不同栽培措施對(duì)黨參藥材化學(xué)質(zhì)量的影響

高石曼+劉久石+孫恬+劉鳳松+景浩+齊耀東+張本剛+劉海濤+肖培根

[摘要]研究不同栽培措施對(duì)黨參藥材化學(xué)成分的影響，為黨參藥材的合理種植提供參考依據(jù)。以甘肅省岷縣黨參藥材規(guī)范化種植基地不同栽培措施種植的黨參藥材為材料，通過(guò)HPLC指紋圖譜分析、黨參炔苷和黨參多糖的含量測(cè)定，對(duì)黨參藥材樣品進(jìn)行化學(xué)質(zhì)量評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示不同栽培措施對(duì)黨參藥材的化學(xué)質(zhì)量具有一定的影響，黨參炔苷和黨參多糖的含量差異明顯。其中，按照黨參炔苷含量的高低順序?yàn)椋翰皇┯脡迅`>施用壯根靈，不打尖、搭架>不打尖、不搭架>打尖、搭架>打尖、不搭架；按照黨參多糖含量的高低順序?yàn)椋翰皇┯脡迅`>施用壯根靈，不打尖、搭架>不打尖、不搭架>打尖、不搭架>打尖、搭架?；诨瘜W(xué)質(zhì)量評(píng)價(jià)結(jié)果，不施用壯根靈、不打尖、搭架是種植黨參藥材較佳的栽培措施。

[關(guān)鍵詞]黨參； 栽培措施； 質(zhì)量評(píng)價(jià)

[Abstract]To observe the influence of different cultivation measures on the chemical constituents of Codonopsis Radix and provide reference for its reasonable cultivation， Codonopsis Radix samples cultivated by different cultivation measures were collected from the planting base in Min county，and their quality were evaluated by establishing HPLC fingerprint and determining the content of lobetyolin and Codonopsis Radix polysaccharide. The results show that different cultivation measures have an effect on the quality of Codonopsis Radix and the contents of lobetyolin and Codonopsis Radix polysaccharide are obviously different. According to the content of lobetyolin， not using Zhuanggenling>using Zhuanggenling. While， not pinching， shelving>not pinching， not shelving>pinching， shelving>pinching， not shelving. According to the content of Codonopsis Radix polysaccharide， not using Zhuanggenling>using Zhuanggenling. While， not pinching， shelving>not pinching， not shelving>pinching， not shelving>pinching， shelving. Based on the chemical quality evaluation results， the appropriate cultivation measure of Codonopsis Radix is not using Zhuanggenling， not pinching and shelving.

[Key words]Codonopsis Radix； cultivation measure； chemical quality evaluation

doi：10.4268/cjcmm20162009

黨參為桔?？浦参稂h參Codonopsis pilosula （Franch.） Nannf.、素花黨參C. pilosula Nannf. var. modesta （Nannf.） L. T. Shen或川黨參C. tangshen Oliv.的干燥根，具有補(bǔ)中益氣、生津養(yǎng)血、扶正祛邪的功效^[1]。黨參主要分布于華北、東北、西北地區(qū)，全國(guó)多數(shù)地區(qū)引種，以山西潞黨和臺(tái)黨、甘肅紋黨、四川晶黨、陜西鳳黨最著名，為道地藥材。通過(guò)文獻(xiàn)查閱發(fā)現(xiàn)，影響黨參藥材產(chǎn)量及質(zhì)量的主要因素有：土壤含水量、移栽、田間管理、農(nóng)藥及化肥施用、生長(zhǎng)年限、采收期、加工方式等^[2-11]。前期在對(duì)黨參藥材主產(chǎn)區(qū)的資源調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，施用壯根靈、打尖、搭架等栽培措施會(huì)對(duì)黨參藥材的產(chǎn)量及質(zhì)量產(chǎn)生一定的影響。因此，本研究通過(guò)設(shè)計(jì)施用壯根靈、打尖、搭架等不同栽培實(shí)驗(yàn)區(qū)考察不同栽培措施對(duì)黨參藥材化學(xué)質(zhì)量的影響，應(yīng)用高效液相色譜建立黨參藥材的HPLC指紋圖譜，并對(duì)黨參藥材中與補(bǔ)益脾胃相關(guān)的活性成分黨參炔苷的含量進(jìn)行測(cè)定，另外采用紫外-可見(jiàn)分光光度法對(duì)黨參藥材中與抗腫瘤、增強(qiáng)免疫功能及抗氧化相關(guān)的活性成分黨參多糖的含量進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)化學(xué)質(zhì)量的評(píng)價(jià)結(jié)果，確定黨參藥材的最佳栽培種植技術(shù)，為黨參藥材的合理栽培種植和資源開(kāi)發(fā)利用提供參考依據(jù)。

