滁菊的功能成分及其體外抗氧化活性

賈雨朦，陳芹芹，畢金峰，呂 瑩，喬葉寧，張佰清

（1.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，遼寧 沈陽 110866；2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品加工綜合性重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100193）

菊花為菊科植物菊花（Chrysanthemum morifolium Ramat）的干燥頭狀花序，具有疏風(fēng)、清熱、明目、解毒的功效，在我國種植廣泛，有3 000 年的栽種歷史[1]。按產(chǎn)地可將菊花分為“杭菊”、“貢菊”、“懷菊”、“滁菊”、“毫菊”等品種[2]。其中，滁菊產(chǎn)于安徽滁州地區(qū)，為當(dāng)?shù)靥厣参镔Y源，又名“甘菊”、“白菊”等，是中國“四大名菊”之一，其性微寒，具有平肝、明目及疏風(fēng)散熱等功效，為我國衛(wèi)生部批準(zhǔn)的藥食同源植物[3]。

在多種菊花品種中，滁菊效用較優(yōu)。《中藥志》所述“主產(chǎn)于安徽滁縣，品質(zhì)最佳”；《現(xiàn)代實(shí)用中藥》同樣評價(jià)“滁州產(chǎn)者菊花味最清涼，不苦不甜，白菊中以此為最良，且不濕不燥，故處方中常以滁菊代替其他菊花，而其他菊花不能代替滁菊”[4]。同時(shí)，現(xiàn)代研究也表明，滁菊含有酚酸類、黃酮類、萜類和多糖[5]等物質(zhì)，具有抗氧化、抗衰老[6]、預(yù)防高血糖、改善缺血心肌的血液供應(yīng)[5]、抗腫瘤等作用[6]。

氧化過程對許多生物體是來說必不可少的，氧化反應(yīng)可以產(chǎn)生代謝所需的能量，然而，氧自由基的過度產(chǎn)生會(huì)誘發(fā)諸多疾病，例如癌癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、心血管疾病、糖尿病以及與衰老相關(guān)的退行性過程[7]。過去20 年來，有很多關(guān)于活性氧及自由基在細(xì)胞損傷和與衰老過程相關(guān)的疾病中起重要作用的報(bào)道[8]。研究證明，含有抗氧化活性物質(zhì)（如酚類、維生素、類胡蘿卜素和黃酮類）的食物可以幫助人體減少氧化損傷[9]。近年來，具有抗氧化能力的食物作為可以保護(hù)人體健康的天然抗氧化劑，受到大眾越來越多的關(guān)注，因此對食物含有的抗氧化活性物質(zhì)及抗氧化能力進(jìn)行檢測和鑒定具有重要意義。

目前對于滁菊的研究主要集中在產(chǎn)品加工[10]、成分提取和鑒定[11]及種質(zhì)特征分析[12]上，對滁菊的功能性成分及其效用的研究較少，特別是對類胡蘿卜素類物質(zhì)。Kishimoto等[13]對菊花中類胡蘿卜素的含量和種類進(jìn)行了鑒定，Ullas等[14]對部分菊花品種的類胡蘿卜素類物質(zhì)及其抗氧化能力進(jìn)行了分析測定，但目前對于滁菊中類胡蘿卜素類物質(zhì)的種類及功能尚鮮見報(bào)道。本研究對滁菊中類胡蘿卜素的含量、單體組成及其抗氧化能力進(jìn)行分析，并對滁菊中含有的其他具有抗氧化能力的物質(zhì)如多糖、多酚、黃酮等生物活性物質(zhì)的含量、單體組成和對1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）和2,2'-聯(lián)氮雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)（2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)，ABTS）陽離子自由基的清除能力、對Fe3+的還原能力進(jìn)行測定和比較，以期明確滁菊中各抗氧化物質(zhì)單體在不考慮協(xié)同作用情況下對其總抗氧化能力的貢獻(xiàn)，為今后對滁菊抗氧化功能的進(jìn)一步研究及其作為天然抗氧化劑的進(jìn)一步開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

