ACE抑制肽的研究進(jìn)展

趙 越，張孚嘉，吳 楠，雙 全

（內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 食品科學(xué)與工程學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010018）

世界衛(wèi)生組織將高血壓列為人群健康的頭號危險因素，它是引起全世界人口死亡率上升的主要病因，約影響15%～20%的成年人的健康[1]。2010年，高血壓導(dǎo)致940萬人死亡，占全球傷殘死亡率的7.0%。據(jù)估計在2030年，將會導(dǎo)致2 330萬人死亡[2]。心血管疾病有關(guān)的治療費(fèi)用約高達(dá)1 060億歐元，約占整個歐盟醫(yī)療支出總額的9%，給社會帶來了很大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。據(jù)報道，全世界大約有2/3的高血壓患者生活在發(fā)展中國家，特別是亞洲國家，其高血壓人數(shù)的增長率最高。高血壓是引起流行性心血管疾?。ㄖ酗L(fēng)、心肌梗塞、心臟病等）的主要病因之一，47%的冠心病和54%的腦中風(fēng)患者是由高血壓引起的[3]。成人高血壓占比為30%～45%，且隨著年齡的增長患病人數(shù)急劇增加。高血壓的典型定義是血壓在140/90 mmHg以上的水平，血壓值120～139/80～89 mmHg與低于120/80 mmHg的血壓水平相比，前者心血管疾病發(fā)病率和死亡率大幅增加[4]。雖然高血壓的控制與多種代謝途徑有關(guān)，但血管緊張素轉(zhuǎn)換酶的調(diào)節(jié)是一個關(guān)鍵調(diào)控因素。

1 ACE抑制肽的研究歷史及作用機(jī)制

1.1 ACE抑制肽作用機(jī)制

血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（angiotensin-I converting enzyme，ACE）是從人體組織和體液中發(fā)現(xiàn)的一種二肽羧肽酶，在人體心血管系統(tǒng)中起著至關(guān)重要的作用。ACE通過將血管緊張素I轉(zhuǎn)化成血管緊張素Ⅱ來提高血壓。血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制肽（Angiotensin I-converting enzyme inhibitory peptides，ACEI）是通過抑制血管緊張素Ⅱ的合成或促進(jìn)緩激肽的釋放，抑制ACE活性從而降低血壓。ACE主要有兩種亞型—人體體細(xì)胞ACE（somatic ACE，sACE）和睪丸ACE（testis ACE，tACE），它們由同源的C-ACE和N-ACE組成，而tACE與sACE的C域相同，但sACE在其N端含有一個獨(dú)特的36-殘基序列。有研究表明，C域?qū)τ隗w內(nèi)血壓的控制具有明顯作用[5]。腎素-血管緊張素系統(tǒng)（renin-angiotensin system，RAS）和激肽釋放酶-激肽系統(tǒng)（kallikrein-kinin system，KKS）在調(diào)節(jié)血壓和維持體液平衡方面發(fā)揮著重要作用。在RAS系統(tǒng)中，ACE通過將非活性形式的十肽-血管緊張素I（angiotensin I）轉(zhuǎn)化為一種強(qiáng)效的血管收縮劑八肽—血管緊張素II（Angiotensin II），血管緊張素II是一種有效的血管收縮劑，能使血壓上升[6]；在KKS系統(tǒng)中，ACE抑制了緩激肽的分解，緩激肽是一種血管舒張劑，可降低血壓，將緩激肽分解為一個無活性的片段，從而使血壓升高，ACE會通過雙重作用提高血壓，即刺激血管收縮和抑制血管舒張。

