經(jīng)皮穴位電刺激預處理對運動性疲勞模型大鼠血腦鈉素和尾加壓素Ⅱ水平的影響

石君杰 蘭加陸 胡贏贏 葉祥明

適量的運動負荷可促使心肌舒縮因子的適度分泌，有利于心肌自由基的清除；而劇烈運動會使心肌細胞產(chǎn)生過多的自由基，引起心肌能量相關酶的活性降低，導致運動性疲勞[1]。因此，在運動性疲勞的研究中，維護心臟機能正常，防止發(fā)生心肌疲勞，是防治運動性疲勞的關鍵。經(jīng)皮穴位電刺激療法（transcutaneous electrical acupoint stimulation，TEAS）融合了經(jīng)皮電刺激療法和針刺療法的特點，較之針刺療法減少了創(chuàng)傷和疼痛，又可通過經(jīng)絡、腧穴發(fā)揮整體和良性調節(jié)作用。目前，TEAS 在防治運動性疲勞方面得到廣泛應用[2]。課題組前期研究顯示，TEAS“足三里”穴具有良好的抗運動性疲勞效應，并對胃黏膜有一定的保護作用[3-4]。但有關TEAS 對運動性疲勞心肌損傷作用機制的研究報道較少。本實驗擬在前期研究工作的基礎上，采用TEAS“足三里”穴預處理的方式，觀察其對運動性疲勞大鼠心臟內分泌激素腦鈉素（brain natriuretic pepti-de，BNP）、尾加壓素Ⅱ（urotensinⅡ，UⅡ）的影響，現(xiàn)報道如下。

1 實驗材料

1.1 動 物 清潔級雄性SD 大鼠21 只，體質量（200±20）g，購自浙江中醫(yī)藥大學實驗動物中心。實驗動物許可證號：SYXX（浙）2013-0184。實驗過程中對動物的處置符合相關動物倫理學標準條例。實驗動物常規(guī)適應性喂養(yǎng)1 周。

1.2 試劑與儀器 BNP 酶聯(lián)免疫試劑盒（北京華英生物技術研究所，批號20170116）、UⅡ酶聯(lián)免疫試劑盒（北京華英生物技術研究所，批號20170325）。韓式穴位神經(jīng)刺激儀（LH 202 H 型，成都鑫奧醫(yī)療器械公司）；γ-放射免疫計數(shù)器（GC1500，安徽中佳科學儀器有限公司）。

2 實驗方法

2.1 動物分組與模型制備 21 只SD 大鼠按照隨機數(shù)字表法分為正常組、模型組和TEAS 組，每組7只。參照文獻[5]，在課題組前期研究工作基礎上，進一步改良建模方法。模型組與TEAS 組參照Bedford建立的漸增負荷法（跑臺坡度與速度）建立運動性疲勞模型。一級負荷：0°，8.2m/min，運動15min（相當于53%V02max）；二級負荷：5°，15m/min，運動15min（相當于64%V02max）；三級負荷：10°，19.3m/min，運動90min（相當于76%V02max）。總運動時間為120min。運動中采取毛刷刺激驅使大鼠維持足夠的運動強度。每天1 次，共7 天。第7 天，保持大鼠在三級運動負荷下持續(xù)運動至力竭狀態(tài)。力竭狀態(tài)判斷標準：連續(xù)給大鼠施加毛刷刺激后，大鼠不能繼續(xù)跑動，下跑臺后疲態(tài)明顯，連續(xù)喘息，暫時無逃避反應。正常組不進行任何操作，僅每天適應跑臺環(huán)境。

2.2 針刺干預 TEAS 組大鼠每天運動前在雙側“足三里”穴處進行TEAS 治療。大鼠的穴位定位參照中國針灸學會實驗針灸研究會制定的《實驗動物針灸穴位圖譜》[6]，足三里穴位于大鼠后肢膝關節(jié)后外側，腓骨小頭下約5mm 處。治療參數(shù)為連續(xù)波、頻率2Hz、強度5mA、持續(xù)30min，以大鼠肢體微顫為度。正常組、模型組不做任何處理。

2.3 指標檢測

2.3.1 力竭運動時間 實驗最后1 天，大鼠在三級運動負荷下運動90min 后，繼續(xù)施加毛刷刺激使大鼠持續(xù)運動，直至力竭狀態(tài)，由獨立觀察者記錄大鼠從開始運動到出現(xiàn)力竭狀態(tài)的時間。

