外泌體提取方法及在肺癌早期診斷中的作用研究進展

羅丹 李春雷 武倫 陳琴華

肺癌是世界范圍內發(fā)病率較高的惡性腫瘤之一[1]，它的死亡率在各類癌癥中高居榜首，并明顯呈現(xiàn)出逐年上升的趨勢[2]，是一種嚴重威脅國民生命健康的重大疾病。目前，由于缺乏精準有效的早期診斷方法、腫瘤細胞容易轉移和治療后復發(fā)率較高等各種原因，肺癌患者5年生存率較低，總體上不超過15%[3]。盡管目前國內外有很多的藥物研發(fā)、肺癌發(fā)生發(fā)展研究和為改進肺癌治療策略所做的努力，但肺癌仍然是預后不良的一種典型疾病[4]。

肺癌的早期診斷是肺癌預防和治療過程中的關鍵環(huán)節(jié)之一，但目前可以用于肺癌早期診斷的方法非常局限，胸部X線敏感性較差[5]、螺旋計算機斷層掃描（computed tomography,CT）敏感性高，但準確性和特異性較差[6]。肺癌的早期診斷依然面臨著巨大的技術瓶頸和挑戰(zhàn)，大多數腫瘤體積已經生長到足夠大時甚至腫瘤細胞已經開始轉移時才能夠被傳統(tǒng)的診斷技術檢測出來[7]，這時患者病情已經處于中晚期，進行針對性治療比較困難并且預后情況較差，這導致肺癌患者的總體生存率較低[8]。目前在肺癌的臨床診斷和治療中所采用的腫瘤原發(fā)灶-淋巴結-轉移（tumor-node-metastasis,TNM）分期標準具有準確性較差、分型效率較低、不能有效地指導臨床治療和預后判斷等缺點[9]，尤其是對于開展肺癌患者的個體化治療及預后評估等方面所發(fā)揮的作用極為有限。早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療對于降低肺癌患者的死亡率，提高其生存率具有極其重要的意義，而外泌體是肺癌早期診斷中極具前景的一類檢測對象，在肺癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用。外泌體內部含有豐富的生物大分子物質，可以為肺癌的早期臨床診斷提供有價值的信息，這在肺癌早期診斷中具有重要意義。

1 液體活檢在肺癌早期診斷中的意義

“液體活檢”技術是一種非侵入式的微創(chuàng)的疾病檢測方法，基于液體活檢的早期分子診斷技術[10]，近年來逐漸成為一個研究熱點。它區(qū)別于傳統(tǒng)的手術活檢技術和穿刺活檢技術，主要利用癌癥患者的體液如血液、尿液、乳汁、唾液等來檢測腫瘤的循環(huán)生物標志物，從而獲得相關疾病的遺傳信息[11]，為疾病的早期診斷和治療提供新的思路和方法。液體活檢具有操作簡便、非侵入式[12,13]、成本較低、副作用小[14]、樣品采集方便、可以重復取樣、對于患者的傷害較小、患者的可接受程度較高等[15]優(yōu)勢，可早于影像學條件下發(fā)現(xiàn)腫瘤，適合用于相關疾病的早期診斷。這也為肺癌患者的早期診斷和輔助臨床治療提供了一種新思路和新途徑，從而改善肺癌患者預后情況、提高肺癌患者的生活質量并且降低肺癌患者的死亡率。

大量研究表明，通過檢測和分析腫瘤患者外周循環(huán)血液中存在的生物標志物，如循環(huán)腫瘤細胞（circulating tumor cells,CTCs）[16]、外泌體、DNA或RNA等物質，可以探知腫瘤相關的基因信息，這也為檢測和監(jiān)控腫瘤的動態(tài)演變提供了一個強有力的證據[17]。CTCs是從實體腫瘤中脫離出來并進入外周血液循環(huán)的腫瘤細胞。CTCs的數目一般較少，而血液中血細胞的數量龐大，檢測CTCs的關鍵在于根據CTCs的物理學特征（大小、密度、電荷、可變形性）和生物學特征（表面抗原、侵襲性等），來實現(xiàn)CTCs從血液中的識別和富集[18]。目前不管是通過物理學特征和生物學特征來識別CTCs都面臨著巨大的技術挑戰(zhàn)，CTCs的異質性對識別和富集方法會產生一定的影響，且腫瘤患者血液中為數不多的CTCs很難完整反映整個腫瘤的整體信息。而由腫瘤細胞釋放到各種體液中的外泌體含量豐富，這些外泌體與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及轉移具有一定的相關性。因此，利用腫瘤細胞釋放到血液中的外泌體，檢測其中特異性的遺傳信息等，可以分析腫瘤相關的信息。通過液體活檢技術連續(xù)監(jiān)測肺癌患者外周循環(huán)血液中腫瘤標志物的變化，可進一步了解肺癌的發(fā)生發(fā)展過程[19]。因此，將液體活檢技術廣泛應用于肺癌早期診斷的工作中，是目前迫切亟需解決的問題，也可為肺癌早期診斷的臨床研究奠定堅實的基礎。