1.2 ACE抑制肽的研究簡史

ACE抑制肽的發(fā)現(xiàn)于1965年，F(xiàn)ERREIRA S H[7]從蝮蛇體內(nèi)發(fā)現(xiàn)緩激肽增強(qiáng)因子，1970年[8]，用超濾法在蝮蛇體內(nèi)提取分離出9個具有增強(qiáng)緩激肽作用的肽段，每個肽段有5～13個氨基酸殘基，這些肽段在組成上相似，且脯氨酸含量較高，同時大多肽段含有谷氨酸、精氨酸和色氨酸。研究證明，這些多肽抑制循環(huán)激素如緩激肽和血管緊張素Ⅱ的失活和釋放。1971年，ONDETTI M A等[9]用固相合成法合成了緩激肽增強(qiáng)因子-壬肽抗壓素（teprotide），并將ACE抑制劑應(yīng)用于臨床。1977年，CUSHMAN D W等[10]根據(jù)ACE底物的化學(xué)及分子動力學(xué)模型設(shè)計出ACE活性的結(jié)構(gòu)模型，同年ONDETTI M等[11]根據(jù)已知的ACE模型的活性位點(diǎn)人工合成了新的抗高血壓藥物—卡托普利。隨著對血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑的深入研究，又誕生了培哚普利、雷米普利、賴諾普利和曲多普利等ACE抑制劑，并被廣泛應(yīng)用于高血壓的臨床試驗(yàn)和治療。但經(jīng)長期研究表明，部分患者服用人工合成ACE抑制劑后出現(xiàn)咳嗽、頭暈、疲勞、血管水腫，鉀水平升高等不良反應(yīng)，長期服用對人體各器官產(chǎn)生毒副作用，而食源性ACE抑制肽具有成本低、無副作用的優(yōu)點(diǎn)，有望成為理想的功能性食品。1979年，OSHIMA G等[12]采用細(xì)菌膠原酶水解明膠分離提純了食源性ACE抑制肽。1982年，MARUYAMA S等[13]從酪蛋白的水解液中分離提純出具有ACE抑制活性的肽段，這是首次從乳蛋白源中提取出ACE抑制肽，為后續(xù)乳源提取奠定了基礎(chǔ)。1995年，NAKAMURA Y等[14]采用瑞士乳桿菌（Lactobacillus helveticus）和釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）兩種混合菌株作為發(fā)酵劑，研制出具有ACE抑制活性的酸奶“Calpis”，并從中提取出了ACE抑制肽活性的短肽IPP（Ile-Pro-Pro）和VPP（Val-Pro-Pro）。經(jīng)研究表明，水母性腺[15]，虹鱒魚[16]，蠶蛹蛋白[17]，乳清蛋白[18]等眾多食品中都可分離提取ACE抑制肽。因此，從食品中尋找ACE抑制肽并利用這些肽取代化學(xué)合成抑制劑已成為本研究領(lǐng)域的發(fā)展趨勢。

2 ACE抑制肽來源

2.1 植物來源ACE抑制肽

從植物中分離ACE抑制肽來源豐富、成本較低、分離及純化較為方便。MA F F等[19]采用液相二級質(zhì)譜法從銀杏種子中分離得到三條多肽序列TNLDWY（Thr-Asn-Leu-Asp-Trp-Tyr）、RADFY（Arg-Ala-Asp-PheTyr）、RVFDGAV（Arg-Val-Phe-Asp-Gly-Ala-Val），其ACE的半抑制濃度（50% inhibiting concentration，IC50）分別為1.932 μmol/L、1.35 μmol/L和1.006 μmol/L，采用分子對接的方法進(jìn)行了研究，結(jié)果表明，該多肽能與ACE緊密結(jié)合，并與S1、S2和S10活性位點(diǎn)的氨基酸殘基進(jìn)一步相互作用。馬洪鑫等[20]采用直接加熱法從苜蓿葉提取出蛋白，分別用堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶、胰蛋白酶6種酶進(jìn)行酶解，獲得酶解產(chǎn)物。通過篩選得木瓜蛋白酶ACE抑制率最高為（90.69±2.77）%，其最佳酶解工藝為pH值7.5，酶解時間4 h，酶解底物質(zhì)量分?jǐn)?shù)4%。SUN Z L等[21]用胰蛋白酶水解海棠從中分離和鑒定出以下3種ACE抑制肽：IGETGP（Ile-Gly-Glu-Thr-Gly-Pro），GATGPAGYV（Gly-Ala-Thr-Gly-Pro-Ala-Gly-Tyr-Val）和GAFGPGGLVGRP（Gly-Ala-Phe-Gly-Pro-Gly-Gly-Leu-Val-Gly-Arg-Pro），其ACE的IC50分別為19.07 μmol/L、27.42 μmol/L和31.26 μmol/L。LI M Q等[22]利用微波輔助酶法從堿性磷酸酶水解黑豆蛋白中提取ACE抑制肽，其多肽的ACE抑制活性為70.38%。余虹等[23]采用風(fēng)味蛋白酶、堿性蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解龍須菜蛋白，最終篩選出胰蛋白酶為ACE抑制肽的適宜蛋白酶，抑制率為72.37%。

