甲狀腺癌組織中l(wèi)ncRNA CCHE1水平及其臨床意義

許春暉

(杭州市余杭區(qū)第二人民醫(yī)院普外科，浙江 杭州 311121)

甲狀腺癌是常見的內(nèi)分泌惡性腫瘤，甲狀腺癌的發(fā)病率呈上升趨勢，其主要病理類型為甲狀腺乳頭狀癌，最主要的治療方式為甲狀腺癌根治術(shù)，多數(shù)患者術(shù)后總體生存率比較好，但部分術(shù)后患者預(yù)后比較差〔1，2〕。甲狀腺癌起病隱匿，早期診斷比較困難，主要依靠癥狀、體征、超聲、CT、穿刺細胞學(xué)活檢等方法進行鑒別和診斷，穿刺細胞學(xué)活檢是甲狀腺癌早期診斷的有效方法，但有依從性差、無法確診、存在假陰性率等問題，使其難以在甲狀腺癌篩查中普及，因此研究甲狀腺癌早期診斷、預(yù)后評估的生物標(biāo)志物具有重要意義〔3，4〕。CCHE1為一種新近鑒定的長鏈非編碼(lnc)RNA，在宮頸癌等多種癌組織中表達異常〔5，6〕，宮頸癌組織中CCHE1高水平表達和宮頸癌的FIGO分期、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和人乳頭瘤病毒感染關(guān)系密切，低CCHE1表達患者的5年生存率高于高表達CCHE1患者。CCHE1在甲狀腺癌組織中的表達及臨床意義尚不十分清楚，本文對甲狀腺癌組織中CCHE1表達水平進行研究，探討其在甲狀腺癌診斷和預(yù)后評價中的價值。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選擇杭州市余杭區(qū)第二人民醫(yī)院普外科2010年1月至2013年12月行甲狀腺癌根治術(shù)的80例甲狀腺癌患者的甲狀腺癌組織和癌旁組織(距離甲狀腺癌組織5 cm)。年齡(54.36±6.57)歲，男25例，女55例，乳頭狀癌54例，濾泡狀癌14例，髓樣癌12例，腫瘤最大直徑≥1.0 cm者57例，腫瘤最大直徑<1.0 cm者23例，有包膜浸潤者36例，無包膜浸潤者44例，TNM分期Ⅰ期14例，Ⅱ期24例，Ⅲ期39例，Ⅳ期3例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移41例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移39例。

納入標(biāo)準(zhǔn)：病理確診為甲狀腺癌，術(shù)前未進行放化療等其他治療，首次手術(shù)，簽署知情同意書，經(jīng)倫理委員會批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：其他惡性腫瘤患者，患心、肝、腎等其他重要臟器疾病者，甲狀腺功能異常者，肺轉(zhuǎn)移或遠處轉(zhuǎn)移者，不配合研究者，未進行正規(guī)隨訪或失訪者。

1.2甲狀腺癌組織和癌旁組織中CCHE1水平測定 取患者甲狀腺癌組織和癌旁組織，采用Trizol提取總RNA，將組織RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，以甲狀腺癌組織和癌旁組織cDNA為模板，采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(QPCR)測定甲狀腺癌組織和癌旁組織中CCHE1水平。CCHE1上游引物序列為：5′-AAGGTCCCAGGATACTCGC-3′，下游引物序列為：5′-GTGTCGTGGACTGGCAAAAT-3′。甲狀腺癌組織和癌旁組織中CCHE1相對表達量以2-ΔΔCt表示。

1.3隨訪 所有患者通過電話隨訪和門診隨訪，術(shù)后1個月時隨訪1次，第1年內(nèi)3個月隨訪1次，第2年內(nèi)6個月隨訪1次，以后每年隨訪1次，隨訪至2018年5月結(jié)束，隨訪率100%，記錄隨訪資料。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS20.0軟件進行t檢驗、方差分析，CCHE1對甲狀腺癌的診斷價值采用受試者工作特征(ROC)曲線下面積分析，5年總生存期采用Kaplan-Meier生存曲線分析。

