檢測(cè)干擾導(dǎo)致2例CA19-9假性升高的處理及分析*

秦雪君，李揚(yáng)宇，林伯熹，林 青

福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建福州 350001

糖類抗原(CA)19-9是唾液酸化Ⅱ型乳酸巖藻糖，是腫瘤細(xì)胞神經(jīng)節(jié)苷脂。胚胎期分布于胎兒的胰腺、肝膽和腸道等組織，在成人的胰腺、膽道、胃腸道、子宮內(nèi)膜等部位也有少量存在[1]。胰腺癌、肝膽管癌、胃癌、肝癌、直腸癌及乳腺癌患者血液中均可升高，胰腺炎及良性胃腸道疾病患者中也可見(jiàn)升高[2]。CA19-9升高對(duì)于早期發(fā)現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移具有重要的臨床意義。目前，CA19-9常用的檢測(cè)方法為化學(xué)發(fā)光免疫法，該法具有靈敏度高、特異度好、速度快，且不用預(yù)處理的優(yōu)點(diǎn)。常用的檢測(cè)系統(tǒng)有貝克曼DXI800、羅氏E601、雅培I2000SR等。但是該方法的原理是抗原抗體反應(yīng)。在反應(yīng)過(guò)程中，可能會(huì)受到藥物、異嗜性抗體、人抗動(dòng)物抗體(HAAA)、自身抗體、類風(fēng)濕因子等因素的干擾而導(dǎo)致假陽(yáng)性或假陰性的結(jié)果，從而影響臨床診斷及治療。本文通過(guò)分析2例CA19-9異常升高患者的臨床資料，及其可能導(dǎo)致升高的原因，現(xiàn)將診治過(guò)程報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1臨床資料 病例1，女性，56歲，2019年3月21日以“子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤術(shù)后3年余”為主訴入院。螺旋CT平掃+重建5 mm對(duì)肺部進(jìn)行掃描，顯示：(1)右肺中、下葉結(jié)節(jié)；(2)右肺中葉少許條索灶，考慮慢性炎癥；(3)左乳小鈣化灶。常規(guī)心電圖檢查結(jié)果顯示：竇性心律；心電圖未見(jiàn)明顯異常。胸部正側(cè)位片結(jié)果顯示：心肺未見(jiàn)明顯異常。盆腔MR平掃+增強(qiáng)結(jié)果顯示：子宮惡性腫瘤術(shù)后改變，盆腔未見(jiàn)明顯轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)改變。全腹彩超結(jié)果顯示：輕度脂肪肝；膽囊多發(fā)息肉樣病變；子宮切除術(shù)后。臨床醫(yī)生報(bào)告入院檢查CA19-9水平為444.29 IU/mL，結(jié)合影像學(xué)資料及以往檢查結(jié)果，差異較大，考慮存在干擾因素。

病例2，女性，47歲，2019年5月6日前因“發(fā)現(xiàn)右乳腫物1月”入院，于5月16日行“右乳區(qū)段切除術(shù)+清創(chuàng)縫合術(shù)”，入院完善檢查，乳腺彩超提示雙側(cè)乳腺增生，右側(cè)乳腺片狀低回聲區(qū)，雙側(cè)乳腺導(dǎo)管擴(kuò)張伴導(dǎo)管內(nèi)透聲差。電子胃鏡顯示慢性非萎縮性胃炎伴糜爛。2019年5月15日行全腹部CT直接增強(qiáng)+肺部高分辨率螺旋CT平掃，結(jié)果顯示：(1)右肺上葉、下葉結(jié)節(jié)；(2)左肺上葉少許慢性炎癥；(3)右側(cè)乳腺結(jié)節(jié)及鈣化灶；(4)右側(cè)腋窩淋巴結(jié)；(5)雙腎囊腫。CA19-9水平檢測(cè)結(jié)果為567.40 IU/mL。2019年5月16日在全身麻醉下行“右乳區(qū)段切除術(shù)+清創(chuàng)縫合術(shù)”。手術(shù)順利，生命體征平穩(wěn)。手術(shù)標(biāo)本檢查后診斷為肉芽腫性小葉性乳腺炎、導(dǎo)管囊性擴(kuò)張伴慢性炎癥、局灶導(dǎo)管內(nèi)乳頭狀瘤。免疫組織化學(xué)法結(jié)果顯示，CK-p(-)、CD68-kp1(-)、波形蛋白(+)、平滑肌肌動(dòng)蛋白(-)、Ki-67(-)?；颊咧委熐闆r良好后出院。2019年6月5日患者以“反復(fù)口干、多飲、多尿1個(gè)月”入院，甲狀腺功能3項(xiàng)+抗甲狀腺過(guò)氧化物酶抗體結(jié)果顯示為正常。腎功能檢查、糖尿病自身抗體測(cè)定、腦鈉肽檢測(cè)結(jié)果均正常。檢驗(yàn)人員在結(jié)果審核過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，臨床診斷“糖尿病”與CA19-9水平為364.40 IU/mL單項(xiàng)升高的結(jié)果不符。