2.2 動物來源ACE抑制肽

動物來源ACE抑制肽以家畜、海洋生物和蛋類來源為主。MUGURUMA M等[24]采用凝膠滲透色譜法和反相高效液相色譜法從豬骨骼肌球蛋白中提取出兩種多肽KRVITY（Lys-Arg-Val-Ile-Gln-Try）和VKAGF（Val-Lys-Ala-Gly-Phe），ACE的IC50分別為6.1 μmol和0.3 μmol，經(jīng)研究表明即使在烹調(diào)后，骨骼肌中的抗高血壓多肽仍具有ACE抑制活性。JIANG Z等[5]經(jīng)堿性蛋白酶酶解琵琶魚中純化出兩條ACE抑制肽為TFPHGP（Thr-Phe-Pro-His-Gly-Pro）和HWTTQR（His-Trp-Thr-Thr-Gln-Arg），并采用分子對接與分子動力學(xué)模擬的方法，研究ACE抑制肽與其受體ACE的相互作用及兩條多肽復(fù)合物中的時間應(yīng)力和結(jié)合能，發(fā)現(xiàn)氨基酸Glu384和Glu411是ACE抑制活性的關(guān)鍵殘基。JIANG S S等[25]采用Plastein反應(yīng)對海參蛋白其進(jìn)行改性，制備出活性高、穩(wěn)定性好的ACE抑制肽，且X射線衍射（x-ray diffraction，XRD）譜圖在7.9°和13.6°處出現(xiàn)了兩個新的衍射峰，表明從肽中獲得新的產(chǎn)物，并且經(jīng)過Plastein反應(yīng)后肽的熱穩(wěn)定性增強(qiáng)，肽的熱轉(zhuǎn)變溫度從120 ℃提高到134 ℃，ACE抑制肽水解產(chǎn)物活性也得到了提升。SUN S Q等[26]用5種不同的蛋白酶（胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、堿性蛋白酶）水解海洋大球藻從中提取出兩條新肽為FGMPLDR（Phe-Gly-Met-Pro-Leu-Asp-Arg）和MELVLR（Met-Glu-Leu-Val-Leu-Arg），其ACE的IC50值分別為219.35 μmol/L和236.85 μmol/L，采用分子對接方法發(fā)現(xiàn)，氫鍵與ACE的Zn2+的相互作用，對這兩種多肽的ACE抑制活性有一定的促進(jìn)作用。KHUEYCHAI S等[27]采用陰離子交換層析法對鴕鳥蛋清中的卵清蛋白進(jìn)行了純化，得到多肽YV，其ACE的IC50值為63.97 μg/mL，經(jīng)分子對接后發(fā)現(xiàn)，YV的ACE活性主要?dú)w因于YV與ACE的S1和S2口袋位點(diǎn)之間的氫鍵；經(jīng)胃腸消化處理后發(fā)現(xiàn)，YV仍具有ACE抑制活性，且YV對人紅細(xì)胞、人角質(zhì)形成細(xì)胞（HaCaT）和人肺成纖維細(xì)胞（MRC-5）均無毒副作用，所以，YV可用于新型降血壓產(chǎn)品的開發(fā)。

乳制品是ACE抑制肽的重要來源之一，而牛奶是乳中最常用的乳源提取物。ULUKO H等[28]采用中性酶解濃縮牛奶蛋白（MPC）從中提取出活性較高的ACE抑制肽，之后用分子質(zhì)量8 kDa和3.5 kDa膜進(jìn)行超濾以及0.2 kDa的膜進(jìn)行納米過濾以產(chǎn)生4個組分，分析表明，3.5 kDa膜回收了大量的ACE抑制肽，且活性較高。MARTIN M等[29]使用胰蛋白酶水解乳清蛋白提取出具有ACE抑制肽活性的二肽LT（Lie-Trp），其ACE的IC50為0.7 μmol/L。研究表明，ACE抑制肽二肽IW（Ile-Trp）對自發(fā)性高血壓大鼠的血壓有明顯降低的作用，并且在臨床實(shí)驗(yàn)中，單次口服50 mg IW制劑后，血漿ACE下降32%，因此，當(dāng)高血壓患者服用后，IW可能會具有良好的效果。ALHAJ O A[30]用L.helveticus和L.acidophilus水解單峰駝駝乳，從中鑒定出多種多肽，但其C端位置為Tyr（Y）、Arg（R）和Pro（P）的多肽，具有較好的ACE抑制活性。PAMAR H等[31]研究發(fā)現(xiàn)發(fā)酵羊乳是一種新的ACE抑制肽來源，具有兩種潛在的乳酸菌培養(yǎng)物分別是干酪乳桿菌（Lactobacillus casei）NK9和發(fā)酵乳桿菌（Lactobacillus fermentum），羊乳在發(fā)酵過程中表現(xiàn)出良好的蛋白水解、ACE抑制活性和雙三肽酶活性。SAHINGIL D等[32]采用Lactobacillus casei、Lactobacillus helveticus、Lactobacillus delbrueckiissp.和Lactobacillus plantarum發(fā)酵奶酪，經(jīng)響應(yīng)面分析法優(yōu)化發(fā)現(xiàn)，成熟溫度為8～16 ℃，鹽分濃度為2.5%～3.0%，熟化期為43 d時，ACE抑制肽活性最高。