滁菊 安徽滁州全椒縣臥龍湖有機(jī)農(nóng)業(yè)園。

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品、沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品、β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品、綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品 上海源葉生物科技有限公司；葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品、亞硝酸鈉、無水碳酸鈉、氯化鈉、硫酸、苯酚、丙酮、無水乙醇 國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；DPPH、ABTS、2,4,6-三吡啶基均三嗪、水溶性VE（Trolox）、α-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品、葉黃素標(biāo)準(zhǔn)品、隱黃素標(biāo)準(zhǔn)品、福林-酚試劑、九水合硝酸鋁 美國西格瑪奧德里奇貿(mào)易有限公司；氫氧化鈉 上海阿拉丁生化科技股份有限公司；甲醇、正己烷、甲基叔丁基醚（色譜級） 美國賽默飛世爾科技公司。

1.2 儀器與設(shè)備

離心機(jī) 艾本德中國有限公司；RE52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 上海亞榮生化儀器廠；DK-S26電熱恒溫水浴鍋、DHG-9023A鼓風(fēng)干燥箱 上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；UV1800紫外分光光度計(jì) 日本島津公司；1525高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）儀 美國Waters公司。

1.3 方法

1.3.1 滁菊樣品的制備

將滁菊置于粉碎機(jī)中22 000 r/min粉碎1 min，粉碎后將滁菊粉放置于自封袋中，密閉封口，常溫下放置在干燥器中保存。經(jīng)測定粉碎后滁菊粉濕基水分質(zhì)量分?jǐn)?shù)為11.03%。

1.3.2 滁菊酚類提取液的制備

采用Istrati等[15]的方法提取酚類物質(zhì)，稍作修改。精確稱取粉碎后的滁菊樣品2.00 g于具塞試管中，加入10.0 mL 80%（體積分?jǐn)?shù)，下同）甲醇溶液，超聲提取30 min（40 kHz、25 ℃），經(jīng)10 000 r/min離心10 min后取上清液，重復(fù)3 次，合并上清液，于-20 ℃下保存?zhèn)溆茫糜诳偡?、黃酮含量及酚類物質(zhì)抗氧化能力測定。

1.3.3 抗氧化能力的測定

1.3.3.1 DPPH自由基清除能力測定

參照Wang Yongtao等[16]的方法并略作修改。取2.0 mL不同濃度的Trolox溶液（0、20、30、40、60、80、100 μmol/L，80%甲醇溶解）于10 mL試管中，加入4.0 mL 0.1 mol/L DPPH溶液（80%甲醇溶解），避光靜置30 min，于517 nm波長處測定吸光度。以Trolox濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，曲線方程為y＝0.007 4x+0.641 3，R2＝0.998 9。取0.05 mL提取液，用80%甲醇稀釋至2 mL，按上述步驟操作并測定吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，結(jié)果以每克干物質(zhì)中Trolox的物質(zhì)的量表示。

1.3.3.2 Fe3+還原能力的測定

參照Tabart等[17]的方法并略作修改。取0.20 mL不同濃度的Trolox溶液（0、100、200、300、400、500、600、700、800 μmol/L，80%甲醇溶解）于10 mL試管中，加入6.0 mL Fe3+還原能力試劑，混勻，37 ℃水浴30 min，冷卻至常溫后于593 nm波長處測定吸光度。以Trolox濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，曲線方程為y＝0.001 3x-0.094 2，R2＝0.999 1。取0.10 mL提取液，用80%甲醇稀釋至0.20 mL，按上述步驟操作并測定吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，結(jié)果以每克干物質(zhì)中Trolox的物質(zhì)的量表示。

1.3.3.3 ABTS陽離子自由基清除能力

參照J(rèn)eong等[18]的方法并略作修改。將7.0 mmol/L ABTS溶液加入2.45 mmol/L過硫酸鉀溶液中（體積比1∶1），避光靜置12～14 h（室溫）后，用80%甲醇將溶液稀釋至734 nm波長處吸光度為0.700±0.020。取0.40 mL不同濃度的Trolox溶液（0、25、50、75、100、125、150 μmol/L，80%甲醇溶解）于10 mL試管中，加入3.6 mL ABTS溶液，混勻，靜置1 min（室溫），于734 nm波長處測定吸光度。以Trolox濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，曲線方程為y＝-0.003 0x+0.612 4，R2＝0.999 1。吸取0.10 mL提取液，用80%甲醇稀釋至0.40 mL，按上述步驟操作并測定吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，結(jié)果以每克干物質(zhì)中Trolox的物質(zhì)的量表示。