1 材料

Waters 2695-2996高效液相色譜系統(tǒng)（USA），Empower 2工作站，AL204電子分析天平（METTLER TOLEDO），KQ-300DE 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），UV2550紫外分光光度儀（SHIMADZU，JAPAN），XMTD-6000水浴鍋（北京市長(zhǎng)風(fēng)儀器儀表公司）。乙腈為色譜純（Honeywell，USA），超純水（Milli-Q System，USA），甲醇、乙醇、硫酸為分析純（北京化工廠），苯酚（天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所）。黨參炔苷（天津馬克生物技術(shù)有限公司，純度大于>98%，批號(hào)20151202），無(wú)水葡萄糖（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)110833-201205）。壯根靈（蘭州義順工貿(mào)有限公司）。

在甘肅省定西市岷縣十里鎮(zhèn)十里村黨參藥材規(guī)范化種植基地（34°29′ N， 103°57′ E，2 340 m），設(shè)計(jì)施用壯根靈、打尖、搭架等不同栽培措施實(shí)驗(yàn)區(qū)6個(gè)，每個(gè)小區(qū)設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)小區(qū)面積66 m²，并設(shè)置中間保護(hù)行1 m。樣品采集于2015年10月，共計(jì)18份，樣品采集信息見(jiàn)表1，經(jīng)中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所張本剛研究員鑒定為桔梗科植物黨參C. pilosula，憑證標(biāo)本保存于中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所藥用植物資源研究中心。

2 方法與結(jié)果

2.1 打尖、搭架的試驗(yàn)操作方法

2.1.1 打尖 打尖處理，在黨參營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)旺盛期，即7月中旬，對(duì)苗高35～40 cm的植株，在距地面15 cm左右處打尖，當(dāng)藤蔓再次長(zhǎng)到40 cm時(shí)，再打一次，共打尖2次，選擇天晴、田間土壤干燥時(shí)按方案進(jìn)行打尖。不打尖處理，與傳統(tǒng)管理辦法相同，任其自然生長(zhǎng)。

2.1.2 搭架 搭架處理，用直徑1 cm左右、長(zhǎng)1.5 m左右的竹桿，每平方米按正三角形搭架。頂端用鐵絲扎緊，下端插入土壤10 cm深左右。在苗高30～50 cm時(shí)，選擇天晴、田間土壤干燥時(shí)按方案進(jìn)行搭架。不搭架處理，與傳統(tǒng)管理辦法相同，任其自然生長(zhǎng)。

2.2 提取工藝優(yōu)選

在預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選擇提取溶劑（A）、料液比（B）、超聲時(shí)間（C）、超聲次數(shù)（D）為考察因素，以黨參炔苷提取量為指標(biāo)，設(shè)計(jì)L₉ （3⁴）正交試驗(yàn)優(yōu)化超聲提取條件，其中因素水平見(jiàn)表2，試驗(yàn)安排及結(jié)果見(jiàn)表3，方差分析見(jiàn)表4。由直觀分析可知，各因素對(duì)黨參中黨參炔苷的提取率的影響順序?yàn)锳>D>C>B，方差分析表明各因素對(duì)黨參炔苷提取率的影響均無(wú)顯著性差異。綜合考慮，確定黨參超聲提取優(yōu)化后的條件為70%甲醇超聲提取，料液比為1∶30，超聲2次，每次30 min。

2.3 HPLC指紋圖譜分析

2.3.1 色譜條件 色譜柱 Waters XBridge C₁₈（4.6 mm×250 mm， 5 μm）；進(jìn)樣量 10 μL；檢測(cè)波長(zhǎng) 267 nm；柱溫 30 ℃；流速 0.8 mL·min^-1；進(jìn)樣量 10 μL；流動(dòng)相水（A）-乙腈（B），洗脫梯度：0～8 min，5% B，8～10 min，5%～8% B，10～25 min，8%～15% B，25～26 min，15%～20% B，26～36 min，20% B，36～48 min，20%～37% B，48～55 min，37%～60% B，55～70 min，60% B，70～80 min，60%～90% B，80～90 min，90% B。

