基于浸出物和特征圖譜的熵權(quán)TOPSIS法綜合評(píng)價(jià)仙鶴草藥材質(zhì)量

曾昭君 洪婉敏 鐘如帆 胡瑤 潘玲 干麗

摘 要 目的：基于浸出物和特征圖譜建立仙鶴草藥材的整體質(zhì)量評(píng)價(jià)模型，為該藥材的綜合質(zhì)量評(píng)價(jià)和優(yōu)質(zhì)種源篩選提供依據(jù)。方法：參照2015年版《中國(guó)藥典》（四部）通則采用不同的提取方法和溶劑條件，以浸出物含量和浸出物高效液相色譜（HPLC）特征圖譜總峰面積為指標(biāo)，通過(guò)加權(quán)綜合評(píng)分優(yōu)選仙鶴草浸出物的提取工藝。建立15批仙鶴草藥材的HPLC特征圖譜，并進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)和特征峰指認(rèn)。采用SPSS 25.0軟件對(duì)不同產(chǎn)地仙鶴草浸出物含量、藥材特征峰總峰面積進(jìn)行單因素方差分析和Pearson相關(guān)性分析，比較不同產(chǎn)地藥材的質(zhì)量?jī)?yōu)劣。以15批仙鶴草藥材的特征峰峰面積和浸出物含量為指標(biāo)，采用熵權(quán)逼近理想解排序法（TOPSIS）進(jìn)行該藥材綜合質(zhì)量評(píng)價(jià)。結(jié)果：優(yōu)選出以50%乙醇為溶劑、熱浸法提取的仙鶴草浸出物提取工藝。15批仙鶴草藥材的相似度均大于0.92，并指認(rèn)了4個(gè)特征成分（鞣花酸、槲皮苷、芹菜素、山柰酚）。不同產(chǎn)地的仙鶴草浸出物平均含量、藥材特征圖譜平均總峰面積均有顯著差異（P<0.05或P<0.01），且兩者呈正相關(guān)（r=0.86，P<0.01）。熵權(quán)TOPSIS法評(píng)價(jià)結(jié)果顯示，安徽、浙江、四川、河南、江蘇產(chǎn)仙鶴草藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)中的貼近度（Ci）均值依次為0.689、0.351、0.218、0.308、0.361。結(jié)論：各批樣品以安徽產(chǎn)仙鶴草藥材質(zhì)量最優(yōu)，江蘇、浙江產(chǎn)藥材質(zhì)量次之，河南產(chǎn)藥材質(zhì)量再次之，四川產(chǎn)地藥材質(zhì)量相對(duì)較差。所建立的仙鶴草浸出物提取工藝、藥材特征圖譜測(cè)定方法穩(wěn)定可行;用于仙鶴草藥材綜合質(zhì)量評(píng)價(jià)的熵權(quán)TOPSIS法客觀、可量化，能有效評(píng)價(jià)該藥材質(zhì)量。

關(guān)鍵詞 仙鶴草;浸出物;特征圖譜;熵權(quán)TOPSIS法;質(zhì)量評(píng)價(jià)

