miRNA對腫瘤微環(huán)境中免疫細(xì)胞的調(diào)控作用

劉長琳，胡金芳，陳思羽，蔡嘉怡，李文德，黃韌

(1.廣東醫(yī)科大學(xué)研究生院，廣東 湛江 524000； 2.廣東省實(shí)驗(yàn)動物監(jiān)測所，廣州 510000)

微RNA(microRNA，miRNA)普遍存在于真核生物體內(nèi)，Lee等[1]在線蟲體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了第一個miRNA——lin-4基因，該基因不編碼蛋白質(zhì)，但可通過靶向lin-14基因調(diào)控秀麗隱桿線蟲的發(fā)育。隨后，秀麗隱桿線蟲體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的let-7基因肯定了miRNA存在的廣泛性，屆時RNA干擾相關(guān)領(lǐng)域的興起，讓人們意識到這種非編碼調(diào)節(jié)性miRNA在調(diào)控基因表達(dá)過程中的重要性[2]。此后，成千上萬種miRNA在各個物種中被發(fā)現(xiàn)。有證據(jù)表明，miRNA在生物體的生長、發(fā)育等過程中發(fā)揮著重要作用[3-5]，特別是腫瘤發(fā)生和發(fā)展過程中miRNA的異常表達(dá)推動了腫瘤的發(fā)生和發(fā)展[6-9]。免疫系統(tǒng)可以特異性地識別、清除腫瘤細(xì)胞，即腫瘤的“免疫監(jiān)視”[10]。腫瘤與免疫系統(tǒng)的相互作用經(jīng)歷了免疫系統(tǒng)的重塑，腫瘤細(xì)胞可以通過修飾自身表面抗原以及改變腫瘤組織周圍微環(huán)境，抑制免疫細(xì)胞的功能，逃避免疫系統(tǒng)對腫瘤細(xì)胞的識別和攻擊，最終發(fā)生免疫逃逸和腫瘤休眠[11-12]。在腫瘤微環(huán)境中，免疫細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞表達(dá)的miRNA通過調(diào)控腫瘤微環(huán)境中免疫細(xì)胞的分化、增殖、分泌效應(yīng)因子等生物學(xué)過程，在腫瘤免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用，影響腫瘤的發(fā)生、發(fā)展?，F(xiàn)就miRNA對腫瘤微環(huán)境中免疫細(xì)胞的調(diào)控作用予以綜述。

1 miRNA的形成和生物功能

miRNA是一類長度約為22個核糖核苷酸的內(nèi)源性非編碼小分子單鏈RNA，具有高度保守序列。成熟miRNA的形成，始于編碼miRNA的基因在細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄形成的長度為幾千核苷酸的初始miRNA；初始miRNA在核糖核酸酶Drosha復(fù)合物的剪切作用下，形成了60～70個核苷酸長度的具有莖環(huán)結(jié)構(gòu)的miRNA前體；緊接著miRNA前體由輸出蛋白5復(fù)合物轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞質(zhì)，在核糖核酸內(nèi)切酶Dicer的進(jìn)一步作用下形成約為22個核苷酸長度的雙鏈miRNA，隨后組裝形成RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合體(RNA-induced silencing complex，RISC)；雙鏈miRNA的一條單鏈被排出RISC并迅速降解，另一條單鏈則保存在RISC復(fù)合體中并以堿基互補(bǔ)配對形式通過與靶標(biāo)信使RNA的3′非翻譯區(qū)產(chǎn)生不同程度的結(jié)合，抑制翻譯過程或直接降解靶標(biāo)信使RNA發(fā)揮轉(zhuǎn)錄后的負(fù)調(diào)控作用[13-15]。miRNA參與機(jī)體幾乎所有的生理和病理過程[16-18]，miRNA不僅可以調(diào)控免疫細(xì)胞的發(fā)育[19-20]，而且可以通過對免疫系統(tǒng)的調(diào)控影響多種類型腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[21]。

