酚氨咖敏顆粒質(zhì)量標準研究

董秋香，張月寒，姚 輝，付萍萍，王 騰，王 楠

（河北省保定市食品藥品檢驗所，河北 保定 071051）

酚氨咖敏顆粒曾用名為克感敏顆粒、克感敏沖劑，是解熱鎮(zhèn)痛類處方藥，用于治療感冒、發(fā)熱、頭痛、神經(jīng)痛及風濕痛等疾病。該藥由對乙酰氨基酚、氨基比林、咖啡因及馬來酸氯苯那敏4種成分組成，現(xiàn)行標準［1］中缺少主要成分對乙酰氨基酚的鑒別及含量測定，其他成分的含量選用2種不同的高效液相色譜（HPLC）系統(tǒng)分別測定。酚氨咖敏片現(xiàn)行標準［2］采用HPLC法測定4種成分的含量，因各成分處方量及其紫外吸收強度差異均較大，需分別制備2種供試品溶液在不同波長下測定，無法實現(xiàn)同時檢測。郭琦等［3］報道，采用氣相色譜（GC）內(nèi)標法可同時測定4種成分。為加強對該藥品的質(zhì)量控制并簡化操作，本研究中建立了快速定性鑒別4種成分的薄層色譜（TLC）法，以及可同時測定4種成分含量的GC外標法?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

Agilent 7820A型氣相色譜儀，包括FID檢測器，G4513A型自動進樣器，EC Chrom Elite工作站（美國Agilent公司）；Sartorius BP211D型電子分析天平（德國Sartorius公司，十萬分之一）；CAMAG型薄層色譜成像系統(tǒng)（瑞士Camag公司）；SK250HP型超聲波清洗器（上?？茖С晝x器有限公司）。

1．2 試藥

酚氨咖敏顆粒（市售品，批號分別為16062211，15121471，15121375）；對乙酰氨基酚對照品（批號為100018-201610，純度為99．9%），氨基比林對照品（批號為100503-201302，純度為99．9%），咖啡因?qū)φ掌罚ㄅ枮?71215-201512，純度為99．9%），馬來酸氯苯那敏對照品（批號為100047-201507，純度為99．7%），均購自中國食品藥品檢定研究院；硅膠GF254板（德國Merck公司）；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 薄層色譜鑒別

稱取對乙酰氨基酚、氨基比林、咖啡因、馬來酸氯苯那敏對照品適量，加三氯甲烷制成質(zhì)量濃度分別為20，25，6，0．4 mg／mL的混合溶液，必要時濾過，取濾液作為對照品溶液。稱取本品細粉適量（約相當于馬來酸氯苯那敏4 mg），加三氯甲烷10 mL，振搖使溶解，濾過，取濾液作為供試品溶液。除去4種待測成分，模擬處方（生產(chǎn)企業(yè)提供）按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。分別吸取上述3種溶液各10μL，點于同一硅膠GF254板上，三氯甲烷-甲醇-丙酮-乙醚-氨水（9∶0．8∶1∶5∶0．2，V／V／V／V／V）為展開劑，展開（展開距離約為8 cm），取出，晾干，置紫外光燈（254 nm）下檢視。紫外光燈下，4種待測成分完全分離，比移值分別為0．1，0．4，0．5，0．8，3批樣品所顯斑點顏色與位置分別與對照品相同，輔料無干擾。色譜圖見圖1。

圖1 薄層色譜圖

2．2 含量測定（GC法）

2．2．1 色譜條件

色譜柱：TR-1彈性石英毛細管柱（30 m×0．32 mm，0．25μm，S／N：11019B03，Thermo科技公司）；升溫程序：起始溫度為180℃，保持1 min，再以8℃／min的速率升至240℃，保持2 min；進樣口溫度：240℃；分流比：20∶1；載氣：氮氣；柱流量：1．5 mL／min；檢測器：FID，溫度260℃；氫氣流量：30 mL／min；空氣流量：400 mL／min；尾吹流量：25 mL／min；進樣量：1μL。

圖2 氣相色譜圖

2．2．2 溶液制備

對照品溶液：取對乙酰氨基酚、氨基比林、咖啡因、馬來酸氯苯那敏對照品適量，精密稱定，加乙醇制成質(zhì)量濃度分別為15．0，10．0，3．0，0．2 mg／mL的混合溶液，作為對照品貯備液；精密量取對照品貯備液5 mL，置50 mL容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

供試品溶液：取本品10包，精密稱定內(nèi)容物總質(zhì)量，研細，取細粉適量（約相當于馬來酸氯苯那敏1 mg），精密稱定，置100 mL具塞錐形瓶中，精密加入乙醇50 mL，超聲（功率250 W，頻率53 kHz）提取20 min，放冷，濾過，取續(xù)濾液，即得。

陰性對照品溶液：除去4種待測成分，以模擬處方按供試品溶液制備方法制備。

2．2．3 方法學考察

專屬性試驗：取2．2．2項下3種溶液各1μL，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，詳見圖2。結(jié)果，在此色譜條件下，4種待測成分峰與相鄰峰分離良好，分離度均大于1．5，輔料對測定無干擾。