ABSTRACT ? OBJECTIVE： To establish an overall quality evaluation model for Agrimonia pilosa based on extract and characteristic spectrum， and to provide evidence for comprehensive quality evaluation of the medicinal material and screening of high-quality provenance. METHODS： Referring to different extraction method and solvent condition stated in 2015 edition of Chinese Pharmacopoeia （part Ⅳ）， using the content and total peak area of HPLC characteristic chromatogram of extract as indexes， and the extraction technology was optimized by weighted comprehensive score. HPLC characteristic spectrum of 15 batches of A. pilosa was established， and similarity evaluation and characteristic peak identification were performed. SPSS 25.0 software was used to conduct single factor analysis and Pearson correlation analysis for the extract content and total peak area of ? A. pilosa from different origins. The quality of medicinal materials from different origins were compared. Entropy weight TOPSIS method was adopted to evaluate comprehensive quality of A. pilosa using the extract content and total peak area of 15 batches of ? A. pilosa. RESULTS： The extraction technology of A. pilosa extract， which was extracted with hot dip plating using 50% ethanol as solvent， was optimized. The similarity of 15 batches of A. pilosa was higher than 0.92， and 4 characteristic components were identified （ellagic acid， quercetin， apigenin， kaempferol）. There were significant differences in average extract content and total peak area of characteristic chromatogram of A. pilosa from different origins （P<0.05 or P<0.01）， and there was a certain positive correlation between them （r=0.86， P<0.01）. Results of entropy weight TOPSIS evaluation showed that the average Ci values of ?A. pilosa in Anhui，Zhejiang，Sichuan，Henan and Jiangsu provinces were 0.689，0.351，0.218，0.308 and 0.361 respectively. CONCLUSIONS： The quality of A. pilosa from Anhui was the best，that from Zhejiang and Jiangsu was better，that from Henan was the second，and that from Sichuan was poor. Established extraction technology and characteristic spectrum determination method of A. pilosa are stable and feasible. The entropy weight TOPSIS model is objective and quantifiable for comprehensive quality evaluation of A. pilosa， and can effectively evaluate its quality.

KEYWORDS Agrimonia pilosa;Extract;Characteristic spectrum; Entropy weight TOPSIS method; Quality evaluation

仙鶴草為薔薇科植物龍芽草Agrimonia pilosa Ledeb.的干燥地上部分，主產(chǎn)于我國(guó)浙江、江蘇、湖北、安徽等地，多在夏秋兩季莖葉茂盛時(shí)采收;具有收斂止血、截瘧、止痢等功效，多用于治療咯血、吐血、崩漏下血、瘧疾、血痢等[1]。仙鶴草中主要含有黃酮類、三萜類、鞣質(zhì)類以及酚類等化學(xué)成分，以黃酮類、鞣質(zhì)類成分居多[2-5]?，F(xiàn)代藥理研究表明，仙鶴草中的黃酮類成分具有抗菌、抗病毒、降血糖、抗氧化等重要藥理活性[6-8];鞣質(zhì)類成分能在體外抑制肝癌、胃癌細(xì)胞增殖，其收斂止血及廣譜抗菌等作用顯著[8-15]。該藥材臨床使用量較大，控制其質(zhì)量對(duì)確保臨床療效有著重要意義[6]。

浸出物測(cè)定系指用水或其他適宜的溶劑對(duì)藥材和飲片中的可溶性物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定[16]，是中藥材質(zhì)量控制的重要部分，但2015年版《中國(guó)藥典》（一部）“仙鶴草”項(xiàng)下僅記載其鑒別和檢查等方法[1]，而未對(duì)浸出物含量進(jìn)行限定，也未采用液相色譜法等分析手段進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)。中藥特征圖譜是一種能較全面反映藥材質(zhì)量的重要方法，被廣泛應(yīng)用于藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)[17]?；诖耍狙芯繑M優(yōu)選仙鶴草浸出物的提取工藝并測(cè)定其浸出物含量;同時(shí)，建立仙鶴草藥材特征圖譜，并基于其浸出物含量和藥材特征圖譜，采用熵權(quán)逼近理想解排序法（TOPSIS）綜合評(píng)價(jià)15批不同產(chǎn)地仙鶴草藥材的質(zhì)量，為進(jìn)一步確保該藥材質(zhì)量的有效、穩(wěn)定以及優(yōu)質(zhì)種源的篩選提供參考依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

ARC型高效液相色譜（HPLC）儀，含二極管陣列（PDA）檢測(cè)器（美國(guó)Waters公司）;KQ-700DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;ME204E型萬(wàn)分之一分析天平（瑞士Mettler Toledo公司）;111B型二兩裝高速中藥粉碎機(jī)（瑞安市永歷制藥機(jī)械有限公司）;DHG-9147A型電熱恒溫干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）;HWS28型電熱恒溫水浴鍋（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 藥品與試劑

槲皮苷對(duì)照品（批號(hào)：111538-201606，純度：≥90.6%）、芹菜素對(duì)照品（批號(hào)：111901-201603，純度：≥99.2%）、山柰酚對(duì)照品（批號(hào)：110861-201611，純度：≥95.5%）、鞣花酸對(duì)照品（批號(hào)111959-201903，純度：≥89.3%）均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院;磷酸、甲醇、乙腈均為色譜純，乙醇為分析純，水為超純水。