2 在腫瘤微環(huán)境中miRNA對抗腫瘤免疫細(xì)胞的調(diào)控

2.1miRNA對T細(xì)胞的調(diào)控 T細(xì)胞參與的免疫應(yīng)答在機(jī)體殺傷腫瘤細(xì)胞過程中發(fā)揮重要作用。表達(dá)CD8的細(xì)胞毒性T細(xì)胞(cytotoxic T lymphocyte，CTL)可通過分泌穿孔素、顆粒酶、淋巴毒素、腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor，TNF)、γ干擾素(interferon-γ，IFN-γ)等效應(yīng)分子致使腫瘤細(xì)胞裂解和凋亡[22]。激活的CD4+T細(xì)胞可通過釋放多種細(xì)胞因子[如白細(xì)胞介素(interleukin，IL)-2]激活細(xì)胞毒性T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等，增強(qiáng)效應(yīng)細(xì)胞的殺傷能力；另外，激活的CD4+T細(xì)胞還可以通過釋放IFN-γ、TNF等細(xì)胞因子直接作用于腫瘤細(xì)胞，提高靶細(xì)胞表面Ⅰ類主要組織相容性復(fù)合體的表達(dá)，從而增強(qiáng)CTL對腫瘤細(xì)胞的識別或直接殺傷腫瘤細(xì)胞[23]。

miRNA在T細(xì)胞的增殖、凋亡、活化和效應(yīng)功能等過程中發(fā)揮著重要作用。miRNA在腫瘤微環(huán)境的T細(xì)胞中異常表達(dá)影響了T細(xì)胞參與的免疫應(yīng)答過程，T細(xì)胞表達(dá)的miR-448、miR-15a和miR-16等在CD8+T細(xì)胞介導(dǎo)的腫瘤免疫應(yīng)答過程中通過靶向調(diào)控作用，改變腫瘤的發(fā)展進(jìn)程。例如，Lou等[24]在CT26結(jié)腸癌小鼠模型中發(fā)現(xiàn)，miR-448通過靶向吲哚胺2，3-雙加氧酶，抑制CD8+T細(xì)胞凋亡，并促進(jìn)IFN-γ的分泌，對腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生殺傷效應(yīng)；膠質(zhì)瘤微環(huán)境浸潤T細(xì)胞中miR-15a/16的表達(dá)上調(diào)，將miR-15a/16剔除后，CD8+T細(xì)胞的增殖和功能效應(yīng)得到促進(jìn)，從而抑制了膠質(zhì)瘤的進(jìn)展[25]。另外，在CD4+T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫調(diào)控方面，也存在免疫T細(xì)胞表達(dá)的miRNA(miR-126、miR-142和miR-195等)直接靶向調(diào)控的現(xiàn)象。在T細(xì)胞中剔除miR-126后，CD4+T細(xì)胞的腫瘤殺傷能力顯著增強(qiáng)[26]；在非小細(xì)胞肺癌中，miR-142-5p可以通過抑制人類第10號染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源基因(phosphate and tension homology deleted on chromosome ten，PTEN)，抑制CD4+T細(xì)胞的抗腫瘤免疫應(yīng)答，從而促進(jìn)腫瘤逃逸[27]；miR-195通過激活CCDC88C(coiled coil domain containing protein 88C)/Wnt信號通路，促進(jìn)CD4+T細(xì)胞的活化和功能效應(yīng)，抑制非小細(xì)胞肺癌進(jìn)展[28]。以上證據(jù)表明，miRNA在免疫T細(xì)胞中發(fā)生靶向調(diào)控，通過改變免疫細(xì)胞的增殖、活化及效應(yīng)功能，直接影響腫瘤的免疫應(yīng)答過程，從而改變腫瘤進(jìn)程。該特征在腫瘤免疫治療研究方面具有重要的應(yīng)用價值。