2 外泌體在液體活檢早期診斷中的作用和意義

在肺癌液體活檢的各種檢測物質中，最具有檢測前景的一類檢測對象是肺癌來源的外泌體。外泌體最初被Johnstone等描述為一種由網織紅細胞分泌的獨特的物質小泡，1987年“外泌體”一詞被提出用來指代那些在細胞內形成、釋放于細胞外的微小型細胞外囊泡[20]。近年來多項研究表明，由于外泌體存在于人體的大多數體液中，其穩(wěn)定性比較好并且其內容物與親本細胞具有較大的相似性[21]，通過檢測和提取外泌體中的內容物可以獲知其親本細胞相關的遺傳物質和信息。人體各種體液中的外泌體含量豐富、特異性高、大小均勻，包含豐富的同腫瘤相關的基因信息，如特異性生物標志物（RNAs、DNAs、脂質和蛋白質）等生物分子，直接或間接調控受體細胞的表達，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起著極其重要的調控作用。目前已有一系列的臨床研究利用外泌體作為生物標志物，Cecilia等[22]研究發(fā)現(xiàn)miR-21的表達增加與非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）患者的預后惡化有關。Zhou等[23]篩選了肺癌患者外泌體中的6種miRNA，包括miR-19-3p、miR-21-5p、miR-221-3p、miR-409-3p、miR-425-5p和miR-584-Sp，其中miR-19-3p、miR-21-5p和miR-221-3p與正常人相比表達上調，差異具有統(tǒng)計學意義。通過精確檢測分析外泌體內容物的類型、含量等特性，可以輔助肺癌的早期診斷。因此，外泌體具有很大的潛力發(fā)展成為一種肺癌早期診斷的生物標志物，作為肺癌的液體活檢工具[24]，對肺癌的早期診斷具有重要價值。

2.1 外泌體概述 外泌體是一種由細胞主動分泌的由膜包裹的[25]大小均一、直徑約為30 nm-200 nm的脂質雙分子層結構小囊泡[26]。外泌體的內容物包含不同類型的核苷酸和蛋白質，這些核苷酸和蛋白質來源于其親本細胞（包括親本癌細胞）[27]，外泌體廣泛分布于各種體液中，如血液、尿液、乳汁和唾液等[28]。外泌體是在質膜雙內陷和細胞內多泡小體（multivesicular bodies,MVBs）形成過程中產生的，外泌體起源于質膜循環(huán)途徑中的膜腔或早期胞內體[29]，它們向內凹陷形成管腔內膜泡，逐漸發(fā)展成為MVBs，MVBs在細胞內發(fā)生移動與其親本細胞質膜表面進行融合，然后通過胞吐作用以外泌體的形式分泌至細胞外，最終形成外泌體[30]。血漿膜的第一次內陷形成一個杯狀結構，包括細胞表面蛋白和與胞外環(huán)境相關的可溶性蛋白。MVBs既可以與溶酶體或自噬體融合降解，也可以與質膜融合釋放含有腔內小泡的外泌體[30]。外泌體的組成成分繁多而復雜，其內部含有豐富的生物學大分子物質，如單鏈RNA、長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA,lncRNA）、微小RNA（microRNA,miRNA）、蛋白質、脂類[31-33]、氨基酸和代謝物，外泌體的內容物可以反映它們的起源細胞，可為腫瘤的臨床診斷方面提供有價值的遺傳信息。