2.3.2 對(duì)照品溶液的制備 取黨參炔苷對(duì)照品適量，精密稱定，加色譜甲醇制成每1 mL含40 μg的溶液，將對(duì)照品溶液保存于4 ℃冰箱中備用。

2.3.3 供試品溶液的制備 取黨參藥材樣品細(xì)粉約1 g，精密稱定，加70%甲醇30 mL，稱重，超聲2次，每次30 min，取出，放冷，稱重，并用70%甲醇補(bǔ)足失重，濾過(guò)，取續(xù)濾液過(guò)0.22 μm濾膜，即得。

2.3.4 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液（S1）10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，考察特征色譜峰保留時(shí)間和峰面積的一致性。各個(gè)特征色譜峰的保留時(shí)間和峰面積基本一致，與其共有模式圖譜的相似度大于0.993，符合指紋圖譜的要求。

2.3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液（S1）10 μL，分別在0，4，8，12，24 h進(jìn)行測(cè)定，以黨參炔苷為觀測(cè)指標(biāo)，考察色譜峰保留時(shí)間和峰面積的一致性。各個(gè)特征色譜峰的保留時(shí)間和峰面積基本一致，與其共有模式圖譜的相似度大于0.992， 表明在24 h內(nèi)黨參供試品溶液穩(wěn)定性良好。

2.3.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一供試品（S1）6份，精密稱定，按2.3.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣10 μL，考察特征色譜峰保留時(shí)間和峰面積的一致性。各個(gè)特征色譜峰的保留時(shí)間和峰面積基本一致，與其共有模式圖譜的相似度大于0.990，符合指紋圖譜的要求。

2.3.7 指紋圖譜的建立 按照2.3.1項(xiàng)下色譜條件，建立了18份黨參藥材樣品的HPLC指紋圖譜。采用國(guó)家藥典委員會(huì)編寫(xiě)的《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》（2004A 版）軟件對(duì)圖譜進(jìn)行處理，生成共有模式的對(duì)照指紋圖譜R，其中包括共有峰25個(gè)。通過(guò)與對(duì)照品比較，指認(rèn)18號(hào)峰為黨參炔苷，將其設(shè)為參照峰，標(biāo)記為S。18份黨參藥材樣品的共有模式的對(duì)照指紋圖譜R 及HPLC 指紋圖譜分別見(jiàn)圖1，2。

2.3.8 相似度分析 利用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2004 A版）軟件對(duì)18份黨參藥材樣品的指紋圖譜數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)算相似度，結(jié)果見(jiàn)表5。結(jié)果表明，18份黨參藥材樣品之間的化學(xué)成分具有一定的差異性，即不同栽培措施對(duì)黨參藥材的化學(xué)質(zhì)量具有一定影響。比較施用壯根靈對(duì)黨參藥材化學(xué)質(zhì)量的影響，發(fā)現(xiàn)與對(duì)照指紋圖譜R相比，壯根靈施用與否對(duì)黨參藥材整體化學(xué)成分的一致性影響不大。比較不同打尖、搭架栽培措施對(duì)黨參藥材化學(xué)質(zhì)量的影響，發(fā)現(xiàn)與對(duì)照指紋圖譜R相比，不打尖、不搭架和不打尖、搭架栽培的黨參藥材相似度最高，其次為打尖、不搭架栽培的黨參藥材，打尖、搭架栽培的黨參藥材相似度較低，以上說(shuō)明打尖、搭架的栽培措施對(duì)黨參藥材整體化學(xué)成分的一致性影響較大，不同程度地影響黨參藥材質(zhì)量的穩(wěn)定性。