腫瘤微環(huán)境中大量免疫抑制分子的富集會促使T細(xì)胞進(jìn)入耗竭狀態(tài)，使免疫系統(tǒng)對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用下降。miRNA在T細(xì)胞的耗竭過程中也發(fā)揮著重要作用，T細(xì)胞表達(dá)的miR-149-3p、miR-28通過調(diào)控T細(xì)胞程序性細(xì)胞死亡受體-1(programmed cell death receptor 1，PD-1)的表達(dá)，影響T細(xì)胞的耗竭。在小鼠4T-1乳腺癌模型中，CD8+T細(xì)胞中miR-149-3p的表達(dá)顯著下調(diào)，當(dāng)PD-1+CD8+T細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-149-3p時，耗竭CD8+T細(xì)胞的比例下降，CD8+T細(xì)胞凋亡受到抑制，CD8+T細(xì)胞分泌TNF-α、IFN-γ效應(yīng)分子增多，恢復(fù)了耗竭T細(xì)胞的殺傷活性[29]。在黑色素瘤微環(huán)境中，過表達(dá)T細(xì)胞中的miR-28同樣能改善耗竭狀態(tài)，使T細(xì)胞恢復(fù)殺傷腫瘤細(xì)胞的功能[30]。通過逆轉(zhuǎn)T細(xì)胞中miRNA的異常表達(dá)，改善T細(xì)胞耗竭狀態(tài)，從而有效調(diào)控T細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用，可為腫瘤的免疫治療提供新的方向和靶點(diǎn)。

除T細(xì)胞表達(dá)的miRNA外，腫瘤細(xì)胞表達(dá)的miRNA也可通過調(diào)控腫瘤細(xì)胞程序性細(xì)胞死亡配體1(programmed cell death ligand 1，PD-L1)的表達(dá)，影響T細(xì)胞的耗竭。例如miR-142-5p，在胰腺癌腫瘤微環(huán)境中，胰腺癌細(xì)胞表達(dá)的miR-142-5p直接靶向PD-L1，抑制了PD-L1與PD-1的結(jié)合，從而促進(jìn)了CD8+T細(xì)胞和CD4+T細(xì)胞在腫瘤中存活以及IFN-γ等細(xì)胞因子的分泌，增強(qiáng)T細(xì)胞對胰腺癌細(xì)胞的殺傷作用[31]。然而，也有報道顯示，在非小細(xì)胞肺癌中，肺癌細(xì)胞表達(dá)的miR-142-5p能通過靶向PTEN誘導(dǎo)PD-L1表達(dá)，促進(jìn)T細(xì)胞的耗竭[32]。不同類型腫瘤細(xì)胞表達(dá)的miR-142-5p對T細(xì)胞的耗竭發(fā)揮著完全不同的作用，提示由于miRNA靶點(diǎn)的豐富性和免疫調(diào)控機(jī)制自身的復(fù)雜性，在不同腫瘤中miRNA可能會通過不同的免疫機(jī)制發(fā)揮截然相反的作用。

2.2miRNA對自然殺傷細(xì)胞(natural killer cell，NK細(xì)胞)的調(diào)控 NK細(xì)胞非特異性識別腫瘤細(xì)胞，對腫瘤細(xì)胞的殺傷不具有主要組織相容性復(fù)合體限制性。NK細(xì)胞被激活后，表達(dá)乙型跨膜糖蛋白分子，啟動腫瘤細(xì)胞的死亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，并分泌穿孔蛋白、顆粒酶B、TNF以及NK細(xì)胞毒因子等殺傷腫瘤細(xì)胞，發(fā)揮類似于CTL的效應(yīng)機(jī)制[33]。

