祛風(fēng)合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

★ 李前瓊 張紅波 張靜 高長(zhǎng)青*（.濟(jì)南市第二食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心 濟(jì)南 50000；.濟(jì)南市第二婦幼保健計(jì)劃生育服務(wù)中心 濟(jì)南 50000）

祛風(fēng)合劑為萊蕪市皮膚病防治所的臨床驗(yàn)方，為該院醫(yī)院制劑。祛風(fēng)合劑主要有荊芥、防風(fēng)、黃芩、蛇床子、連翹等11味中藥組成，具有祛風(fēng)清熱、利濕解毒功效，用于丘疹狀濕疹、瘙癢性扁平疣、傳染性軟疣、泛發(fā)性神經(jīng)性皮炎、接觸性皮炎等的治療。該制劑僅有性狀及裝量、相對(duì)密度、pH等合劑通則檢驗(yàn)，難以達(dá)到有效控制產(chǎn)品質(zhì)量的目的。為更好地控制其質(zhì)量，本研究對(duì)制劑中防風(fēng)、連翹及蛇床子建立了薄層色譜鑒別方法，并采用高效液相色譜法對(duì)制劑中黃芩所含黃芩苷進(jìn)行了含量測(cè)定，能較為全面地控制制劑質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器島津LC-20AT高效液相色譜儀，紫外檢測(cè)器；梅特勒XSE105DU電子分析天平；GoodSee-20E薄層成像系統(tǒng)（上海科哲生化科技有限公司）；KQ-250DE數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；Milli-Q integral 3（美國(guó)Millipore）。

1.2 試藥連翹對(duì)照藥材（批號(hào)120908-201216），防風(fēng)對(duì)照藥材（批號(hào)120947-201810），蛇床子對(duì)照藥材（批號(hào)121030-201507），蛇床子素對(duì)照品（批號(hào)110822-201710），黃芩苷對(duì)照品（批號(hào)110715-201821），均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；祛風(fēng)合劑（規(guī)格：100mL/瓶，萊蕪市皮膚病防治所提供，批號(hào)分別為20181217、20181219、20181221）；缺連翹、防風(fēng)、蛇床子及黃芩的陰性對(duì)照品分別按處方工藝自制；甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 防風(fēng)薄層鑒別取祛風(fēng)合劑30mL，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20mL，再用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次30mL，正丁醇液合并蒸干，加甲醇2mL溶解殘?jiān)?，制成供試品溶液。另取缺防風(fēng)的處方按相同工藝制備陰性對(duì)照溶液。再稱取防風(fēng)對(duì)照藥材1.0g置錐形瓶中，加入20mL丙酮超聲15min，濾過(guò)，濾液蒸干，加甲醇2mL溶解殘?jiān)?，制成?duì)照藥材溶液。分別吸取上述三種溶液5μL，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇（4∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱2～3min，紫外光（365nm）檢視，供試品與對(duì)照藥材在相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。色譜圖見(jiàn)圖1。

2.1.2 連翹薄層鑒別取祛風(fēng)合劑20mL，加入20mL石油醚（30～60℃）振搖提取2次，傾去石油醚液，蒸干水液，加甲醇2mL溶解殘?jiān)?，制成供試品溶液。另取缺連翹的處方按相同工藝制備陰性對(duì)照溶液。再稱取連翹對(duì)照藥材0.5g置錐形瓶中，加入20mL甲醇超聲15min，過(guò)濾，濾液蒸干，加甲醇2mL溶解殘?jiān)?，制成?duì)照藥材溶液。分別吸取上述三種溶液5μL，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇（5∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品與對(duì)照藥材在相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。色譜圖見(jiàn)圖2。

圖1 防風(fēng)薄層色譜圖

圖2 連翹薄層色譜圖

2.1.3 蛇床子薄層鑒別取祛風(fēng)合劑20mL，加氯仿萃取2次，每次20mL，合并氯仿液，蒸干，加2mL甲醇溶解殘?jiān)瞥晒┰嚻啡芤?。另取缺蛇床子的處方按相同工藝制備陰性?duì)照溶液。再稱取蛇床子對(duì)照藥材0.5g置錐形瓶中，加入甲醇30mL超聲10min，濾過(guò)，濾液濃縮至約2mL，作為對(duì)照藥材溶液。再取蛇床子素對(duì)照品，加甲醇制成每1mL含1mg的對(duì)照品溶液。分別吸取上述四種溶液5μL，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-正己烷（6∶6∶5）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，紫外光（365nm）檢視。供試品與對(duì)照藥材和對(duì)照品在相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。色譜圖見(jiàn)圖3。

圖3 蛇床子薄層色譜圖

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件［1］色譜柱：Thermo ODS HYPERSIL C18柱（150×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-水-磷酸（45∶55∶0.2）；柱溫：35℃；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm，理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算不少于2500。