3 ACE抑制肽制備策略

生產(chǎn)制備ACE抑制肽的主要方法有四種[33]：（1）酶解法，分為直接酶解法和間接酶解法兩種。酶解法是通過酶分解蛋白質(zhì)制備ACE抑制肽，是目前最為常用的方法。其優(yōu)點(diǎn)是成本較低，安全性能高，無毒副作用。（2）化學(xué)合成法，分為液相和固相化學(xué)方法。化學(xué)合成法多用于人工合成藥物的制備，但其成本偏高，具有毒副作用和殘留化合物。（3）天然生物活性肽的直接提取，是直接從天然產(chǎn)物中提取ACE抑制肽，無需經(jīng)過體外水解。（4）基因工程法，此方法適合生產(chǎn)蛋白質(zhì)和長肽，但是ACE抑制肽幾乎都是短肽，因此基因工程法受到限制。

3.1 直接酶解法

酶解法是選用合適的酶水解蛋白質(zhì)，從而使ACE抑制肽活性片段釋放。目前常用的酶有：堿性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、膠原蛋白酶等。ZHENG Y等[34]采用堿性酶、風(fēng)味酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶水解椰餅蛋白提取出具有ACE抑制肽活性的三條多肽：KAQYPYV（Lys-Ala-Gln-Tyr-Pro-Tyr-Val）、KIIIYN（Lys-Ile-Ile-Ile-Tyr-Asn）和KILIYG（Lys-Ile-Leu-Ile-Tyr-Gly）。采用超濾法、Sephadex凝膠層析法和反相高效液相色譜法對三種新型多肽進(jìn)行分離，其ACE的IC50分別為37.06 mmol/L、58.72 mmol/L和53.31 mmol/L。PAN D等[35]使用胰蛋白酶水解乳清蛋白純化出具有ACE抑制肽活性的二肽LL（Leu-Leu）。經(jīng)分子對接發(fā)現(xiàn)，抑制肽通過疏水作用與Ala354、Ala356、Phe391、Phe512、Val518殘基接觸，通過親水作用與His353、383、387、410、513、Glu384、411、Arg522殘基接觸。BINCY B等[36]使用胃蛋白酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶水解馬克面粉鑒定出具有ACE抑制肽活性的多肽TVGM TAKF（Thr-Val-Gly-Met-Thr-Ala-Lys-Phe）和QLLQQ（Gln-Leu-Leu-Leu-Gln-Gln），其ACE的IC50分別為30.3 μmol/L和75.0 μmol/L。YANG X X等[37]用堿性蛋白酶、中和酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶對蜜蜂蛹的多肽進(jìn)行酶解篩選出具有ACE抑制活性的8個多肽，其中抑制活性較高的三個ACE抑制肽是AVFPSIVMGR（Ala-Val-Phe-Pro-Ser-Ile-Val-Gly-Arg）、PPVLVFV（Pro-Pro-Val-Leu-Val-Phe-Val）和PGKVIT（Pro-Gly-Lys-Val-His-Thr），其ACE的IC50分別為6.64 μmol/L、47.7859 μmol/L和223.869 μmol/L，此外，在模擬硅膠胃腸消化中，肽段AVFPSIVGR和PGKVHIT易被胃蛋白酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶分解，肽段PPVLVFV易被胃蛋白酶和糜蛋白酶分解。