miRNA調(diào)控NK細(xì)胞的增殖、活化等過程，影響NK細(xì)胞分泌IFN-γ、穿孔蛋白、顆粒酶B等效應(yīng)分子發(fā)揮殺傷腫瘤細(xì)胞的功能。目前已有文獻(xiàn)證明，NK細(xì)胞表達(dá)的miR-155、miR-506及miR-182可促進(jìn)NK細(xì)胞對腫瘤的殺傷作用，miR-155能靶向SHIP1(SH-2 containing inositol 5′ polyphosphatase 1)，促進(jìn)胞外信號調(diào)節(jié)激酶和蛋白激酶B的活化，進(jìn)而促進(jìn)NK細(xì)胞的增殖和活化，促進(jìn)NK細(xì)胞分泌IFN-γ效應(yīng)分子，增強(qiáng)NK細(xì)胞對淋巴瘤細(xì)胞的殺傷作用[34]。在肝癌患者外周血中分離出的NK細(xì)胞中miR-506的表達(dá)下調(diào)，且miR-506通過靶向信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3，STAT3)促進(jìn)NK細(xì)胞對肝癌細(xì)胞的殺傷毒性[35]。NK細(xì)胞的激活狀態(tài)取決于激活受體NKG2D(natural killer cell group 2 member D)和抑制受體NKG2A(natural killer cell group 2 member A)之間的平衡，Abdelrahman等[36]發(fā)現(xiàn)，在肝癌患者的NK細(xì)胞中miR-182高表達(dá)，且miR-182同時上調(diào)NKG2D和NKG2A兩種受體，由于NKG2D激活信號發(fā)揮的效應(yīng)強(qiáng)于NKG2A的抑制信號，最終促進(jìn)NK細(xì)胞分泌穿孔蛋白和顆粒酶B，導(dǎo)致NK細(xì)胞的細(xì)胞毒性增強(qiáng)。然而，由于miRNA可結(jié)合靶點(diǎn)的豐富性，很多NK細(xì)胞表達(dá)的miRNA(如miR-218-5p、miR-27*、miR-24)能通過靶向特定分子對NK細(xì)胞的細(xì)胞殺傷毒性發(fā)揮抑制作用。在肺癌腫瘤微環(huán)境中，NK細(xì)胞表達(dá)的miR-218-5p通過靶向絲氨酸羥甲基轉(zhuǎn)移酶1，抑制NK細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷活性[37]。在結(jié)直腸癌中，NK細(xì)胞表達(dá)的miR-24下調(diào)樁蛋白，miR-27a*下調(diào)穿孔蛋白、顆粒酶B的表達(dá)，均達(dá)到抑制NK細(xì)胞對結(jié)直腸癌細(xì)胞的殺傷作用[38-39]。

免疫細(xì)胞自身表達(dá)的miRNA能調(diào)控NK細(xì)胞的存活和效應(yīng)分子的釋放，而腫瘤細(xì)胞表達(dá)的miRNA也可在轉(zhuǎn)入NK細(xì)胞后發(fā)揮對NK細(xì)胞的調(diào)控作用。例如，肺癌細(xì)胞表達(dá)的miR-23a轉(zhuǎn)入NK細(xì)胞后，NK細(xì)胞激活受體NKG2D表達(dá)下調(diào)，抑制了NK細(xì)胞的殺傷活性[40]。除了直接調(diào)控NK細(xì)胞的存活和功能，腫瘤細(xì)胞表達(dá)的miRNA還可通過靶向趨化因子影響NK細(xì)胞招募進(jìn)入腫瘤微環(huán)境，進(jìn)而影響腫瘤進(jìn)展。肝癌細(xì)胞表達(dá)的miR-561-5p直接靶向人趨化因子CX3C配體1，從而抑制表達(dá)趨化因子CX3C受體1的NK細(xì)胞遷移進(jìn)入腫瘤微環(huán)境，從而促進(jìn)肝細(xì)胞癌的進(jìn)展和肺轉(zhuǎn)移[41]。這也進(jìn)一步證明了腫瘤微環(huán)境中腫瘤細(xì)胞和免疫細(xì)胞存在相互作用，影響NK細(xì)胞遷移進(jìn)入微環(huán)境或者直接抑制NK細(xì)胞的殺傷活性，從而抑制免疫應(yīng)答。

2.3miRNA對樹突狀細(xì)胞(dendritic cell，DC)的調(diào)控 DC是專職抗原呈遞細(xì)胞，它能高效攝取、加工處理和呈遞腫瘤相關(guān)抗原，未成熟的DC具有較強(qiáng)的遷移能力和抗原攝取能力，成熟的DC能有效激活初始T細(xì)胞，DC與T細(xì)胞結(jié)合后分泌IL-12等刺激T細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)CTL生成[42]。

腫瘤微環(huán)境浸潤的DC中異常表達(dá)的miRNA對DC介導(dǎo)的抗腫瘤免疫應(yīng)答發(fā)揮抑制作用。在DC中表達(dá)上調(diào)的miRNA有miR-21、miR-222、miR-28、miR-30a和miR-301a等，這些miRNA均抑制了DC的活化、成熟以及對T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答的激活[43]。在非小細(xì)胞肺癌的腫瘤微環(huán)境中，DC中miR-301a的過表達(dá)抑制了DC的成熟，從而抑制了DC介導(dǎo)的抗腫瘤免疫的激活，最終促進(jìn)了腫瘤的生長[44]。然而，少數(shù)miRNA也可促進(jìn)DC的活化、成熟等過程，如miR-155能促進(jìn)DC的成熟和遷移能力，誘導(dǎo)DC通過分泌效應(yīng)因子激活T細(xì)胞；在乳腺癌腫瘤微環(huán)境中，DC中的miR-155表達(dá)下調(diào)，而miR-155的表達(dá)下調(diào)抑制了DC介導(dǎo)的免疫應(yīng)答[45]。

