婦科門(mén)診患者宮頸感染人乳頭瘤病毒基因分型檢測(cè)特征分析

張麗敏,呂 虹,陳柯霖,劉淑靜,周 金,谷愉愉，康熙雄*，張國(guó)軍*

(1.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院，北京100070；2.北京市免疫試劑臨床工程技術(shù)研究中心，北京100070)

宮頸癌是常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤之一，而人乳頭瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染已被證實(shí)是宮頸癌發(fā)生的首要因素[1]。目前已鑒定出 HPV 有100 多種亞型，約有40多種與生殖道感染有關(guān)，根據(jù)其致病力分為高危型和低危型，高危型可引起多種惡性腫瘤如喉癌、膀胱癌、宮頸癌等，高危型 HPV 持續(xù)感染是宮頸癌的主要致病因素[2]；低危型則常引起濕疣等良性病變。因此對(duì)女性宮頸脫落細(xì)胞進(jìn)行HPV分型檢測(cè)，了解HPV基因型分布特征，對(duì)預(yù)防和早期診治宮頸癌具有重要的意義。本文對(duì)2014年1月至2016年6月北京地區(qū)來(lái)北京天壇醫(yī)院婦科門(mén)診初診的婦女HPV感染情況作一回顧性分析,現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

2014年1月-2016年6月于北京天壇醫(yī)院婦科門(mén)診就診的初診婦女共10252例，年齡16-86歲，平均年齡40.7±11.5歲?；颊呶唇邮苓^(guò)抗HPV相關(guān)治療，無(wú)宮頸切除術(shù)治療史，排除妊娠。

1.2 標(biāo)本采集

由婦科醫(yī)生使用HPV采樣刷采集宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本,將毛刷放入加有專(zhuān)用細(xì)胞保存液的收集管中，4-8℃冰箱保存，3天內(nèi)完成檢測(cè)。

1.3 儀器與試劑

HPV基因分型檢測(cè)試劑盒,由潮州凱普生物化學(xué)有限公司生產(chǎn),HPV基因型進(jìn)行分型檢測(cè)，包括13種高危型HPV(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68)和8種低危型HPV(6、11、42、43、44、53、66和CP8304)，共21種。

1.4 實(shí)驗(yàn)過(guò)程

樣本DNA抽提；PCR 擴(kuò)增；導(dǎo)流雜交；酶標(biāo)顯色；根據(jù)芯片顯色位點(diǎn)判斷HPV基因型。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件；計(jì)數(shù)資料以百分比表示，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 婦科門(mén)診患者宮頸感染HPV檢出情況

2.1.1HPV感染率及各基因型分布 10252例婦科門(mén)診初診患者，檢出HPV-DNA陽(yáng)性例數(shù)為1930例，總陽(yáng)性檢出率為18.83%(1930/10252)，21種基因型均有檢出。各基因型別分布如表1所示。其中HPV-52檢出率最高，共363例，陽(yáng)性率為3.54%(363/10252)，其次為HPV-16、58、CP8304和53，陽(yáng)性率分別為3.41%(350/10252)、3.13%(321/10252)、1.97%(202/10252)和1.89%(194/10252)。

2.1.2單一及多重感染分布 在1930例檢出陽(yáng)性標(biāo)本中，單一感染1426例，占總陽(yáng)性標(biāo)本的73.89%，二重感染373例，占總陽(yáng)性標(biāo)本的19.33%，三重及以上感染131例,如表2所示。

2.1.3高危及低危型別感染分布 1930例檢出陽(yáng)性標(biāo)本，根據(jù)HPV型別檢出情況劃分為3組：高危型感染組、高低危型混合感染組和低危型感染組，分別定義如下：高危型感染組，即至少有一個(gè)高危型陽(yáng)性，且所有低危型陰性；高低危型混合感染組，即至少有一個(gè)高危型陽(yáng)性，并且同時(shí)至少也有一個(gè)低危型陽(yáng)性；低危型感染組，即至少有一個(gè)低危型陽(yáng)性，且所有高危型陰性。

1930例陽(yáng)性標(biāo)本檢出情況如表3所示，高危型感染檢出率為68.81%(1328/1930)，低危型感染檢出率為18.39%(355/1930)，高低危型別混合感染檢出率為12.80%(247/1930)。其中，高危型感染組以單一感染為主，共1128例，占陽(yáng)性標(biāo)本的84.94%(1128/1328)，主要型別為HPV-52、16、58、39和51。低危型感染組單一感染309例，占陽(yáng)性標(biāo)本的87.04%(309/355)，主要型別為HPV-CP8304、53、66和6，二重感染22例。高低?；旌细腥窘M二重感染167例，占陽(yáng)性標(biāo)本的67.61%(167/247)，主要型別為HPV- CP8304和53。

表1 10252例婦科門(mén)診患者檢出HPV各基因型分布

表2 婦科門(mén)診患者檢出HPV單一及多重感染分布

2.1.4婦科門(mén)診患者感染HPV年齡分布情況

婦科門(mén)診患者中，年齡<23歲患者HPV感染率最高，為35.48%。年齡>60歲患者感染率最低，為12.97%，如表4所示。

表3 婦科門(mén)診患者檢出HPV高低危感染分布

表4 婦科門(mén)診患者感染HPV年齡分布情況

*與<23歲比較，P<0.05#與>60歲比較，P<0.05

2.2 婦科門(mén)診患者和體檢婦女宮頸感染HPV結(jié)果比較

前期研究中，對(duì)同期來(lái)北京天壇醫(yī)院體檢科進(jìn)行體檢的女性進(jìn)行了宮頸感染HPV基因型別的分布特征分析[3]，現(xiàn)將婦科門(mén)診患者和體檢婦女兩組人群HPV感染分布特征進(jìn)行比較如下。