3.2 發(fā)酵法

發(fā)酵法又稱間接酶解法[38]，是利用微生物代謝過程中產(chǎn)生的酶，水解發(fā)酵物中蛋白質(zhì)，再從發(fā)酵液中提取具有ACE抑制活性的多肽。SHU G等[39]為提高發(fā)酵山羊乳的ACE抑制肽的產(chǎn)量，利用Lactobacillus bulgaricusLB6發(fā)酵羊奶，采用響應(yīng)面法（response surface method，RSM）對發(fā)酵山羊乳中添加營養(yǎng)成分進(jìn)行了研究，結(jié)果表明，最佳添加量為大豆蛋白胨0.35%、葡萄糖1.2%和酪蛋白0.15%時，ACE抑制率顯著提高。李利軍等[40]對采用微生物發(fā)酵的方法發(fā)酵調(diào)味品（醬油、黃豆醬、豆腐乳、食醋、甜面醬等）進(jìn)行了綜合性概括，發(fā)現(xiàn)發(fā)酵調(diào)味品具有良好的ACE抑制活性，且調(diào)味品在日常生活中應(yīng)用廣泛，具有很好的開發(fā)價值。SOLANKI D等[41]利用鼠李糖桿菌（L.rhamnosus）MTCC 5945（NS4）發(fā)酵駱駝乳提取出具有ACE抑制活性的多肽，研究發(fā)現(xiàn)多肽的氨基酸序列為MQTDIMIFTIGPA（Met-Gln-Thr-Asp-Ile-Met-Ile-Phe-Thr-Ile-Gly-Pro-Ala），ACE抑制肽源于αS1-酪蛋白。馬英輝等[42]以大豆分離蛋白為基質(zhì)，通過微生物發(fā)酵法篩選出一株具有高ACE抑制活性的枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）BS90，當(dāng)大豆蛋白含量為5%，初始pH 9，培養(yǎng)溫度35 ℃，培養(yǎng)時間為40 h時ACE抑制率高達(dá)81.8%，較優(yōu)化前提高了13.4%。

3.3 固相合成法

固相合成是將索要合成多肽的氨基酸C端的羧基固定于不溶性的高分子樹脂，然后進(jìn)行氨基酸縮合反應(yīng)以延長肽鏈。ORIO L P等[43]以脫脂大麻籽為原料提取ACE抑制肽，采用Fmoc固相合成法合成了四種潛在的ACE抑制活性肽，即GVLY（Gly-Val-Leu-Tyr）、IEE（Ile-Glu-Glu）、LGV（Leu-Gly-Val）和RVR（Arg-Val-Arg），其中測得GVLY的ACE的IC50為（16±1.5）μmol/L、LGV為（145±13）μmol/L、RVR為（526±33）μmol/L。YANG S等[44]采用微波輔助固相合成法合成了14種新型ACE抑制劑，其中抑制活性最高的短肽為LAPF（Leu-Arg-Pro-Phe），其ACE的IC50為0.26 μmol/L，經(jīng)分子對接發(fā)現(xiàn)，活性位點(diǎn)S1、S2口袋處多肽與tACE相結(jié)合，多肽與tACE結(jié)合的位點(diǎn)受肽C端L型或D型氨基酸構(gòu)型的影響。HUANG M Y等[45]根據(jù)αS1-酪蛋白序列，采用Fmoc固相合成法合成三肽，通過高效液相色譜法檢測馬尿酸的濃度為0.005 mmol/L，篩選出與三肽抑制活性相對應(yīng)的ACE抑制肽，結(jié)果表明，含有疏水氨基酸或脯氨酸的三肽與N端含有芳香氨基酸的三肽具有相同的抑制活性。MAHTA M等[46]從釀酒酵母蛋白水解液中分離出ACE抑制肽YGKPVAVPAR（Tyr-Gly-Lys-Pro-Val-Ala-Val-Pro-Ala-Arg），通過固相合成法得到Y(jié)GKHVAVHAR（Tyr-Gly-Lys-His-Val-Ala-Val-His-Ala-Arg）、GKPVAVPA（Gly-Lys-Pro-Val-Ala-Val-Pro-Ala）、GKHVAVHA（Gly-Lys-His-Val-Ala-Val-His-Ala）和PAR（Pro-Ala-Arg）四種結(jié)構(gòu)類似物，其ACE的IC50分別為（139.554±2.3）μmol/L、（61.91±1.2）μmol/L、（463.230±3.56）μmol/L、（135.135±2.1）μmol/L、（514.024±5.86）μmol/L，采用分子對接模擬發(fā)現(xiàn)肽序列與ACE通過氫鍵、疏水、親水和靜電相互作用結(jié)合。