線性關(guān)系考察：精密量取對照品貯備液適量，加流動相等倍逐級稀釋成系列質(zhì)量濃度的對照品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積。分別以4種待測成分的質(zhì)量濃度（X，μg／mL）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，對乙酰氨基酚、氨基比林、咖啡因和馬來酸氯苯那敏的回歸方程分別為Y乙＝3．999×103X乙-1．238×105（r＝0．999 9），Y氨＝4．506×103X氨＋3．736×104（r＝0．999 9），Y咖＝2．391×106X咖-2．125×103（r＝1．000 0）和Y馬＝3．922×106X馬＋5．964×103（r＝0．999 9）。結(jié)果表明，該4種成分質(zhì)量濃度分別在186．3～596 0μg／mL，124．9～3 996μg／mL，38．24～1 224μg／mL，2．525～80．80μg／mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

定量限（LOQ）測定：取2．2．2項下的對照品貯備液適量，等倍逐級稀釋，按擬訂色譜條件進樣測定。結(jié)果對乙酰氨基酚、氨基比林、咖啡因和馬來酸氯苯那敏的LOQ分別為0．09，0．06，0．10，0．07 ng。

精密度試驗：取2．2．2項下混合對照品溶液適量，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結(jié)果對乙酰氨基酚、咖啡因、氨基比林和馬來酸氯苯那敏峰面積的RSD分別為0．69%，0．50%，0．65%，0．68%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：取樣品（批號為15121471），依法制備供試品溶液，分別于室溫下放置0，1，2，4，6，8，10，12，24 h時，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結(jié)果對乙酰氨基酚、氨基比林、咖啡因和馬來酸氯苯那敏色譜峰面積的RSD分別為1．69%，1．78%，1．75%，1．29%（n＝9），表明供試品溶液在室溫下24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復性試驗：取同一批（批號為15121471）樣品，依法制備供試品溶液6份，按擬訂色譜條件進樣測定，以外標法計算平均含量。結(jié)果樣品中對乙酰氨基酚、氨基比林、咖啡因和馬來酸氯苯那敏的平均含量分別為99．51%，99．53%，99．32%，98．48%，RSD分 別 為0．58%，0．70%，1．79%，1．15%（n＝6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品（批號為15121471），取細粉適量（約相當于馬來酸氯苯那敏1 mg）9份，精密稱定，置100 mL具塞錐形瓶中，分別精密加入低、中、高質(zhì)量濃度的混合對照品溶液，依法制備供試品溶液（n＝3），按擬訂色譜條件進樣測定，計算加樣回收率。結(jié)果見表1。

2．2．4 含量測定

取3批樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積，以外標法計算4種成分的含量，咖啡因計算結(jié)果與1．092 7相乘，并與現(xiàn)行標準檢驗結(jié)果進行比較。結(jié)果見表2。

表1 加樣回收試驗結(jié)果（n＝9）

表2 2種方法樣品含量測定結(jié)果（%）

3 討論

3．1 薄層色譜法建立

酚氨咖敏膠囊現(xiàn)行標準［4］采用薄層色譜法鑒別4種成分，展開劑為三氯甲烷-甲醇-丙酮-乙醚-氨水（9∶0．8∶1∶3∶0．012），該方法要求展距達到15 cm，耗時較長，且展開后馬來酸氯苯那敏的Rf值較小。經(jīng)反復試驗和篩查，最終確定三氯甲烷-甲醇-丙酮-乙醚-氨水（9∶0．8∶1∶5∶0．2）為展開劑。當展距達到8 cm時4種待測成分即可達到有效分離，操作簡便快速，適宜于本品的快速鑒別。

3．2 含量測定方法選擇

在酚氨咖敏顆粒現(xiàn)行標準的色譜條件下，咖啡因和對乙酰氨基酚色譜峰不能達到有效分離，無法準確定量［5］。本研究中建立的氣相色譜外標法，可實現(xiàn)1次制備樣品、1次進樣同時測定4種組分，且10 min之內(nèi)即可達到有效分離，操作更加簡便、快速，亦可用于咖啡因及馬來酸氯苯那敏含量均勻度的測定［6］。

3．3 提取溶劑選擇

本研究結(jié)果比較發(fā)現(xiàn)，氨基比林和咖啡因的測定結(jié)果接近，馬來酸氯苯那敏的測定結(jié)果差距較大?，F(xiàn)行標準馬來酸氯苯那敏的含量測定選用乙腈為溶劑提取后測定。張軼華等［7］報道，用乙腈作溶劑提取馬來酸氯苯那敏，提取率較低。本研究中對標準方法提取剩余殘渣中馬來酸氯苯那敏進行考察，測定剩余量約相當于標示量的6%，表明此方法提取不完全，致使其含量測定結(jié)果偏低。馬來酸氯苯那敏在乙醇中易溶［8］，超聲提取20 min即可提取完全。