在腫瘤微環(huán)境中，DC自身表達(dá)的miRNA異?；蚰[瘤細(xì)胞來源的外泌體中miRNA被DC捕獲攝取后，可抑制DC的分化，減弱其抗原呈遞能力，抑制其與T細(xì)胞的相互作用，從而抑制T細(xì)胞的激活，促使腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸。例如，人胰腺癌細(xì)胞panc-1來源的外泌體攜帶的miR-203被DC攝取后，DC中的miR-203表達(dá)上調(diào)，Toll樣受體4表達(dá)下調(diào)，IL-12和TNF-α分泌被抑制，進(jìn)而抑制DC的成熟[46]。人胃癌細(xì)胞BGC-823來源的外泌體攜帶的miR-17-5p被未成熟的DC攝取后，也抑制了DC的成熟[47]。目前臨床上有效的抗腫瘤免疫治療的核心是產(chǎn)生以CTL細(xì)胞為主體的細(xì)胞免疫，DC作為專職抗原呈遞細(xì)胞能夠誘導(dǎo)腫瘤特異性CTL的生成，這也是基于DC的抗腫瘤免疫療法的基礎(chǔ)。DC與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有密切的關(guān)系，在大多數(shù)實(shí)體瘤內(nèi)，浸潤DC數(shù)量多，則患者預(yù)后好，探究miRNA對腫瘤微環(huán)境中DC的調(diào)控機(jī)制也可為基于DC的免疫療法提供更多的可能。

3 腫瘤微環(huán)境中miRNA對促腫瘤免疫抑制細(xì)胞的調(diào)控

3.1miRNA對髓樣抑制細(xì)胞(myeloid derived suppressor cells，MDSCs)的調(diào)控 在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中，腫瘤細(xì)胞以及腫瘤微環(huán)境中的因子[如血管內(nèi)皮生長因子、IL-6、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子、IL-10、轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforming growth factor-β，TGF-β)等]可誘導(dǎo)MDSCs的產(chǎn)生；MDSCs通過分泌TGF-β、精氨酸酶(arginase，ARG)、活性氧類、一氧化氮合酶和IL-10等免疫抑制分子，抑制T細(xì)胞增殖活化、分泌IFN-γ等效應(yīng)因子和DC的分化成熟，以抑制DC的抗原呈遞能力[48]。

在腫瘤微環(huán)境中，MDSCs來源的miRNA的異常表達(dá)主要表現(xiàn)在：對MDSCs發(fā)揮促進(jìn)作用的miRNA表達(dá)上調(diào)，進(jìn)一步促進(jìn)MDSCs的擴(kuò)增和效應(yīng)因子的分泌；對MDSCs發(fā)揮抑制作用的miRNA表達(dá)下調(diào)，進(jìn)而緩解miRNA對MDSCs的抑制作用；最終導(dǎo)致MDSCs細(xì)胞的富集和相關(guān)免疫抑制因子的累積，從而促進(jìn)炎癥微環(huán)境的形成，這種炎性環(huán)境進(jìn)一步抑制抗腫瘤的免疫應(yīng)答，最終促進(jìn)腫瘤的逃逸。例如，MDSCs表達(dá)的miR-486、miR-30a能促進(jìn)MDSCs細(xì)胞的擴(kuò)增和功能效應(yīng)，小鼠LLC肺癌荷瘤小鼠脾臟分離出的MDSCs中miR-486的表達(dá)上調(diào)，miR-486通過靶向CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白α，促進(jìn)了MDSCs的擴(kuò)增，并且抑制MDSCs的凋亡，導(dǎo)致MDSCs的富集[49]。在非霍奇金淋巴瘤微環(huán)境中，MDSCs中miR-30a的表達(dá)顯著上調(diào)，miR-30a通過靶向細(xì)胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子3，促進(jìn)骨髓中細(xì)胞誘導(dǎo)分化形成MDSCs，促進(jìn)MDSCs分泌IL-10、ARG1、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶等免疫抑制分子，抑制免疫應(yīng)答[50]。MDSCs表達(dá)的部分miRNA則對MDSCs的擴(kuò)增和效應(yīng)發(fā)揮抑制作用，如miR-17-5p和miR-21a，通過靶向STAT3，抑制MDSCs釋放活性氧類和過氧化氫等免疫抑制分子；在結(jié)腸癌腫瘤微環(huán)境中，miR-17-5p和miR-21a在MDSCs中均表達(dá)下調(diào)，miRNA表達(dá)下調(diào)促進(jìn)了MDSCs對抗腫瘤免疫應(yīng)答的抑制[51]。