4 ACE抑制肽活性檢測方法

4.1 體外活性檢測

體外活性檢測常采用以下方法，分光光度法、熒光法、放射化學(xué)法、高效液相色譜法和毛細(xì)管電泳方法。目前最常用的是CUSHMAN D W等[47]建立的紫外分光光度法，該方法以馬尿酰組氨酸亮氨酸（Hip-His-Leu，HHL）作為基質(zhì)，按照特定的順序依次加入定量的ACE和ACE抑制肽，經(jīng)過反應(yīng)后，用乙酸乙酯提取HHL后，使用紫外分光光度計在波長228 nm處測定HHL的最大吸光度。因?yàn)槠湓O(shè)備及操作簡便，是目前實(shí)驗(yàn)室最常用的檢測手段。色譜法在波長228 nm處用檢測器測吸光度值，其結(jié)果精度較高效液相色譜法準(zhǔn)確，檢測過程更為快捷。

4.2 體內(nèi)活性檢測

ACE抑制肽體內(nèi)活性檢測是以動物實(shí)驗(yàn)為主，一類是對原發(fā)性高血壓大鼠（sponta-neouslyhypertensive rats，SHR）為實(shí)驗(yàn)對象，通過短期或長期的灌胃實(shí)驗(yàn)，定期檢測實(shí)驗(yàn)對象的血壓值，從而驗(yàn)證ACE抑制肽的體內(nèi)活性。第二類是對已麻醉的大鼠靜脈注射六甲銨藥物，之后注射ACE抑制肽，測量血壓判斷ACE抑制肽活性[48]。陶瑤等[49]采用中性蛋白酶水解枸杞提取出具有ACE抑制肽活性的酶解液，對服用卡托普利和枸杞蛋白酶的SHR大鼠與服用相等劑量生理鹽水大鼠相比，服降壓藥及枸杞蛋白酶的大鼠血漿AngⅡ含量均降低，心臟和腎臟組織中ACE信使核糖核酸（messenger ribonucleic acid，mRNA）表達(dá)也降低，可以說明枸杞蛋白酶解液是通過抑制ACE的活性，減少AngⅡ的產(chǎn)生而達(dá)到降血壓的效果。BARKIA I等[50]采用4種蛋白酶（風(fēng)味酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶）酶解天然海洋硅藻提取出具有ACE抑制肽的活性的多肽，給SHR大鼠每日口服400 mg/kg的硅藻水解物，5 d后其血壓下降了17 mmHg，證明硅藻水解物具有良好的ACE抑制活性。LIN Y H等[51]采用蛋白酶N1酶解小球藻（PN-1）提取出具有ACE抑制肽活性的多肽，ACE的IC50為0.035 mg/mL，采用粒度排除色譜法將PN-1分離為7個組分，ACE抑制肽的氨基酸序列分別為WV（Trp-Val）、VW（Val-Trp）、IW（Ile-Trp）和LW（Leu-Trp），其ACE的IC50分別為307.61 μmol/L、0.58μmol/L、0.50μmol/L和1.11μmol/L，SHR大鼠口服171.4mg的PN-1組分6 h后，收縮壓和舒張壓分別降低20 mmHg和21 mmHg。

5 存在的問題及前景分析

5.1 存在問題

越來越多食源性ACE抑制肽被研究，但大多數(shù)ACE抑制肽高活性結(jié)構(gòu)并沒有得到確定，其結(jié)構(gòu)特性與抑制肽的構(gòu)效關(guān)系還需進(jìn)一步研究。其次，ACE的制備及分離純化技術(shù)較為復(fù)雜，成本較高且難以批量生產(chǎn)。最后，體外活性檢測并不穩(wěn)定，不能完全體現(xiàn)體內(nèi)降血壓效果，因此還需進(jìn)一步動物實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。

5.2 前景分析

高血壓是最嚴(yán)重的心血管死亡的原因，與大多數(shù)疾病不同，高血壓沒有癥狀，因此被稱為“無聲殺手”。然而，積極使用抗高血壓藥物并不是完全合理的，患者處于次優(yōu)狀態(tài)。ACE抑制肽在血壓調(diào)節(jié)中起著至關(guān)重要的作用，近些年，國內(nèi)外學(xué)者對ACE抑制肽進(jìn)行開發(fā)與研究，越來越多的食物中提取出新型且抑制活性較高的ACE抑制肽。一些研究表明，食源性ACE抑制肽是可以被人吸收利用的，還可預(yù)防和治療多種疾病，因此，ACE抑制肽在世界范圍內(nèi)受到更多的關(guān)注。隨著人們對ACE抑制肽的重視，新型食源ACE抑制肽設(shè)計的營養(yǎng)食品是一個很有前途的研究領(lǐng)域。