• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    香菇菌糠多糖的提取、組成及抗氧化活性分析

    2017-04-05 16:28沙日娜
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2016年12期
    關(guān)鍵詞:響應(yīng)面香菇多糖

    摘要:利用響應(yīng)面法,對香菇菌糠多糖(Lentinus edodes residues polysaccharides,LRPS)的提取條件進(jìn)行優(yōu)化,利用高效液相色譜(HPLC)、氣相色譜(GC)等對其2種組分LRPS-1、LRPS-2進(jìn)行化學(xué)結(jié)構(gòu)特征分析,測定其抗氧化活性。結(jié)果表明,LRPS的最佳提取條件為:加水稀釋35倍、醇沉?xí)r間20 h、pH值為8,此時多糖的得率為3.69%;LRPS-1由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖組成,物質(zhì)量之比為1.7 ∶[KG-*3]1.0 ∶[KG-*3]3.0,LRPS-2由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖組成,物質(zhì)量之比為7.2 ∶[KG-*3]2.3 ∶[KG-*3]1.0 ∶[KG-*3]8.4;LRPS-1、LRPS-2均有較強(qiáng)的抗氧化活性,LRPS-2更為顯著。

    關(guān)鍵詞:香菇;菌糠;響應(yīng)面;提取優(yōu)化;多糖;抗氧化

    中圖分類號:TS201.2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A

    文章編號:1002-1302(2016)12-0325-04

    收稿日期:2016-03-02

    作者簡介:沙日娜(1982—),女,內(nèi)蒙古通遼人,碩士,講師,主要從事農(nóng)產(chǎn)品檢驗研究。E-mail:15588894651@163.com。

    香菇(Lentinus edodes)別稱花菇,為真菌門側(cè)耳科香菇屬世界第二大食用菌[1]。香菇口味鮮美,富含多糖、維生素、蛋白質(zhì)、多元酚、樸菇素、膳食纖維等多種生物活性物質(zhì),其中,菌絲體多糖是香菇菌絲體中最重要的生物活性物質(zhì),具有抗氧化、抗衰老、抗炎、保肝護(hù)肝和降血糖等作用[2-4]。菌糠是真菌收獲后的培養(yǎng)基剩余物,含有豐富的菌絲體,我國年產(chǎn)各類菌糠總量約為900萬t,大部分被作為廢物遺棄,在浪費(fèi)資源的同時造成環(huán)境污染。響應(yīng)面法(RSM)是以最經(jīng)濟(jì)的方式、較少的試驗次數(shù)及較短的時間對參數(shù)進(jìn)行全面研究,越來越多地被應(yīng)用于各種生物化工處理過程[5]。本研究對香菇菌糠多糖的提取條件進(jìn)行優(yōu)化,利用DEAE-52纖維素柱和葡聚糖G-100對香菇菌糠多糖(LRPS)進(jìn)行分離純化,研究多糖組分LRPS-1、LRPS-2的分子量、單糖組成和抗氧化活性,從而為香菇菌糠的開發(fā)利用提供參考。

    1材料與方法

    1.1試驗材料

    香菇菌糠,由內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)科學(xué)院真菌研究所提供。

    1.2儀器與試劑

    1.2.1試驗儀器752-N紫外可見分光光度計、DK-S24型恒溫水浴鍋、DZF-6021型真空干燥箱,均由上海精宏實驗設(shè)備有限公司生產(chǎn);GC2010氣相色譜儀,日本島津公司生產(chǎn);TDL-5-A型臺式離心機(jī),上海安亭科學(xué)儀器廠生產(chǎn);Nicolet380 傅立葉變換紅外光譜儀,美國熱電集團(tuán)生產(chǎn);LXJ-68-02 型離心機(jī),北京醫(yī)療儀器修理廠生產(chǎn)。

    1.2.2試劑30% H2O2,天津市凱通化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn);95%乙醇,天津市百世化工有限公司生產(chǎn);DPPH、DEAE-52纖維素、葡聚糖G-100,Sigma公司生產(chǎn);苯酚,天津市天大化學(xué)試劑廠生產(chǎn);濃硫酸、濃鹽酸,淄博化學(xué)試劑廠有限公司生產(chǎn);三氯乙酸,天津大茂化學(xué)試劑廠生產(chǎn)。

