斑馬魚白血病模型的研究進(jìn)展

向文碧，何志旭，舒莉萍

(1.貴州醫(yī)科大學(xué)細(xì)胞工程生物醫(yī)藥技術(shù)國(guó)家地方聯(lián)合工程實(shí)驗(yàn)室 組織工程與干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中心，貴陽(yáng) 550004； 2.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院成體干細(xì)胞轉(zhuǎn)化研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴陽(yáng) 550004； 3.貴州醫(yī)科大學(xué)兒科學(xué)教研室，貴陽(yáng) 550004； 4.遵義醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院兒科學(xué)教研室，貴州 遵義 563004)

白血病是一類造血干細(xì)胞惡性克隆性疾病，通常來源于骨髓。 2015年，有超過230萬患白血病的患者，全球超過350 000人死于白血病[1]。在美國(guó)，2017年有62 130例新發(fā)白血病病例，白血病導(dǎo)致24 500例死亡，白血病患者的5年生存率約為63%[2]。雖然大多數(shù)白血病累及成人，但白血病也是兒童癌癥中最常見的診斷。白血病主要按兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)分類，按起源細(xì)胞分類：淋巴起源的白血病被稱為“淋巴細(xì)胞性或淋巴細(xì)胞系白血病”，而骨髓來源的白血病被稱為“骨髓性或髓系白血病”；根據(jù)生長(zhǎng)速度分為急性白血病和慢性白血病。白血病的發(fā)病原因多種多樣，一些與染色體異常直接相關(guān)(如慢性髓系白血病中的費(fèi)城染色體)，一些白血病涉及血細(xì)胞生長(zhǎng)、分化和存活相關(guān)的多個(gè)基因的突變和(或)易位。然而，大多數(shù)白血病的病因不明，尚有一些患者無染色體異常且無已知的基因突變，突出了需要在動(dòng)物模型中進(jìn)一步研究以揭示這些未知的造血系統(tǒng)惡性腫瘤的驅(qū)動(dòng)因素。現(xiàn)就斑馬魚白血病模型的最新研究進(jìn)展予以綜述。

1 斑馬魚模式生物的生物學(xué)優(yōu)勢(shì)

斑馬魚是一種淡水硬骨魚，自20世紀(jì)70年代有學(xué)者首次使用斑馬魚作為模型生物[3]以來，越來越多的實(shí)驗(yàn)室開始使用這種強(qiáng)大的生物來研究發(fā)育和疾病，因?yàn)樗哂性S多優(yōu)于其他模式生物的優(yōu)勢(shì)。首先，斑馬魚體外受精，胚胎通體透明，易于觀察和進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作；另外，斑馬魚發(fā)育迅速，大多數(shù)主要器官在受精后2～3 d形成，3個(gè)月左右達(dá)到性成熟，一次繁殖可產(chǎn)生數(shù)百枚胚胎[4]，使得斑馬魚成為用于大規(guī)模篩查的理想模型。

斑馬魚在血液系統(tǒng)關(guān)鍵發(fā)育過程的高度保守使人們能夠識(shí)別出與人類造血功能障礙有關(guān)的幾個(gè)基因[5]。此外，由于白血病細(xì)胞的特殊性，使用熒光蛋白標(biāo)記可視化轉(zhuǎn)基因斑馬魚體內(nèi)的白血病發(fā)生過程，將有助于進(jìn)行白血病的研究。與小鼠的給藥方式相比，斑馬魚可以直接從水中攝入小分子化合物，方便快捷，易于對(duì)藥物進(jìn)行高通量篩選。通過轉(zhuǎn)基因斑馬魚篩選程序鑒定小分子將有助于開發(fā)用于治療疾病(特別是癌癥)的新型藥物。因此，轉(zhuǎn)基因斑馬魚在造血、造血系統(tǒng)疾病和白血病的研究方面具有很好的前景。