15批仙鶴草藥材分別于2017 年采集自安徽亳州市、浙江衡州市、四川成都市、河南南陽(yáng)市、江蘇淮安市，并于同市不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)各采集3批，經(jīng)過(guò)廣東一方制藥有限公司魏梅主任藥師鑒定為薔薇科植物龍芽草A. pilosa Ledeb.的干燥地上部分，且符合2015年版《中國(guó)藥典》（一部）要求[1]。12批仙鶴草樣品來(lái)源信息見(jiàn)表1。

2 方法與結(jié)果

2.1 仙鶴草藥材HPLC特征圖譜測(cè)定方法的建立

2.1.1 色譜條件 色譜柱：Eclipse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）;流動(dòng)相：乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B），梯度洗脫（0～30 min，13%A;30～65 min，13%A→22%A;65～80 min，22%A→30%A;80～100 min，30%A）;流速：1.0 mL/min;柱溫：30 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm;進(jìn)樣量：10 μL。

2.1.2 溶液的制備 ①混合對(duì)照品溶液：分別稱取鞣花酸、槲皮苷、芹菜素、山柰酚對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL分別含鞣花酸10.72 μg、槲皮苷70.65 μg、芹菜素6.96 μg、山柰酚4.18 μg的混合對(duì)照品溶液，用0.22 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。②供試品溶液：取仙鶴草藥材粉末（過(guò)三號(hào)篩，下同）1.0 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇25 mL，密塞，稱定質(zhì)量，加熱回流45 min，取出，放冷，再次稱定質(zhì)量，用50%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，用0.22 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.1.3 精密度試驗(yàn) 取仙鶴草藥材（編號(hào)：S14）粉末適量，按“2.1.2②”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6 次測(cè)定，結(jié)果得12個(gè)特征峰。以峰面積較大、分離度較好的6號(hào)色譜峰作為參照峰（S）進(jìn)行計(jì)算，其余11個(gè)特征峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD均小于1.0%（n=6）、相對(duì)峰面積的RSD均小于2.0%（n=6），表明方法精密度良好。

2.1.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批仙鶴草藥材（編號(hào)：S14）粉末適量，共6份，按“2.1.2②”項(xiàng)下方法平行制備供試品溶液，再按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。以6號(hào)色譜峰作為參照峰（S）進(jìn)行計(jì)算，其余11個(gè)特征峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD均小于1.0%（n=6）、相對(duì)峰面積的RSD 均小于2.0%（n=6），表明方法重復(fù)性較好。

2.1.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取仙鶴草藥材（編號(hào)：S14）粉末適量，按“2.1.2②”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件分別于室溫下放置0、2、4、8、12、24 h時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。以6 號(hào)色譜峰作為參照峰（S）進(jìn)行計(jì)算，其余11個(gè)特征峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD均小于1.0%（n=6）、相對(duì)峰面積的RSD均小于2.0%（n=6），表明供試品溶液在室溫下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2 仙鶴草浸出物提取工藝的建立

2.2.1 仙鶴草浸出物的提取條件 取仙鶴草藥材（編號(hào)：S14）粉末（過(guò)三號(hào)篩，下同）約4 g，共24份，精密稱定，置于250 mL錐形瓶中，分別按2015年版《中國(guó)藥典》（四部）通則“2201冷浸法和熱浸法”[16]，均分別以水、50%乙醇、75%乙醇、95%乙醇各100 mL為溶劑進(jìn)行提?。ú煌崛》椒?、溶劑條件均平行3份樣品操作），用干燥濾器迅速濾過(guò)，備用。