    1.3多糖的提取與測定

    使用多功能粉碎機(jī)粉碎香菇菌糠,采用水提醇沉法[6-7]提取香菇菌糠多糖,采用苯酚-硫酸法[8]測定多糖含量。

    1.4香菇菌糠多糖的提取優(yōu)化

    1.4.1Plackett-Burman(PB)試驗設(shè)計采取9因素3水平PB試驗(表1)考察各提取條件對LRPS提取率的影響;采用Design-Expert 7.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

    1.4.2響應(yīng)面(RSM)試驗設(shè)計根據(jù)PB試驗結(jié)果,選取pH值、加水倍數(shù)、醇沉?xí)r間這3個對多糖得率影響最大的因素進(jìn)行響應(yīng)面法優(yōu)化條件的篩選試驗,以1、0、-1編碼自變量的高、中、低3個水平,通過最小二乘法擬合二次多項方程,模型表達(dá)式為:y=A0+∑Aixi+∑Aiixi+∑Aijxixj。式中,y為響應(yīng)值,即LRPS得率,A0、Ai、Aii、Aij為方程系數(shù),xi、xj(i≠j)為自變量編碼值。采用Design-Expert 7.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析。

    1.5多糖的凝膠柱層析

    采用DEAE-纖維素離子交換柱對多糖進(jìn)行分離純化,采用葡聚糖G-100凝膠柱對多糖進(jìn)行進(jìn)一步分離純化和純度鑒定[9],采用硫酸-苯酚法測定收集到的多糖溶液濃度,繪制洗脫曲線。

    1.6多糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)分析

    1.6.1單糖組成測定糖樣品經(jīng)過0.25 mol/L H2SO4 100 ℃ 加熱16 h完全水解,或者不經(jīng)過水解處理,按照Blakeney等的方法[10]將各單糖制備成全乙?;谴佳苌铮徊捎脷庀嗌V分析糖的構(gòu)成,分離柱為島津公司生產(chǎn)的 0.25 mm×30 m毛細(xì)管柱DB-1,柱溫為210 ℃,N2流速為 30 mL/min。

    1.6.2多糖分子量的測定多糖樣品溶于50 mmol/L的硝酸鈉溶液或0.05%疊氮化鈉中,獲得濃度為2.0 mg/mL的糖溶液;使用0.45 μm濾膜過濾,直接進(jìn)樣[11]進(jìn)行高效液相色譜測定,測定條件為:30 cm×4.6 mm TSKG3000PWxl色譜柱,3.5 cm×4.6 mm TSK保護(hù)柱,流動相為50 mmol/L硝酸鈉溶液或0.05%的疊氮化鈉,流速為0.4 mL/min,柱溫為 30 ℃,進(jìn)樣量為20 μL。

    1.7多糖抗氧化分析

    多糖清除DPPH自由基的測定方法為:2 mL 95%乙醇或0.1 μmol/L DPPH,與2 mL濃度在100~1 000 mg/L之間的EPS溶液進(jìn)行混合,25 ℃水浴15 min,517 nm處測定吸光度[12]。EPS清除羥基自由基的測定采用Smironff等的方法[13],多糖還原力的測定采用Oyaizu的方法[14]。

    2結(jié)果與分析

    2.1PB試驗

    由表2可見,當(dāng)香菇菌糠加水稀釋20倍、pH值為5、提取溫度為95 ℃、提取時間為3 h、提取1次、乙醇濃度為95%、乙醇稀釋2倍、醇沉?xí)r間36 h、醇沉溫度12 ℃時(編號5),LRPS的得率相對最高,為3.34%。由表3可知,試驗?zāi)P偷腜值小于0.01,模型回歸性較好,能夠很好地反映變量和自變量之間的變化規(guī)律;pH值、加水倍數(shù)和醇沉?xí)r間的P值均小于0.01,這3個因素對LRPS的得率影響顯著,其他因素影響相對較小或不顯著。因此,選取提取pH值、加水倍數(shù)和醇沉?xí)r間這3個因素進(jìn)行響應(yīng)面分析試驗。

