減味壽胎丸對(duì)甲醛胚胎毒性的干預(yù)作用

高新源， 王慧穎

[北京中醫(yī)藥大學(xué)深圳醫(yī)院（龍崗）婦科，廣東深圳 518112]

甲醛已被世界衛(wèi)生組織煙草控制框架公約（FCTC）列為煙氣優(yōu)先級(jí)管制污染物[1]，它對(duì)人類的生殖系統(tǒng)[2-3]、免疫系統(tǒng)[4]、神經(jīng)系統(tǒng)[5]、循環(huán)系統(tǒng)[5]等都有毒害。值得注意的是，大部分裝修材料及新購家具含有甲醛成分，尤其是劣質(zhì)的裝修材料，其甲醛成分遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過健康標(biāo)準(zhǔn)，且據(jù)研究報(bào)告顯示室內(nèi)甲醛殘留時(shí)間很長，當(dāng)它的濃度上升至高峰后會(huì)逐漸下降，但可持續(xù)殘留3～15年，這就使我國城市室內(nèi)污染非常嚴(yán)重[6-8]。為保障人類生殖健康，防止妊娠缺失及子代缺陷，學(xué)者們?cè)絹碓疥P(guān)注甲醛的生殖毒性[9-11]及治療[12]。清·張錫純所創(chuàng)立的壽胎丸由菟絲子、桑寄生、續(xù)斷、阿膠4味中藥組成，具有補(bǔ)腎安胎之功效，臨床療效確切。為進(jìn)一步探討壽胎丸對(duì)甲醛生殖毒性的拮抗作用，本研究觀察了減味壽胎丸對(duì)甲醛所致妊娠缺失、胚胎缺陷的干預(yù)效果，因維生素C[12]可減少甲醛對(duì)體內(nèi)抗氧化成分的消耗，從而改善胚胎發(fā)育毒性，故以其作為陽性對(duì)照藥物?，F(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 孕鼠的準(zhǔn)備 選用12周齡SD大鼠雌性80只、雄性40只，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心所提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（粵）2013-0002；廣東省動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明號(hào)：00180392、00180394；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：44007200045043、44007200045044。將雌性與雄性12周齡SD大鼠按1∶2或1∶1的比例進(jìn)行交配，獲得57只孕鼠，隨機(jī)分為5組，即陰性對(duì)照組（12只）、模型對(duì)照組（11只）、維生素C組（11只）、減味壽胎丸低劑量組（11只）、減味壽胎丸高劑量組（12只）。

1.2 藥物及制備 減味壽胎丸組成：鹽菟絲子100 g，桑寄生50 g，續(xù)斷片50 g。加水武火煮沸后文火慢煎成灌胃液。按照60 kg成人與300 g大鼠體表面積的劑量換算公式（系數(shù)為4.78）換算大鼠給藥劑量。大鼠減味壽胎丸等效劑量為3.19 g·kg-1·d-1，作為本實(shí)驗(yàn)的低劑量；高劑量是低劑量的2倍，為6.38 g·kg-1·d-1。維生素C片，100 mg/片，由廣東恒健制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：170513。維生素C按照藥品說明書以成人給藥劑量換算大鼠等效劑量為150 mg·kg-1·d-1。

1.3 試劑與儀器 甲醛（西隴科技股份有限公司）。HOPE-MED 8050F/54全身吸入染毒控制儀（天津合普公司）；MIC-800-CH2O便攜式甲醛檢測(cè)儀（深圳市逸云天科技有限公司）。

1.4 造模 造模方法采用李詩宇[13]、朱嘉偉[14]等的靜吸式甲醛吸入染毒方式。自妊娠第1天起至妊娠第15天，除陰性對(duì)照組外，其余動(dòng)物置于全身吸入染毒柜中，根據(jù)甲醛不同染毒濃度、不同染毒時(shí)間預(yù)實(shí)驗(yàn)，確定給予110 mg/m3甲醛濃度吸入染毒2 h，每天1次。同時(shí)，自妊娠第1天起至妊娠第15天，減味壽胎丸低、高劑量組分別給予減味壽胎丸水煎液（劑量分別為3.19、6.38 g·kg-1·d-1）灌胃，維生素C組給予維生素C溶液（劑量為150 mg·kg-1·d-1）灌胃，模型對(duì)照組、陰性對(duì)照組給予等體積的純凈水灌胃。均連續(xù)15 d。