2.2 外泌體生物學作用 外泌體最早被認為是細胞內信息交流的一種運輸載體，此后，有研究者[24]發(fā)現(xiàn)外泌體具有免疫調控和抗原呈遞作用。外泌體可介導細胞與細胞間的相互交流，這與其含有大量的核苷酸（mRNA、miRNA、lncRNA、核糖體RNA等）、蛋白質（膜轉運蛋白、融合蛋白、熱休克蛋白等）、脂質（膽固醇、磷脂、甘油二脂等）密切相關[34]。其中，CD63、CD81等蛋白是外泌體特有的標志性蛋白[35]，可作為外泌體的生物學鑒定標志。各細胞間信息交流的異常調節(jié)和異常交換導致了腫瘤的發(fā)生。在腫瘤細胞的發(fā)生進展中，由腫瘤細胞分泌的外泌體通過膜蛋白與靶細胞進行識別并融合，將其內部所含的miRNAs等物質釋放至靶細胞，從而調節(jié)受體細胞的轉錄[24]。

外泌體利用分子機制和基因機制將其所攜帶的各類遺傳信息以循環(huán)往復的方式進行近距離或遠距離的傳遞[36]，參與細胞間的物質交換和信息交流活動，同時參與各種生理、病理過程和腫瘤細胞的生長及轉移過程[34]。研究發(fā)現(xiàn)，由于外泌體在肺癌患者體內呈現(xiàn)異常表達的狀態(tài)[37]，這提示著外泌體具有成為肺癌早期診斷生物標志物的巨大潛力[38]。外泌體作為一種細胞間通訊信息交換的載體[39]，目前在國內外已開展了外泌體細胞間信號轉導、腫瘤診斷及靶向治療等多領域的綜合研究。

2.3 外泌體的提取與分離方法 外泌體作為一種生物信息載體，其實際價值如同血漿、胸水等，但其提取分離的特異性及效率卻是一個影響其應用的重要問題。由于外泌體納米級別的分子尺寸大小，外泌體的提取與分離方法一直以來是一個尚未徹底解決的問題。外泌體的異質性非常強，其顆粒直徑大小不同，差異甚大，目前對于外泌體的分離和鑒定方法并無統(tǒng)一標準。由于缺乏特異性的標志物，目前暫時無法對提取效果做出客觀判斷。來自于腫瘤的生物標志物（外泌體）在血液樣本中的表達豐度非常的低[40]，當前傳統(tǒng)的外泌體提取和檢測技術還遠遠不能滿足高靈敏度提取和檢測液體活檢所需生物樣品的要求。目前外泌體的提取方法有：超速離心沉淀法[41]、試劑盒提取法（Exo QuickTM法、qEV技術）[42,43]、磁珠免疫分析法[44]及微流控技術等。這些技術在提取分析液體活檢生物樣品外泌體時都存在各自的優(yōu)點與不足之處：提取費時費力、提取效率較低[45]、對外泌體損傷較大[46]、提取的外泌體容易受到蛋白的污染且提取純度較低[47]等；此外，試劑盒提取法（ExoQuickTM法、qEV技術）所運用到的試劑盒價格昂貴、所需成本較高[48,49]，很難在臨床和實際操作上實現(xiàn)大規(guī)模的運用。下面將具體闡述現(xiàn)有的各種提取外泌體的技術和方法。

2.3.1 超速離心沉淀法 基于超速離心的外泌體分離技術被認為是外泌體提取與分離的金標準[46]，絕大部分外泌體研究中所使用的外泌體分離方法都是超速離心法。當非均質混合物（懸浮液）受到離心力作用時，懸浮液中的顆粒成分將根據其密度、大小和形狀，將更大密度的或更大的顆粒首先沉淀出來[45]。離心通常用于分離和純化顆粒材料以及分析聚合物材料（包括核酸和蛋白質等生物聚合物）的水動力特性。應用時，懸浮液中的顆?？筛鶕湮锢硇再|和溶劑的密度和黏度依次分離[41]。在外泌體的分離方面，制備性超速離心是一個重要的部分，因為它的目的是分離病毒、細菌、亞細胞器和細胞外囊泡等小的生物制品[45]。