    2.2RSM試驗

    2.2.1選取優(yōu)化因素pH值、加水倍數(shù)、醇沉?xí)r間分別以變量x1、x2、x3表示,經(jīng)多重回歸分析,LRPS得率的預(yù)測值y和變量之間的多項式模型為:

    y=2.11+0.30x1+0.14x2+0.31x3-0.12x1x2-0.067x1x3+0.10x2x3-0.42x12-0.30x22-0.27x32。

    2.2.2響應(yīng)面數(shù)據(jù)分析由表4可知,線性回歸系數(shù)x1、x3和[CM(25]二次項系數(shù)x12、x22、x32均極顯著(P<0.01),線性回歸系數(shù)x2顯著(P<0.05),這表明pH值、加水倍數(shù)和醇沉?xí)r間對LRPS得率的影響都比較顯著;模型的P值<0.000 1,具有極顯著性,而F值為13.40,這說明香菇菌糠多糖的預(yù)測值和試驗值一致;失擬項的F值為0.29,P值為0.128 9,這說明試驗結(jié)果并非由純誤差引起,模型方程適合對LRPS提取試驗的理論預(yù)測。另外,試驗結(jié)果表明,模型的R2值為0.999 6,這說明試驗值和預(yù)測值高度吻合,99.96%的響應(yīng)值具有可變性;調(diào)整行列式系數(shù)的R2值為0.999 0,這說明 99.90% 的LRPS總變差歸因于獨(dú)立變量,僅約0.10%的總變量不能用模型解釋。

    經(jīng)響應(yīng)面(圖1)分析,提取條件為pH值7.88、加水34.5倍、醇沉?xí)r間19.82 h,LRPS的得率相對最高,為3.85%,而驗證試驗LRPS的得率為3.84%,這表明該模型適用于LRPS提取??紤]到操作方便,將最優(yōu)提取條件調(diào)整為pH值8、加水35倍、醇沉?xí)r間20 h,此時,LRPS的得率為3.69%。

    2.3香菇菌糠多糖的組分分離純化

    采用DEAE-纖維素柱對LRPS進(jìn)行組分分離,分別利用蒸餾水和0.2、0.5、1.0 mol/L NaCl溶液作為流動相對LRPS進(jìn)行洗脫,得到2個組分LRPS-1、LRPS-2;對分離得到的2個組分用葡聚糖G-100凝膠作進(jìn)一步分離發(fā)現(xiàn),LRPS-1、LRPS-2均分離得到1個單一的洗脫峰,這表明LRPS-1、LRPS-2均為純多糖(圖2)。

    2.4多糖組分化學(xué)結(jié)構(gòu)分析

    2.4.1單糖組成分析由表5可知,LRPS-1的單糖組成主要包括鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖,其物質(zhì)量之比為 1.7 ∶[KG-*3]1.0 ∶[KG-*3]3.0;LRPS-2的單糖組成主要包括鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖,其物質(zhì)量之比為7.2 ∶[KG-*3]2.3 ∶[KG-*3]1.0 ∶[KG-*3]8.4。

    2.4.2分子量由表6可知,LRPS-1的數(shù)均分子量Mn為4.36×102,重均分子量Mw為2.97×104,多分散系數(shù)Mw/Mn為68.11;LRPS-2的數(shù)均分子量Mn為6.93×102,重均分子量Mw為1.18×105,多分散系數(shù)Mw/Mn為 170.27。

    2.4.3多糖的抗氧化活性由圖3可知,LRPS、LPS(香菇多糖)、LRPS-1、LRPS-2在波長700 nm處測得的吸光度分別為0.204±0.03、0.264±0.001、0.773±0.05、0.986±0.03;濃度為1 000 mg/L時,LRPS、LPS、LRPS-1、LRPS-2對DPPH 的清除率分別為(19.92±0.02)%、(39.88±0.01)%、(53.56±0.03)%、(55.61±0.01)%;對羥基自由基的清除率分別為(58.99±1.03)%、(66.20±1.34)%、(78.58±2.33)%、(92.10±2.57)%。由此可見,同等濃度下,LRPS的抗氧化活性略低于LPS,但是LRPS-1、LRPS-2的抗氧化活性明顯高于LPS,濃度為1 000 mg/L時,LRPS-2的還原力是LPS的3.73倍,對DPPH和羥基自由基的清除率均為LPS的1.39倍。

