大小鼠脾虛及濕盛模型的研究*

★ 張雅莉 吉燕華 姜瓔娜 聶鵬 曾治君*（江西中醫(yī)藥大學/江西省中醫(yī)病因生物學重點實驗室 南昌 330004）

由于環(huán)境氣候的變化和肥甘厚膩食物的過度攝取，導致了脾虛濕盛證患者越來越多。該證出現(xiàn)的腹瀉腹脹、食少納呆、面色萎黃等癥狀也極大的影響了人們的正常生活。所以對于研究出治療脾虛濕盛證的藥物具有很大的臨床意義。而模型的構(gòu)建則是藥物研制的至關(guān)重要的一步。比如為尋找相關(guān)中草藥以解決表現(xiàn)為平素面垢油光、易生痤瘡粉刺、身重困倦的濕熱證。如，董銀卯等［1］在《祛濕清熱方對濕熱模型的作用》中采取多因素致濕熱模型，對中醫(yī)驗方—祛濕清熱方進行了藥理作用評價，取得了不錯效果。

在相關(guān)文獻中，我們發(fā)現(xiàn)了大量脾虛模型，或濕盛模型的單獨構(gòu)建，而現(xiàn)實中脾虛多由濕盛造成，濕也易致脾虛，所以脾虛和濕盛往往同時存在。所以本文旨在同時研究脾虛和濕盛，及如何構(gòu)建脾虛濕盛大小鼠模型。

從20世紀70年代，由北京師范大學首次報道了大黃脾虛動物模型開始［2］，到1982年前中國中醫(yī)研究院基礎(chǔ)理論研究所應(yīng)用大黃致瀉來造脾虛大鼠模型［3］，前后經(jīng)歷了十多年，可見構(gòu)建一個符合臨床特點的動物模型的難度非同一般。然而，近年來，饑飽失常、苦寒瀉下、勞倦傷脾、甘肥過度等各類脾氣虛證模型相繼問世。由于大小鼠和人的種屬差異，且動物急性實驗不符合虛證臨床，也不能排除藥物的中毒反應(yīng)和峻瀉導致生化乏源，致使難以說明是脾氣本身的“虛”。所以脾虛濕盛證大小鼠模型的構(gòu)建以解決以上問題為前提，來構(gòu)建更符合臨床的脾虛動物模型和以藥物的研制提供基礎(chǔ)為目標。

1 大小鼠脾虛模型的構(gòu)建

脾虛［4］包括脾氣虛和脾陽虛，脾氣虛多由于飲食不節(jié)、勞累或久病所致。而脾陽虛多由于脾氣虛加重，出現(xiàn)明顯的寒證所致，或是過用寒涼藥物及攻下太過而引起的以泄瀉、腹痛為主要癥狀的病證。臨床上脾虛患者可因久服耗氣破氣的中藥導致，或過食肥甘厚味、寒涼之品，或腫瘤患者的放療化療等造成。

1.1 耗氣破氣法陳小野等［5］用厚樸、枳實、大黃按3∶3∶2比例常規(guī)制成100%煎劑隔日灌喂中藥4mL/只（雄鼠）或3mL/只（雌鼠），隔日喂食。造模26周以期達到造成慢性脾虛大鼠模型。與對照組相比，實驗結(jié)果為脾虛證組大鼠的病理改變以慢性炎癥及各器官的退行性病變?yōu)橹鳌?/p>

1.2 過勞加飲食失節(jié)法模擬人類由于過勞耗氣或飲食失節(jié)導致脾虛。謝仰洲等［6］選用Wistar雄性大鼠60只，體重在120～150g，分為實驗組（40只）、對照組（20只）。隔天在跑步機上連續(xù)跑步30min，豬油與白菜隔日交叉喂養(yǎng)，自由進水。造模后模型大鼠出現(xiàn)體重下降、體溫低、毛疏松色無光澤等癥狀，待個別大鼠死亡，判定為造模成功。

1.3 秋水仙堿法秋水仙堿為治療腫瘤的化療藥物，臨床多見藥后出現(xiàn)吸收不良綜合征，與中醫(yī)的脾氣虛證類似。所以劉士敬等［7］用秋水仙堿水溶液喂飼大鼠來構(gòu)建脾氣虛模型。結(jié)果發(fā)現(xiàn)模型組大鼠出現(xiàn)食量減少、體重減輕、大便溏泄等癥狀。且模型組血清胃泌素、D-木糖濃度低于對照組大鼠，而血清肌紅蛋白、肌酸磷酸激酶高于對照組，模型大鼠血小板與纖維蛋白原含量也均有不同程度的下降。

