中藥復(fù)方制劑質(zhì)量控制體系的研究進(jìn)展

呂 玥，湯 湧，李立言，閻 姝

隨著科學(xué)技術(shù)與醫(yī)療水平的提高，對(duì)于中藥復(fù)方制劑的藥效學(xué)指標(biāo)的建立與測(cè)定方法的研究已由先前模仿西藥藥物分析方法的單一指標(biāo)研究方法發(fā)展為多指標(biāo)研究方法，如綜合權(quán)重法[1]。本文綜述了中藥復(fù)方制劑質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)展以及基于藥效相關(guān)的中藥復(fù)方制劑質(zhì)量控制技術(shù)方法。

1 中藥復(fù)方制劑質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)展

《中華人民共和國(guó)藥典》一部和部頒標(biāo)準(zhǔn)屬于我國(guó)中藥復(fù)方制劑的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，是中藥生產(chǎn)、使用時(shí)必須遵循的技術(shù)規(guī)定。通過(guò)藥效學(xué)研究，初步證實(shí)中藥復(fù)方制劑是否有效，藥效作用的強(qiáng)度、范圍、特點(diǎn)，與同療效的其他藥物制劑相比是否具有發(fā)展前景及使用價(jià)值。

1985 年以前，中藥質(zhì)量?jī)H依靠經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行外觀形態(tài)鑒別及顯微鑒別，沒(méi)有定量指標(biāo)，缺乏專(zhuān)屬性鑒別項(xiàng)目。因此，中藥成分的不確定性影響中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量以及藥效學(xué)評(píng)價(jià)。1985年以后，中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)向著微觀內(nèi)在成分監(jiān)測(cè)的方向發(fā)展，中藥復(fù)方制劑的成分鑒別開(kāi)始引入化學(xué)和儀器分析方法。謝培山[2]最早引入薄層色譜鑒定中藥。隨后氣相色譜（GC）、高效液相色譜（HPLC）、質(zhì)譜（MS）等方法也廣泛應(yīng)用于中藥復(fù)方制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究。近年來(lái)，相關(guān)中藥綜合質(zhì)量評(píng)價(jià)和控制的方法多種多樣，使用中藥指紋圖譜、“一測(cè)多評(píng)”方法（QAMS）、中藥譜效關(guān)系、中藥質(zhì)量標(biāo)志物等方法開(kāi)展的研究也愈來(lái)愈多。

2 中藥復(fù)方制劑質(zhì)量控制技術(shù)方法

2.1 指紋圖譜法 中藥指紋圖譜是運(yùn)用現(xiàn)代分析技術(shù)鑒別中藥材或中成藥的真?zhèn)危u(píng)價(jià)原料藥、半成品和成品質(zhì)量的一致性和穩(wěn)定性的一種綜合分析的有效手段。與現(xiàn)有的單一有效成分或指標(biāo)性成分的鑒定相比，中藥指紋圖譜技術(shù)綜合各種有效化學(xué)信息，使結(jié)果更為科學(xué)、合理。因此，結(jié)合計(jì)算機(jī)智能信息處理的指紋圖譜技術(shù)，有助于實(shí)現(xiàn)現(xiàn)代中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立。中藥指紋圖譜分為中藥化學(xué)指紋圖譜和中藥生物指紋圖譜。中藥化學(xué)指紋圖譜技術(shù)包括紫外光譜法（UV）、紅外光譜法（IR）、核磁共振波譜法（NMR）、薄層色譜法（TLC）、GC、HPLC、超臨界流體色譜法(SFC)等。中藥生物指紋圖譜主要是測(cè)定各種中藥材的DNA圖譜，它對(duì)中藥材GAP 基地建設(shè)、中藥材種植規(guī)范(SOP)、選擇優(yōu)良種質(zhì)資源和藥材道地性研究極為有用[3]。

隨著薄層色譜儀器的發(fā)展，TLC 因其操作方便設(shè)備簡(jiǎn)單、顯色容易、專(zhuān)屬性強(qiáng)等特點(diǎn)，TLC 指紋圖譜分析已逐漸成為中藥及其復(fù)方制劑質(zhì)量控制的重要分析手段及首選方法。趙如詩(shī)等[4]建立靈芝三萜類(lèi)化合物的TLC 標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，并對(duì)TLC 展開(kāi)劑、顯色劑等因素進(jìn)行優(yōu)化，利用優(yōu)化條件對(duì)樣品進(jìn)行TLC 分析，結(jié)果表明了靈芝三萜的TLC 指紋圖譜得到7 個(gè)共有峰，通過(guò)靈芝三萜的TLC 指紋圖譜分析及其不同來(lái)源靈芝活性成分靈芝三萜藥效的比較，為不同來(lái)源靈芝藥材的鑒別及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立起到了一定的作用。

