小鉆化學(xué)成分的研究

唐炳蘭 覃 朗 周小雷 王 碩 龔小妹 趙成堅(jiān) 莫單丹*

（1.廣西藥用植物園廣西藥用資源保護(hù)與遺傳改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 廣西 南寧530023； 2.廣西衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院， 廣西 南寧530023）

小鉆系木蘭科南五味子屬植物長(zhǎng)梗南五味子Kadsura longipedunculataFinet et Gagnep 的根和莖，別名小怎美、銅精端、小鉆骨風(fēng)、南五味子、紅木香、紫金皮，是瑤藥老班藥“十八鉆” 之一。主要分布于云南、四川、湖北、湖南、廣東、廣西等省。具有理氣活血、祛風(fēng)通絡(luò)、消腫止痛之功效，用于產(chǎn)后浮腫、經(jīng)閉腹痛、胃痛、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、跌打損傷、骨折等疾?。?］。近年有關(guān)南五味子屬化學(xué)成分和藥理作用的研究，表明其特征性化學(xué)成分為木脂素和三萜類，木脂素類成分主要含聯(lián)苯環(huán)辛烯類木脂素和螺苯駢呋喃型聯(lián)苯環(huán)辛烯類木脂素，還包括芳基四氫萘類、二芐基丁烷類、四氫呋喃類及新木脂素類；三萜類成分主要含羊毛脂烷型和環(huán)阿爾廷烷型三萜，還包括降三萜、五環(huán)三萜、三萜酸等。南五味子屬植物除了具有傳統(tǒng)的抗炎、鎮(zhèn)痛［2］、抗?jié)儯?］、保肝作用［4］外，還有抗癌［5］、抗HIV 病毒［6］、抗氧化［7］和抑制血小板聚集［8］等活性。本實(shí)驗(yàn)在前期對(duì)小鉆抗炎鎮(zhèn)痛活性部位篩選及抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎作用機(jī)制研究基礎(chǔ)上［2，9］，對(duì)其活性最強(qiáng)部位乙酸乙酯部位進(jìn)行了化學(xué)成分研究，從中分離到9個(gè)化合物，其中化合物5～9 為首次從該植物中分離得到，化合物7 為首次從該屬植物中得到。

1 材料

N-1106 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海愛朗儀器有限公司）；GE Healthcare 17-0090-2 紫外分光儀、Finnigan Trace DSQ 四極桿質(zhì)譜儀、Vnmrs 600、400型核磁共振儀（美國(guó)Varian 公司）；柱層析硅膠（青島海洋化工廠生產(chǎn)）；GF254薄層層析硅膠板（青島海洋化工廠）；羥丙基葡聚糖凝膠Sephadex LH-20（美國(guó)Healthcave Bio-Sciences AB 公司）。其他試劑均為分析純（成都科龍化學(xué)試劑廠）。

藥材采自廣西金秀縣，經(jīng)廣西藥用植物園資源保護(hù)與遺傳改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室趙以民博士鑒定為長(zhǎng)梗南五味子Kadsura longipedunculataFinet et Gagnep的根和莖。