在患有免疫功能低下的小鼠中進(jìn)行異種移植是一種具有代表性的體內(nèi)研究方法，用于研究惡性血細(xì)胞生成的生物學(xué)以及開發(fā)針對(duì)血液疾病的新療法[6-7]。然而，由于小鼠實(shí)驗(yàn)的局限性(包括實(shí)驗(yàn)程序的時(shí)間安排和動(dòng)物房的設(shè)施成本)，小鼠模型不適合用于對(duì)潛在候選藥物進(jìn)行快速、經(jīng)濟(jì)有效的篩查；此外，免疫抑制可以改變?cè)煅h(huán)境，從而影響腫瘤細(xì)胞的行為和對(duì)治療的反應(yīng)[8]。與其他脊椎動(dòng)物模型系統(tǒng)相比，用斑馬魚胚胎進(jìn)行異種移植可提供許多優(yōu)點(diǎn)：斑馬魚在受精后4周缺乏成熟的適應(yīng)性免疫系統(tǒng)，允許移植且不需要免疫抑制[9]；斑馬魚是光學(xué)透明的，并且與注射的細(xì)胞一樣，可以用各種熒光染料特異性標(biāo)記，達(dá)到體內(nèi)細(xì)胞-細(xì)胞相互作用的可視化；斑馬魚繁殖迅速且價(jià)格低廉，允許進(jìn)行高通量藥物篩查[10]。目前，通過斑馬魚藥篩體系篩選出的藥物已進(jìn)入臨床試驗(yàn)[11]。

2 斑馬魚的正常造血過程

斑馬魚造血發(fā)育主要有原始造血和定向造血兩個(gè)階段[12]。原始造血在受精后24 h從兩個(gè)位置產(chǎn)生，前側(cè)板中胚層產(chǎn)生骨髓譜系，中間細(xì)胞團(tuán)產(chǎn)生原始骨髓和紅細(xì)胞，然后，原始骨髓細(xì)胞在卵黃囊周圍遷移并分化成不同的骨髓譜系[13]。定向造血能夠產(chǎn)生和重建整個(gè)造血系統(tǒng)的造血干細(xì)胞(hematopoietic stem cells，HSCs)，從受精后26 h開始，定向HSCs從主動(dòng)脈-性腺-中腎(aorta-gonad-mesonephros，AGM)區(qū)域背主動(dòng)脈的血源性內(nèi)皮細(xì)胞中出現(xiàn)，然后HSCs在受精后48 h遷移至尾部造血組織，這是后血島的擴(kuò)張，并且作為瞬時(shí)造血部位產(chǎn)生紅細(xì)胞、骨髓細(xì)胞和血小板，來自AGM區(qū)域的HSCs約在受精后48 h定殖于腎髓[14]。斑馬魚腎髓與哺乳動(dòng)物骨髓相似，可產(chǎn)生所有的成熟血液細(xì)胞譜系，包括胚胎和成年斑馬魚的紅系、髓系和淋系[15]。在大約受精后54 h時(shí)，來自AGM區(qū)域的淋巴樣祖細(xì)胞轉(zhuǎn)移到胸腺，即淋巴T細(xì)胞成熟的位置，盡管造血部位存在差異，但斑馬魚的每個(gè)造血過程與哺乳動(dòng)物一樣都是非常保守的[15-16]。

3 斑馬魚白血病模型的研究進(jìn)展

斑馬魚和人類造血發(fā)育高度保守[17]，利于造血系統(tǒng)惡性腫瘤斑馬魚模型的發(fā)展，有助于闡明惡性腫瘤的分子發(fā)病機(jī)制，并加快新療法的臨床前研究[18]。

3.1淋系白血病的斑馬魚模型 第一個(gè)急性T淋巴細(xì)胞白血病(acute T-lymphocytic leukemia，T-ALL)轉(zhuǎn)基因斑馬魚模型是由Langenau等[19]通過將小鼠c-Myc基因與增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(enhanced green fluorescent protein，EGFP)基因融合，以淋巴細(xì)胞特異性啟動(dòng)子rag2驅(qū)動(dòng)EGFP-mMyc融合基因的表達(dá)而構(gòu)建的。該模型首次在熒光顯微鏡下監(jiān)測(cè)EGFP標(biāo)記的白血病細(xì)胞的發(fā)生過程。然而，由于該轉(zhuǎn)基因魚(30日齡)中白血病發(fā)病非常迅速，因此，很難長(zhǎng)期觀察和研究白血病的發(fā)生、發(fā)展。為了克服這個(gè)問題，該組構(gòu)建了一個(gè)條件轉(zhuǎn)基因斑馬魚系，在EGFP-mMyc致癌基因前面加一個(gè)loxed dsRED2基因，通過Cre介導(dǎo)的LoxP-dsRED2-loxP重組盒控制c-Myc的表達(dá)[20]。該魚未注射Cre信使RNA重組酶時(shí)，表達(dá)紅色熒光，不會(huì)發(fā)生白血病。通過將Cre信使RNA注入單細(xì)胞期胚胎，可以誘導(dǎo)轉(zhuǎn)基因后代發(fā)生T-ALL。