作為MDSCs主要的效應(yīng)因子，ARG和TGF-β在促進(jìn)腫瘤逃逸過程中發(fā)揮著重要作用。精氨酸是T細(xì)胞增殖所需要的物質(zhì)，可調(diào)節(jié)T細(xì)胞代謝，促進(jìn)T細(xì)胞存活，促進(jìn)抗腫瘤免疫應(yīng)答[52]，ARG通過催化精氨酸分解抑制T細(xì)胞增殖和抗腫瘤免疫，促進(jìn)腫瘤逃逸[53]。TGF-β是重要的免疫抑制性細(xì)胞因子，能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移與侵襲、促進(jìn)腫瘤血管生成，TGF-β信號通路在介導(dǎo)腫瘤轉(zhuǎn)移中發(fā)揮必不可少的作用[54]。腫瘤細(xì)胞來源外泌體中的miRNA(如miR-107、miR-29a、miR-92a、miR-10a和miR-21)被MDSCs攝取吸收后，在MDSCs中的表達(dá)上調(diào)，促進(jìn)MDSCs的擴(kuò)增和效應(yīng)，影響MDSCs效應(yīng)分子的分泌，從而改變腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。例如，胃癌細(xì)胞來源的富含miR-107的外泌體可以被人外周血中分離出的MDSCs攝取吸收，miR-107靶向核糖核酸內(nèi)切酶Dicer1基因，促進(jìn)MDSCs的擴(kuò)增，并通過靶向磷脂酰肌醇-3-激酶促進(jìn)MDSCs分泌ARG1[55]。在組織缺氧的條件下，膠質(zhì)瘤細(xì)胞來源外泌體中的miR-29a和miR-92a可被MDSCs攝取吸收，分別通過靶向HMG盒轉(zhuǎn)錄因子1(HMG-box transcription factor 1，HBP1)和cAMP依賴性蛋白激酶調(diào)節(jié)亞基1α(protein kinase，cAMP-dependent，regulatory subunit type Ⅰ alpha，PRKAR1A)，促進(jìn)MDSCs的擴(kuò)增以及分泌TGF-β、ARG1等發(fā)揮免疫抑制功能；此外，膠質(zhì)瘤中的miR-10a、miR-21也可促進(jìn)MDSCs擴(kuò)增[56-57]。研究miRNA在腫瘤微環(huán)境中對MDSCs的調(diào)控機(jī)制，在探索miRNA與MDSCs和腫瘤遷移、侵襲、血管生成的關(guān)系中發(fā)揮越來越重要的作用，也為臨床抗腫瘤免疫治療尋找新的靶點(diǎn)提供了可能。