2.2.2 不同提取方法和溶劑對(duì)仙鶴草浸出物含量的影響 精密量取“2.2.1”項(xiàng)下所得樣品濾液25 mL，分別置于已干燥至恒質(zhì)量的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，再于105 ℃干燥3 h后置于干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定質(zhì)量，以干燥品計(jì)算仙鶴草浸出物含量[浸出物含量（%）=（干燥品質(zhì)量×稀釋體積）/（取樣質(zhì)量×取樣體積）×100%]，結(jié)果見(jiàn)表2。如表2所示，以不同溶劑采用熱浸法提取后所測(cè)得的仙鶴草浸出物含量均高于以相應(yīng)溶劑采用冷浸法提取所得的浸出物含量，且相同提取方法、不同溶劑所得浸出物的含量排序均為50%乙醇>75%乙醇>水>95%乙醇。

2.2.3 不同提取方法和溶劑對(duì)仙鶴草浸出物特征圖譜總峰面積的影響 取“2.2.1”項(xiàng)下仙鶴草浸出物濾液適量，以0.22 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。采用Origin 2018軟件繪制其HPLC疊加特征圖譜，詳見(jiàn)圖1;浸出物特征峰總峰面積見(jiàn)表3。如圖1、表3所示，在不同體積分?jǐn)?shù)乙醇提取條件下，冷浸法和熱浸法所得仙鶴草浸出物的主要色譜峰個(gè)數(shù)均基本一致;以水為提取溶劑時(shí)，所得部分浸出物的色譜峰無(wú)法檢出，且特征峰總峰面積存在較大差異;此外，不同溶劑熱浸法較之于相應(yīng)溶劑冷浸法提取所得浸出物的特征峰總峰面積更高，且相同提取方法、不同溶劑提取所得浸出物的特征峰總峰面積排序均為50%乙醇>75%乙醇>95%乙醇>水。

2.2.4 仙鶴草浸出物提取工藝優(yōu)化 以浸出物的含量、浸出物特征峰總峰面積再結(jié)合過(guò)濾速度（即浸出物提取液用干燥濾器濾過(guò)的快慢）為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用綜合加權(quán)評(píng)分法進(jìn)行仙鶴草浸出物提取工藝評(píng)價(jià)。分別計(jì)算浸出物含量、特征峰總峰面積、過(guò)濾速度的得分（某指標(biāo)得分=該指標(biāo)測(cè)定值/該指標(biāo)最大值×100），并擬定浸出物含量、特征峰總峰面積、過(guò)濾速度的權(quán)重分別為0.4、0.4、0.2，計(jì)算綜合評(píng)分（綜合評(píng)分=浸出物含量/浸出物含量最大值×40+特征峰總峰面積/特征峰總峰面積最大值×40+過(guò)濾速度/過(guò)濾速度最大值×20），結(jié)果見(jiàn)表4。如表4所示，熱浸法所得綜合評(píng)分總體高于冷浸法，表明熱浸法用于提取仙鶴草浸出物的效果更優(yōu)。選擇綜合評(píng)分最高（94.0分）的工藝為仙鶴草浸出物的最優(yōu)提取工藝，即以50%乙醇為溶劑、采用熱浸法提取。

2.3 仙鶴草藥材HPLC特征圖譜的建立

2.3.1 HPLC特征圖譜的生成 取15批仙鶴草藥材粉末，按“2.1.2②”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，使用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)軟件（2012版）》進(jìn)行共有峰匹配。以編號(hào)為S1的仙鶴草藥材的色譜圖為參照?qǐng)D譜，將時(shí)間窗寬度設(shè)為0.1 min，采用多點(diǎn)校正法進(jìn)行色譜峰匹配，選擇中位數(shù)法生成對(duì)照?qǐng)D譜（R）。15批仙鶴草藥材的HPLC疊加特征圖譜見(jiàn)圖2，對(duì)照?qǐng)D譜（R）見(jiàn)圖3A。

2.3.2 相似度評(píng)價(jià) 采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012 版）》，以仙鶴草藥材對(duì)照?qǐng)D譜為參照進(jìn)行15批樣品的整體相似度評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示，15批仙鶴草（編號(hào)：S1～S15）的相似度依次為0.965、0.993、0.992、0.993、0.990、0.994、0.977、0.946、0.954、0.966、0.985、0.995、0.926、0.984、0.964，均大于0.92，且與對(duì)照?qǐng)D譜具有較好的一致性，表明藥材批間差異較小、質(zhì)量穩(wěn)定性較好。