2.2.1HPV感染率比較 婦科門(mén)診患者與體檢婦女感染HPV情況比較，婦科門(mén)診患者HPV總感染率、單一感染和多重感染率均高于體檢婦女，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。兩組婦女中，高危型感染組與高低危型感染組合計(jì)為高危感染，低危型感染組與高低危型感染組合計(jì)為低危感染，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果見(jiàn)表5。婦科門(mén)診患者高危感染率及低危感染率均高于體檢婦女(P<0.01)。

表5 婦科門(mén)診患者及體檢婦女HPV感染狀況比較(n，%)

2.2.2HPV感染基因型別比較 兩組患者HPV 感染前6 位型別完全相同，如表6所示，且HPV-52在兩組均排首位。除HPV-CP8304外，其余5種基因型感染率婦科門(mén)診患者均高于體檢婦女，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表6 婦科門(mén)診患者及體檢婦女主要HPV型別及感染率比較(n，%)

3 討論

宮頸癌是婦科常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，發(fā)病率僅次于乳腺癌，全世界每年有46萬(wàn)新發(fā)病例，每年有25萬(wàn)人死于宮頸癌[4]。1995年，國(guó)際癌癥研究中心宣布HPV感染是子宮頸癌的發(fā)生主要原因。近年來(lái)HPV疫苗的研制及應(yīng)用，雖然在一定程度上能夠通過(guò)預(yù)防HPV感染進(jìn)而防止宮頸癌的發(fā)生[5，6]，但受疫苗的推廣程度以及人們性觀念的改變等因素影響，目前宮頸癌的發(fā)病率仍呈穩(wěn)步上升及年輕化趨勢(shì)。最近一項(xiàng)來(lái)自加拿大對(duì)19000名女性進(jìn)行的隨訪研究報(bào)道，HPV檢測(cè)可明確降低后續(xù)宮頸上皮內(nèi)瘤變的發(fā)生率，并認(rèn)為HPV檢測(cè)比細(xì)胞學(xué)檢查更有效，可作為宮頸癌的主要篩查方法[7]。我院婦科門(mén)診患者，多數(shù)伴有下腹部不適等癥狀，作為HPV的高危人群，HPV檢測(cè)尤為重要。并且隨著我國(guó)新的生育政策的實(shí)施，部分婦女尚有生育需求，而孕前女性宮頸HPV感染，可對(duì)胎兒及新生兒的健康帶來(lái)隱患，因此對(duì)這部分人群進(jìn)行HPV篩查對(duì)促進(jìn)母嬰健康也具有重要的價(jià)值。

本研究回顧性分析了10252例婦科門(mén)診初診婦女宮頸感染HPV的資料，結(jié)果顯示其陽(yáng)性檢出率為18.83%，這與國(guó)內(nèi)多項(xiàng)研究結(jié)果相一致[8，9]。但也有研究顯示部分地區(qū)HPV感染率高于本研究[10，11]。這說(shuō)明HPV感染存在一定的地域差異，另外研究的樣本量、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法、所測(cè)HPV型別不同也是導(dǎo)致結(jié)果不一致的可能原因。在年齡分布上，數(shù)據(jù)顯示<23歲女性感染率最高(35.48%)，>60歲女性感染率最低(12.97%)，而介于31-60歲之間的各年齡段之間感染率相近。這與我們前期在妊娠及體檢婦女中的研究結(jié)果趨勢(shì)一致[3]，但不同于其他一些研究結(jié)論。如王新忠等研究報(bào)道女性HPV感染率隨年齡增長(zhǎng)均呈上升趨勢(shì)[12]。另王小利等研究數(shù)據(jù)顯示HPV在50-60歲婦女檢出率最高[10]。首先這不能排除地域差異的因素，此外這也與每個(gè)年齡段入組人數(shù)的基數(shù)有關(guān)。<23歲的就診女性檢出陽(yáng)性人數(shù)為66例，僅占總陽(yáng)性例數(shù)的3.42%(66/1930)，但由于此年齡段入組人數(shù)基數(shù)較少，為186例，為所有年齡段中人數(shù)最少者，其陽(yáng)性檢出率反而高于其他年齡組。高發(fā)病率呈年輕化趨勢(shì)，也與此年齡段女性性行為習(xí)慣、缺乏生理衛(wèi)生知識(shí)、免疫系統(tǒng)因素及自身防護(hù)意識(shí)較弱等有關(guān)。

在前期研究中我們對(duì)同期的體檢婦女HPV感染特點(diǎn)進(jìn)行了分析，此次研究中我們也將二者的資料進(jìn)行了比較，結(jié)果顯示婦科門(mén)診患者在HPV總感染率，單一/混合感染及高危/低危感染方面均高于體檢婦女。這是因?yàn)榫驮\于婦科門(mén)診女性多數(shù)伴有身體不適而來(lái)就診，而體檢婦女大部分來(lái)自健康體檢人群，因此不難理解。在基因型分布上，檢出率排前六位的基因型別在兩組間分布相同，且高危型別均占優(yōu)勢(shì)，這說(shuō)明HPV基因型在不同人群中的分布具有一致性。