2 提取與分離

40 kg 長(zhǎng)梗南五味子的根和莖粉碎后，用80%乙醇室溫浸提3 次，每次10 d，提取液合并后減壓濃縮得乙醇粗提取物。將該粗提物分散于蒸餾水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，減壓回收溶劑后得石油醚部位178.1 g、乙酸乙酯萃取物809.9 g、正丁醇萃取物181.0 g。乙酸乙酯部位采用正相硅膠柱色譜分離，氯仿-丙酮（100∶0～1∶1） 梯度洗脫，得到6個(gè)流分（Fr.1～Fr.6）。Fr.1 用石油醚-乙酸乙酯（20∶1～1∶1） 梯度洗脫，所得流分反復(fù)純化得化合物1（1 254.9 mg）、2（125.7 mg）；Fr.2～Fr.6 經(jīng)反復(fù)硅膠及凝膠柱色譜分離，ODS 柱反復(fù)純化，得化合物 3（23.8 mg）、4（15.6 mg）、5（9.7 mg）、6（278.4 mg）、7（56.3 mg）、8（32.2 mg）、9（12.4 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：無(wú)色塊狀結(jié)晶（甲醇）。mp 72～73℃，ESI-MSm／z：351［M ＋Na］＋，分子式C20H24O4。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：6.82（1H，d，J＝8.0 Hz，H-5），6.70（1H，d，J＝7.8 Hz，H-5′），6.62（1H，d，J＝1.8 Hz，H-2），6.59（1H，d，J＝1.6 Hz，H-2′），6.60（1H，m，H-6），6.56（1H，m，H-6′），5.89（1H，d，J＝1.9 Hz，-OCH2O），5.90（1H，d，J＝1.9 Hz，-OCH2O），5.40（1H，s，-OH），3.82（3H，s，-OCH3），2.69（2H，dd，J＝5.1，13.7 Hz，H-7a／H-7a′），2.25（1H，dd，J＝9.2，13.5 Hz，H-7b），2.24（1H，dd，J＝9.4，13.7 Hz，H-7b／7b′），1.78-1.67（2H，m，H-8／H-8′），0.83（3H，d，J＝6.6 Hz，H-9），0.81（3H，d，J＝6.6 Hz，H-9′）；13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ：135.2（C-1），107.6（C-2），147.1（C-3），145.2（C-4），108.9（C-5），121.3（C-6），39.0（C-7），39.4（C-8），16.2（C-9），133.6（C-1′），111.2（C-2′），146.8（C-3′），143.3（C-4′），113.8（C-5′），121.1（C-6′），38.7（C-7′），39.3（C-8′），16.0（C-9′），100.9（-OCH2O），55.3（-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10-11］基本一致，故鑒定為（＋） -安五脂素。

化合物2：白色針狀結(jié)晶（氯仿-甲醇），分子式C29H50O。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：0.62（3H，s，H-18），0.71（3H，d，J＝7.0 Hz，H-27），0.86（3H，d，J＝6.8 Hz，H-26），0.72（3H，t，J＝7.5 Hz，H-29），0.83（3H，d，J＝6.5 Hz，H-21），0.97（3H，s，H-19），5.38（1H，m，H-6），3.54（3H，m，H-3）；13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ：37.1（C-1），29.2（C-2），71.1（C-3），39.6（C-4），140.2（C-5），121.5（C-6），32.3（C-7，8），50.7（C-9），36.8（C-10），21.4（C-11），39.1（C-12），42.5（C-13），56.2（C-14），24.1（C-15），28.6（C-16），56.3（C-17），12.6（C-18），19.5（C-19），35.4（C-20），17.3（C-21），32.8（C-22），25.7（C-23），44.8（C-24），27.5（C-25），18.6（C-26），18.1（C-27），25.9（C-28），11.7（C-29）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］基本一致，故鑒定為β-谷甾醇。

化合物3：無(wú)色針晶（甲醇），mp 188～192℃，ESI-MSm／z：444［M］＋，分子式 C24H28O8。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：6.43（1H，s，H-4），6.49（1H，s，H-11），5.89、5.87（1H，s，-OCH2O），5.51（1H，s，H-9），3.90，3.88，3.84（3H，s，-OCH3×3），1.08（3H，d，J＝7.0 Hz，CH3-17），0.90（3H，d，J＝7.0 Hz，CH3-18），1.52（3H，s，-CH3CO）；13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ：146.3（C-1），133.1（C-2），149.8（C-3），107.2（C-4），133.2（C-5），38.3（C-6），35.1（C-7），41.6（C-8），82.3（C-9），135.7（C-10），102.5（C-11），148.6（C-12），136.2（C-13），141.6（C-14），119.3（C-15），116.8（C-16），19.8（C-17），14.8（C-18），101.5（-OCH2O），60.3，55.6，59.2（2，3，14-OCH3），167.7（-OCOCH3），20.1（-OCOCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13-14］基本一致，故鑒定為acetyl-binankadsurin A。