Myc致癌轉(zhuǎn)錄因子在大多數(shù)T-ALL病例中過表達(dá)，人第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶與張力蛋白同源基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten，PTEN)/磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinases,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B，PKB/Akt)通路中的基因突變?cè)赥-ALL中也是常見的。Gutierrez等[21]構(gòu)建了T-ALL的第二個(gè)條件轉(zhuǎn)基因斑馬魚模型，該模型不是基于Cre/lox系統(tǒng)而是由他莫昔芬誘導(dǎo)，在該條件轉(zhuǎn)基因斑馬魚模型中，用4-羥基他莫昔芬誘導(dǎo)后，Myc被激活，從而使斑馬魚發(fā)生T-ALL，并且4-羥基他莫昔芬的撤除導(dǎo)致T-ALL細(xì)胞凋亡和腫瘤消退；同時(shí)還發(fā)現(xiàn)，斑馬魚PTEN基因的功能缺失突變或組成型活性Akt2轉(zhuǎn)基因的表達(dá)在4-羥基他莫昔芬撤除后可促進(jìn)疾病進(jìn)展；此外，Myc降低了PTEN在信使RNA水平的表達(dá)，表明Myc下游的PTEN-PI3K-Akt通路激活是腫瘤進(jìn)展的原因。通常在T-ALL中激活的另一途徑是Notch途徑。為了研究Notch信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)激活后誘導(dǎo)白血病的分子機(jī)制，Chen等[22]構(gòu)建了由人Notch1誘導(dǎo)的T細(xì)胞白血病斑馬魚模型，在該模型中，rag2啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)Notch1的胞內(nèi)部分表達(dá)，從而誘導(dǎo)疾病發(fā)生，44%的斑馬魚在誘導(dǎo)約5個(gè)月時(shí)發(fā)生T淋巴細(xì)胞增生性疾病，腫瘤細(xì)胞廣泛侵入斑馬魚的所有組織，將誘導(dǎo)斑馬魚中的腫瘤細(xì)胞移植到受輻射的受體斑馬魚中時(shí)，受體斑馬魚發(fā)生侵襲性和致命性白血??；此外，當(dāng)該轉(zhuǎn)基因系與另一種過表達(dá)斑馬魚Bcl-2基因系雜交時(shí)，白血病發(fā)病顯著加速，表明Notch途徑和Bcl-2介導(dǎo)的抗凋亡途徑之間有協(xié)同作用。通過這些轉(zhuǎn)基因斑馬魚模型人們已經(jīng)對(duì)白血病的發(fā)病機(jī)制產(chǎn)生了重要的見解，并且這些模型已經(jīng)用于化學(xué)篩選和移植實(shí)驗(yàn)，旨在進(jìn)一步認(rèn)識(shí)T-ALL的生物學(xué)過程。

3.2髓性白血病的轉(zhuǎn)基因斑馬魚模型 在斑馬魚ALL模型取得初步成功之后，科研工作者開始努力在斑馬魚中重現(xiàn)髓系惡性腫瘤，包括骨髓增生性腫瘤(myeloproliferative neoplasms，MPN)和急性髓性白血病(acute myeloid leukemia，AML)。許多血液系統(tǒng)惡性腫瘤由染色體轉(zhuǎn)位后產(chǎn)生的致癌融合基因驅(qū)動(dòng)。染色體轉(zhuǎn)位后產(chǎn)生的這些融合基因通?？梢栽趧?dòng)物模型或細(xì)胞系中表達(dá)以驅(qū)動(dòng)腫瘤發(fā)生。因此，大多數(shù)MPN和AML轉(zhuǎn)基因斑馬魚系是通過在斑馬魚體內(nèi)表達(dá)人類常見的致癌融合基因和突變基因所構(gòu)建的。有學(xué)者用啟動(dòng)子spi-1驅(qū)動(dòng)EGFP和MYST3/NCOA2融合基因的表達(dá)構(gòu)建了AML的第一個(gè)轉(zhuǎn)基因斑馬魚模型，證明了MYST3/NCOA2融合基因的致癌效力；在斑馬魚胚胎單細(xì)胞期注射MYST3/NCOA2-EGFP融合基因后14和26個(gè)月，表達(dá)MYST3/NCOA2-EGFP的轉(zhuǎn)基因斑馬魚中有1.1%發(fā)生了AML，這種白血病的特征在于骨髓原始細(xì)胞對(duì)轉(zhuǎn)基因斑馬魚腎臟的廣泛侵襲[23-24]。