2.3.2 腦鈉素、尾加壓素Ⅱ 實驗最后1 天，大鼠力竭運動后，麻醉，消毒，心尖部取血5mL，4℃、3000r/min離心15min，取上清液放入離心管，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA 法）測定大鼠血BNP、UⅡ水平。

2.4 統(tǒng)計學方法 應用SPSS 16.0 統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差（）表示，組間比較采用單因素方差分析，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

3 實驗結果

3.1 各組大鼠力竭運動時間比較 與正常組比較，模型組大鼠力竭運動時間明顯縮短（P＜0.01）；與模型組比較，TEAS 組力竭運動時間明顯延長（P＜0.05）。見表1。

表1 各組大鼠力竭運動時間比較（min，）

表1 各組大鼠力竭運動時間比較（min，）

注：正常組和模型組運動前不予任何處理；TEAS 組運動前TEAS 足三里穴；TEAS 為經(jīng)皮穴位電刺激療法；與正常組比較，aP＜0.01；與模型組比較，bP＜0.05

3.2 各組大鼠心臟內分泌激素水平比較 與正常組比較，模型組大鼠血BNP 含量升高、UⅡ含量降低（P均＜0.01）；與模型組比較，TEAS 組大鼠BNP 含量降低、UⅡ含量升高（P 均＜0.05）。見表2。

表2 各組大鼠血BNP、UⅡ水平比較（）

表2 各組大鼠血BNP、UⅡ水平比較（）

注：正常組和模型組運動前不予任何處理，TEAS 組運動前TEAS 足三里穴；TEAS 為經(jīng)皮穴位電刺激療法；BNP 為腦鈉素；UⅡ為尾加壓素Ⅱ；與正常組比較，aP＜0.01；與模型組比較，bP＜0.05

4 討論

延緩或消除心肌損傷，防止心臟過度負荷已成為運動性疲勞的研究熱點之一。BNP 是重要的心臟舒血管因子，在對抗腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS）的縮血管作用等方面發(fā)揮著重要作用。UⅡ是重要的心臟縮血管因子，其縮血管活性比內皮素強8～110 倍。BNP、UⅡ作為心肌應激的敏感因子，能靈敏反映心臟機能變化，用于監(jiān)測心肌機能，在運動訓練中具有重要的意義。研究發(fā)現(xiàn)，超長時運動負荷能引起心肌受損，使得血清BNP 含量明顯增加；也有研究報道進行大強度運動訓練后的大鼠心肌BNP mRNA 表達增強[7]。本實驗結果顯示，與正常組比較，運動性疲勞模型組大鼠UⅡ含量降低，BNP 含量升高，與運動性疲勞心肌損傷的病理改變相符合。

運動性疲勞屬中醫(yī)“虛證”范疇，與臟腑虛弱、功能失調密切相關。研究發(fā)現(xiàn)，針灸療法對消除運動性疲勞、改善機體運動能力，有較為肯定的作用，并具有整體性和良性調節(jié)的特點[8]。應曉明等[9]認為，TEAS抗運動性疲勞的療效優(yōu)于穴位注射療法和艾灸療法。在針灸療法防治運動性疲勞選用的穴位中，以足三里穴的選用頻率最高。足三里穴屬足陽明胃經(jīng)，胃經(jīng)與脾經(jīng)相表里。脾主肌肉四肢，脾胃又為氣血生化之源、后天之本；《針灸大成》載足三里穴主“臟氣虛憊，真氣不足”，《靈樞·海論》曰“胃者，水谷之海，……下至足三里”，說明足三里具有補益氣血、扶正培元之功效。

防治運動性疲勞的關鍵在于早期干預。根據(jù)中醫(yī)“治未病”思想，古代醫(yī)家提出“逆針灸”方法進行早期干預。明高武《針灸聚英》提出“無病而先針灸曰逆。逆，未至而迎之也”。陳澤斌等[10]、楊翼等[11]在此基礎上提出“穴位針刺預處理”方法，證實針刺預處理可以啟動機體內源性自我保護機制。本研究以TEAS預處理的方法，通過對足三里穴的刺激，增強機體對運動性疲勞的預適應性和耐受性。研究結果表明，TEAS 組力竭運動時間比模型組明顯延長（P＜0.05），血BNP 含量降低、UⅡ含量升高（P＜0.05），提示TEAS“足三里”穴預處理，可消除或延緩運動性疲勞的產(chǎn)生，能減少BNP 水平升高程度，增加UⅡ分泌，提高心肌應激能力，對運動性疲勞心臟機能具有一定保護作用。