2.3.3 特征峰的指認(rèn) 15批仙鶴草藥材樣品共有12個(gè)共有特征峰，取“2.1.2①”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。通過(guò)與此對(duì)照品圖譜比對(duì)，指認(rèn)了仙鶴草對(duì)照?qǐng)D譜（R）中的2號(hào)峰為鞣花酸、6號(hào)峰為槲皮苷、11號(hào)峰為芹菜素、12號(hào)峰為山柰酚?；旌蠈?duì)照品溶液色譜圖見(jiàn)圖3B。

2.4 15批仙鶴草浸出物含量和藥材特征圖譜總峰面積的測(cè)定和兩者相關(guān)性分析

2.4.1 15批仙鶴草浸出物含量和藥材特征圖譜總峰面積的測(cè)定 取15批不同產(chǎn)地仙鶴草藥材，采用“2.2.4”項(xiàng)下所得最佳提取工藝（50%乙醇、熱浸法）提取，并按“2.2.2”項(xiàng)下方法測(cè)定并計(jì)算浸出物含量;同時(shí)，取上述不同產(chǎn)地仙鶴草藥材，按“2.3”項(xiàng)下方法檢測(cè)，獲得特征圖譜總峰面積，結(jié)果見(jiàn)表5。

采用SPSS 25.0軟件對(duì)不同產(chǎn)地的15批仙鶴草的浸出物含量、藥材特征圖譜總峰面積進(jìn)行單因素方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)不同產(chǎn)地仙鶴草樣品（每個(gè)地區(qū)各3批）的測(cè)定結(jié)果取平均值后顯示，其浸出物平均含量、藥材平均特征總峰面積均有顯著差異：安徽、江蘇產(chǎn)仙鶴草的浸出物平均含量、藥材特征圖譜平均總峰面積均顯著高于四川產(chǎn)仙鶴草，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）;安徽產(chǎn)藥材特征圖譜平均總峰面積也顯著高于浙江、河南產(chǎn)仙鶴草，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）。不同產(chǎn)地的仙鶴草浸出物平均含量排序?yàn)椋喊不?江蘇>浙江≈河南>四川;藥材特征圖譜平均總峰面積排序?yàn)椋喊不?江蘇≈浙江>河南>四川。綜上，以安徽產(chǎn)仙鶴草藥材質(zhì)量整體較優(yōu)，詳見(jiàn)圖4。

2.4.2 相關(guān)性分析 采用SPSS 25.0軟件對(duì)15批仙鶴草浸出物含量、藥材特征峰總峰面積進(jìn)行Pearson相關(guān)性分析。結(jié)果顯示，浸出物含量與藥材特征峰總峰面積呈顯著相關(guān)（P<0.01）。以浸出物含量為橫坐標(biāo)（X，%）、藥材特征圖譜總峰面積為縱坐標(biāo)（Y），采用Prism 8.01軟件繪制線性曲線（見(jiàn)圖5），并求得線性關(guān)系方程：Y=13 159X-81 273（r=0.86）。結(jié)果表明，仙鶴草浸出物含量與藥材特征圖譜總峰面積呈正相關(guān)。

2.5 熵權(quán)TOPSIS法綜合評(píng)價(jià)仙鶴草藥材質(zhì)量

采用熵權(quán)TOPSIS法[18-20]綜合評(píng)價(jià)仙鶴草藥材質(zhì)量。15批仙鶴草藥材中共有12個(gè)共有特征峰（4個(gè)特征峰被指認(rèn)），以其中的6號(hào)峰（槲皮苷）作為參照峰（S），計(jì)算得各特征峰的相對(duì)峰面積和相對(duì)保留時(shí)間，詳見(jiàn)表6、表7。