    3結(jié)論

    香菇菌糠多糖的最佳提取條件:pH值為8、加水35倍、醇沉?xí)r間為20 h,此時多糖的提取率為3.69%。對LRPS進(jìn)行[CM(25]分離純化,得到LRPS-1、LRPS-2這2種組分,LRPS-1[CM)]由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖組成,物質(zhì)量之比為 1.7 ∶[KG-*3]1.0 ∶[KG-*3]3.0;LRPS-2由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖組成,物質(zhì)量之比為7.2 ∶[KG-*3]2.3 ∶[KG-*3]1.0 ∶[KG-*3]8.4。本試驗選取多糖對羥基自由基清除率、DPPH清除率及還原力3個指標(biāo)考察多糖體外的抗氧化活性,結(jié)果顯示,LRPS-1、LRPS-2對DPPH、羥基自由基均有較強(qiáng)的清除能力及較強(qiáng)的還原力,LRPS-2的體外抗氧化活性相對更強(qiáng)。

    [TPSRN3.tif]

    [HS2*2][HT8.5H]參考文獻(xiàn):[HT8.SS]

    [1]劉春如,易誠. 香菇的營養(yǎng)價值和藥用價值[J]. 中國林副特產(chǎn),2002(1):52-53.

    [2]呂國英,范雷法,張作法,等. 香菇多糖研究進(jìn)展[J]. 浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報,2009,21(2):183-188.

    [3]張昕,張強(qiáng),梁彥龍. 香菇多糖的抗腫瘤和降糖作用機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 中國藥事,2008,22(2):149-154.

    [4]申進(jìn)文,馮雅嵐,莊慶利,等. 香菇子實體多糖提取工藝優(yōu)化研究[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué),2010(3):90-92.

    [5]Kalil S J,Maugeri F,Rodrigues M I. Response surface analysis and simulation as a tool for bioprocess design and optimization[J]. Process Biochemistry,2000,35(6):539-550.

    [6]胡成旭,侯欣彤,馮永寧,等. 響應(yīng)面法優(yōu)化云芝多糖提取條件的研究[J]. 食品工業(yè)科技,2007(7):124-126,130.

    [7]張迅捷,王捷,謝寶貴,等. 響應(yīng)面法優(yōu)化樟芝多糖提取工藝的研究[J]. 中國食品學(xué)報,2008,8(1):49-54.

    [8]Dubois M,Gilles K A,Hamilton J K,et al. Colorimetric method for determination of sugars and related substances[J]. Analytical Chemistry,2002,28(3):350-356.[HJ1.71mm]

    [9]王博,徐莎,黃琳娟,等. 白芨多糖BSPI-A的分離純化及結(jié)構(gòu)研究[J]. 食品科學(xué),2010,31(17):120-123.

    [10]Blakeney A B,Harris P T,Henry R J,et al. A simple and rapid preparation of alditol acetates for monosaccharide analysis[J]. Carbohydrate Res,1983,113(83):219-299.

    [11]Lin H J,Qin X M,Aizawa I,et al. Chemical properties of water-soluble pectins in hot-and cold-break tomato pastes[J]. Food Chemistry,2005,93(3):409-415.

    [12]Liu X H,F(xiàn)eng P Y,Shi Y L. Study of isolation and purification of polysaccharides from fresh mycelia of Agaricus blazei Mussill and its anti-fatigue effect[J]. Journal of Southwest Agricultural University,2006,28(2):190-194.

    [13]Smirnoff N,Cumbes Q J. Hydroxyl radical scavenging activity of compatible solutes[J]. Phytochemistry,1989,28(4):1057-1060.

    [14]Oyaizu M. Antioxidative activity of browning products of glucosamine fractionated by organic solvent and thin layer chromatography[J]. Journal of the Japanese Society for Food Science & Technology,1988,35(11):771-775.

