轉(zhuǎn)錄活化因子3、腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白1、低氧誘導(dǎo)因子-1α在銀屑病患者中的表達(dá)及意義

吳 丹,劉 敏,王曉哲

(錦州市中心醫(yī)院 皮膚科，遼寧 錦州121000)

銀屑病屬于一種慢性炎癥性皮膚病，患者主要表現(xiàn)是表皮增殖異常，造成大量干燥片狀的皮屑脫落，對(duì)人們的生活、工作產(chǎn)生嚴(yán)重的影響，患者負(fù)面情緒增加。相關(guān)研究顯示，銀屑病是一種多基因遺傳病，受遺傳、環(huán)境等多種因素影響[1]。MTA1是腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白家族的重要成員，含有多個(gè)酪氨酸激酶，蛋白激酶C是酪蛋白激酶的磷酸化位點(diǎn)，MTA1蛋白通過(guò)對(duì)信號(hào)傳導(dǎo)途徑進(jìn)行影響發(fā)揮其自身作用[2]。STATs參與多種細(xì)胞轉(zhuǎn)化過(guò)程，Stat3主要是通過(guò)多種配體進(jìn)行激活，對(duì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化有調(diào)節(jié)作用，從而抑制細(xì)胞凋亡，與細(xì)胞增生和分化有緊密的聯(lián)系[3]。有研究指出，在銀屑病皮損中表皮角質(zhì)層、真皮乳頭層發(fā)生過(guò)度增生，主要是受HIF1α表達(dá)異常影響，HIF1α能調(diào)控VEGF、COX-2等相關(guān)因子，促使真皮乳頭層微血管以及表皮角質(zhì)層增生過(guò)度，導(dǎo)致銀屑病發(fā)病[4,5]。目前關(guān)于銀屑病發(fā)病相關(guān)機(jī)制尚不明確，本文旨在研究Stat3、MTA1、HIF1α在銀屑病患者中的表達(dá)及意義，為研究銀屑病的發(fā)病機(jī)制具有重要作用。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

本文選取2017年1月-2019年1月在我院就診的70例尋常型銀屑病患者標(biāo)本，男38例，女32例，年齡18-58歲，平均年齡(38.5±12.6)歲，病程0.5-5年，平均病程(3.2±1.5)年；其中穩(wěn)定期40例，進(jìn)展期30例，斑塊型50例，點(diǎn)滴型20例，輕度18例，中度22例，重度30例。同時(shí)選取正常皮膚組織標(biāo)本，男35例，女35例，年齡20-60歲，平均年齡(39.6±11.9)歲。

納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)中關(guān)于尋常型銀屑病的診斷標(biāo)準(zhǔn)。

排除標(biāo)準(zhǔn)：3周內(nèi)服用糖皮質(zhì)激素、維A酸類、免疫抑制劑藥物治療患者；伴有其他系統(tǒng)性疾病患者；免疫功能缺陷患者；妊娠期、哺乳期患者；前1個(gè)月進(jìn)行紫外線照射患者。本文研究患者及其家屬均知情，簽署知情通知書，經(jīng)過(guò)我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1銀屑病患者病情嚴(yán)重程度評(píng)估 根據(jù)患者皮損面積、嚴(yán)重程度指數(shù)(Psoriasis area and severity index，PASI)評(píng)分進(jìn)行評(píng)估：輕度患者PASI評(píng)分≤15分，中度患者PASI評(píng)分<30分，重度患者PASI評(píng)分≥30分。

1.2.2免疫組化染色 將搜集到的標(biāo)本在液氮中備用，組織切片的厚度為5 μm，恒溫箱設(shè)置溫度為58 ℃，烘烤時(shí)間為2 h，在二甲苯中進(jìn)行脫蠟處理30 min，之后浸在梯度乙醇中各5 min，再用無(wú)菌蒸餾水洗滌5 min。加入檸檬酸鈉抗原修復(fù)液在沸水中水浴20 min，冷卻到室溫采用PBS沖洗3次，每次持續(xù)5 min。分別滴加Stat3、MTA1、HIF1α抗體(1∶200)，在4℃的濕盒中過(guò)夜保存，第2 d將濕盒取出后復(fù)溫處理1 h，采用PBS洗片3次，每次持續(xù)5 min。之后加入二氨基聯(lián)苯胺(1∶50)進(jìn)行顯色處理1 min，最后加入蒸餾水反應(yīng)終止。加入蘇木素給予復(fù)染，鹽酸乙醇分化后，采用梯度乙醇進(jìn)行脫水，采用二甲苯?jīng)_洗片3次一直到透明，采用中性樹(shù)脂封片處理，顯微鏡下觀察免疫組化染色情況。