超速離心的方案一般開始時要使用亞微米過濾器或低速離心機去除雜質，如細胞碎片、微泡或凋亡小體。然后，使用超速離心機以至少100,000×g的轉速進行多次超速離心使外泌體沉淀，離心管管底產生的沉淀即外泌體[46]。除去上清液，然后將其重新懸浮在相對少量（200 μL左右）的PBS緩沖液中，產生濃縮樣品，即可提取到外泌體。這種超高速的離心方法不僅需要大量的初始資金成本（超級離心機價格＞10萬美元），而且還需要大量的維護和運營成本；除了高昂的費用之外，超速離心是一個耗時且勞動密集的過程，通常需要熟練技術人員或研究人員進行4 h-6 h的長時間工作[41]。為了滿足實驗所需的外泌體濃度和體積，還需要收集大體積（＞100 mL）的樣品量[50]。最后，它仍然不會產生非常純的樣品，純度只有5%-23%[51]。最終的外泌體樣品仍然會受到蛋白質的污染，并且結果往往是高度可變的。

2.3.2 磁珠免疫分析法 超速離心沉淀法的替代方案是通過磁珠和抗體功能化的支柱和填料進行免疫親和捕獲。外泌體的表面表達有大量的標志蛋白和特異性受體[44]，這為外泌體的高特異性提取提供了一個極好的機會。這些蛋白與其抗體可以發(fā)生免疫親和識別作用，受體與其所對應的配體之間存在特異性結合作用[44]，因此，基于免疫親和力捕獲的外泌體分離技術已經被開發(fā)出來，這種磁珠免疫分析法適用于從其他流體組分中分離出外泌體。然而，該技術僅限于提取表面具有已知抗原的外泌體[45]。此外，由細胞分泌的大部分外泌體往往具有異源性，這大大限制了該方法的使用和推廣。研究[52]表明，在不同來源的外泌體表面上能夠大量表達的相同蛋白質并不常見。因此，使用基于磁珠免疫分析法的外泌體的提取方法目前僅成功地分離了存在于患者體內的一小部分外泌體。如果想要捕獲所有的外泌體，而不僅僅是具有特定抗原的外泌體，磁珠免疫分析的方法是不充分不完全的。盡管磁珠加速了外泌體的后續(xù)分析，但購買磁珠所需成本較高且外泌體與磁珠的分離過程非常耗時，可能需要超過一天才能達到最佳回收率[53]。

2.3.3 試劑盒提取法System Biosciences（SBI） 在2009年底發(fā)明了一種利用聚合物沉淀法進行外泌體分離的技術[26]。這項技術的工作原理是在“聚合物網”中捕獲和收集一定尺寸范圍（60 nm-150 nm）的外泌體，這些外泌體可以通過在離心機進行1,500×g簡單的低速離心進行回收[46]。目前該項技術已經用于商用，SBI將該項技術的商標名命名為Exo QuickTM和Exo Quick TCTM[54]。Exo Quick技術中的聚合物配方在特定的化合物條件下引入時形成網絡，并且在4oC-5oC的條件下進行孵育[55]。外泌體作為單個納米顆粒，需要通過超速離心獲得很高的重力才能使外泌體顆粒脫離溶液，將它們聚集在由聚合物分支形成的聚合物袋或網中，這些細胞外納米囊泡能夠在低重力離心力的條件下恢復[26]。利用該種方法可提取獲得外泌體顆粒，除去含有過量聚合物的上清液，將外泌體重新懸浮在合適的緩沖溶液中，如PBS溶液[56]。這個重懸過程稀釋了外泌體顆粒中的殘留聚合物，PBS溶解聚合物網并釋放出完整的外泌體。Exo QuickTM法提取與分離外泌體的整個過程只需30 min[57]，這種方法所提取的外泌體產量高于超速離心沉淀法和磁珠免疫分析法。任何物種的生物流體樣本中的外泌體都可以使用這種Exo QuickTM的技術進行分離[57]。但利用這種技術提取分離外泌體的方法所需的試劑盒價格昂貴、成本較高，目前很難在臨床和實際操作中實現(xiàn)大規(guī)模應用。

近年來出現(xiàn)一種新型外泌體提取試劑盒，由IZON公司（新西蘭）研發(fā)生產且已商業(yè)化使用的qEV試劑盒是一種根據尺寸排阻原理（size-exclusion chromatography,SEC）設計的外泌體提取分離技術[58]。qEV試劑盒可以從細胞上清液或各種生物樣品中（血漿、血清、尿液、唾液等）高效、簡便、無損地提取出外泌體，且提取的外泌體不包括囊泡聚合物，受蛋白污染的可能性較小，外泌體的生物活性較高[59]。但使用該技術每次提取的外泌體體積約為1.5 mL左右[58]，導致外泌體的濃度較低，如需提取高濃度的外泌體，則要進行進一步的外泌體富集與純化工作。