2.2.2 溶液制備精密稱取黃芩苷對(duì)照品0.0118g，置100mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，即得對(duì)照品溶液；精密吸取祛風(fēng)合劑1mL，置于25mL容量瓶中，定容至刻度，即得供試品溶液；精密吸取缺黃芩的陰性樣品溶液1mL，置于25mL容量瓶中，定容至刻度，即得陰性對(duì)照溶液。

2.2.3 專屬性試驗(yàn)精密吸取2.2.1項(xiàng)下的三種溶液各10μL，按擬訂的色譜條件進(jìn)樣。結(jié)果供試品溶液呈現(xiàn)和對(duì)照品溶液保留時(shí)間相一致的色譜峰，陰性對(duì)照溶液未出現(xiàn)與對(duì)照品溶液保留時(shí)間相一致的色譜峰，表明制劑中其他成分對(duì)黃芩苷的測(cè)定無(wú)干擾，方法專屬性好。見(jiàn)圖4。

圖4 專屬性試驗(yàn)液相色譜圖

2.2.4 線性關(guān)系考察分別精密吸取濃度為0.1180mg/mL的黃芩苷對(duì)照品溶液1，5，10，15，20μL進(jìn)樣，記錄峰面積。以黃芩苷對(duì)照品的進(jìn)樣質(zhì)量為橫坐標(biāo)（X，μg），峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y= 1977419.90X-1735047.50，相關(guān)系數(shù)r=0.9991（n=5）。試驗(yàn)結(jié)果表明，黃芩苷進(jìn)樣量在0.118～2.36μg之間，進(jìn)樣量與峰面積線性關(guān)系良好。

2.2.5 精密度試驗(yàn)精密吸取黃芩苷對(duì)照品溶液（0.1180mg/mL）5μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。峰面積的RSD為0.49%，說(shuō)明儀器精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)取供試品溶液（批號(hào)20181217），在0，2，4，8，12，24h時(shí)各進(jìn)樣一次，每次10μL，記錄峰面積。峰面積的RSD為1.70%，表明24h內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn)取供試品（批號(hào)：20181217），按2.2.2項(xiàng)下供試品溶液的制備方法平行制備6份，分別進(jìn)樣10μL，按擬訂的色譜條件測(cè)定。結(jié)果6份黃芩苷的含量分別為0.5521，0.5458，0.5586，0.5518，0.5549，0.5610mg/mL，平均含量為0.5540mg/mL，RSD為0.98%，表明該方法在同一條件下重復(fù)性良好。

2.2.8 加樣回收試驗(yàn)精密量取已知含量的供試品溶液6份（批號(hào)：20181217，黃芩苷含量為0.5525mg/mL）各1mL，分別精密加入對(duì)照品溶液4.5mL，混勻后依法測(cè)定含量，計(jì)算回收率為99.42%，RSD為1.07%。試驗(yàn)結(jié)果表明，測(cè)定方法的回收率良好。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率考察結(jié)果（n=6）

2.2.9 樣品含量測(cè)定取3批祛風(fēng)合劑，按2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，各精密吸取10μL進(jìn)樣，按擬定的色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表2。典及相關(guān)文獻(xiàn)［2-4］對(duì)黃芩苷的提取采用50%～100%醇類溶劑提取，故本研究采用甲醇直接稀釋制備供試品溶液。還考察了不同比例的甲醇-水流動(dòng)相，發(fā)現(xiàn)黃芩苷拖尾較為嚴(yán)重，加入磷酸可以顯著改善拖尾情況，分離度較好，陰性對(duì)照無(wú)干擾。

表2 黃芩苷含量測(cè)定結(jié)果（n=2） mg/mL

本研究確立了祛風(fēng)合劑中防風(fēng)、連翹、蛇床子的薄層色譜鑒別方法及黃芩中黃芩苷含量的液相色譜測(cè)定方法。試驗(yàn)結(jié)果表明，方法重復(fù)性好、專屬性強(qiáng)、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于祛風(fēng)合劑的質(zhì)量控制。

3 討論

參考2015年版《中國(guó)藥典》（一部）對(duì)該制劑中的主要藥材荊芥、防風(fēng)、連翹、蛇床子等進(jìn)行了薄層色譜鑒別，其中防風(fēng)、連翹、蛇床子的薄層鑒別斑點(diǎn)清晰，陰性對(duì)照無(wú)干擾，而荊芥陰性對(duì)照有干擾，故未列入正文方法。

黃芩屬清熱燥濕藥，具有清熱燥濕、瀉火解毒等功效；用于濕熱、熱毒諸證治療，為祛風(fēng)合劑的主藥。對(duì)其指標(biāo)成分黃芩苷進(jìn)行了含量測(cè)定研究，藥