隨著科學(xué)技術(shù)及分析方法的不斷發(fā)展，HPLC 已經(jīng)成為中藥藥材及其中藥產(chǎn)品質(zhì)量控制的主要方法，HPLC 指紋圖譜法也成為最常見(jiàn)的質(zhì)量控制手段。段福先等[5]采用HPLC 及中藥指紋圖譜分析，建立了不同產(chǎn)地的三白草藥材的HPLC 指紋圖譜，實(shí)驗(yàn)確定了20 個(gè)共有色譜峰為特征峰及其不同來(lái)源三白草活性成分藥效的比較以及研究抗感染、抗氧化、抑制超氧基陰離子和羥基自由基活性藥效指標(biāo)之間的相關(guān)性，結(jié)果表明了建立的HPLC 指紋圖譜及分析模式穩(wěn)定可靠，為三白草藥材的質(zhì)量控制提供了可靠的依據(jù)。胡曉燕等[6]采用管碟法，以抑菌系數(shù)作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，檢測(cè)板藍(lán)根不同部位對(duì)大腸桿菌的抑制作用，確定抑菌活性最強(qiáng)部位后，建立10 批不同產(chǎn)地板藍(lán)根樣品的HPLC 指紋圖譜，應(yīng)用主成分分析法將HPLC 指紋圖譜共有峰的峰面積與抑菌系數(shù)進(jìn)行相關(guān)分析，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)板藍(lán)根總有機(jī)酸部位有較強(qiáng)的抑菌活性，其中苯甲酸、水楊酸等化學(xué)成分與抑菌活性關(guān)系密切。許雯雯等[7]將藥效信息與各組HPLC 指紋圖譜化學(xué)信息用灰色關(guān)聯(lián)度分析得出各色譜峰對(duì)抗炎活性的影響程度，再用BP 神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行擬合，建立譜效關(guān)系，實(shí)驗(yàn)確定了有25 個(gè)色譜峰與抗炎活性密切相關(guān)，有助于建立中藥復(fù)方質(zhì)量控制。

除了HPLC 指紋圖譜的應(yīng)用，超高效液相色譜（UPLC）指紋圖譜也得到了廣泛的應(yīng)用。柴瑞平等[8]建立了生脈注射液UPLC 指紋圖譜及多成分含量測(cè)定的方法，實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了同一廠家多批次藥品的質(zhì)量一致性評(píng)價(jià)，同時(shí)測(cè)定了人參皂苷Rb1、麥冬皂苷D、五味子醇甲等11 種活性成分的含量及其抗炎抗氧化、逆轉(zhuǎn)組織損傷活性藥效指標(biāo)之間的相關(guān)性，結(jié)果表明所建立的UPLC 指紋圖譜分離效果良好、方法穩(wěn)定，基本能夠反映生脈注射液的化學(xué)成分特征，為提升生脈注射液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供實(shí)用可靠的方法。

2.2 一測(cè)多評(píng)法 隨著中藥現(xiàn)代化的進(jìn)一步加快，市場(chǎng)對(duì)中藥及其制劑的質(zhì)量也提出了更高的要求。而現(xiàn)有的中藥標(biāo)準(zhǔn)大多是以單一成分指標(biāo)反映中藥產(chǎn)品的質(zhì)量，但中藥的成分復(fù)雜，具有多成分、多靶點(diǎn)的特點(diǎn)，單單以一個(gè)成分指標(biāo)不足以反映中藥整體質(zhì)量的優(yōu)劣。因此，多指標(biāo)同步質(zhì)量控制方法已成為目前中藥質(zhì)量控制的優(yōu)先方法。

傳統(tǒng)的多指標(biāo)質(zhì)量控制要求足夠量的對(duì)照品，而中藥對(duì)照品分離難度大且價(jià)格昂貴。為了解決質(zhì)量控制中存在的問(wèn)題，王智民等[9]提出了“一測(cè)多評(píng)”法，即通過(guò)中藥有效成分之間存在的函數(shù)關(guān)系和比例關(guān)系，測(cè)定某中藥一個(gè)有效成分（對(duì)照品易得）的含量，而實(shí)現(xiàn)多成分（對(duì)照品難得）的同時(shí)測(cè)定，并通過(guò)檢測(cè)木通中皂苷成分的含量而得到驗(yàn)證[10]。目前，繼2010 年版《中國(guó)藥典》首次收錄一測(cè)多評(píng)法測(cè)定黃連的含量[11]后，2015 年版《中國(guó)藥典》將該法的應(yīng)用拓展至提取物等復(fù)方制劑的多指標(biāo)質(zhì)量控制，新增銀杏葉及其制劑、丹參藥材等成分的含量測(cè)定[12]。