1.3.3.4 滁菊不同提取物中單一成分對總抗氧化能力貢獻(xiàn)的計(jì)算

按照式（1）計(jì)算不同提取物中單一成分對滁菊總抗氧化能力的貢獻(xiàn)[19]。

式中：w為某提取物抗氧化能力貢獻(xiàn)；Ux為某單體抗氧化能力/（μmol/g）；Cy為某單體含量/（μg/g）；Uy為某提取物總抗氧化能力/（μmol/g）。

1.3.4 總酚含量測定

采用福林-酚比色法[20]進(jìn)行總酚含量測定，使用沒食子酸作為標(biāo)準(zhǔn)品，以80%甲醇為空白，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，曲線方程為y＝0.093 5x+0.014 2，R2＝0.997。取0.2 mL提取液，用80%甲醇定容至2.0 mL，加1.0 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%福林-酚顯色劑，充分搖勻，6 min之后加入2.0 mL 7.5 g/L Na2O3溶液，混勻定容至10.0 mL，75 ℃放置10 min，冷卻至常溫后于765 nm波長處測定其吸光度?？偡雍恳悦靠烁晌镔|(zhì)中沒食子酸的質(zhì)量表示。

1.3.5 黃酮含量的測定

根據(jù)Sun Lijun等[21]的方法測定黃酮含量，并稍作修改。以蘆丁作為標(biāo)準(zhǔn)品，結(jié)果以每克干物質(zhì)中蘆丁的質(zhì)量表示。準(zhǔn)確稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品5.00 mg于25 mL容量瓶中，80%甲醇溶解定容，得到質(zhì)量濃度為0.20 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。精確移取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 mL于15 mL比色管中，加80%甲醇定容至4.0 mL，再加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%亞硝酸鈉0.5 mL，搖勻，放置6 min；加質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%硝酸鋁0.5 mL，搖勻，放置6 min；加質(zhì)量分?jǐn)?shù)4%氫氧化鈉4.0 mL，定容至10.0 mL，搖勻，放置15 min，以不加樣品組為空白。于510 nm波長處測定吸光度，并以蘆丁的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，曲線方程為y＝0.013 2x+0.031 3，R2＝0.999。取0.2 mL提取液，按上述步驟操作并測定吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算黃酮含量。

1.3.6 總類胡蘿卜素含量的測定

根據(jù)Knockaert[22]的方法測定總類胡蘿卜素含量。取2.00 g滁菊粉加40.0 mL混合液（含質(zhì)量分?jǐn)?shù)50%正己烷、25%丙酮、25%乙醇、0.1% 2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚（2,6-di-tert-butyl-4-methylphenol，BHT）、0.5 g NaCl），常溫下攪拌30 min，之后加入15.0 mL蒸餾水，常溫下攪拌10 min，攪拌結(jié)束將混合物倒入分液漏斗，振蕩3 次，靜置，待液體分為清晰的兩層后收集上層有機(jī)相?？瞻捉M為加入BHT（0.10 g/100 mL）并充分溶解后的正己烷，450 nm波長處測定吸光度，按照公式（2）計(jì)算滁菊總類胡蘿卜素含量。

式中：A為滁菊在450 nm波長處的吸光度；m為稱取的原料質(zhì)量/g；V為收集的有機(jī)相體積/mL；為β-胡蘿卜素在正己烷中的摩爾消光系數(shù)（2 560 L/（mol·cm））。