1.5 觀察指標(biāo)

1.5.1 胚胎著床情況 孕20 d給予孕鼠過量二氧化碳吸入安樂死，剖宮，記錄活胎數(shù)、吸收胎數(shù)、死胎數(shù)，計(jì)算總胎數(shù)、活胎率、吸收胎率。公式：總胎數(shù)=活胎數(shù)+吸收胎數(shù)+死胎數(shù)；活胎率=活胎數(shù)/總胎數(shù)；吸收胎率=吸收胎數(shù)/總胎數(shù)。

1.5.2 胎仔情況 檢查胎仔有無外觀異常，并測(cè)量胎仔體質(zhì)量、身長、尾長。

1.5.3 胎仔畸形情況 檢查胎仔外觀畸形、內(nèi)臟畸形及骨骼畸形情況。畸形發(fā)生率=畸形胎仔數(shù)/檢查胎仔數(shù)。

1.6 統(tǒng)計(jì)方法 應(yīng)用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示，計(jì)量資料數(shù)據(jù)方差齊，或數(shù)據(jù)經(jīng)轉(zhuǎn)換后方差齊，采用單因素方差分析，若數(shù)據(jù)經(jīng)轉(zhuǎn)換后方差仍不齊，采用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 著床情況

2.1.1 活胎情況 模型對(duì)照組活胎率較陰性對(duì)照組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；各給藥組活胎率較模型對(duì)照組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；減味壽胎丸高劑量組孕鼠活胎率與維生素C組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。具體結(jié)果見表1。

表1 各組妊娠母鼠孕20 d活胎情況比較Table 1 Comparison of the data about live fetal in the rats with pregnancy for 20 days of various groups

2.1.2 吸收胎情況 模型對(duì)照組孕鼠的吸收胎率較陰性對(duì)照組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；各給藥組孕鼠的吸收胎率較模型對(duì)照組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；減味壽胎丸高劑量組孕鼠吸收胎率與維生素C組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。具體結(jié)果見表2。

2.2 胎仔情況

2.2.1 胎仔體質(zhì)量 與陰性對(duì)照組比較，模型對(duì)照組胎仔體質(zhì)量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型對(duì)照組比較，各給藥組胎仔體質(zhì)量均升高，其中減味壽胎丸低劑量組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），其余則無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。具體結(jié)果見表3。

表2 各組妊娠母鼠孕20 d吸收胎情況比較Table 2 Comparison of the data of absorption embryo in the rats with pregnancy for 20 days of various groups

表3 各組妊娠母鼠孕20 d剖檢胎仔體質(zhì)量比較Table 3 Comparison of the fatal body mass in the rats with pregnancy for 20 days of various groups

2.2.2 胎仔身長、尾長 各組胎仔身長、尾長比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。具體結(jié)果見表4。

表4 各組妊娠母鼠孕20 d剖檢胎仔身長、尾長比較Table 4 Comparison of the fatal body length and tail length in the rats with pregnancy for 20 days of various groups （-x±s，l/mm）

2.2.3 胎仔畸形情況

2.2.3.1 外觀畸形 對(duì)各組胎仔外觀進(jìn)行檢查，均未見到任何畸形。

2.2.3.2 胎仔內(nèi)臟畸形 陰性對(duì)照組（86只）、減味壽胎丸高劑量組（93只）均未見內(nèi)臟畸形胎仔。模型對(duì)照組（81只）畸形胎仔1只，發(fā)生率1.2%。維生素C組（82只）畸形胎仔2只，發(fā)生率2.4%。減味壽胎丸低劑量組（88只）畸形胎仔2只，發(fā)生率2.3%。各組胎仔內(nèi)臟畸形發(fā)生率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。具體結(jié)果見表5。

表5 各組胎仔內(nèi)臟畸形檢查結(jié)果比較Table 5 Comparison of the data about malformation ofthe fatal viscera in the rats with pregnancy for 20 days of various groups

2.2.3.3 胎仔骨骼畸形 陰性對(duì)照組（96只）均未見骨骼畸形。模型對(duì)照組（87只）畸形胎仔14只，發(fā)生率16.1%，與陰性對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）；維生素C組（88只）畸形胎仔10只，發(fā)生率11.4%，與模型對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；減味壽胎丸低劑量組（93只）畸形胎仔5只，發(fā)生率5.4%，與模型對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；減味壽胎丸高劑量組（99只）畸形胎仔7只，發(fā)生率7.1%，與模型對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。具體結(jié)果見表6。