3.2miRNA對腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(tumor associated macrophage，TAM)的調(diào)控 TAM是浸潤在腫瘤組織中的一群異質(zhì)性巨噬細(xì)胞，功能類似于M2型巨噬細(xì)胞。M1型巨噬細(xì)胞具有吞噬和殺死目標(biāo)細(xì)胞的功能，能刺激T細(xì)胞分化成輔助性T細(xì)胞1；M2型巨噬細(xì)胞高表達(dá)IL-10、TGF-β和ARG等，能夠?qū)細(xì)胞極化為免疫抑制性的輔助性T細(xì)胞2，進(jìn)而抑制免疫反應(yīng)[58]。TAM不僅可抑制抗腫瘤的免疫應(yīng)答，還可促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移和侵襲等過程，促進(jìn)惡性腫瘤的發(fā)展和轉(zhuǎn)移[59-60]。TAM自身表達(dá)的miRNA可調(diào)控TAM從M1型巨噬細(xì)胞向M2型巨噬細(xì)胞的極化，影響腫瘤進(jìn)展。miR-19a-3p通過靶向FOS樣抗原1、血管內(nèi)皮生長因子和STAT3，調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞從M2型向M1型轉(zhuǎn)變，促進(jìn)免疫應(yīng)答，從而抑制乳腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移[61]。相反地，miR-146a能促進(jìn)M2型巨噬細(xì)胞部分表型分子的表達(dá)，從而促進(jìn)乳腺癌的進(jìn)展，將miR-146a表達(dá)抑制的RAW264.7單核巨噬細(xì)胞與4T-1小鼠乳腺癌細(xì)胞共培養(yǎng)后，發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞的生長受到抑制[62]。進(jìn)一步探索miRNA調(diào)控TAM從M1型向M2型巨噬細(xì)胞極化的機(jī)制，建立有效措施誘導(dǎo)TAM向M1型巨噬細(xì)胞的極化，將會對改善抗腫瘤免疫治療產(chǎn)生積極影響。

腫瘤細(xì)胞表達(dá)的miRNA也可調(diào)控TAM介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。腫瘤細(xì)胞高表達(dá)miR-155和腫瘤細(xì)胞外泌體中的miR-940、miR-145被TAM攝取轉(zhuǎn)化后，促進(jìn)了TAM向M2型巨噬細(xì)胞的極化，從而促進(jìn)了腫瘤的進(jìn)展。例如，miR-940在卵巢癌細(xì)胞來源外泌體中高表達(dá)，當(dāng)miR-940從外泌體轉(zhuǎn)化入TAM后，誘導(dǎo)了TAM極化為M2型巨噬細(xì)胞[63]；結(jié)腸癌細(xì)胞來源的miR-145被腫瘤微環(huán)境中巨噬細(xì)胞攝取后，促進(jìn)TAM分泌IL-10、TGF-β等炎癥因子，誘導(dǎo)TAM向M2型巨噬細(xì)胞極化，促進(jìn)結(jié)腸癌的進(jìn)展[64]。此外，腫瘤細(xì)胞表達(dá)的miRNA在轉(zhuǎn)化進(jìn)入TAM后，也可通過調(diào)控TAM表面PD-L1的表達(dá)，促進(jìn)T細(xì)胞的耗竭，進(jìn)而發(fā)揮免疫抑制效應(yīng)。肝癌細(xì)胞來源外泌體中的miR-23a-3p，通過靶向PTEN和蛋白激酶B，上調(diào)TAM細(xì)胞表面PD-L1的表達(dá)，進(jìn)一步促進(jìn)T細(xì)胞的凋亡，抑制抗腫瘤的免疫應(yīng)答[65]。這些結(jié)果表明，在腫瘤微環(huán)境中，腫瘤細(xì)胞與免疫細(xì)胞的相互作用促成了腫瘤逃逸。

3.3miRNA對調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cells，Treg細(xì)胞)的調(diào)控 Treg細(xì)胞是一群異質(zhì)性細(xì)胞，在腫瘤微環(huán)境中發(fā)揮免疫抑制功能，抑制腫瘤特異性T細(xì)胞的抗腫瘤效應(yīng)。Treg細(xì)胞不僅可以通過誘導(dǎo)抗原呈遞細(xì)胞表達(dá)B7-H4，促進(jìn)抗原呈遞細(xì)胞與T細(xì)胞表面特異性受體結(jié)合并分泌IL-10和TGF-β等效應(yīng)因子來抑制T細(xì)胞增殖；還可通過分泌穿孔素和顆粒酶直接殺傷T細(xì)胞和抗原呈遞細(xì)胞[66]。miRNA在Treg細(xì)胞中的異常表達(dá)，影響Treg細(xì)胞的增殖和免疫抑制的效應(yīng)功能[67]。Treg細(xì)胞中的miR-17、miR-27b-3p、miR-330-3p和miR-340-5p均能抑制Treg細(xì)胞的增殖和效應(yīng)，其中miR-17通過靶向叉頭框轉(zhuǎn)錄因子P3抑制Treg細(xì)胞的效應(yīng)功能，而miR-27b-3p、miR-330-3p以及miR-340-5p能抑制Treg細(xì)胞分泌免疫抑制因子，從而促進(jìn)抗腫瘤免疫應(yīng)答，這些miRNA在CD8+CD25+CD127lowTreg細(xì)胞中均低表達(dá)，提高其在Treg細(xì)胞中的表達(dá)水平后，Treg細(xì)胞的增殖和效應(yīng)功能均受到抑制[68]。Treg細(xì)胞中的少數(shù)miRNA(如miR-21)通過靶向PTEN，促進(jìn)小鼠乳腺癌模型中CCR6+Treg細(xì)胞的增殖[69]。