1.3.7 多糖含量的測定

采用Zhao Qingsheng[23]和Wang[24]等的方法進(jìn)行多糖提取，并稍作修改。精確稱取粉碎后的滁菊樣品2.00 g，加30.0 mL蒸餾水，置于90 ℃的恒溫水浴鍋中水浴1 h，水浴結(jié)束后超聲提取1 h（40 kHz、25 ℃）。抽濾取濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至10.0 mL，加無水乙醇至溶液乙醇體積分?jǐn)?shù)為80%，4 ℃下醇沉24 h，醇沉結(jié)束后抽濾取沉淀，合并沉淀加蒸餾水溶解并定容至100.0 mL。

吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL于15 mL試管中，加水至2.0 mL，加入1.0 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%苯酚溶液，混合均勻，迅速加入5.0 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)95%硫酸溶液，搖勻，室溫放置10 min后沸水浴15 min，取出后迅速冷卻至室溫，以蒸餾水代替葡萄糖溶液作為空白。以葡萄糖質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，曲線方程為y＝0.060 8x+0.001 1，R2＝0.999。取多糖提取液1.0 mL，蒸餾水稀釋至2.0 mL，按上述步驟操作并測定吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，滁菊多糖含量以葡萄糖計(jì)。

1.3.8 抗氧化成分單體組成的測定

1.3.8.1 單體酚組成的測定

稱取2.00 g滁菊粉于帶蓋離心管中，加入10 mL 80%甲醇，室溫避光超聲提取30 min（40 kHz、25 ℃），經(jīng)10 000 r/min離心10 min后，取上清液，重復(fù)3 次，合并上清液，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀30 ℃下蒸至近干，用甲醇（色譜級）溶解殘?jiān)⒍ㄈ葜?0.0 mL，測定前過0.45 μm濾膜。

選用C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相A為體積分?jǐn)?shù)2%乙酸溶液，流動(dòng)相B為甲醇，梯度洗脫[25]，流速1 mL/min，柱溫40 ℃，進(jìn)樣量10 μL，檢測波長280 nm。洗脫程序?yàn)椋?～20 min，95%～75% A；20～35 min，75%～60% A；35～40 min，60% A；40～45 min，60%～5% A；45～50 min，5% A；50～52 min，5%～95% A；52～55 min，95% A。

1.3.8.2 類胡蘿卜素單體組成的測定

類胡蘿卜素的提取同1.3.5節(jié)方法，測定前過0.45 μm有機(jī)濾膜。采用HPLC法測定類胡蘿卜素單體組成，選用反相C30色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）[26]，流動(dòng)相A為V（甲醇）∶V（甲基叔丁基醚）∶V（水）＝81∶15∶4，流動(dòng)相B為V（甲醇）∶V（甲基叔丁基醚）：V（水）＝6∶90∶4，采用100%～44% A、45 min洗脫程序進(jìn)行梯度洗脫，流速1 mL/min，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量10 μL，檢測波長450 nm。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

實(shí)驗(yàn)均進(jìn)行3 次平行，采用Excel 2013軟件處理數(shù)據(jù)，顯著性分析采用Duncan's多范圍檢驗(yàn)方法，P＜0.05表示差異顯著；采用Origin 9.0軟件作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 滁菊總酚、黃酮、多糖及類胡蘿卜素含量

滁菊的總酚含量為53.67 mg/g，是藍(lán)莓全果的5～11 倍[27]，黑莓全果的5.5 倍[28]；黃酮含量為70.32 mg/g，比黃菊高24%，比大洋菊高66%～79%[29]，是藍(lán)莓的1.9 倍、黑莓的5.9 倍[28]；多糖含量為7.68 mg/g，為棗的1/10[30]；類胡蘿卜素含量為112.36 μg/g，為枸杞的1/12[31]。由此可知，滁菊的酚類物質(zhì)含量較多，且高于普遍被認(rèn)為酚類含量較高的藍(lán)莓、黑莓等小漿果食物，黃酮含量也遠(yuǎn)高于其他品種菊花，多糖含量和類胡蘿卜素含量相比于這兩種物質(zhì)含量較高的棗和枸杞并不突出。