1.2.3結(jié)果判定 每份標(biāo)本在鏡頭下隨機(jī)選擇5個(gè)視野，所有病理切片均由2位以上經(jīng)驗(yàn)豐富的醫(yī)師采用雙盲法進(jìn)行確診。根據(jù)染色程度和染色細(xì)胞百分比進(jìn)行評(píng)分：不著色0分，淡黃色1分，黃色2分，棕黃色3分；著色細(xì)胞數(shù)≤5% 0分，6%-25% 1分，26%-50% 2分，≥51% 3分。陰性(-)得分≤1分，弱陽(yáng)性(+)得分2-3分；中度陽(yáng)性(++)得分4-5分；強(qiáng)陽(yáng)性(+++)得分≥6分。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，其中計(jì)數(shù)資料采用百分率描述，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05則說(shuō)明差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Stat3、MTA1、HIF1α在銀屑病患者中的表達(dá)比較

如表1所示，銀屑病組織中Stat3、HIF1α陽(yáng)性表達(dá)率高于正常皮膚組織，MTA1陽(yáng)性表達(dá)率低于正常皮膚組織，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。

表1 Stat3、MTA1、HIF1α在銀屑病患者中的陽(yáng)性表達(dá)比較(%)

Stat3主要在銀屑病組織細(xì)胞層、顆粒層角質(zhì)形成細(xì)胞的細(xì)胞核中表達(dá)，正常皮膚組織中無(wú)表達(dá)。MTA1主要在正常皮膚組織細(xì)胞核中表達(dá)，部分在細(xì)胞質(zhì)中也有表達(dá)，為棕黃色顆粒狀，在銀屑病組織中表達(dá)較少。HIF1α主要在銀屑病組織細(xì)胞核中表達(dá)，顯示為棕黃色顆粒，在正常皮膚組織中表達(dá)較弱。

2.2 Stat3、MTA1、HIF1α表達(dá)與銀屑病患者性別相關(guān)性研究

如表2所示，男性患者與女性患者Stat3、MTA1、HIF1α陽(yáng)性表達(dá)比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

2.3 Stat3、MTA1、HIF1α表達(dá)與銀屑病患者臨床分期的相關(guān)性研究

如表2所示，進(jìn)展期患者Stat3、HIF1α陽(yáng)性表達(dá)率高于穩(wěn)定期患者，MTA1陽(yáng)性表達(dá)率低于穩(wěn)定期患者，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。

表2 不同臨床分期Stat3、MTA1、HIF1α表達(dá)比較(%)

2.4 Stat3、MTA1、HIF1α表達(dá)與銀屑病類型相關(guān)性研究

如表3所示，點(diǎn)滴型患者與斑塊型患者Stat3、MTA1、HIF1α陽(yáng)性表達(dá)比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

表3 不同銀屑病類型Stat3、MTA1、HIF1α表達(dá)比較(%)

2.5 Stat3、MTA1、HIF1α表達(dá)與銀屑病患者疾病嚴(yán)重程度相關(guān)性研究

如表4所示，重度患者Stat3、HIF1α陽(yáng)性表達(dá)率高于輕度、中度患者，MTA1陽(yáng)性表達(dá)率低于輕度、中度患者，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。中度患者Stat3、HIF1α陽(yáng)性表達(dá)率高于輕度患者，MTA1陽(yáng)性表達(dá)率低于輕度患者，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。

表4 不同嚴(yán)重程度Stat3、MTA1、HIF1α表達(dá)比較(%)