1.2方法

1.2.1稀釋處理標(biāo)本 在雅培I2000SR上采用試劑配套稀釋液進(jìn)行檢測(cè)，選擇10倍稀釋比例檢測(cè)血清結(jié)果。偏差(%)=(稀釋后結(jié)果-原值)/原值×100%。

1.2.2異嗜性抗體阻斷劑(HBR)處理標(biāo)本 HBR(Scantibodies公司)含有一種特殊成分的阻斷試劑，可對(duì)異嗜性抗體進(jìn)行滅活。一旦特異性黏合劑與異嗜性抗體結(jié)合，該抗體則不再能造成免疫干擾。HBR為凍干顆粒的形式，裝在試管的底部，每管中含有足夠的試劑，能滅活500 μL標(biāo)本中的異嗜性抗體。500 μL患者血清與HBR室溫混合孵育1 h后，置雅培I2000SR檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)CA19-9。偏差(%)=(HBT阻斷后結(jié)果-原值)/原值×100%。

1.2.3更換檢測(cè)系統(tǒng) 病例1采用本實(shí)驗(yàn)室貝克曼DXI800全自動(dòng)免疫分析儀檢測(cè)CA19-9，檢測(cè)原理為雙抗體夾心微粒子化學(xué)發(fā)光法；病例2采用外院實(shí)驗(yàn)室羅氏E601檢測(cè)CA19-9，檢測(cè)原理為雙抗體夾心電化學(xué)發(fā)光法。偏差(%)=(更換檢測(cè)系統(tǒng)結(jié)果-原值)/原值×100%。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用Microsoft Excel2010對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

2 結(jié) 果

2.1血清稀釋后CA19-9水平與原值的比較 病例1血清經(jīng)儀器10倍稀釋后CA19-9水平檢測(cè)結(jié)果為229.51 IU/mL，偏差為-48.34%；病例2血清經(jīng)儀器10倍稀釋后CA19-9水平檢測(cè)結(jié)果為124.71 IU/mL，偏差為-65.78%。稀釋結(jié)果與稀釋倍數(shù)不成線性。

2.2血清經(jīng)HBR阻斷處理后CA19-9水平與原值的比較 病例1血清經(jīng)HBR阻斷處理后CA19-9水平檢測(cè)結(jié)果為45.57 IU/mL，偏差為-89.74%；病例2血清經(jīng)HBR阻斷處理后CA19-9水平檢測(cè)結(jié)果為36.92 IU/mL，偏差為-89.87%。

2.3更換檢測(cè)系統(tǒng)后兩例患者血清CA19-9水平與原值的比較 病例1血清更換為貝克曼DXI800進(jìn)行檢測(cè)后，CA19-9水平為54.00 IU/mL(參考區(qū)間為0～37 IU/mL)，偏差為-87.84%；病例2血清更換為羅氏E601進(jìn)行檢測(cè)，CA19-9水平為36.92 IU/mL(參考區(qū)間為0～39 IU/mL)，偏差為-89.87%。