QAMS 側(cè)重研究藥材的主要成分或藥效成分之間的相互關(guān)系[13]，目前QAMS 已與其他的質(zhì)量控制方法結(jié)合運(yùn)用在中藥藥材及其復(fù)方制劑。楊憲等[14]采用HPLC 一測(cè)多評(píng)法，以木香烴內(nèi)酯作為內(nèi)參物，建立了該成分與去氫木香內(nèi)酯的相對(duì)校正因子（f），從而對(duì)含有木香的中藥復(fù)方制劑中的木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確、可行。何兵等[15]以中藥材魚(yú)腥草為研究對(duì)象，以綠原酸為參照物建立了魚(yú)腥草 HPLC 指紋圖譜并標(biāo)定了其中 7 個(gè)含量較高的活性成分(新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、蘆丁、金絲桃苷、異槲皮苷及槲皮苷)，并計(jì)算其含量，實(shí)現(xiàn)一測(cè)多評(píng)，將定性的指紋圖譜結(jié)合定量的一測(cè)多評(píng)，全面評(píng)價(jià)魚(yú)腥草的質(zhì)量，為魚(yú)腥草質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高研究提供科學(xué)依據(jù)。

2.3 質(zhì)量標(biāo)志物法 在《中國(guó)藥典》2015 年版一部收錄的中藥材中，有許多藥材具有多基源的情況，給這些中藥的質(zhì)量評(píng)價(jià)和標(biāo)準(zhǔn)制定帶來(lái)了難題。特別是當(dāng)用這類(lèi)藥材制成復(fù)方制劑時(shí)，如果基于測(cè)定一種或幾種有效成分的量來(lái)進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，通常難以真正反映該中藥的質(zhì)量與療效的關(guān)系。因此，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)鍵在于建立具有特異性和可控性的定性定量檢測(cè)方法。

至此，劉昌孝等[16]提出了中藥質(zhì)量標(biāo)志物這一新概念，引起了學(xué)術(shù)界的廣泛關(guān)注。這一概念的提出為中藥復(fù)方制劑的藥效指標(biāo)的質(zhì)量控制提供了很好的研究方法。張鐵軍等[17]通過(guò)對(duì)延胡索化學(xué)物質(zhì)組辨識(shí)明確化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)；通過(guò)延胡索化學(xué)成分生源途徑及成分特異性分析明確其化學(xué)成分的來(lái)源及特異性；通過(guò)藥效、藥性及藥動(dòng)學(xué)研究及其物質(zhì)基礎(chǔ)的相關(guān)性分析，明確其主要藥效物質(zhì)基礎(chǔ)；并綜合研究結(jié)果，確定質(zhì)量標(biāo)志物。最后以延胡索乙素、延胡索甲素、黃連堿、巴馬汀、去氫延胡索甲素、D-四氫藥根堿及原阿片堿7 個(gè)生物堿為質(zhì)量標(biāo)志物，建立了延胡索多指標(biāo)成分定量測(cè)定及指紋圖譜控制方法。為了解決葛根中葛根素難吸收、生物利用度差無(wú)法作為葛根質(zhì)量控制指標(biāo)等問(wèn)題，朱衛(wèi)豐等[18]基于中藥質(zhì)量標(biāo)志物的概念，通過(guò)分析給藥后原型成分及其代謝產(chǎn)物，對(duì)化合物－靶點(diǎn)－通路間顯效方式進(jìn)行探討，結(jié)合入血成分的組織分布與疾病的病理部位和藥物干預(yù)方式， 篩選出葛根藥效成分為葛根素、大豆甘、大豆苷元，為葛根及其制劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)研究提供思路。除此之外，Gao 等[19]、Bai 等[20]對(duì)中藥質(zhì)量標(biāo)志物也做了深層次的研究分析。

3 展望

近年來(lái)，隨著中藥在醫(yī)藥領(lǐng)域地位的不斷升高，中藥及其復(fù)方制劑的質(zhì)量控制研究已經(jīng)成為滿足藥效學(xué)和實(shí)現(xiàn)中藥現(xiàn)代化的關(guān)鍵，也帶動(dòng)了中藥復(fù)方質(zhì)量控制由低層次向高層次的邁進(jìn)。多成分多靶點(diǎn)協(xié)同發(fā)揮藥效是中藥復(fù)方制劑的特色優(yōu)勢(shì)，中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制是采用現(xiàn)代先進(jìn)的分析手段和儀器檢測(cè)中藥復(fù)方制劑中的有效成分，以保證中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量。包括藥效學(xué)指標(biāo)建立方法研究在內(nèi)的中藥復(fù)方制劑質(zhì)量控制方法的發(fā)展也呈現(xiàn)出多學(xué)科相互交融，新技術(shù)、新方法的出現(xiàn)也為復(fù)方制劑的質(zhì)量控制提供了更好的分析研究思路。由此可以預(yù)見(jiàn)，在今后的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制研究中，將繼續(xù)以傳統(tǒng)方法與藥效學(xué)相結(jié)合去分析和研究中藥復(fù)方，以更好的保障中藥復(fù)方使用的安全性和有效性。