    猜你喜歡
    響應(yīng)面香菇多糖
    Modeling and Verification of a Sentiment Analysis System Using Aspect-Oriented Petri Nets
    香菇接種三招
    米胚多糖的組成及抗氧化性研究
    熟三七多糖提取工藝的優(yōu)化
    響應(yīng)面優(yōu)化誘導(dǎo)子促進(jìn)印楝懸浮細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)印楝素的研究
    香菇皮炎二例施為
    酶法降解白及粗多糖
    玉米多糖的抗衰老作用
    亚洲,欧美精品.| 午夜91福利影院| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 国产又色又爽无遮挡免费看| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 亚洲成人手机| 日韩欧美国产一区二区入口| 视频区欧美日本亚洲| 国产av又大| av天堂久久9| 成年人午夜在线观看视频| 精品亚洲成a人片在线观看| 国产精品.久久久| 香蕉国产在线看| 成人三级做爰电影| 国产高清国产精品国产三级| 热re99久久国产66热| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 久久精品国产亚洲av高清一级| 夜夜夜夜夜久久久久| 99国产精品99久久久久| 亚洲伊人色综图| 女性生殖器流出的白浆| 性少妇av在线| av不卡在线播放| 99久久人妻综合| 大香蕉久久网| 99香蕉大伊视频| 高潮久久久久久久久久久不卡| 亚洲精品成人av观看孕妇| 在线观看免费视频网站a站| 丝袜美腿诱惑在线| 欧美一级毛片孕妇| 黄色成人免费大全| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 丝袜人妻中文字幕| 两个人看的免费小视频| 久久久久久免费高清国产稀缺| 一进一出好大好爽视频| 十八禁人妻一区二区| 伦理电影免费视频| 在线观看www视频免费| 久久国产乱子伦精品免费另类| 欧美日本中文国产一区发布| 99久久国产精品久久久| 欧美乱色亚洲激情| 久久久精品免费免费高清| 亚洲av欧美aⅴ国产| 国产亚洲欧美精品永久| 免费日韩欧美在线观看| 亚洲欧美色中文字幕在线| 精品国产乱码久久久久久男人| 99热网站在线观看| 757午夜福利合集在线观看| 国产精品久久久av美女十八| av超薄肉色丝袜交足视频| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 欧美成人午夜精品| 亚洲av美国av| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 亚洲欧美一区二区三区久久| 亚洲精品在线观看二区| 成人免费观看视频高清| 久久久久国内视频| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 日韩欧美国产一区二区入口| 一个人免费在线观看的高清视频| 少妇的丰满在线观看| 一本大道久久a久久精品| 精品久久久久久,| 满18在线观看网站| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 一边摸一边做爽爽视频免费| 国产一区二区激情短视频| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 欧美日本中文国产一区发布| 操美女的视频在线观看| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 午夜老司机福利片| 一级毛片精品| 国产精品免费视频内射| 久久久久精品人妻al黑| 亚洲精品自拍成人| 亚洲成国产人片在线观看| 在线观看免费高清a一片| av免费在线观看网站| 国产成人欧美| 热99久久久久精品小说推荐| 五月开心婷婷网| 丝袜人妻中文字幕| 亚洲熟女毛片儿| 天天影视国产精品| 国产免费现黄频在线看| 操美女的视频在线观看| 国产乱人伦免费视频| 另类亚洲欧美激情| 91国产中文字幕| 免费观看精品视频网站| 精品亚洲成a人片在线观看| 成在线人永久免费视频| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 精品卡一卡二卡四卡免费| 男女午夜视频在线观看| 最新的欧美精品一区二区| 亚洲在线自拍视频| 十八禁高潮呻吟视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 国产在线精品亚洲第一网站| 12—13女人毛片做爰片一| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 欧美日韩福利视频一区二区| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 国产成人系列免费观看| 亚洲人成电影观看| 亚洲国产欧美网| 久久久国产欧美日韩av| 免费看十八禁软件| 99国产精品99久久久久| 久热这里只有精品99| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 他把我摸到了高潮在线观看| 国产极品粉嫩免费观看在线| 老司机深夜福利视频在线观看| 国产不卡一卡二| 国产成人影院久久av| 怎么达到女性高潮| 国产男靠女视频免费网站| 高清黄色对白视频在线免费看| 欧美精品av麻豆av| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 亚洲av日韩在线播放| 正在播放国产对白刺激| 日韩欧美国产一区二区入口| 一边摸一边抽搐一进一小说 | 久久中文字幕一级| 高清在线国产一区| av天堂在线播放| 国产成人精品无人区| 精品一区二区三区四区五区乱码| 国产成人精品久久二区二区免费| 两个人免费观看高清视频| 91国产中文字幕| 午夜日韩欧美国产| 国产免费av片在线观看野外av| 欧美色视频一区免费| 