3 討論

銀屑病病理特點(diǎn)是，細(xì)胞因?yàn)檫^(guò)度增殖，分化異常，角化不全，導(dǎo)致表皮角質(zhì)形成，患者表皮和真皮之間有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，并且在真皮乳頭層中微血管發(fā)生擴(kuò)張、增生以及迂曲[6]。有大量研究證實(shí)，微血管變化在銀屑病患者中出現(xiàn)較早，但是消失也最晚，具有持續(xù)存在、復(fù)發(fā)等特點(diǎn)，與銀屑病發(fā)病緊密相關(guān)[7,8]。微血管變化是導(dǎo)致銀屑病發(fā)病主要原因，在銀屑病皮損中發(fā)現(xiàn)，微血管的產(chǎn)生主要作為啟動(dòng)因素，受細(xì)胞增殖、缺氧過(guò)度的影響[9]。皮損發(fā)生過(guò)程中，角質(zhì)形成細(xì)胞因?yàn)樵鲋尺^(guò)度，導(dǎo)致氧消耗量增加,隨著表皮肥厚促進(jìn)氧供障礙形成，發(fā)生局部缺氧，以及造成缺氧適應(yīng)性改變[10]。

HIF1α屬于一種核蛋白具有轉(zhuǎn)錄活性特點(diǎn)，在缺氧環(huán)境下大量產(chǎn)生，促使細(xì)胞能快速的適應(yīng)缺氧環(huán)境，對(duì)氧供、能量穩(wěn)定發(fā)揮作用[11]。HIF1α是HIF1主要的活性形式。涂晨[12]研究指出，在銀屑病患者皮損表皮角質(zhì)細(xì)胞、真皮淺層以及乳頭層的毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞中顯示過(guò)度表達(dá)。本文研究指出，銀屑病組織中HIF1α陽(yáng)性表達(dá)率較高，說(shuō)明HIF1α在銀屑病中高表達(dá)，參與銀屑病發(fā)生，與王杰[13]研究結(jié)果保持一致。MTA1蛋白是一種重要的核調(diào)節(jié)因子，在信號(hào)傳導(dǎo)通路中發(fā)揮作用，參與多種惡性腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移過(guò)程[14]。本文研究顯示，MTA1在銀屑病組織顯示低表達(dá)，說(shuō)明MTA1表達(dá)異常與銀屑病發(fā)病有關(guān)。Stat3可作為一種癌基因，在多種腫瘤中被異常激活，參與腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡、分化。劉鳳杰[15]指出，銀屑病患者受損皮膚組織中Stat3表達(dá)水平較高，受IL-10等因子的影響，被激活。本文研究中，Stat3在銀屑病組織中陽(yáng)性表達(dá)率較高，說(shuō)明Stat3可能參與銀屑病發(fā)生。楊璐婷[16]認(rèn)為，在銀屑病皮損角質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞核中，Stat3表達(dá)水平升高，本文研究結(jié)果與其保持一致。分析原因：Stat3能促進(jìn)細(xì)胞增殖，參與銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞過(guò)度增殖過(guò)程。

本文研究證實(shí)，進(jìn)展期患者Stat3、HIF1α陽(yáng)性表達(dá)率升高，MTA1陽(yáng)性表達(dá)率降低，說(shuō)明Stat3、MTA1、HIF1α表達(dá)與尋常型銀屑病患者臨床分期有關(guān)。Abdou AG[17]研究也指出，進(jìn)展期銀屑病患者HIF1α表達(dá)升高。與本文研究一致。銀屑病發(fā)生缺氧適應(yīng)性反應(yīng)，導(dǎo)致HIF1發(fā)生活化，HIF1α表達(dá)升高，參與銀屑病發(fā)病過(guò)程[18]。本文中，重度患者Stat3、HIF1α陽(yáng)性表達(dá)率高于輕度、中度患者，MTA1陽(yáng)性表達(dá)率低于輕度、中度患者。說(shuō)明Stat3、MTA1、HIF1α表達(dá)水平與銀屑病患者并且嚴(yán)重程度有關(guān)，隨著患者病情加重，Stat3、HIF1α表達(dá)不斷升高，MTA1表達(dá)不斷降低，與病情嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。