1.4 X射線照射法用X線照射大鼠腹部導致脾虛，模擬腫瘤病人放療化療后的脾虛。劉士敬等［8］選用日產(chǎn)HG7001型X線遠距離照射機，在密閉盒中對每只大鼠進行腹外照射，確定以大鼠的食欲不振、消瘦、大便溏泄等脾虛癥狀為主要診斷指標。以公認的代表脾氣虛的病理指標為輔助，如血清胃泌素、D-木糖濃度；胃、小腸粘膜的組織形態(tài)觀察；血清堿性磷酸激酶及同工酶、肌紅蛋白、血小板指數(shù)、血清纖維蛋白原等。

1.5 利血平法利血平通過耗竭兒茶酚胺，使動物出現(xiàn)脾虛患者常見的交感神經(jīng)功能低下、副交感神經(jīng)功能亢進等癥狀，且通過利血平能使動物長時間脾虛，有利于健脾中藥緩慢發(fā)揮作用［9-10］。周英［11］用12只80日齡，體重220～250g的SD大鼠作為脾虛組。給大鼠肌注利血平0.2mg/（kg·d），連續(xù)14天，發(fā)現(xiàn)脾虛組大鼠造模第6天出現(xiàn)飲食減少、大便溏、蜷縮或肛門污穢等脾虛證候，且造模結(jié)束時并見形體消瘦、身軟乏力等表現(xiàn)。

1.6 苦寒瀉下加勞倦法曲長江等［12］選用SPF級雄性KM小鼠110只。將其隨機編號并且稱重，然后將其分為6組，A組：大黃瀉下造模組；B組：番瀉葉瀉下造模組；C組：勞倦過度造模組；AC組：大黃瀉下加勞倦過度造模組；BC組：番瀉葉瀉下加勞倦過度造模組；O組：空白對照組。且選擇谷雨時節(jié)造模，持續(xù)時間為8天。A組在上午用大黃灌胃；B組在上午灌胃番瀉葉水浸液；C組在下午強迫大鼠游泳至耐力極限；AC組上午灌胃大黃，下午游泳；BC組上午灌胃番瀉葉水浸液，下午游泳；O組不施加任何的處理因素。旨在探討單因素和復合因素對于造模的影響。結(jié)果都出現(xiàn)了肛溫降低和體重下降的結(jié)果。

2 濕盛大小鼠模型的建立

濕［13］可分為外濕和內(nèi)濕。外濕可由起居環(huán)境潮濕，或冒雨涉水感受濕邪等導致。內(nèi)濕則由于過食肥甘，恣食生冷所致，因為脾為太陰濕土，喜燥惡濕，所以過食肥甘厚味易傷脾胃，致使脾失健運不能為胃行其津液，或者素體肥胖，喜靜少動，致使氣機不利，津液輸布障礙，聚結(jié)所致。

2.1 肥甘厚膩飲食法吳賽等［14］用飲食誘導痰濕壅盛證高血壓大鼠模型。用高脂飼料喂養(yǎng)后選出體重、血壓均超過對照組25%的大鼠歸為模型組大鼠。模型大鼠呈現(xiàn)體重增加、毛色黯淡、嗜睡等典型的濕盛證候，且用瘦素作為客觀指標來評價痰濕壅盛證大鼠模型。

2.2 “飲食+環(huán)境+生物致病因子”法湯朝暉等［15］采用“飲食+環(huán)境+生物致病因子”復合因素造濕盛小鼠模型，也就是肥甘厚膩的食物、潮濕的環(huán)境和病毒細菌致病因子聯(lián)合造模。實驗分為3組，正常組：正常飼料、自由飲水及自然環(huán)境飼養(yǎng)15天。病毒組：小鼠先在肥甘厚膩飲食、自由飲水和自然環(huán)境中飼養(yǎng)，至第10天上午予以腹腔注射MHV-A59 0.5mL，然后分別在病毒感染后第1天、第3天、第5天上午（9時～12時）放入氣候模擬艙［溫度（32±0.5）℃，濕度（60±5）%］；其余時間在自然環(huán)境、肥甘飼料及自由飲水中飼養(yǎng)。腸菌組：小鼠先給予肥甘飲食、自由飲水和在自然環(huán)境飼養(yǎng)，然后至第10天上午8時予以大腸桿菌灌胃1次，第12天上午8時重復感染一次。入艙暴露及平時喂養(yǎng)同病毒組。所得結(jié)論是“內(nèi)濕”的形成可能主要與肥甘飲食、濕熱外環(huán)境相關(guān)，而MHV-A59作為生物致病因子所致的濕熱證模型炎癥反應(yīng)更加劇烈。