2.3.9 聚類分析 以18份黨參藥材樣品作為研究對(duì)象，進(jìn)行HPLC指紋圖譜分析，獲得25個(gè)共有色譜峰。以18號(hào)峰為參照峰，計(jì)算共有色譜峰的相對(duì)峰面積，運(yùn)用SPSS 21軟件對(duì)其進(jìn)行聚類分析。經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)，施用壯根靈與未施用壯根靈的黨參藥材難以分開(kāi)，說(shuō)明兩者整體化學(xué)成分的差異較小。對(duì)不同打尖、搭架栽培措施種植的12份黨參藥材樣品進(jìn)行聚類分析，結(jié)果見(jiàn)圖3。12份黨參藥材樣品可以分為2類，其中打尖、不搭架栽培的黨參藥材樣品聚為一類，其余黨參藥材樣品聚為一類。后者分為2類，即不打尖、不搭架栽培的黨參藥材樣品聚為一類，其余黨參藥材樣品聚為一類。聚類分析的結(jié)果表明，不同的打尖、搭架栽培措施種植的黨參藥材樣品間化學(xué)成分差異較大，其中打尖、不搭架栽培的黨參藥材樣品的化學(xué)成分與其他樣品差異性最大，不打尖、搭架和打尖、搭架栽培的黨參藥材樣品間化學(xué)成分的差異性最小。

2.4 黨參炔苷的含量測(cè)定

2.4.1 線性關(guān)系 精密吸取黨參炔苷對(duì)照品溶液2，4，6，8，10，15 μL，在2.3.1項(xiàng)的色譜條件下測(cè)定含量，記錄色譜峰面積，以峰面積（Y）對(duì)進(jìn)樣量（X， μg）進(jìn)行線性回歸，所得回歸方程為Y=643 575X-6 822.8，r=0.999 9，結(jié)果表明黨參炔苷在0.08～0.60 μg線性關(guān)系良好。取黨參炔苷對(duì)照品儲(chǔ)備液，逐步稀釋，在相同色譜條件下進(jìn)樣，測(cè)得黨參炔苷的檢測(cè)限為0.099 μg（S/N=3），定量限為0.331 μg（S/N=10）。

2.4.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一份黨參供試品溶液（S1）10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得的黨參炔苷峰面積的RSD 0.09%，表明儀器精密度良好。

2.4.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一份黨參樣品（S1），共取6份，精密稱定，分別按2.3.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣10 μL，記錄色譜數(shù)據(jù)。計(jì)算黨參炔苷含量的RSD 0.57%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取黨參供試品溶液（S1）10 μL，分別在0，4，8，12，24 h進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果黨參炔苷的峰面積RSD 0.19%，表明黨參供試品溶液在室溫下24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.5 加樣回收率試驗(yàn) 稱取已知含量的黨參藥材樣品粉末1 g，精密稱定，共取9份，分別加入高、中、低3種不同質(zhì)量的黨參炔苷對(duì)照品，精密加入70%甲醇溶液30 mL，稱定質(zhì)量，超聲2次，每次30 min，取出，放冷，稱重，并用70%甲醇補(bǔ)足失重，濾過(guò)，取續(xù)濾液過(guò)0.22 μm濾膜，即得。結(jié)果平均回收率在99.17%～101.1%，RSD 0.49%～1.1%，見(jiàn)表6。

2.4.6 樣品測(cè)定 取不同批次的黨參藥材樣品細(xì)粉1 g，精密稱定，按上述色譜條件2.3.3項(xiàng)下制備黨參供試品溶液，分別吸取10 μL進(jìn)樣，根據(jù)線性回歸方程計(jì)算黨參中黨參炔苷的含量，結(jié)果見(jiàn)表7。

2.4.7 數(shù)據(jù)分析 將18份黨參藥材樣品中黨參炔苷的含量數(shù)據(jù)導(dǎo)入SPSS 21軟件進(jìn)行分析，得到不同栽培措施的黨參藥材樣品中黨參炔苷含量的均值及變異程度，見(jiàn)圖4。方差結(jié)果表明，不同栽培措施的黨參藥材樣品中黨參炔苷的含量有顯著性差異（P<0.05）。其中，不施用壯根靈>施用壯根靈，其含量差異具有顯著性（P<0.05）；不打尖、搭架>不打尖、不搭架>打尖、搭架>打尖、不搭架，其中采用不打尖、搭架栽培措施種植的黨參藥材樣品中黨參炔苷的含量顯著高于其余黨參藥材樣品（P<0.05）。