色综合婷婷激情| av中文乱码字幕在线| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 午夜精品在线福利| 国产成人啪精品午夜网站| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 男人舔女人的私密视频| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| √禁漫天堂资源中文www| 热re99久久精品国产66热6| 岛国毛片在线播放| 欧美国产精品一级二级三级| 午夜免费成人在线视频| 成人手机av| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产免费av片在线观看野外av| 国产熟女午夜一区二区三区| 下体分泌物呈黄色| 午夜福利在线免费观看网站| 午夜成年电影在线免费观看| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 国产不卡av网站在线观看| 欧美日韩福利视频一区二区| 一二三四在线观看免费中文在| 欧美日本中文国产一区发布| 国产精品 欧美亚洲| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 性色av乱码一区二区三区2| av一本久久久久| ponron亚洲| 国产亚洲精品久久久久5区| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 久久久久久人人人人人| 亚洲精品自拍成人| 欧美人与性动交α欧美软件| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 亚洲专区字幕在线| 日本黄色日本黄色录像| 精品无人区乱码1区二区| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产xxxxx性猛交| 两性夫妻黄色片| 日韩免费高清中文字幕av| 国产不卡av网站在线观看| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 国产男女超爽视频在线观看| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 精品人妻1区二区| 亚洲一区二区三区欧美精品| 亚洲专区字幕在线| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 精品久久蜜臀av无| 久久人人97超碰香蕉20202| 欧美在线一区亚洲| 美女福利国产在线| 欧美激情 高清一区二区三区| 久久这里只有精品19| 一二三四在线观看免费中文在| videosex国产| 久久人人爽av亚洲精品天堂| avwww免费| 在线观看免费午夜福利视频| 国产精品亚洲一级av第二区| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 欧美久久黑人一区二区| 国产xxxxx性猛交| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 老司机亚洲免费影院| 久久中文看片网| 最新在线观看一区二区三区| 天堂俺去俺来也www色官网| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| av国产精品久久久久影院| 日本欧美视频一区| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 中文亚洲av片在线观看爽 | 黄色成人免费大全| 日韩视频一区二区在线观看| 免费在线观看日本一区| 午夜免费观看网址| 校园春色视频在线观看| 一进一出抽搐gif免费好疼 | 久久热在线av| av欧美777| 热99re8久久精品国产| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| av天堂在线播放| 在线观看免费日韩欧美大片| 午夜激情av网站| 国产成人精品在线电影| xxxhd国产人妻xxx| 精品一品国产午夜福利视频| 性少妇av在线| 久久人人97超碰香蕉20202| 在线观看午夜福利视频| 国产亚洲精品一区二区www | 曰老女人黄片| 日韩欧美免费精品| 热re99久久国产66热| 18禁国产床啪视频网站| 大片电影免费在线观看免费| 国产亚洲精品第一综合不卡| 一进一出抽搐动态| 飞空精品影院首页| 欧美精品一区二区免费开放| 一二三四在线观看免费中文在| 叶爱在线成人免费视频播放| 色综合婷婷激情| 欧美激情 高清一区二区三区| 精品久久蜜臀av无| 精品亚洲成a人片在线观看| 欧美日韩视频精品一区| 亚洲五月色婷婷综合| 叶爱在线成人免费视频播放| 色综合婷婷激情| 深夜精品福利| 成人影院久久| 久热这里只有精品99| 夜夜夜夜夜久久久久| 老司机靠b影院| 国产成人精品无人区| 国产成人精品久久二区二区免费| 老汉色av国产亚洲站长工具| 国产在线精品亚洲第一网站| 18禁国产床啪视频网站| www.熟女人妻精品国产| 成年动漫av网址| 国产成人免费观看mmmm| 婷婷精品国产亚洲av在线 | 亚洲国产毛片av蜜桃av| x7x7x7水蜜桃| 热re99久久精品国产66热6| 亚洲av欧美aⅴ国产| 国产亚洲精品一区二区www | 麻豆成人av在线观看| 男女之事视频高清在线观看| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 久久久久精品人妻al黑| 淫妇啪啪啪对白视频| 欧美黑人精品巨大| av网站在线播放免费| 日本五十路高清| 成人黄色视频免费在线看| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 日韩精品免费视频一区二区三区| 无遮挡黄片免费观看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 黄片大片在线免费观看| 91大片在线观看| 不卡一级毛片| 成人亚洲精品一区在线观看| 99久久综合精品五月天人人| 下体分泌物呈黄色| 99热只有精品国产| 