2.3.4 微流控技術 近年來利用微流控技術提取外泌體也較為廣泛，Liu等[60]在2017年報道了一種基于尺寸分離的外泌體總分離芯片（exosome total isolation chip,ExoTIC）用于外泌體的提取與分離，該方法操作簡便、易用、高通量、可自動化，利用微流控技術可從各種生物流體中利用壓力驅動流體的方法高效分離出高純度的外泌體。ExoTIC提取外泌體的產量比超速離心法高出4倍-1,000倍，ExoTIC是一個模塊化平臺，它可以根據腫瘤細胞外泌體的大小對異源群體進行分類。Liu等[60]利用ExoTIC從癌癥患者的臨床生物樣本中分離出外泌體，包括血漿、尿液和灌洗液，證明該裝置對癌癥和其他疾病具有廣泛的適用性。該技術提取外泌體的關鍵核心為不同系列尺寸大小的納米孔薄膜，由于該納米孔薄膜的孔形為商業(yè)柱形孔，柱形孔在較強壓力的驅動作用下承壓能力較弱，易發(fā)生納米孔形變，出現(xiàn)堵孔現(xiàn)象。因為該納米孔薄膜的損傷不可逆，如果將該技術應用于大量生物樣本外泌體的提取，需進一步優(yōu)化納米孔薄膜的承壓能力，提高其廣泛性和實用性。

3 外泌體在肺癌早期診斷中的作用

由腫瘤分泌的外泌體幾乎可以在所有類型的體液中有效檢測到。由于外泌體成分極其復雜，含有多種蛋白、核酸等，不同疾病、不同個體甚至不同病期都有很大差異。外泌體內部所含的miRNA、蛋白質等生物分子的穩(wěn)定性較高，相比于游離miRNA和蛋白質更加穩(wěn)定，可如實地反映其分泌細胞的生理狀態(tài)及病理特征，作為液體活檢的檢測標志物，外泌體具有良好的生物學前景。

3.1 外泌體的蛋白標志物 外泌體中含有多種蛋白質成分，如表面蛋白與胞內蛋白，可以促進肺癌的發(fā)生發(fā)展，與肺癌的早期診斷與預后有著密切的聯(lián)系[61]。大量外泌體的標志性膜蛋白可以作為肺癌的診斷生物標志物，如目前已發(fā)現(xiàn)的有CD91、CD317、表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor,EGFR）等[62]。研究[63]表明，用生物素結合的CD151、CD171和tetraspanin8抗體的混合物來檢測和捕獲外泌體比傳統(tǒng)的外泌體提取方法有著更強的外泌體分離能力。更重要的是，研究發(fā)現(xiàn)外泌體中CD151、CD171、tetraspanin8的水平在肺癌患者中高表達，其表達水平明顯高于正常人，進而提示著我們CD151、CD171、tetraspanin8有著作為強有力的肺癌早期診斷的蛋白標志物的潛力。另外，NY-ESO-1、EGFR、PLAP、上皮細胞黏附分子（epithelial cell adhesion molecule,EpCAM）和Alix等外泌體膜表面蛋白對預測肺癌患者遠期總體生存率有顯著的作用，可以作為潛在的預后標志物[34]。

除了外泌體的表面標志性膜蛋白外，實驗人員發(fā)現(xiàn)外泌體中所含有的蛋白質也可作為肺癌早期診斷的生物標志物。David等[64]用氨基酸穩(wěn)定同位素定量標記（stable isotope labeling with amino acids,SILAC）的定量蛋白組學方法分析了721種外泌體蛋白，并發(fā)現(xiàn)了許多與增殖相關的細胞信號分子，如SRC、EGFR等與信號轉導相關的蛋白在NSCLC外泌體中富集，并能積極調節(jié)腫瘤受體細胞增殖。通過對NSCLC外泌體蛋白組的研究，有助于發(fā)現(xiàn)與肺癌進展相關的外泌體富集蛋白物質，這可能對NSCLC生物標志物的發(fā)現(xiàn)和發(fā)展具有潛在的臨床意義。Niu等[65]研究了125例NSCLC患者和46名正常人血清中腫瘤衍生的外泌體生物標志物，以提高中國NSCLC患者的診斷價值。與健康對照組相比，NSCLC患者外泌體中AHSG和ECM1的表達水平顯著升高，表明在NSCLC患者血清外泌體中發(fā)現(xiàn)的蛋白標志物AHSG和ECM1顯示出潛在的診斷價值。

