廓腫脹具有明顯的抑制作用，而乙酸乙酯部位則無抑制作用。

本實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了毛果算盤子不同極性部位的體外抗炎作用，中藥成分十分復(fù)雜，抗炎機(jī)制也十分復(fù)雜，具有多靶點(diǎn)、多途徑、多環(huán)節(jié)的特點(diǎn)，本次試驗(yàn)對不同藥用部位的提取物進(jìn)行分離單獨(dú)測其抗炎鎮(zhèn)痛作用， 雖然不能確定是其中某個(gè)單體發(fā)揮抗炎鎮(zhèn)痛作用，但初步確定不毛果算盤子的有效極性部位，為其進(jìn)一步開發(fā)及臨床應(yīng)用提供有效依據(jù)，但其不同部位的抗炎機(jī)制尚未明確，尚須進(jìn)一步從因子水平等進(jìn)行研究才能更全面更深層次的闡明其抗炎機(jī)制。