探討國(guó)內(nèi)抗釀酒酵母抗體（ASCA）鑒別診斷克羅恩病的截?cái)帱c(diǎn)（cutoff值）的相關(guān)研究

姚芳 桑怡 范一宏

[摘要] 目的 檢測(cè)抗釀酒酵母抗體IgG、IgA在克羅恩病患者中的表達(dá)水平，探討其鑒別診斷克羅恩病的cutoff值。方法 納入2018年10月～2019年4月期間診斷為克羅恩病的患者109例，潰瘍性結(jié)腸炎30例，內(nèi)鏡檢查無異常者25例。間接酶聯(lián)免疫檢測(cè)法測(cè)定患者血清中抗釀酒酵母抗體IgG、IgA表達(dá)水平，計(jì)算其cutoff值、靈敏度、特異度等指標(biāo)。 結(jié)果 抗釀酒酵母抗體的陽性率為47.71%，抗釀酒酵母抗體IgG的cutoff值為10.5，靈敏度為71.56%，特異度為61.82%;抗釀酒酵母抗體IgA的cutoff值為0.415，靈敏度為66.06%，特異度為78.18%;兩者任一陽性的靈敏度為85.32%，兩者均陽性的特異度為80.00%。 結(jié)論 抗釀酒酵母抗體IgG、IgA在中國(guó)人群克羅恩病患者中的表達(dá)水平不高，需制定相應(yīng)的cutoff值，兩者聯(lián)合檢測(cè)可提高克羅恩病患者檢出率。

[關(guān)鍵詞] 克羅恩病;抗釀酒酵母抗體;ROC曲線;靈敏度;特異度

[中圖分類號(hào)] R574.62 ? ? ? ? ?[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A ? ? ? ? ?[文章編號(hào)] 1673-9701（2019）30-0010-04

Study on the investigation on the cutoff value of domestic anti-Saccharomyces cerevisiae antibody（ASCA） for differential diagnosis of Crohn's disease

YAO Fang1 ? SANG Yi1 ? FAN Yihong2

1.Department of Gastroenterology， Hangzhou Hospital of TCM， Hangzhou 310007， China;2.Department of Gastroenterology， the First Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medicine University， Hangzhou ? 310006， China

[Abstract] Objective To detect the expression level of anti-Saccharomyces cerevisiae antibody IgG and IgA in the patients with Crohn's disease， and to explore the cutoff value of differential diagnosis of Crohn's disease. Methods A total of 109 patients with Crohn's disease， 30 patients with ulcerative colitis and 25 patients with no abnormalities by endoscopy were enrolled from October 2018 to April 2019. Indirect enzyme-linked immunosorbent assay was used for the determination of ASCA IgG and IgA expression levels in patients' serum， and the indicators such as cutoff value， sensitivity， and specificity were calculated. Results The positive rate of ASCA was 47.71%， the cutoff value of ASCA IgG was 10.5， the sensitivity was 71.56% and the specificity was 61.82%; the cutoff value of ASCA IgA was 0.415， the sensitivity was 66.06%， and the specificity was 78.18%; the sensitivity of either positive was 85.32%， and the specificity of both positive was 80.00%. Conclusion The expression levels of ASCA IgG and IgA are not high in the patients with Crohn's disease in China. A corresponding cutoff value needs to be established， and the combined detection of the two can improve the detection rate of patients with Crohn's disease.

[Key words] Crohn's disease; Anti-Saccharomyces cerevisiae antibody （ASCA）; ROC curve; Sensitivity; Specificity

克羅恩?。–rohn's disease，CD）是一種多種因素導(dǎo)致的可累及全消化道的慢性炎性肉芽腫性疾病，不同因素所導(dǎo)致的不同疾病亞型的混雜，導(dǎo)致了CD臨床譜的異質(zhì)性，臨床表型紛繁多樣[1]，僅靠?jī)?nèi)鏡、影像等檢查常不能確診，且病理往往不典型，長(zhǎng)期隨訪過程中常導(dǎo)致疾病的進(jìn)展，因此，臨床特別是基層臨床非常需要一些明確的客觀性檢測(cè)指標(biāo)，而抗釀酒酵母抗體（Anti-Saccharomyces cerevisiae antibody，ASCA）是國(guó)內(nèi)外研究較深入的用來輔助診斷CD的特異性血清學(xué)標(biāo)記物，但國(guó)內(nèi)外研究數(shù)據(jù)差距較大，其具體應(yīng)用價(jià)值在國(guó)內(nèi)存在較大爭(zhēng)議。本研究旨在根據(jù)我國(guó)CD患者ASCA表達(dá)水平制定相應(yīng)的cutoff值，使其更好地應(yīng)用于臨床。