3.2 外泌體的核酸標志物 外泌體中的RNA是其內含物中重要的組成部分，肺癌患者外泌體中的RNA較正常人群表達水平明顯升高，這與肺癌的發(fā)生發(fā)展、侵襲轉移等生物學特性密切相關[66]。近年來有大量文獻報道，外泌體中的循環(huán)miRNAs可作為肺癌的潛在診斷標志物。Cazzoli等[67]從30名受試者的血漿外泌體中鑒定出4種miRNA（miR-378a、miR-379、miR-139-5p和miR-200b-5p），以篩選和區(qū)分肺癌患者和健康對照組。與外泌體蛋白類似，外泌體miRNA的表達水平也可以作為評估肺癌患者預后的指標。Liu等[68]的研究結果表明，高表達水平的外泌體miRNA（miR-23b-3p、miR-10b-5p、miR-21-5p）與肺癌患者的不良預后明顯相關，并且聯(lián)合多種miRNA分析具有更高的敏感性與特異性。Cecilia等[22]研究發(fā)現(xiàn)miR-21的表達增加與NSCLC患者的預后惡化有關。有研究[69]發(fā)現(xiàn)在NSCLC來源的外泌體的miRNA中，miR-10b-5p、miR-15b-5p具有診斷鱗癌的特異性，而miR-181-5p、miR-30a-3p、miR-30e-3p和miR-361-5p具有診斷腺癌的特異性，通過下一代測序（next-generation sequencing,NGS）平臺檢測miR-320b，驗證了其診斷的準確性。

根據Zhang等[70]的報道，肺癌患者術后外泌體中miR-500a-3p、miR-501-3p和miR-502-3p的表達顯著上調，這提示著miR-500a-3p、miR-501-3p和miR-502-3p可能與腫瘤的進展有關，這些變化也可能與腫瘤生長過程中持續(xù)的炎癥反應相關。分析顯示miR-500a-3p、miR-501-3p和miR-502-3p的上調與肺癌患者總體生存率的提高有關，雖然這三種miRNAs在肺癌中的發(fā)生機制尚不清楚，但在其他癌癥類型中也觀察到它們的促腫瘤作用。這提示著我們，外泌體中miR-500a-3p、miR-501-3p和miR-502-3p有著作為肺癌早期診斷標志物的巨大潛力。此外，蘇超粵等[71]調研文獻發(fā)現(xiàn)，利用 miRNA 測序和定量聚合酶鏈反應（q-polymerase chain reaction,qPCR）技術檢測41例 I 期NSCLC患者與42名健康正常人中的血漿外泌體miRNA及其Ct值，以篩選和確定NSCLC特異性的miRNA，結果發(fā)現(xiàn)miR-181b-5p、miR-361b-5p、miR-10b-5p和miR-320b這4種miRNA 具有鑒別肺腺癌、肺鱗癌及非 NSCLC 患者的能力。因此，通過非侵入性的方式（液體活檢）檢測外泌體中具有差異表達的miRNA可用于肺癌的早期診斷。鑒于以上優(yōu)點，外泌體有望替代傳統(tǒng)的肺癌篩查工具及檢查方法應用于臨床工作中，為肺癌的早期診斷提供新的技術思考并奠定堅實的理論依據。

4 展望

外泌體在肺癌的發(fā)生發(fā)展過程中具有重要作用。外泌體作為腫瘤微環(huán)境中細胞間交流的載體，促進了肺癌的發(fā)生發(fā)展過程。同時，它也是肺癌診斷及預后的潛在生物標志物。要探索外泌體在肺癌的早期診斷中所發(fā)揮的作用，首先要建立一套外泌體專屬的提取與分離方法，而當前傳統(tǒng)的外泌體提取和分離技術還遠遠不能滿足高靈敏度提取和分離液體活檢所需外泌體的要求。這需要我們研發(fā)出更好的外泌體提取與分離方法，進一步推動外泌體與肺癌早期診斷研究的發(fā)展，這具有重要的基礎研究價值和潛在應用價值。同時，加速外泌體生物標志物的發(fā)現(xiàn)、驗證、監(jiān)管批準，最終快速運用到臨床，為臨床更加科學的進行肺癌早期診斷、分型分期、精準治療和預后判斷提供新思路和新途徑。