3 脾虛濕盛證大小鼠模型的建立

《素問·至真要大論》載：“諸濕腫滿，皆屬于脾?！闭f明脾的運化失職是濕濁內(nèi)生的關(guān)鍵。而濕為陰邪，易損傷陽氣，且脾喜燥惡濕，濕邪易困脾陽，阻滯氣機，導致脾的運化功能失職。所以脾虛易致濕濁內(nèi)生，而濕邪反過來又易引起脾虛［4，13］。

因為濕盛與脾虛的相互作用，所以脾虛濕盛大小鼠模型的建立，容易于脾虛模型、濕盛模型的單個建立。脾虛大小鼠模型的構(gòu)建可以用耗氣破氣加飲食失節(jié)法、過勞加飲食失節(jié)法、苦寒瀉下法等方法。濕盛模型的構(gòu)建可以用肥甘厚膩飲食法和“飲食+環(huán)境+生物致病因子”法。而脾虛濕盛模型可以先通過給予肥甘厚膩飼料、或潮濕環(huán)境導致濕盛實證，然后在大小鼠存在內(nèi)濕的情況下，再通過上述的導致脾虛的方法，以期造成脾虛濕盛模型。也可以通過上述導致脾虛的方法致虛，再給予一個不節(jié)飲食或潮濕環(huán)境，來造脾虛濕盛模型。

4 討論

陳小野等用苦寒瀉下藥來導致大鼠脾虛，有可能為瀉下太過，導致食物來不及吸收，生化乏源而出現(xiàn)脾虛類似癥狀，而不是脾本身的虛，以至于不能運化水谷精微。

謝仰洲等則通過強制大鼠跑步，使其勞倦，勞則氣耗，形體勞倦則氣傷，就如張景岳所云：“脾胃之傷于外者，唯勞倦最能傷脾?！鼻矣冒撞伺c豬油交替喂飼，飲食失調(diào)容易導致脾虛。但是現(xiàn)今人類的勞倦多由腦力勞動，熬夜、睡眠不足所導致［16］，而不是體力活動所導致的“勞”。且飲食失調(diào)也多為過食冰冷寒涼食物，張景岳又云：“脾胃屬土，惟火能生，故其本性則常惡寒喜暖，使非真有邪火，則寒涼之物最宜慎用”。所以為了更加符合臨床，可以通過干擾睡眠和灌胃冰水來達到過勞加飲食失節(jié)而造脾虛大小鼠模型。

秋水仙堿法、X射線照射法、利血平法等造模方法也都可以使大小鼠出現(xiàn)脾虛癥狀。而肥甘厚味飲食加潮濕環(huán)境能夠?qū)е麓笮∈鬂袷?，但是脾虛和濕盛往往同時存在，脾能燥濕，且脾屬中焦，為水液運行的通道，所以脾虛能使水無去處而停聚于內(nèi)。

5 結(jié)論

瀉下藥加勞倦法制脾虛大小鼠模型具有用藥劑量小，造模時間長和造模因素更接近于臨床脾氣虛證的病因和久病致虛的特點，且易于復制，得到了廣泛應(yīng)用。但是，峻瀉易導致生化乏源，難以說明是脾氣本身的虛，還是元氣的虛。

濕盛模型以“飲食+環(huán)境+生物致病因子”法來造濕盛大小鼠模型，無論從實驗指標、造模動物的發(fā)熱、還是神倦等觀察癥狀體征，最為接近中醫(yī)濕熱證型。

所以脾虛濕盛大小鼠模型的構(gòu)建應(yīng)該合理安排致虛或致濕飼料的喂養(yǎng)，及有關(guān)藥物的注射，防止模型過多的意外死亡。臨床上脾虛濕盛證一般是慢性病，所以制作模型的過程應(yīng)該要更貼近實際情況。