3 討 論

CA19-9的檢測(cè)是基于抗原、抗體結(jié)合的免疫法。免疫法的特異性與抗體的特性密切相關(guān)，同時(shí)也受到標(biāo)本中抗原及其基質(zhì)、試劑成分和檢測(cè)方法的影響。本研究中，臨床醫(yī)師發(fā)現(xiàn)病例1及病例2的CA19-9檢測(cè)結(jié)果與以往檢測(cè)結(jié)果差異較大，與臨床表現(xiàn)不符，為證實(shí)結(jié)果是否可信，筆者進(jìn)行了一系列的排除試驗(yàn)。兩例患者CA19-9經(jīng)過(guò)稀釋后，稀釋結(jié)果與稀釋倍數(shù)不成線性，考慮標(biāo)本中可能存在干擾物質(zhì)。為進(jìn)一步查找可能的干擾物質(zhì)，分別采用HBR阻斷后及更換檢測(cè)系統(tǒng)，檢測(cè)結(jié)果與雅培I2000SR檢測(cè)系統(tǒng)比較有明顯的差異。說(shuō)明雅培I2000SR檢測(cè)系統(tǒng)的結(jié)果可能受到異嗜性抗體的干擾。HBR成分為抗小鼠單克隆抗體免疫球蛋白，能夠特異性的結(jié)合鼠源性的抗體，產(chǎn)生位阻效應(yīng)，消除干擾。查閱各個(gè)系統(tǒng)的檢測(cè)原理，雅培檢測(cè)系統(tǒng)采用雙抗體夾心法，所用的捕獲抗體和標(biāo)記抗體均為小鼠單克隆抗體。貝克曼DXI800檢測(cè)系統(tǒng)所采用的捕獲抗體為多克隆山羊抗菌藥物抗體，小鼠單克隆-抗菌藥物抗體復(fù)合物，標(biāo)記抗體為小鼠單克隆抗體。羅氏E601檢測(cè)系統(tǒng)采用的是雙抗體夾心法檢測(cè)CA19-9，所采用的捕獲抗體及標(biāo)記抗體均為小鼠單克隆抗體。因此，推測(cè)兩例患者血清中出現(xiàn)的異嗜性抗體可能是人抗小鼠抗體，它可能代替待測(cè)抗原物質(zhì)，同時(shí)結(jié)合捕獲抗體和標(biāo)記抗體，使結(jié)果出現(xiàn)假性升高。而由于不同品牌的試劑所使用的抗體結(jié)合位點(diǎn)不同，同一種異嗜性抗體由于對(duì)不同檢測(cè)試劑中各抗體組合的反應(yīng)可能會(huì)有所不同，因此，可能出現(xiàn)雅培I2000SR檢測(cè)系統(tǒng)受影響，而貝克曼DXI800和羅氏E601檢測(cè)結(jié)果未受影響。兩例患者均為腫瘤術(shù)后患者，病例1為子宮惡性腫瘤術(shù)后10年的患者，術(shù)后隨訪復(fù)查CA19-9，否認(rèn)近期動(dòng)物接觸史，治療用藥不詳。病例2為乳腺炎術(shù)后1個(gè)月的患者，因糖尿病入院治療，否認(rèn)近期動(dòng)物接觸史，治療用藥不詳，因此異嗜性抗體來(lái)源不詳。