69精品国产乱码久久久| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 精品国产一区二区三区四区第35| 亚洲国产欧美一区二区综合| 两个人看的免费小视频| 男人舔女人的私密视频| а√天堂www在线а√下载 | 亚洲少妇的诱惑av| cao死你这个sao货| 我的亚洲天堂| 新久久久久国产一级毛片| 麻豆av在线久日| 中文字幕av电影在线播放| 天天影视国产精品| 三级毛片av免费| 美女视频免费永久观看网站| 亚洲熟女精品中文字幕| 悠悠久久av| 国产精品偷伦视频观看了| 国产精品一区二区精品视频观看| 老鸭窝网址在线观看| 国产免费男女视频| 国产伦人伦偷精品视频| av不卡在线播放| 国产av精品麻豆| 久久国产亚洲av麻豆专区| 日本精品一区二区三区蜜桃| 亚洲精品久久午夜乱码| 捣出白浆h1v1| 欧美最黄视频在线播放免费 | 啦啦啦 在线观看视频| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 欧美国产精品va在线观看不卡| 国产不卡av网站在线观看| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 咕卡用的链子| 亚洲男人天堂网一区| 中出人妻视频一区二区| 悠悠久久av| 亚洲av日韩在线播放| 精品一区二区三区av网在线观看| 男女午夜视频在线观看| 国产淫语在线视频| 国产精品久久视频播放| 无限看片的www在线观看| 亚洲熟妇熟女久久| 欧美丝袜亚洲另类 | 欧美日韩国产mv在线观看视频| av欧美777| 后天国语完整版免费观看| 日日夜夜操网爽| 人妻 亚洲 视频| av福利片在线| 又黄又粗又硬又大视频| 欧美老熟妇乱子伦牲交| aaaaa片日本免费| 欧美精品亚洲一区二区| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 精品久久久久久电影网| 少妇 在线观看| 91精品三级在线观看| 久久久国产成人精品二区 | 一区福利在线观看| 免费av中文字幕在线| 国产免费av片在线观看野外av| svipshipincom国产片| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 日本vs欧美在线观看视频| 女同久久另类99精品国产91| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 国产精品av久久久久免费| 久久人妻av系列| 亚洲av美国av| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 人妻一区二区av| 精品久久久久久久久久免费视频 | 欧美日韩乱码在线| a级毛片黄视频| av网站免费在线观看视频| 水蜜桃什么品种好| 欧美日韩成人在线一区二区| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 日韩免费高清中文字幕av| 国产亚洲精品久久久久5区| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 国产伦人伦偷精品视频| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 国产精品 国内视频| 一二三四在线观看免费中文在| 这个男人来自地球电影免费观看| 在线观看www视频免费| 国产欧美日韩一区二区精品| 亚洲专区中文字幕在线| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 在线播放国产精品三级| 99re6热这里在线精品视频| 99精品在免费线老司机午夜| 成在线人永久免费视频| 色老头精品视频在线观看| 久久久久久久久久久久大奶| 成人特级黄色片久久久久久久| 久久九九热精品免费| 一进一出抽搐gif免费好疼 | 无限看片的www在线观看| 国产伦人伦偷精品视频| a级毛片黄视频| cao死你这个sao货| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 大型av网站在线播放| 久久久久国产精品人妻aⅴ院 | 999精品在线视频| 成人手机av| 免费在线观看影片大全网站| 国产麻豆69| 精品亚洲成国产av| 中出人妻视频一区二区| av视频免费观看在线观看| 在线播放国产精品三级| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 淫妇啪啪啪对白视频| 捣出白浆h1v1| 看黄色毛片网站| 一个人免费在线观看的高清视频| 老司机亚洲免费影院| 一级,二级,三级黄色视频| 在线观看www视频免费| 欧美乱妇无乱码| 三上悠亚av全集在线观看| 色婷婷av一区二区三区视频| 在线观看一区二区三区激情| 欧美国产精品一级二级三级| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 怎么达到女性高潮| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 嫩草影视91久久| 精品电影一区二区在线| 久久精品国产亚洲av高清一级| 国产成人精品久久二区二区免费| 精品乱码久久久久久99久播| 国产成人啪精品午夜网站| 久久国产乱子伦精品免费另类| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 美女视频免费永久观看网站| 丝袜人妻中文字幕| 国产精品国产高清国产av | 国产精品一区二区在线不卡| avwww免费| 国产伦人伦偷精品视频| av不卡在线播放| 亚洲精品自拍成人| 日韩免费av在线播放| 欧美日韩一级在线毛片| 亚洲精品中文字幕在线视频| 日韩人妻精品一区2区三区| 日韩免费高清中文字幕av| 色94色欧美一区二区| 我的亚洲天堂| 国产蜜桃级精品一区二区三区 | 日本欧美视频一区| 夜夜夜夜夜久久久久| 久久精品国产a三级三级三级| 欧美日韩福利视频一区二区| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 