NUP98-HOXA9融合基因[t(7; 11) (p15; p15)]與AML和慢性粒細(xì)胞白血病的預(yù)后不良有關(guān)[25]。Forrester等[26]用spi-1啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)NUP98-HOXA9融合基因表達(dá)構(gòu)建了Cre/lox誘導(dǎo)型轉(zhuǎn)基因斑馬魚系(spi1:loxP-EGFP-loxP；NUP98-HOXA9)；在胚胎期，NUP98-HOXA9過表達(dá)導(dǎo)致NUP98-HOXA9轉(zhuǎn)基因斑馬魚造血功能改變，包括髓樣細(xì)胞大量擴(kuò)增、紅細(xì)胞減少和骨髓分化抑制；在成年期，23%的NUP98-HOXA9轉(zhuǎn)基因斑馬魚在19～23個(gè)月時(shí)發(fā)展成MPN。

在髓系惡性腫瘤中，HRAS基因突變比KRAS基因突變更頻繁，而NRAS基因突變很罕見，但在AML中NRAS基因經(jīng)常上調(diào)且被認(rèn)為是AML不良的預(yù)后標(biāo)志物[27-28]。Alghisi等[27]在造血出現(xiàn)之前誘導(dǎo)HRAS突變基因在生血內(nèi)皮中表達(dá)構(gòu)建了轉(zhuǎn)基因斑馬魚系(fli1：GAL4-FF；UAS-GFP-HRASG12V)，這個(gè)轉(zhuǎn)基因系斑馬魚尾部造血組織顯著擴(kuò)增，未成熟的造血細(xì)胞數(shù)量增加以及腎髓中出現(xiàn)骨髓分化塊，與人類MPN類似。Shen等[29]創(chuàng)建了表達(dá)鼠n-Myc基因同時(shí)驅(qū)動(dòng)EGFP表達(dá)的熱休克反應(yīng)性轉(zhuǎn)基因斑馬魚系MYCN：HSE：EGFP，在熱休克后，n-Myc過表達(dá)促進(jìn)未成熟的髓樣細(xì)胞擴(kuò)增，并增強(qiáng)骨髓細(xì)胞的再增殖活性。

核磷蛋白1(nucleophosmin 1，NPM1)的突變發(fā)生在約27%的AML病例中[30-31]，而FMS樣酪氨酸激酶3(fms-like tyrosine kinase 3，F(xiàn)LT3)基因內(nèi)部串聯(lián)重復(fù)突變(internal tandem duplication，F(xiàn)LT3-ITD)也是AML中的常見突變，與預(yù)后不良和復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)增加相關(guān)[32-33]。Lu等[34]試圖通過構(gòu)建spi1啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的spi1：FLT3-ITD-2A-EGFP和spi1：NPM1-Mut-PA兩個(gè)轉(zhuǎn)基因斑馬魚系來研究AML中這兩種突變的相互作用，F(xiàn)LT3-ITD突變體6個(gè)月時(shí)出現(xiàn)中度髓樣高纖維化，其中一部分魚在9個(gè)月時(shí)發(fā)展為白血病，NPMc+突變體具有正常的造血組成，然而，F(xiàn)LT3-ITD和NPMc+的雙突變體在6個(gè)月內(nèi)進(jìn)展為白血病，證明它們?cè)隍?qū)動(dòng)AML中具有協(xié)同作用。