異嗜性抗體是由已知或未知的抗原物質(zhì)刺激人體所產(chǎn)生的一類能與多個(gè)物種的免疫球蛋白發(fā)生相對(duì)弱結(jié)合的多重特異性免疫球蛋白[1-2]。其能夠通過(guò)非特異地結(jié)合捕獲抗體或標(biāo)記抗體，影響檢測(cè)，進(jìn)而導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果與臨床表現(xiàn)不符。異嗜性抗體包括一些天然抗體和自身抗體，可能來(lái)源于污染的食物、與動(dòng)物的接觸或動(dòng)物血清的接觸[3-4]。主要通過(guò)非競(jìng)爭(zhēng)機(jī)制干擾免疫檢測(cè)，通過(guò)與試劑中的抗體結(jié)合，導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)假陽(yáng)性[5]。臨床中異嗜性抗體的檢出率很高，WARD等[6]在40%的隨機(jī)人群中檢出異嗜性抗體，但大多數(shù)異嗜性抗體并不會(huì)對(duì)免疫檢測(cè)帶來(lái)干擾。另外，自然產(chǎn)生或自身免疫源性的類風(fēng)濕因子(RF)也是免疫檢測(cè)過(guò)程中的干擾因素之一。RF是患者體內(nèi)出現(xiàn)的針對(duì)變性的IgG或內(nèi)源性IgM產(chǎn)生的抗體，可由細(xì)菌或病毒感染引起，可模擬異嗜性抗體的作用而結(jié)合捕獲抗體和標(biāo)記抗體使結(jié)果出現(xiàn)假性升高[7-9]。

近年來(lái)，部分文獻(xiàn)報(bào)道了異嗜性抗體對(duì)免疫檢測(cè)的干擾，包括心肌標(biāo)志物[1,10-12]、甲狀腺激素[13-14]、腫瘤標(biāo)志物[15-16]等，該類干擾易導(dǎo)致誤診，使患者接受不必要的治療。本研究中兩例患者均為腫瘤術(shù)后患者，CA19-9結(jié)果如超過(guò)參考區(qū)間，臨床醫(yī)師會(huì)考慮患者是否出現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移，從而進(jìn)行治療，而處于參考區(qū)間內(nèi)，醫(yī)生會(huì)選擇繼續(xù)隨訪觀察。不同的結(jié)果會(huì)有截然不同的治療方案，因此，對(duì)于異常檢驗(yàn)結(jié)果應(yīng)提高警惕。目前大多數(shù)試劑盒說(shuō)明書(shū)都對(duì)檢驗(yàn)方法的局限性進(jìn)行了說(shuō)明，但也未能徹底消除異嗜性抗體的干擾。克服此類干擾的處理方法除了文中的HBT阻斷法，還有蛋白G法、PEG法、熱和酸處理法[15]，各有優(yōu)缺點(diǎn)，消除效果取決于免疫分析原理及標(biāo)本中異嗜性抗體的來(lái)源及成分?；谝陨戏治觯谂R床檢驗(yàn)免疫檢測(cè)工作中，一旦出現(xiàn)檢驗(yàn)結(jié)果與臨床癥狀不符的情況，應(yīng)當(dāng)提高警惕，當(dāng)有以下情況發(fā)生時(shí)，可考慮出現(xiàn)異嗜性抗體干擾：(1)檢驗(yàn)結(jié)果與臨床癥狀不符；(2)標(biāo)本經(jīng)稀釋后結(jié)果不成線性；(3)更換檢測(cè)系統(tǒng)，結(jié)果差異顯著；(4)使用HBR處理后，結(jié)果差異顯著；(5)詳細(xì)詢問(wèn)患者近期是否接受免疫接種、輸血或接受單克隆抗體治療；(6)詳細(xì)詢問(wèn)患者是否有動(dòng)物密切接觸史。

本研究中兩例患者的CA19-9檢測(cè)結(jié)果受到了異嗜性抗體的干擾，通過(guò)更換檢測(cè)系統(tǒng)和使用HBR阻斷，有效解決了相應(yīng)的干擾。提示檢驗(yàn)人員在工作過(guò)程中，對(duì)免疫學(xué)檢測(cè)方法的干擾因素及干擾機(jī)制必須要有所了解，熟悉其處理方法。一旦出現(xiàn)結(jié)果與臨床表現(xiàn)不符的情況，能夠與臨床醫(yī)生積極溝通、有效排查。