2.5 黨參多糖的含量測(cè)定

2.5.1 對(duì)照品溶液的制備 取無(wú)水葡萄糖對(duì)照品適量，精密稱定，加水制成每1 mL含0.11 mg的溶液，即得。

2.5.2 供試品溶液的制備 取60 ℃干燥至恒重的黨參藥材樣品細(xì)粉約0.25 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加80%乙醇150 mL，置水浴中加熱回流1 h，趁熱濾過(guò)，殘?jiān)?0%熱乙醇洗滌3次，每次10 mL，將殘?jiān)盀V紙置燒瓶中，加水150 mL，置沸水浴中加熱回流1 h，趁熱濾過(guò)，殘?jiān)盁坑脽崴礈?次，每次10 mL，合并濾液與洗液，放冷，轉(zhuǎn)移至250 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密量取2 mL，定容至10 mL量瓶中，精密量取1 mL，置10 mL具塞干燥試管中，精密加入5%苯酚溶液1 mL，搖勻，再精密加硫酸5 mL，搖勻，置沸水浴中加熱20 min，取出，置冰浴中冷卻5 min，以相應(yīng)試劑為空白，照紫外-可見(jiàn)分光光度法（通則0401），在490 nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。

2.5.3 線性關(guān)系 精密量取對(duì)照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mL，分別置10 mL具塞試管中，各加水補(bǔ)至1.0 mL，按照2.5.2項(xiàng)，自“精密加入5%苯酚溶液”開(kāi)始操作，測(cè)定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)（Y），質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X， g·L^-1），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。所得回歸方程為Y=87.341X+0.020 5，r=0.999 8，結(jié)果表明無(wú)水葡萄糖在0.022～0.110 mg線性關(guān)系良好。

2.5.4 精密度試驗(yàn) 精密吸取供試品（S1）1 mL置試管中，按照2.5.2項(xiàng)下，自“精密加入5%苯酚溶液1 mL”起依法操作，冷卻至室溫后，將同一份反應(yīng)液間隔0，4，8，12，24 h測(cè)定吸光度，連續(xù)測(cè)定6次，記錄吸光度，結(jié)果RSD 0.16%，表明儀器精密度良好。

2.5.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取黨參藥材（S1）樣品細(xì)粉約0.25 g，精密稱定，共6份，按照2.5.2項(xiàng)下操作，制備供試液，分別精密量取0.2 mL，置具塞試管中，按照2.5.2項(xiàng)下自“精密加入5%苯酚溶液1 mL”起依法操作，測(cè)定吸光度，結(jié)果RSD 0.22%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.5.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品（S1）1 mL置試管中，按照2.5.2項(xiàng)下，自“精密加入5%苯酚溶液1 mL”起依法操作，冷卻至室溫后，將同一份反應(yīng)液間隔0，4，8，12，24 h測(cè)定吸光度，結(jié)果RSD 0.82%，表明供試液在顯色后的24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5.7 加樣回收試驗(yàn) 精密稱取已知含量的同批樣品（S1）細(xì)粉0.025 g，共6份，按2.5.2項(xiàng)下的步驟，醇沉后在藥渣中各加入無(wú)水葡萄糖對(duì)照品粉末，制備供試品溶液，按照2.5.2項(xiàng)下自“精密加入5%苯酚溶液1 mL”起依法操作，測(cè)定吸光度，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表8。結(jié)果表明黨參多糖的平均加樣回收率在99.08%～100.3%，RSD 0.69%～1.3%，回收率結(jié)果良好。

2.5.8 黨參多糖含量測(cè)定 取不同批次的黨參藥材樣品細(xì)粉0.25 g，精密稱定，按上述2.2.2項(xiàng)下制備供試品溶液，并根據(jù)線性回歸方程計(jì)算黨參多糖的含量，見(jiàn)表9。

2.5.9 數(shù)據(jù)分析 將18份黨參藥材樣品中黨參多糖含量數(shù)據(jù)導(dǎo)入SPSS 21軟件進(jìn)行分析，得到不同栽培措施的黨參藥材樣品中黨參多糖含量的均值及變異程度，見(jiàn)圖5。結(jié)果表明，不同栽培措施的黨參藥材樣品中黨參多糖含量有顯著性差異（P<0.05）。其中，不施用壯根靈>施用壯根靈，其含量差異具有顯著性（P<0.05）；不打尖、搭架>不打尖、不搭架>打尖、不搭架>打尖、搭架，其中采用不打尖、搭架栽培措施種植的黨參藥材樣品中黨參多糖的含量顯著高于其余黨參藥材樣品（P<0.05）。