c-cbl基因經(jīng)常在MPN和急性白血病中發(fā)生突變，并通過抑制生長(zhǎng)因子和細(xì)胞因子信號(hào)起到腫瘤抑制因子的作用。通過大規(guī)模的乙?；鶃喯趸逭T變篩選，Peng等[35]最終確定了一個(gè)在造血器官中人HSCs顯著增加的系，該系發(fā)生了c-cbl基因突變，被命名為L(zhǎng)DD731：CBLH382T；該突變?cè)?15 dpf時(shí)是純合致死的，并導(dǎo)致定向造血中骨髓/紅細(xì)胞譜系的擴(kuò)增；與在小鼠和人中觀察到的一致，在該系中FLT3對(duì)于骨髓/紅細(xì)胞譜系的擴(kuò)增是必需的，表明FLT3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)促進(jìn)人HSCs增殖并且受c-cbl調(diào)節(jié)。

cAMP應(yīng)答元件結(jié)合蛋白(cAMP response binding protein，CREB)是AML中另一種經(jīng)常上調(diào)的基因，然而，尚不清楚其單獨(dú)的過表達(dá)是否足以誘導(dǎo)白血病的發(fā)生。Tregnago等[36]用spi1啟動(dòng)子構(gòu)建了一個(gè)過表達(dá)CREB的斑馬魚模型，在該模型中，79%轉(zhuǎn)基因成魚的骨髓細(xì)胞生成中斷，66%進(jìn)展為單核細(xì)胞白血病(潛伏期9～14個(gè)月)，該模型顯示出與20個(gè)兒科AML有關(guān)的差異表達(dá)基因相同的轉(zhuǎn)錄特征，包括CCAAT-增強(qiáng)子結(jié)合蛋白δ。

為了研究干擾素調(diào)節(jié)因子8(interferon regulatory factor 8，IRF8)在骨髓瘤形成發(fā)病機(jī)制中的作用，Zhao等[37]通過功能性敲除IRF8創(chuàng)造了一個(gè)錯(cuò)義突變IRF8Δ57/Δ57，IRF8是骨髓譜系分化的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，與髓系白血病密切相關(guān)，IRF8突變體骨髓異常增生，移植后復(fù)發(fā)，并侵入骨髓，迅速形成MPN，骨髓異常增生是由增殖增加和細(xì)胞凋亡減少引起的；在IRF8突變體中，c-Mer原癌基因酪氨酸蛋白激酶的表達(dá)增加，從而導(dǎo)致胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶途徑的過度活化，最終導(dǎo)致骨髓瘤形成，并且敲低c-Mer原癌基因酪氨酸蛋白激酶可逆轉(zhuǎn)IRF8突變體的骨髓擴(kuò)張。這些研究提示，c-Mer原癌基因酪氨酸蛋白激酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程在IRF8介導(dǎo)的髓樣增殖和生存調(diào)節(jié)中是關(guān)鍵的。

基于大多數(shù)白血病癌基因?qū)υ煅δ墚a(chǎn)生的影響可早期檢測(cè)以及斑馬魚模型的一些固有優(yōu)勢(shì)，可以用白血病轉(zhuǎn)基因斑馬魚模型的胚胎開發(fā)藥物篩選。Yeh等[38]用熱激蛋白70啟動(dòng)子控制AML1-ETO融合癌基因的表達(dá)開發(fā)了一種藥篩模型，在這個(gè)模型中，當(dāng)發(fā)生熱休克后，胚胎中大量未成熟胚細(xì)胞累積，Runx1(Runt related transcription factor 1)和c-Myb表達(dá)消失，定向造血功能被破壞，表達(dá)gata1的紅系細(xì)胞消失，并最終導(dǎo)致髓系細(xì)胞異常擴(kuò)增。以上這些影響都是AML1-ETO抑制scl所導(dǎo)致的，并且可以通過scl過表達(dá)逆轉(zhuǎn)。表達(dá)AML1-ETO的斑馬魚胚胎的轉(zhuǎn)錄特征與人類AML的轉(zhuǎn)錄特征類似，根據(jù)斑馬魚胚胎造血受影響的情況和AML轉(zhuǎn)錄特征，該研究組進(jìn)行了可以逆轉(zhuǎn)AML1-ETO效應(yīng)的抑制劑的化學(xué)篩選[39]。