化合物4：淡黃色針晶（甲醇），mp 83～85℃，ESI-MSm／z：330［M］＋，分子式C20H26O4。1H-NMR（600 MHz，CDCl3） 顯示芳香區(qū)有1組ABX 偶合質(zhì)子信號(hào)δ：6.60（1H，s）、6.86（1H，d，J＝6.0 Hz）、6.64（1H，dd，J＝6.0，1.5 Hz） 提示結(jié)構(gòu)中存在1，3，4-三取代苯環(huán)，5.42（1H，s，OH），3.79（3H，s，-OCH3） 質(zhì)子信號(hào)提示苯環(huán)有羥基和甲氧基取代；13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ：133.2（C-1，1′），111.7（C-2，2′），146.8（C-3，3′），143.3（C-4，4′），113.6（C-5，5′），121.4（C-6，6′），38.9（C-7，7′），39.3（C-8，8′），15.9（C-9，9′），56.2（3，3′-OCH3×2）。MS 結(jié)合1H-NMR、13C-NMR數(shù)據(jù)分析可推知該分子中存在對(duì)稱結(jié)構(gòu)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］基本一致，故鑒定為二氫愈瘡木脂素。

化合物5：淡黃色塊狀結(jié)晶（甲醇），mp 213～215℃，ESI-MSm／z：400［M］＋，分子式C22H24O7。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：0.92（3H，s，H-17），0.90（3H，d，J＝6.7 Hz，H-18），1.93～2.03（1H，m，H-7），2.08（1H，ddd，J＝1.5，8.2，18.0 Hz，Ha-6），2.79（1H，ddd，J＝2.4，10.1，18.0 Hz，Hb-6），3.61，3.82，4.09（3H，s，2，3，14-OCH3），4.43（1H，d，J＝12.2 Hz，H-9），4.99（1H，d，J＝12.2 Hz，OH-9），5.91（1H，d，J＝1.2 Hz，Ha-19），5.95（1H，d，J＝1.2 Hz，Hb-19），6.24（1H，s，H-4），6.72（1H，s，H-11）；13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ：192.3（C-1），135.2（C-2），162.8（C-3），112.2（C-4），157.2（C-5），37.3（C-6），38.1（C-7），61.6（C-8），80.3（C-9），142.7（C-10），102.6（C-11），150.6（C-12），136.2（C-13），140.6（C-14），129.1（C-15），75.8（C-16），15.8（C-17），10.7（C-18），101.7（C-19），60.4，57.6，59.2（2，3，14-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［16］基本一致，故鑒定為異型南五味子素G。

化合物6：白色無(wú)定形粉末，mp 158～160℃，ESI-MSm／z：400［M］＋，分子式 C22H24O7。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：6.48（1H，s，H-4），6.43（1H，s，H-11），4.26（1H，d，J＝7.7 Hz，H-6），2.27～2.43（2H，m，H-9），1.78（2H，m，H-7，H-8），0.88，0.89（3H，d，J＝7.0 Hz，CH3-17，18），3.78，3.92（3H，s，-OCH3×2），5.91，5.96（2H，s，-OCH2O×2）；13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ：141.7（C-1），136.2（C-2），148.6（C-3），105.8（C-4），136.2（C-5），81.3（C-6），40.1（C-7），37.6（C-8），37.6（C-9），135.9（C-10），102.6（C-11），149.6（C-12），134.2（C-13），141.3（C-14），120.1（C-15），121.8（C-16），16.8（C-17），17.7（C-18），59.6，59.4（-OCH3× 2），100.2，101.3（-OCH2O×2）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［17-18］基本一致，故鑒定為戈米辛R。