2 結(jié) 果

2.1甲狀腺癌組織中CCHE1水平 甲狀腺癌組織中CCHE1水平(1.83±0.13)顯著高于癌旁組織(1.00±0.07，t=50.280，P=0.000)。

2.2CCHE1對甲狀腺癌的診斷價值 CCHE1診斷甲狀腺癌的ROC曲線下面積為0.821(95%CI：0.818～0.824，P=0.000)，診斷閾值1.68，診斷靈敏度為71.43%，特異度為78.14%。見圖1。

圖1 CCHE1診斷甲狀腺癌的ROC曲線下面積

2.3CCHE1與甲狀腺癌臨床病理特征的關(guān)系 甲狀腺癌組織中CCHE1表達量與甲狀腺癌患者的年齡、性別、病理分型、腫瘤最大直徑、包膜浸潤無關(guān)(P>0.05)，與TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者CCHE1表達量顯著高于Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者。見表1。

表1 CCHE1與甲狀腺癌臨床病理特征的關(guān)系

2.4CCHE1與甲狀腺癌預(yù)后的關(guān)系 術(shù)后隨訪5年，80例患者死亡38例，存活42例，其中31例死于甲狀腺癌本身，7例死于遠處轉(zhuǎn)移。以CCHE1≥1.68為高表達，<1.68為低表達。Kaplan-Meier生存分析結(jié)果顯示，CCHE1低表達患者5年生存率為67.35%，明顯高于高表達患者(31.24%，P<0.05)。見圖2。

圖2 不同CCHE1水平甲狀腺癌患者生存曲線

3 討 論

大部分甲狀腺癌患者經(jīng)手術(shù)治療及輔助治療療效顯著，預(yù)后良好，但部分甲狀腺癌呈多灶型，出現(xiàn)包膜侵犯、遠處轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期高等高侵襲性特點，容易復(fù)發(fā)，對甲狀腺癌患者的生命健康造成嚴(yán)重危害〔7〕。早期手術(shù)是提高甲狀腺癌預(yù)后的重要手段，因此早期診斷甲狀腺癌對改善患者預(yù)后具有重要意義〔8〕。超聲和細胞活檢術(shù)是鑒別和診斷甲狀腺癌的主要方法，超聲檢查受超聲醫(yī)生經(jīng)驗和個人主觀因素影響比較大；細胞活檢術(shù)雖然靈敏度和特異度比較高，但其取材不當(dāng)可影響結(jié)果，且患者依從性比較差，因此尋找靈敏度和特異度比較高的生物標(biāo)志物對甲狀腺癌的早期診斷、靶向治療、預(yù)后評估具有重要意義〔9，10〕。

lncRNA為一種不參與蛋白編碼的RNA分子，長度大于200個核苷酸〔11〕。lncRNA雖不參與蛋白編碼，在可在轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后以及翻譯等水平調(diào)控基因表達〔12〕。lncRNA參與細胞增殖、分化、凋亡等生物學(xué)過程，在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用〔13，14〕。lncRNA在甲狀腺癌的發(fā)生發(fā)展中也扮演重要角色，可用于甲狀腺癌早期診斷、預(yù)后評估及治療靶點的尋找〔15～17〕。CCHE1為新近鑒定的lncRNA，定位在人類10號染色體基因，最初在宮頸癌組織中被發(fā)現(xiàn)呈高表達而命名。后來研究發(fā)現(xiàn)CCHE1在多種惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展中具有重要價值：CCHE1在宮頸癌組織中呈高表達，和宮頸癌腫瘤大小、臨床分期和生存率關(guān)系密切，CCHE1可通過增加增殖細胞核抗原的表達在宮頸癌細胞增殖中發(fā)揮重要作用，可作為宮頸癌的潛在治療靶點和預(yù)后生物標(biāo)志物〔18〕；在非小細胞肺癌組織中CCHE1呈高表達，CCHE1表達水平和腫瘤大小及患者存活時間關(guān)系密切，CCHE1可通過ERK/MAPK信號通路促進非小細胞肺癌細胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移〔19〕；上調(diào)胃癌細胞中CCHE1可促進胃癌細胞增殖、抑制胃癌細胞凋亡〔20〕。

本研究表明CCHE1可能參與甲狀腺癌的發(fā)生發(fā)展過程，在甲狀腺癌的診斷、預(yù)后評估中具有重要價值，有望成為甲狀腺癌早期診斷、預(yù)后評估的潛在標(biāo)志物。