3 結(jié)論與討論

提取方法的考察：比較了冷浸、熱回流、超聲3種提取方法。結(jié)果表明，超聲提取可以得到相對(duì)豐富的色譜信息，且對(duì)黨參炔苷的提取率更高，因此采用超聲的提取方法。之后，設(shè)計(jì)L₉ （3⁴）正交試驗(yàn)優(yōu)化超聲提取條件，選擇提取溶劑、料液比、超聲時(shí)間、超聲次數(shù)為考察因素，以黨參炔苷提取量為指標(biāo)，最終確定黨參超聲提取優(yōu)化后的條件為70%甲醇超聲提取，料液比為1∶30，超聲2次，每次30 min。

色譜柱的選擇：比較了Waters XBridge C₁₈ （4.6 mm×250 mm，5 μm），Agilent Eclipse XDB-C₁₈ （4.6 mm×250 mm，5 μm），Agilent ZORBAX SB-C₁₈ （4.6 mm×250 mm，5 μm），Agilent Poroshell 120 SB-C₁₈ （4.6 mm×100 mm，2.7 μm） 4種色譜柱對(duì)黨參中化學(xué)成分的分離效果。對(duì)比4種色譜柱所形成的指紋圖譜，前3種色譜柱所形成的色譜圖的峰數(shù)差別較小，其中Waters XBridge C₁₈色譜柱的色譜峰峰形和分離度更佳，可以得到更多的色譜信息。Agilent Poroshell 120 SB-C₁₈相對(duì)前3種色譜柱出峰時(shí)間提前，但色譜峰峰形和分離度稍差，且基線波動(dòng)較大，故選用Waters XBridge C₁₈ （4.6 mm×250 mm，5 μm）。

流動(dòng)相系統(tǒng)的選擇：比較了甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.05%甲酸水、乙腈-0.1%甲酸水、乙腈-0.2%甲酸水、乙腈-0.1%乙酸水等作為流動(dòng)相系統(tǒng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)以乙腈-水的梯度洗脫對(duì)黨參中各種化學(xué)成分的分離效果較好，提供了豐富的色譜信息，故確定乙腈-水為流動(dòng)相。

苯酚-硫酸法是多糖含量測(cè)定的經(jīng)典方法之一。本實(shí)驗(yàn)對(duì)黨參多糖的提取方法進(jìn)行了線性關(guān)系、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性及加樣回收率等的方法學(xué)考察，結(jié)果各項(xiàng)指標(biāo)良好，因此該方法可用于黨參多糖的含量測(cè)定。另外，本實(shí)驗(yàn)選用醇沉水提的方法提取黨參多糖，與傳統(tǒng)的水提醇沉方法相比，減少了精制多糖的步驟，可避免多糖在精制過(guò)程中的損失，使測(cè)定結(jié)果更加準(zhǔn)確、真實(shí)，并減少了實(shí)驗(yàn)的工作量，提高了實(shí)驗(yàn)效率，適用于黨參多糖的含量測(cè)定。

壯根靈是一種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，在黨參藥材的栽培過(guò)程中使用較為普遍，其主要化學(xué)成分有氨基酸、五氧化二磷、氧化鉀、微量元素等，通過(guò)抑制黨參原植物莖葉的生長(zhǎng)發(fā)育，控制其不結(jié)籽或少結(jié)籽，減少植物養(yǎng)分消耗，延緩葉片衰老，增強(qiáng)光合效率，從而促進(jìn)地下根的生長(zhǎng)，達(dá)到提高黨參商品等級(jí)、增產(chǎn)創(chuàng)收的目的，一般于花蕾期噴施1～2次。打尖是通過(guò)減少地上部分的營(yíng)養(yǎng)消耗，從而有利于地下部分養(yǎng)分的積累，一般于黨參營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)旺盛期，選擇天晴、田間土壤干燥時(shí)進(jìn)行。搭架的目的是使黨參莖蔓攀援，以利通風(fēng)透光，增強(qiáng)光合能力，促進(jìn)苗壯苗旺，減少病蟲(chóng)害，防止因通風(fēng)透光不良造成雨季爛秧，易染病害，影響參根與種子的產(chǎn)量，一般當(dāng)參苗生長(zhǎng)至合適的高度時(shí)，選擇合適的方法搭架。