IL-10和TGF-β是Treg細(xì)胞的主要效應(yīng)因子，對腫瘤炎癥微環(huán)境的形成發(fā)揮重要作用，抑制抗原呈遞細(xì)胞和T細(xì)胞的活化，而腫瘤細(xì)胞來源miRNA被攝取進(jìn)入受體T細(xì)胞后可促進(jìn)Treg細(xì)胞的增殖和效應(yīng)分子的分泌。例如，miR-214在多種類型的人類腫瘤患者和小鼠腫瘤模型的血漿和腫瘤組織中高表達(dá)，在裸鼠異位移植肺癌模型中，腫瘤細(xì)胞來源的細(xì)胞微泡攜帶的miR-214被受體T細(xì)胞攝取，靶向PTEN，促進(jìn)Treg細(xì)胞增殖，促進(jìn)Treg細(xì)胞分泌高水平的IL-10和TGF-β，發(fā)揮免疫抑制功能，從而促進(jìn)腫瘤的生長[70]。

Treg細(xì)胞在腫瘤組織中浸潤與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，且Treg細(xì)胞占T細(xì)胞的比例越大，患者的預(yù)后越差[66，71]。T細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞表達(dá)的miRNA可調(diào)控T細(xì)胞向Treg細(xì)胞的分化，T細(xì)胞表達(dá)的miR-19b、子宮頸癌細(xì)胞表達(dá)的miR-155、胃癌細(xì)胞來源的外泌體中的miR-451均抑制了Treg細(xì)胞的形成[72-75]。除抑制Treg細(xì)胞形成外，非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞表達(dá)的miR-141還可通過抑制CXC趨化因子配體1和CXC趨化因子受體2的分泌，抑制Treg細(xì)胞進(jìn)入腫瘤微環(huán)境，從而抑制非小細(xì)胞肺癌的轉(zhuǎn)移[76]。減少腫瘤微環(huán)境中Treg細(xì)胞的形成或抑制其被招募進(jìn)入腫瘤微環(huán)境，可緩解微環(huán)境對抗腫瘤免疫應(yīng)答的抑制，從而抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移和術(shù)后復(fù)發(fā)。

4 小 結(jié)

腫瘤免疫療法在抗腫瘤治療中發(fā)揮著日益重要的作用，但具有免疫抑制特征的腫瘤微環(huán)境也使嵌合抗原受體T細(xì)胞免疫療法等無法成功地應(yīng)用于實(shí)體瘤。因此，如何進(jìn)一步緩解腫瘤微環(huán)境對免疫應(yīng)答的抑制作用，是抗腫瘤免疫療法應(yīng)用于實(shí)體瘤需要解決的一大難題。免疫細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞表達(dá)的miRNA調(diào)控著腫瘤微環(huán)境中的免疫應(yīng)答，介導(dǎo)著腫瘤細(xì)胞與免疫細(xì)胞的相互作用，在腫瘤進(jìn)展中發(fā)揮著重要作用。此外，miRNA也可作為腫瘤診斷、治療、判斷預(yù)后的生物標(biāo)志物，具有臨床應(yīng)用潛力?；谀[瘤微環(huán)境中miRNA對免疫細(xì)胞的調(diào)控機(jī)制，尋找新的治療靶點(diǎn)，對于改善臨床腫瘤免疫治療具有重要意義。