欧美精品一区二区免费开放| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 51午夜福利影视在线观看| 搡老熟女国产l中国老女人| 男女床上黄色一级片免费看| 久久午夜综合久久蜜桃| 国产一区在线观看成人免费| 精品国产一区二区久久| 身体一侧抽搐| 黄片大片在线免费观看| 9热在线视频观看99| 黄频高清免费视频| 又黄又粗又硬又大视频| 国产亚洲欧美在线一区二区| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 制服人妻中文乱码| 国产蜜桃级精品一区二区三区 | 一区二区日韩欧美中文字幕| 大片电影免费在线观看免费| 啦啦啦免费观看视频1| 老司机午夜福利在线观看视频| 久久国产乱子伦精品免费另类| 国产97色在线日韩免费| 国产日韩欧美亚洲二区| 久久久久视频综合| 亚洲男人天堂网一区| 黑人操中国人逼视频| 一级片免费观看大全| 久久久久久人人人人人| 校园春色视频在线观看| 在线天堂中文资源库| 亚洲一区二区三区不卡视频| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 99久久人妻综合| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 女人久久www免费人成看片| 亚洲一区中文字幕在线| 99香蕉大伊视频| 精品国产一区二区三区四区第35| 久久青草综合色| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 国产精品99久久99久久久不卡| av超薄肉色丝袜交足视频| 少妇 在线观看| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 日韩精品免费视频一区二区三区| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 黄频高清免费视频| 亚洲精品中文字幕在线视频| 久久久久国产一级毛片高清牌| av视频免费观看在线观看| 国产aⅴ精品一区二区三区波| a级片在线免费高清观看视频| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 国产淫语在线视频| 欧美另类亚洲清纯唯美| 欧美在线黄色| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 欧美丝袜亚洲另类 | 国产xxxxx性猛交| 黄色怎么调成土黄色| 亚洲av第一区精品v没综合| 婷婷成人精品国产| av网站在线播放免费| 久久久水蜜桃国产精品网| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 波多野结衣av一区二区av| 精品久久久久久久久久免费视频 | 啪啪无遮挡十八禁网站| 男人舔女人的私密视频| svipshipincom国产片| 国产免费现黄频在线看| 女同久久另类99精品国产91| 国产区一区二久久| 亚洲男人天堂网一区| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 久久精品亚洲av国产电影网| 一级a爱片免费观看的视频| 脱女人内裤的视频| 久久亚洲真实| 久久人人97超碰香蕉20202| 一进一出好大好爽视频| 日日夜夜操网爽| av网站免费在线观看视频| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 国产成人啪精品午夜网站| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| av电影中文网址| 亚洲黑人精品在线| 久久婷婷成人综合色麻豆| 大片电影免费在线观看免费| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 一区二区三区精品91| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 黑人欧美特级aaaaaa片| 狠狠狠狠99中文字幕| 国产成人欧美| 大片电影免费在线观看免费| 久久精品人人爽人人爽视色| 亚洲熟女毛片儿| 亚洲一区高清亚洲精品| 老汉色av国产亚洲站长工具| 97人妻天天添夜夜摸| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 深夜精品福利| 欧美不卡视频在线免费观看 | 日韩免费高清中文字幕av| 亚洲熟女精品中文字幕| 久久狼人影院| 精品国产国语对白av| 91国产中文字幕| 国产在线观看jvid| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产黄色免费在线视频| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 久久久久久久久免费视频了| 亚洲av日韩在线播放| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 欧美久久黑人一区二区| 国产成人精品无人区| 99久久人妻综合| 精品一区二区三区av网在线观看| 免费人成视频x8x8入口观看| 国产深夜福利视频在线观看| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 高清黄色对白视频在线免费看| 日韩欧美国产一区二区入口| 精品久久久久久久久久免费视频 | 在线观看日韩欧美| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 高清欧美精品videossex| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 波多野结衣av一区二区av| 亚洲国产中文字幕在线视频| 国产精品一区二区在线观看99| 妹子高潮喷水视频| 高清av免费在线| 99国产综合亚洲精品| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 亚洲国产中文字幕在线视频| 国产有黄有色有爽视频| 午夜精品国产一区二区电影| 正在播放国产对白刺激|