本研究通過(guò)設(shè)計(jì)施用壯根靈、打尖、搭架等不同栽培實(shí)驗(yàn)區(qū)獲得相應(yīng)的黨參藥材樣品，以黨參藥材HPLC指紋圖譜、黨參炔苷含量和黨參多糖含量為考察指標(biāo)，研究了壯根靈的施用、打尖、搭架等栽培措施對(duì)于黨參藥材化學(xué)質(zhì)量的影響，為制定黨參藥材的合理栽培種植技術(shù)提供了參考。研究表明，不同栽培措施種植的黨參藥材化學(xué)成分上具有一定的差異，其中，壯根靈施用與否對(duì)黨參藥材化學(xué)成分的整體性影響不大，但施用壯根靈的黨參藥材中黨參炔苷和黨參多糖的含量均明顯下降，分析原因可能是由于壯根靈加速黨參植物生長(zhǎng)，導(dǎo)致其次生代謝產(chǎn)物的積累減少的緣故。比較打尖、搭架栽培措施對(duì)黨參藥材質(zhì)量的影響，經(jīng)過(guò)聚類分析，打尖、搭架，打尖、不搭架，不打尖、搭架和不打尖、不搭架4種栽培措施的黨參藥材樣品可以很好地被分開(kāi)，說(shuō)明打尖、搭架等栽培措施對(duì)黨參藥材的化學(xué)質(zhì)量具有一定的影響，其中，黨參炔苷含量由高到低依次為不打尖、搭架>不打尖、不搭架>打尖、搭架>打尖、不搭架，黨參多糖含量由高到低依次為不打尖、搭架>不打尖、不搭架>打尖、不搭架>打尖、搭架。由此可知，不打尖、搭架栽培措施種植的黨參藥材中黨參炔苷、黨參多糖含量均為最高，分析原因可能是由于打尖在一定程度上限制了黨參植物光合作用的葉面積，使得根部有效成分的積累總量受到一定影響。綜上所述，基于化學(xué)質(zhì)量評(píng)價(jià)結(jié)果，較佳的栽培措施為：不施用壯根靈、不打尖、搭架。

[參考文獻(xiàn)]

[1]中國(guó)藥典.一部[S]. 2015：281.

[2]張定全， 張娟. 隴西縣白條黨參產(chǎn)量與生育期主要?dú)庀髼l件的相關(guān)性分析[J].甘肅農(nóng)業(yè)科技， 2008（8）：11.

[3]彭銳， 馬鵬， 王俊. 農(nóng)藝措施對(duì)川黨參產(chǎn)量和品質(zhì)的影響研究[J]. 重慶中草藥研究， 2009（1）：4.

[4]彭銳， 馬鵬， 孫年喜， 等. 施肥對(duì)川黨參質(zhì)量和產(chǎn)量的影響研究[J]. 世界科學(xué)技術(shù)——中醫(yī)藥現(xiàn)代化， 2010， 12（2）：254.

[5]龔成文， 趙欣楠， 馮守疆， 等. 配方施肥對(duì)黨參生產(chǎn)特性的影響[J]. 西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)， 2013， 22（11）：130.

[6]馮守疆， 龔成文， 劉生戰(zhàn)， 等. 黨參專用肥對(duì)黨參產(chǎn)量及品質(zhì)的影響[J]. 甘肅農(nóng)業(yè)科技， 2013（12）：36.

[7]王愛(ài)娜， 秦雪梅， 張勇， 等. 高效液相色譜法測(cè)定不同產(chǎn)地黨參中蒼術(shù)內(nèi)酯III 的含量[J]. 中國(guó)藥學(xué)雜志， 2005， 40（9）：1436.

[8]潘麗珠， 王躍進(jìn)， 王有為. 板橋黨參最佳采收期的研究[J]. 武漢植物學(xué)研究， 2006， 24（1）：67.

[9]陳玉武， 劉漢斌， 張鳳萍， 等. 不同干燥方法對(duì)黨參質(zhì)量的影響[J]. 甘肅中醫(yī)， 2010， 23（7）：69.

[10]賀玉林， 李先恩， 潘廣州， 等. 黨參質(zhì)量變異研究[J]. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥， 2006， 17（9）：1727.

[11]吳鳳玉， 陳培安， 繆春平. 黨參的加工儲(chǔ)藏及濕度控制[J]. 海峽藥學(xué)， 2008， 20（7）：94.

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