化合物7：白色粉末（氯仿），ESI-MSm／z：426［M］＋，mp 272～276℃，分子式C30H50O。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：0.74，0.75，0.79，0.79，0.81，0.88，0.97，1.02（3H，8×CH3），3.17（1H，dd，J＝6.6，11.4 Hz，H-3α），5.22（1H，m，11-H）；13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ：35.9（C-1），27.8（C-2），78.9（C-3），39.0（C-4），52.3（C-5），26.6（C-6），21.4（C-7），40.9（C-8），148.8（C-9），39.0（C-10），114.3（C-11），36.0（C-12），36.7（C-13），38.1（C-14），29.7（C-15），35.9（C-16），42.8（C-17），52.0（C-18），20.2（C-19），29.6（C-20），59.6（C-21），30.8（C-22），28.2（C-23），15.3（C-24），22.1（C-25），17.1（C-26），15.7（C-27），13.9（C-28），22.1（C-29），23.0（C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［19］基本一致，故鑒定為isoarborinol。

化合物8：白色針晶（氯仿），ESI-MSm／z：423［M-H］-，分子式 C30H48O。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：5.27（1H，brs，H-24），0.83～1.72（CH3×7，s），0.55（1H，d，J＝4.2 Hz，H-19a），0.76（1H，d，J＝4.1 Hz，H-19b）；13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ：33.4（C-1），37.5（C-2），216.5（C-3），50.2（C-4），48.4（C-5），21.5（C-6），28.1（C-7），47.9（C-8），21.1（C-9），26.1（C-10），25.2（C-11），32.8（C-12），45.3（C-13），48.7（C-14），35.6（C-15），26.7（C-16），52.3（C-17），19.3（C-18），29.6（C-19），35.8（C-20），18.7（C-21），36.3（C-22），24.9（C-23），125.2（C-24），130.9（C-25），17.6（C-26），25.7（C-27），18.1（C-28），20.7（C-29），22.2（C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［20］基本一致，故鑒定為24-烯-環(huán)阿爾廷酮。

化合物9：白色粉末（氯仿），mp 83～84℃，ESI-MSm／z：368［M］＋，分子式C24H48O2。1HNMR（600 MHz，CDCl3）δ：0.86（3H，t，J＝6.9 Hz，H-24），1.63（2H，m，H-3），2.41（2H，t，J＝7.7 Hz，H-2）；13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ：179.1（C-1），33.9（C-2），31.9（C-3），29.69～29.04（C-4～21），24.7（C-22），22.7（C-23），14.1（C-24）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［21］基本一致，故鑒定為二十四烷酸。

4 結(jié)果與討論

本實(shí)驗(yàn)采用硅膠柱色譜、凝膠柱色譜等方法對(duì)小鉆乙酸乙酯部位化學(xué)成分進(jìn)行研究，分離鑒定了9個(gè)化合物，木脂素類化合物5個(gè)（1、3～6），其中化合物3、5～6 為聯(lián)苯環(huán)辛烯類木脂素，化合物1、4 為二芳基丁烷類木脂素，三萜類化合物2個(gè)（7～8），其中化合物7 為何帕烷型三萜，化合物8為環(huán)阿爾廷烷型三萜，甾醇類化合物1個(gè)（2） 和脂肪酸類化合物1個(gè)（9）。

小鉆系長(zhǎng)梗南五味子植物的根和莖，木脂素類和三萜類是其主要生物活性成分。（＋） -安五脂素是小鉆主要成分，文獻(xiàn)報(bào)道其對(duì)人血清的乙肝表面抗原有較弱的抑制作用，在體外對(duì)H＋、K＋-ATP 酶和P-388 細(xì)胞有明顯的抑制作用［22］，并且對(duì)ADP誘導(dǎo)的血小板聚集有一定的抑制作用［8］。環(huán)阿爾廷類三萜是小鉆三萜類化合物中主要成分，藥理活性豐富，包括抗腫瘤、抗病毒、抗菌、抗炎等活性，并對(duì)肝損傷有保護(hù)作用［23］。課題組前期對(duì)小鉆抗炎鎮(zhèn)痛及抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎作用進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)小鉆乙酸乙酯部位有顯著的抗炎鎮(zhèn)痛和抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎作用，其藥理活性成分的篩選將進(jìn)一步研究。