2.2 滁菊酚類、多糖及類胡蘿卜素的抗氧化能力分析

圖1 滁菊各提取物抗氧化能力Fig. 1 Antioxidant activities of various extracts of chrysanthemum flowers from Chuzhou

由圖1可知，滁菊酚類提取物對DPPH自由基的清除能力為208.79 μmol/g，比黃山貢菊、胎菊、洋金菊等其他幾種菊花高25%～68%[2]；對ABTS陽離子自由基的清除能力為160.23 μmol/g，是藍(lán)莓的1.4 倍[28]；Fe3+還原能力為238.35 μmol/g，高于杭白菊、黃金貢菊和胎菊[2]。滁菊多糖提取物對DPPH自由基和ABTS陽離子自由基的清除能力分別為2.39 μmol/g和3.55 μmol/g，F(xiàn)e3+還原能力為3.58 μmol/g；滁菊類胡蘿卜素提取物對DPPH自由基的清除能力為9.77 μmol/g，均遠(yuǎn)低于酚類提取物。由此可知，滁菊的抗氧化能力要高于普遍被認(rèn)為抗氧化能力較強(qiáng)的小漿果食物，且滁菊的抗氧化能力要高于其他品種菊花，說明滁菊為菊花中的優(yōu)質(zhì)品種，是一種優(yōu)質(zhì)的天然抗氧化劑。

從對滁菊酚類、多糖和類胡蘿卜素提取物抗氧化能力之間的比較可以發(fā)現(xiàn)，其酚類物質(zhì)的抗氧化能力遠(yuǎn)高于多糖和類胡蘿卜素類物質(zhì)。根據(jù)熊磊等[32]的研究可知，滁菊多糖在0.2～1.0 mg/mL的高質(zhì)量濃度下具有較好的抗氧化活性，其質(zhì)量濃度為1.0 mg/mL時(shí)對自由基的清除率高于0.2 mg/mL抗壞血酸；根據(jù)張成孜[33]的研究結(jié)果可知，滁菊多糖能夠提高血清和肝臟中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶活性，并降低丙二醛含量，說明滁菊能提高機(jī)體抗氧化能力，并抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)。本研究中滁菊多糖抗氧化能力較低，可能是因?yàn)槠滟|(zhì)量濃度較低（0.07 mg/mL），導(dǎo)致其清除自由基能力較差；也可能是因?yàn)槌斩嗵堑目寡趸钚愿囿w現(xiàn)在對超氧化物歧化酶等的作用，而不是自由基的清除能力。

類胡蘿卜素類提取物對于DPPH自由基的清除能力雖然比多糖提取物高，但也遠(yuǎn)低于酚類提取物，這可能是因?yàn)槌罩蓄惡}卜素含量較低，且類胡蘿卜素在結(jié)合狀態(tài)沒有抗氧化能力[31]。由以上結(jié)果可推斷，滁菊的抗氧化能力可能更多地歸因于其所含有的酚類物質(zhì)。

2.3 滁菊酚類及類胡蘿卜素單體組分的鑒定結(jié)果

2.3.1 滁菊酚類物質(zhì)單體組分及含量分析

圖2 酚類標(biāo)準(zhǔn)品HPLC圖譜Fig. 2 HPLC chromatogram of mixed phenol standards

去除溶劑峰后單體酚標(biāo)準(zhǔn)品HPLC測定結(jié)果如圖2所示。對單體酚標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行測定，可得出15 種標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間及其峰面積的關(guān)系，以標(biāo)準(zhǔn)品峰面積為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品含量為縱坐標(biāo)繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線，曲線方程的R2均大于0.97。

圖3 滁菊酚類提取液HPLC圖譜Fig. 3 HPLC chromatogram of phenolic extract of chrysanthemum flowers from Chuzhou