1 資料與方法

1.1一般資料

納入2018年10月～2019年4月期間就診于浙江省中醫(yī)院、浙江大學(xué)附屬邵逸夫醫(yī)院、浙江大學(xué)附屬第一醫(yī)院、浙江大學(xué)附屬第二醫(yī)院、蘇州大學(xué)附屬第三醫(yī)院、杭州市中醫(yī)院等6家醫(yī)院并根據(jù)《炎癥性腸病診斷與治療的共識(shí)意見（2018年·北京）》被確診[2]為CD的患者109例，并選取同期潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）患者30例，健康者25例作為正常組，各組在年齡、性別構(gòu)成比、病程方面比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），見表1。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 ?清晨空腹抽取靜脈血5 mL，離心抽取上方血清1 mL置于2 mL EP管中，放入-80℃冰箱保存，集中檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)。血清學(xué)檢測(cè)采用單盲法進(jìn)行。

1.2.2 抗體測(cè)定 ?各指標(biāo)采用ELISA法檢測(cè)，試劑盒購(gòu)自蘇州和銳醫(yī)藥科技有限公司。檢測(cè)步驟嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。將所有檢驗(yàn)試劑在18℃～25℃條件下平衡0.5 h，然后按1：20去蒸餾水進(jìn)行稀釋。樣本1：101進(jìn)行稀釋，取100 μL稀釋后樣本和陰性質(zhì)控（蒸餾水）加入酶標(biāo)板微孔中，覆上板貼33℃搖床200 r溫育120 min。棄去液體，洗滌液洗板3次，250 μL/孔，每次浸泡3 min，甩干。每孔加酶標(biāo)二抗100 μL，覆上板貼，33℃～35℃搖床200 r溫育120 min。棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，250 μL/孔，每次浸泡3 min，甩干。將底物溶液A和B 1：1混合，依序每孔加底物溶液100 μL，37℃避光顯色15 min。依次每孔加終止液50 μL，終止反應(yīng)。反應(yīng)終止后5 min內(nèi)用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度（OD）值。

1.3 觀察指標(biāo)

ASCA IgG、ASCA IgA在各組中的陽性率，診斷CD的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測(cè)值及陰性預(yù)測(cè)值。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，受試者一般臨床資料采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，指標(biāo)陽性率采用χ2檢驗(yàn)，并采用ROC曲線尋找ASCA IgG、ASCA IgA的cutoff值，根據(jù)cutoff值計(jì)算其靈敏度、特異度、陽性預(yù)測(cè)值及陰性預(yù)測(cè)值。

2 結(jié)果

2.1 ASCA IgG、IgA在各組患者中的陽性率

ASCA IgG、IgA在CD患者中的陽性率分別為16.51%、40.37%，均高于UC組、正常組，兩者聯(lián)合檢測(cè)陽性率達(dá)47.71%，與其他兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.001），見表2。

2.2 ASCA IgG、IgA鑒別診斷CD的價(jià)值

ASCAIgG、ASCAIgA在CD患者中高表達(dá)，因此，我們以CD組為實(shí)驗(yàn)組，以UC及正常組為對(duì)照組，計(jì)算兩指標(biāo)的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值及ROC曲線下面積，以此分析其鑒別診斷CD的價(jià)值。

ASCA IgG診斷CD的特異度較高，達(dá)96.36%，但靈敏度嚴(yán)重不足;ASCA IgG、ASCA IgA兩者聯(lián)合檢測(cè)可提高靈敏度至46.79%，但在篩查疾病方面仍存在不足;兩者特異度均較高，聯(lián)合檢測(cè)時(shí)更高達(dá)100%，鑒別診斷CD價(jià)值高，見表3、4;ROC曲線分析得出ASCA IgG、ASCA IgA曲線下面積分別為0.671、0.760，從而得出最佳靈敏度和特異度及曲線下面積的截?cái)帱c(diǎn)（cutoff值）分別為10.5、0.415（圖1、2）。根據(jù)新的截?cái)帱c(diǎn)重新計(jì)算，ASCA IgG、IgA靈敏度均有不同程度提高，但特異度有所下降;但兩者聯(lián)合檢測(cè)時(shí)任一陽性的靈敏度高達(dá)85.32%，均陽性的特異度高達(dá)80.00%，見表5、6。

3 討論

克羅恩病的發(fā)病與腸道微生物及免疫反應(yīng)失調(diào)存在顯著相關(guān)性，這些不平衡反應(yīng)也包括體液免疫，如ASCA的產(chǎn)生。ASCA是針對(duì)釀酒酵母細(xì)胞壁上寡甘露糖苷抗原表位的血清標(biāo)志物，ASCA陽性提示患者對(duì)酵母菌抗原耐受性缺失。1988年研究[3]發(fā)現(xiàn)CD患者血清ASCA IgA和IgG滴度高于對(duì)照組，隨著研究深入，ASCA以37%～72%的靈敏度及82%～100%的特異度[4]被廣泛應(yīng)用于輔助診斷CD，鑒別腸結(jié)核、潰瘍性結(jié)腸炎、腸道白塞等疾病[4-11]。