3.3人源白血病的斑馬魚異種移植模型 腫瘤移植是了解癌癥病理生理學(xué)的重要技術(shù)。鑒于其超強(qiáng)的繁殖力和獨(dú)特的成像優(yōu)勢(shì)，斑馬魚成為理想的移植模型。Pruvot等[40]是建立斑馬魚異種移植模型以探索不同抗白血病藥物功效和毒性的早期研究者，他們通過將不同的、從AML患者體內(nèi)分選出來的白血病細(xì)胞系(包括K562、Jurkat和NB4細(xì)胞)注射到48 hpf斑馬魚胚胎的卵黃囊中進(jìn)行了一系列實(shí)驗(yàn)，值得注意的是，用熒光標(biāo)記的腫瘤細(xì)胞在斑馬魚胚胎的循環(huán)系統(tǒng)中保留數(shù)天而不影響它們的發(fā)育，移植K562細(xì)胞的受體魚進(jìn)行甲磺酸伊馬替尼藥物處理后K562細(xì)胞數(shù)量減少。為了更好地量化藥物治療后白血病的緩解，Corkery等[41]開發(fā)了一種有效的方法來測(cè)量移植后斑馬魚胚胎中腫瘤細(xì)胞的數(shù)量變化，簡(jiǎn)而言之，在異種移植和藥物處理后，將胚胎酶促解離成單細(xì)胞懸浮液，然后，經(jīng)過核共染色后在顯微鏡下計(jì)數(shù)懸浮液中熒光細(xì)胞的數(shù)目，以確認(rèn)白血病細(xì)胞的計(jì)數(shù)。在白血病中，白血病干細(xì)胞的消融對(duì)于永久地根除白血病細(xì)胞群是必要的，然而，由于白血病細(xì)胞群中可用于動(dòng)物建模的白血病干細(xì)胞數(shù)量非常少，以及白血病干細(xì)胞的病理生理功能無法在培養(yǎng)條件下得到證實(shí)，白血病干細(xì)胞抑制劑開發(fā)困難。Zhang等[42]開發(fā)了一種新的基于表型的白血病干細(xì)胞斑馬魚異種移植檢測(cè)方法，從用熒光蛋白標(biāo)記的K562細(xì)胞中純化醛脫氫酶陽(yáng)性細(xì)胞，然后將其移植到受精后48 h的斑馬魚胚胎中，移植后24 h，用不同治療藥物處理受體斑馬魚，通過高含量細(xì)胞分析成像判斷癌細(xì)胞增殖和細(xì)胞遷移，在測(cè)試的藥物中，除Imatinib和Dasatinib外，所有藥物均選擇性抑制白血病干細(xì)胞異種移植斑馬魚中的醛脫氫酶陽(yáng)性細(xì)胞增殖和腫瘤細(xì)胞遷移?？傊陨线@些研究提供了令人信服的證據(jù)，即在斑馬魚胚胎中進(jìn)行血液腫瘤細(xì)胞移植可能是藥物研發(fā)的有用工具，也是定義患者特異性療法的預(yù)測(cè)平臺(tái)。

4 小 結(jié)

自2003年第一個(gè)斑馬魚T-ALL模型誕生[19]以來，斑馬魚對(duì)白血病的研究做出了巨大貢獻(xiàn)。目前已經(jīng)構(gòu)建了多種不同的轉(zhuǎn)基因斑馬魚來模擬各種人類造血系統(tǒng)惡性腫瘤疾病。研究人員利用斑馬魚進(jìn)行了小分子藥物高通量篩選，并鑒定了多種具有抗白血病活性的藥物，包括Nimesulide、lenaldekar和Perphenazine[39，43-44]。用斑馬魚模型進(jìn)行疾病研究的進(jìn)展消除了之前關(guān)于它們?cè)诎┌Y研究中實(shí)用性的初步懷疑。展望未來，可以使用斑馬魚進(jìn)行更多的研究。雖然目前能成功地用斑馬魚胚胎進(jìn)行小分子藥物篩選，但篩選過程仍然受限于需將胚胎手動(dòng)分配到各個(gè)組以及異種移植模型時(shí)需手動(dòng)進(jìn)行胚胎注射。未來這些程序的自動(dòng)化和標(biāo)準(zhǔn)化將實(shí)現(xiàn)真正的高通量小分子篩選，最終促進(jìn)個(gè)性化醫(yī)療。