表6 各組胎仔骨骼畸形檢查結(jié)果比較Table 6 Comparison of the data about malformation of the fatal skeleton in the rats with pregnancy for 20 days of various groups [n/只（p/%）]

3 討論

本課題組在前期實(shí)驗(yàn)中對(duì)壽胎丸進(jìn)行了復(fù)方組成及配伍規(guī)律的研究，經(jīng)藥效驗(yàn)證篩選出補(bǔ)腎安胎的優(yōu)選配比方：菟絲子∶桑寄生∶續(xù)斷∶阿膠=20∶10∶10∶0，即去阿膠形成本次研究所用的減味壽胎丸。菟絲子為方中君藥，正如《醫(yī)學(xué)衷中參西錄》所言：“菟絲大能補(bǔ)腎，腎旺自能蔭胎也?！逼渌幮云胶?，能滋補(bǔ)肝腎、固沖安胎，是平補(bǔ)之良藥。桑寄生為補(bǔ)益肝腎、養(yǎng)血安胎之要藥，為方中臣藥，其味苦、甘，平，可協(xié)君藥補(bǔ)腎填精，固沖安胎，正如《藥性論》中記載所言：“桑寄生能令胎牢固，主懷妊漏血不止?！狈街欣m(xù)斷藥性苦辛，微溫，入肝、腎經(jīng)，為本方佐藥，可助菟絲子、桑寄生補(bǔ)肝腎、固沖任，使胎氣強(qiáng)壯，如《本草疏經(jīng)》載：“續(xù)斷，……為治胎產(chǎn)、續(xù)絕傷、療不足、療金瘡、理腰腎之要藥也。”減味壽胎丸中君藥菟絲子、臣藥桑寄生、佐藥續(xù)斷三藥相合，能益精填髓，精血同生，腎氣旺盛，胚胎穩(wěn)固。

胚胎著床是復(fù)雜精細(xì)的生理過程，其受有害環(huán)境的影響非常明顯，是公認(rèn)的反映環(huán)境中有害因素影響的敏感生物標(biāo)志物，因此，在進(jìn)行環(huán)境保護(hù)和質(zhì)量評(píng)價(jià)領(lǐng)域，胚胎著床情況是重要檢測(cè)指標(biāo)[15-16]。本研究結(jié)果表明，環(huán)境中的甲醛通過呼吸而進(jìn)入體內(nèi)，可經(jīng)胎盤屏障進(jìn)入胎仔，具有胚胎毒性，導(dǎo)致胚胎發(fā)育畸形、發(fā)育不良甚至是胚胎死亡；而減味壽胎丸及維生素C均可在一定程度上拮抗甲醛對(duì)胚胎的毒性，干預(yù)甲醛對(duì)胎仔的致畸、致死作用，且由于自然界“優(yōu)勝劣汰”的規(guī)律，異常胚胎會(huì)被吸收，而減味壽胎丸干預(yù)能保證優(yōu)質(zhì)胚胎優(yōu)先發(fā)育，促進(jìn)不良胚胎吸收，減少畸形兒的出現(xiàn)機(jī)率。

胚胎毒性還主要表現(xiàn)在胎仔發(fā)育水平及發(fā)育畸形情況。本研究結(jié)果表明，甲醛具有生育毒性，可通過胚胎胎盤轉(zhuǎn)運(yùn)，對(duì)子代的生理發(fā)育產(chǎn)生不良影響，造成胎仔體質(zhì)量減輕，但對(duì)身長及尾長無明顯影響，還可以導(dǎo)致胎仔畸形尤其以致骨骼畸形最為明顯，而減味壽胎丸可拮抗此種毒性，進(jìn)而增加胎仔體質(zhì)量，減輕甲醛對(duì)胎仔的致畸力，減少胎仔畸形的發(fā)生。

綜上所述，減味壽胎丸可拮抗甲醛的生殖毒性，保證優(yōu)質(zhì)胚胎優(yōu)先發(fā)育，增加胎仔體質(zhì)量，減輕甲醛的致畸能力，可為臨床應(yīng)用和推廣提供依據(jù)。