將15批仙鶴草藥材中的12個(gè)特征峰的峰面積和浸出物的含量數(shù)據(jù)等13個(gè)指標(biāo)進(jìn)行同向標(biāo)準(zhǔn)化處理：假設(shè)m個(gè)樣本（m=15）有n個(gè)指標(biāo)（n=13），根據(jù)以下公式（1）（2）對(duì)原始試驗(yàn)數(shù)據(jù)建立標(biāo)準(zhǔn)決策矩陣，后進(jìn)行歸一化處理，計(jì)算越大越優(yōu)型指標(biāo)和越小越優(yōu)型指標(biāo)的標(biāo)化值（Rij）。由于本研究中13個(gè)指標(biāo)均為越大越優(yōu)型指標(biāo)，故采用公式（1）計(jì)算：

Rij=[Xij-min（X1j，X2j，…，Xmj）

max（X1j，X2j，…，Xmj）-min（X1j，X2j，…，Xmj）] … （1）

Rij=[max（X1j，X2j，…，Xmj）-Xij

max（X1j，X2j，…，Xmj）-min（X1j，X2j，…，Xmj）] … （2）

利用熵權(quán)法評(píng)價(jià)指標(biāo)的熵值（Eij），來(lái)反映樣品數(shù)據(jù)的離散程度并體現(xiàn)評(píng)價(jià)指標(biāo)的重要性，并計(jì)算得出1～12號(hào)特征峰的峰面積和浸出物含量這13個(gè)指標(biāo)的權(quán)重（Wj）=（0.124，0.095，0.052，0.081，0.054，0.068，0.084，0.059，0.033，0.056，0.097，0.134，0.062）。熵值（Ej）和權(quán)重（Wj）按公式（3）（4）計(jì)算：

Ej=-k[∑][i=1][m]RijlnRij…（3）

Wj=[1-Ej

[∑][j=1][n]（1-Ej）] [（[∑][j=1][n]Wj=1）]……………………（4）

以權(quán)重賦值標(biāo)準(zhǔn)化決策矩陣，進(jìn)一步構(gòu)建加權(quán)決策矩陣（Z），并確定最優(yōu)向量（Z +）與最劣向量（Z-）。按公式（5）（6）（7）計(jì)算，得Z +=（0.124，0.095，0.052，0.081，0.054，0.068，0.084，0.059，0.033，0.056，0.097，0.134，0.062），Z-=（0，0，0，0，0，0，0，0，0，0，0，0，0）;并按公式（8）（9）計(jì)算每個(gè)樣本與Z+和Z-的距離（Di+、Di-）及最優(yōu)方案的的貼近度（Ci），其中Ci取值為0～1，越接近1表示評(píng)價(jià)樣本越接近最優(yōu)水平，越接近0則越接近最劣水平，結(jié)果見(jiàn)表8。

如表8所示，安徽、浙江、四川、河南、江蘇產(chǎn)仙鶴草藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)中Ci均值依次為0.689、0.351、0.218、0.308、0.361（n=3），以安徽產(chǎn)藥材的Ci均值最接近1，表明其質(zhì)量最優(yōu);其次為江蘇、浙江產(chǎn)藥材，再次為河南產(chǎn)藥材，而四川產(chǎn)地藥材質(zhì)量相對(duì)較差。其中，安徽產(chǎn)的3批藥材Ci值排前3位，表明該產(chǎn)地的仙鶴草藥材整體質(zhì)量更優(yōu)，可作為優(yōu)良種質(zhì)資源進(jìn)一步研究與開發(fā)。

3 討論

浸出物的測(cè)定是用于鑒別、檢查中藥及其飲片質(zhì)量的重要方法之一。由于中藥成分復(fù)雜，部分中藥中有效成分尚不明確，故以浸出物作為質(zhì)量評(píng)價(jià)的指標(biāo)之一，對(duì)于中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立具有重要意義。2015年版《中國(guó)藥典》（一部）未對(duì)仙鶴草浸出物含量進(jìn)行規(guī)定，因此本研究采用不同提取方法和提取溶劑，優(yōu)選仙鶴草浸出物最佳提取工藝并進(jìn)行含量測(cè)定。