由圖3可見，與標(biāo)準(zhǔn)品圖譜相比較，同等測定條件下可鑒定出滁菊含有兒茶素、綠原酸、咖啡酸、阿魏酸、金絲桃苷和槲皮素6 種酚類。謝越等[34]利用HPLC法同樣在滁菊中檢測出了阿魏酸、槲皮素等酚類物質(zhì)；舒俊生等[35]在95%乙醇提取的滁菊提取液中檢測出了綠原酸、咖啡酸、槲皮素等酚類物質(zhì)，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有一致性。由圖4可知，6 種酚類物質(zhì)中，綠原酸、金絲桃苷含量較高，分別達(dá)到了813.21 μg/g和408.17 μg/g，咖啡酸、阿魏酸和槲皮素含量較低，僅分別有32.39、45.76、56.49 μg/g。

圖4 滁菊單體酚物質(zhì)含量Fig. 4 Contents of monophenols in chrysanthemum flowers from Chuzhou

2.3.2 滁菊類胡蘿卜素單體組分及含量分析

圖5 類胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品HPLC圖譜Fig. 5 HPLC chromatogram of mixed carotenoid standards

圖6 滁菊類胡蘿卜素提取物HPLC圖譜Fig. 6 HPLC chromatogram of carotenoid extract of chrysanthemum flowers from Chuzhou

對類胡蘿卜素單體標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行測定后可得峰面積與標(biāo)準(zhǔn)品濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線，曲線方程的R2均大于0.97。圖5為類胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品在450 nm波長處的HPLC圖。圖6為滁菊類胡蘿卜素提取物在450 nm波長處的HPLC圖，與標(biāo)準(zhǔn)品圖譜相比較，可以確定滁菊含有的類胡蘿卜素單體為葉黃素和β-類胡蘿卜素。從圖7可知，這3 種類胡蘿卜素單體中，葉黃素含量較高，達(dá)到了78.6 μg/g；β-類胡蘿卜素含量較低，為6.4 μg/g，說明葉黃素是滁菊含有的主要類胡蘿卜素單體。

圖7 滁菊類胡蘿卜素單體物質(zhì)含量Fig. 7 Types and contents of carotenoid monomers in chrysanthemum flowers from Chuzhou

2.4 單體抗氧化能力及其對總抗氧化能力的貢獻(xiàn)

由2.1節(jié)分析可知，在滁菊中具有抗氧化能力的物質(zhì)中，酚類的抗氧化能力最強(qiáng)，總類胡蘿卜素次之，但具體哪種酚類單體、類胡蘿卜素單體在不考慮協(xié)同作用的情況下對酚類及總類胡蘿卜素抗氧化能力的貢獻(xiàn)最大尚不得而知，故用各單體標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行抗氧化能力測定。鑒于各成分之間的協(xié)同作用機(jī)理較為復(fù)雜[36]，抗氧化能力貢獻(xiàn)的計(jì)算僅考慮各單體單獨(dú)作用情況。

2.4.1 單體酚抗氧化能力及貢獻(xiàn)

表1 滁菊單體酚抗氧化能力Table 1 Antioxidant activities of monophenols in chrysanthemum flowers from Chuzhou μmol/mg

由表1可知，不同單體酚的抗氧化能力之間差異較大，槲皮素的抗氧化能力最強(qiáng)，兒茶素次之，這說明并不是所有酚類都具有較強(qiáng)的抗氧化活性，部分酚類物質(zhì)的抗氧化活性較弱，這可能是因?yàn)楦鲉误w酚在結(jié)構(gòu)上有所差異[37]，同時(shí)酚類的抗氧化能力和羥基數(shù)目也有很大關(guān)系。但在抗氧化能力貢獻(xiàn)方面（表2），綠原酸的抗氧化能力貢獻(xiàn)最大，咖啡酸、阿魏酸較小，這可能是因?yàn)榫G原酸在滁菊中含量較高且抗氧化能力較強(qiáng)，咖啡酸和阿魏酸雖有較強(qiáng)抗氧化能力，但含量低，故對酚類總抗氧化能力貢獻(xiàn)也較低，所以各單體酚的抗氧化能力貢獻(xiàn)在不考慮協(xié)同作用情況下既與其含量有關(guān)，也與其抗氧化能力有關(guān)。

表2 滁菊單體酚抗氧化能力貢獻(xiàn)Table 2 Contribution rates of monophenols in chrysanthemum flowers from Chuzhou to antioxidant capacity%