來自歐洲的研究報(bào)道顯示CD患者ASCA的陽性率可達(dá)60%～70%，美國(guó)一項(xiàng)研究[12]亦顯示ASCA陽性率達(dá)62%，而本研究中ASCA陽性率僅為47.71%，與日本的調(diào)查結(jié)果（45.6%）[13]及既往國(guó)內(nèi)研究結(jié)果[14]相一致，均遠(yuǎn)低于歐洲人群。

ASCA有IgA和IgG兩個(gè)亞型[15]。有研究認(rèn)為，ASCA IgA對(duì)CD更具有特異性，分泌型IgA參與了CD疾病發(fā)病過程中的腸道免疫機(jī)制，更有研究表明ASCA IgA 對(duì)CD有100%的特異性[16]，但大宗人群研究不能重復(fù)這一結(jié)果，本研究結(jié)果亦顯示ASCA IgA單獨(dú)檢測(cè)特異度及陽性預(yù)測(cè)值高達(dá)83.64%、82.69%，但靈敏度及陰性預(yù)測(cè)值則明顯不足，僅39.45%、41.07%，而ASCAIgG也顯示出相同結(jié)果，兩者聯(lián)合檢測(cè)時(shí)同樣顯示出靈敏度的嚴(yán)重不足，使之無法很好地用于臨床篩查。

導(dǎo)致這一研究結(jié)果的原因可能與疾病嚴(yán)重度、活動(dòng)度、病變累及范圍不同等有關(guān)：國(guó)外炎癥性腸病患者均較嚴(yán)重，CDAI評(píng)分在中、重度者居多，腸瘺、梗阻等并發(fā)癥導(dǎo)致需要外科手術(shù)的幾率高，而我國(guó)該病患者則多以輕、中度為主，并發(fā)癥較少見，極少發(fā)展到需要外科手術(shù)[17]。同時(shí)，國(guó)外CD患者多累及小腸，以上消化道病變?yōu)橹髡叨嘁姡覈?guó)則以結(jié)腸型CD多見，一項(xiàng)回顧性研究顯示，ASCA鑒別結(jié)腸型CD靈敏度和特異度分別下降至25%～44%、86%～95%[18]。同時(shí)，ASCA的表達(dá)為一種家族性免疫學(xué)性狀[19-20]，其在有家族史克羅恩病患者中的檢出率明顯高于無家族史的所謂散發(fā)病例，而本研究入組的多為無家族史的散發(fā)CD患者;同時(shí)，CD患者中也有相當(dāng)一部分病例為ASCA血清學(xué)陰性者，而人種的差異，亞洲人群中ASCA血清學(xué)陰性者占多數(shù)也可能導(dǎo)致這一研究結(jié)果。

因此，本研究以ASCA IgG、ASCA IgA在CD患者及對(duì)照組（UC患者及健康者）中的表達(dá)水平，采用ROC曲線重新尋找cutoff值，根據(jù)cutoff值重新計(jì)算兩者的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測(cè)值及陰性預(yù)測(cè)值，結(jié)果顯示，矯正截?cái)帱c(diǎn)后ASCA IgG及ASCA IgA靈敏度及陰性預(yù)測(cè)值均有不同程度提高，分別為71.56%、78.79%及66.06%、85.71%，可作為篩查指標(biāo)，即陽性可高度懷疑CD，但特異度及陽性預(yù)測(cè)值不足，不能用于鑒別診斷CD，將兩者聯(lián)合檢測(cè)，結(jié)果顯示：任意一個(gè)陽性時(shí)，靈敏度高達(dá)85.32%，兩者均陽性時(shí)，特異度高達(dá)80%，提示ASCA對(duì)協(xié)助診斷CD有其臨床意義，且不同亞型需同時(shí)檢測(cè)。

但此研究尚有不足之處，該指標(biāo)與CD疾病位置、活動(dòng)度、藥物治療前后等方面的關(guān)系均未納入研究，且病例集中在南方，僅有單一試劑盒，不排除不同試劑盒導(dǎo)致的不同研究結(jié)果，故需進(jìn)一步在全國(guó)范圍內(nèi)進(jìn)行多中心研究，納入不同疾病分期患者，且需多種試劑盒同時(shí)檢測(cè)，以便尋找適合中國(guó)CD患者的檢測(cè)試劑盒及最佳截?cái)嘀担云诟玫貞?yīng)用于臨床。

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（收稿日期：2019-04-28）