中藥特征圖譜現(xiàn)已被廣泛應(yīng)用于整體反映中藥成分復(fù)雜性的研究中，可對(duì)某些特征成分進(jìn)行指認(rèn)及分析，是中藥的有效質(zhì)量控制與評(píng)價(jià)方法。因此，本研究在測(cè)定仙鶴草浸出物含量的基礎(chǔ)上，同時(shí)建立了仙鶴草藥材的特征圖譜，共得到12個(gè)特征峰，并指認(rèn)了鞣花酸、槲皮苷、芹菜素、山柰酚等4個(gè)化合物。近年來(lái)，越來(lái)越多研究發(fā)現(xiàn)，鞣花酸可抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲[21];山柰酚、槲皮苷能有效降低糖尿病模型小鼠的血糖水平[22]，也是治療結(jié)腸癌的潛在活性成分[23];槲皮苷及其衍生物也可用于阿爾茨海默病的治療[10];芹菜素具有舒張動(dòng)脈血管、降血壓、抗炎、殺菌等多種藥理活性[24-26]。所以，本研究以特征圖譜對(duì)不同產(chǎn)地的仙鶴草藥材進(jìn)行的測(cè)定分析，可為仙鶴草藥材質(zhì)量差異所引起的藥理、藥效研究提供一定的數(shù)據(jù)支撐。

本研究測(cè)定了15批不同產(chǎn)地仙鶴草浸出物含量和藥材特征圖譜總峰面積。結(jié)果顯示，不同產(chǎn)地浸出物含量均值排序?yàn)椋喊不?江蘇>浙江≈河南>四川;不同產(chǎn)地特征峰總峰面積均值排序?yàn)椋喊不?江蘇≈浙江>河南>四川。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，浸出物含量和藥材特征圖譜總峰面積具有一定的正相關(guān)性，即浸出物含量越高，相應(yīng)批次藥材的特征峰總峰面積越大。但僅從浸出物含量或特征峰的峰面積分析仙鶴草藥材質(zhì)量較單一，故本研究進(jìn)一步以浸出物含量和藥材特征圖譜峰面積為指標(biāo)，采用熵權(quán)TOPSIS法建立整體質(zhì)量評(píng)價(jià)模型，對(duì)15批仙鶴草藥材進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示，5個(gè)產(chǎn)地樣品的Ci均值排序?yàn)椋喊不?江蘇≈浙江>河南>四川，3批安徽產(chǎn)樣品（S1～S3）的Ci值排前3位。由此可見(jiàn)，仙鶴草浸出物含量、藥材特征圖譜總峰面積與熵權(quán)TOPSIS法綜合評(píng)價(jià)結(jié)果基本一致，均以安徽產(chǎn)仙鶴草藥材質(zhì)量整體較高。本文采用的熵值法對(duì)各指標(biāo)進(jìn)行客觀權(quán)重賦值，能避免主觀意識(shí)對(duì)評(píng)價(jià)結(jié)果的影響，降低主觀性[19];再結(jié)合TOPSIS法通過(guò)計(jì)算各指標(biāo)對(duì)最優(yōu)方案的貼近度，提高整體綜合分析的科學(xué)性與準(zhǔn)確性[19]，可實(shí)現(xiàn)對(duì)不同產(chǎn)地仙鶴草整體質(zhì)量評(píng)價(jià)以及優(yōu)質(zhì)種源篩選的目的。

綜上所述，本研究基于浸出物和藥材HPLC特征圖譜，采用熵權(quán)TOPSIS法建立了仙鶴草藥材整體質(zhì)量評(píng)價(jià)模型，以多個(gè)測(cè)定指標(biāo)對(duì)不同產(chǎn)地仙鶴草藥材進(jìn)行綜合質(zhì)量評(píng)價(jià)，符合中藥的整體性概念;所采用的熵權(quán)TOPSIS評(píng)價(jià)法客觀、可量化，能做出比較科學(xué)、全面的判斷。今后有待進(jìn)一步對(duì)該藥材尚未指認(rèn)的特征峰進(jìn)行液質(zhì)聯(lián)用分析，以期對(duì)不同產(chǎn)地仙鶴草藥材中化學(xué)成分進(jìn)行更全面的差異分析。

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（收稿日期：2020-07-09 修回日期：2020-10-15）

（編輯：段思怡）