由表2可知，各單體酚抗氧化能力貢獻(xiàn)總和小于100%，可能是因?yàn)樘崛∵^程中酚類物質(zhì)有損失，且使用的提取物雖然主要成分為酚類，但仍有氨基酸和蛋白質(zhì)等物質(zhì)存在；也可能因?yàn)樵摐y定方法不能測定滁菊含有的全部酚類物質(zhì)，如舒俊生等[35]在滁菊中發(fā)現(xiàn)了芹黃素及其糖苷類物質(zhì)；同時(shí)，不同的酚類物質(zhì)在共存的情況下可能存在協(xié)同作用[38]，所以該結(jié)果也可能是因?yàn)榉宇惖目寡趸芰χ饕獨(dú)w因于其各單體酚之間的協(xié)同作用，這還需進(jìn)一步研究。

2.4.2 類胡蘿卜素單體抗氧化能力及貢獻(xiàn)

表3 滁菊類胡蘿卜素單體抗氧化能力及貢獻(xiàn)Table 3 Antioxidant capacity and contribution rates of monomeric carotenoids in chrysanthemum flowers from Chuzhou

由表3可知，葉黃素的DPPH自由基清除能力最高，達(dá)到4.84 μmol/mg，其抗氧化能力貢獻(xiàn)最高；β-類胡蘿卜素的DPPH自由基清除能力較低，且其含量遠(yuǎn)低于葉黃素，故其抗氧化能力貢獻(xiàn)僅為0.23%，遠(yuǎn)低于葉黃素的3.89%。與單體酚相同，在僅考慮單體單獨(dú)作用的情況下，類胡蘿卜素單體的抗氧化能力貢獻(xiàn)之和小于100%，這可能是因?yàn)轭惡}卜素單體之間[39]、類胡蘿卜素與其他成分之間[36]存在協(xié)同作用，這還需要進(jìn)一步的研究。

3 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)對滁菊含有的各類具有抗氧化活性的物質(zhì)進(jìn)行了測定和分析，結(jié)果表明，滁菊的多酚、黃酮類物質(zhì)含量分別為53.67 mg/g和70.32 mg/g，高于其他品種菊花和小漿果食物，但多糖和類胡蘿卜素類物質(zhì)的含量較低。滁菊的酚類物質(zhì)抗氧化能力最高，遠(yuǎn)高于類胡蘿卜素和多糖物質(zhì)，且高于杭白菊等多種菊花。通過HPLC法對滁菊的酚單體組分進(jìn)行測定，可確定滁菊含有兒茶素、綠原酸、咖啡酸、阿魏酸、金絲桃苷、槲皮素6 種酚類物質(zhì)，其中綠原酸含量最高。在不考慮協(xié)同作用的情況下，綠原酸對酚類Fe3+還原能力、DPPH自由基及ABTS陽離子自由基清除能力的貢獻(xiàn)最大，金絲桃苷次之。對滁菊的類胡蘿卜素單體進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)其含有葉黃素和β-類胡蘿卜素2 種類胡蘿卜素單體，其中葉黃素含量最高，在僅考慮單獨(dú)作用情況下其對DPPH自由基的清除能力貢獻(xiàn)最大。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，滁菊是一類具有良好抗氧化能力的天然抗氧化劑，但目前市面上滁菊產(chǎn)品較少，加工較為簡陋，使珍貴的資源未能完全開發(fā)利用，造成較大的浪費(fèi)。作為一種藥食同源食物，滁菊可以被加工為功能飲料、果蔬復(fù)合粉配料，或者作為粥產(chǎn)品、面制品和乳制品等的添加劑，也可以直接作為酚類和類胡蘿卜素類等具有抗氧化能力物質(zhì)的提取原料以制備抗氧化保健品，具有廣闊的開發(fā)利用空間和巨大的市場潛力。對其進(jìn)行充分利用不僅可以減少資源浪費(fèi)，還可以豐富市場中菊花產(chǎn)品的種類，提高農(nóng)民的經(jīng)濟(jì)收益。