銀川市奶牛子宮內(nèi)膜炎發(fā)病調(diào)查及病原菌分離鑒定

馬學(xué)禮

（寧夏回族自治區(qū)農(nóng)業(yè)學(xué)校 750021）

1 試驗(yàn)材料

1.1 試驗(yàn)動物

寧夏回族自治區(qū)銀川市各縣區(qū)7 家規(guī)模養(yǎng)殖園區(qū)的良種荷斯坦奶牛。

1.2 培養(yǎng)基

普通營養(yǎng)培養(yǎng)基、血液瓊脂平板、麥康凱培養(yǎng)基、甘露醇高鹽瓊脂培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基。

1.3 儀器及藥品

超凈工作臺、高倍顯微鏡、游標(biāo)卡尺、不銹鋼蒸汽消毒器、恒溫干燥箱、恒溫培養(yǎng)箱、高速離心機(jī)、一次性輸精管套、輸精器、75%酒精棉、2%新潔爾滅消毒液等；不同規(guī)格的一次性注射器若干。

2 試驗(yàn)方法

2.1 奶牛子宮內(nèi)膜炎診斷

經(jīng)臨床診斷，患牛拱腰、舉尾，有時(shí)努責(zé)，不時(shí)從陰道流出大量污濁或棕黃色黏液膿性分泌物，有腥臭味，內(nèi)含絮狀物或胎衣碎片，常附著尾根，形成干癡。子宮內(nèi)膜炎的患牛子宮分泌物量多，較稀薄不能拉成絲狀，或量少且黏稠渾濁，呈灰白色或灰黃色[1]。陰道檢查陰道內(nèi)可見子宮頸口不同程度的腫脹和充血。在子宮頸封閉不全時(shí)，有不同性狀的炎性分泌物經(jīng)子宮頸排出，可判定為奶?；加凶訉m內(nèi)膜炎。

2.2 病料采集

獸醫(yī)工作人員將病牛保定，清理患子宮內(nèi)膜炎的病牛外陰糞便，清洗病牛陰門，采用事先準(zhǔn)備好的2%新潔爾滅沖洗消毒。將經(jīng)過不銹鋼蒸汽滅菌器消毒過的輸精專用金屬管插入一次性無菌輸精管套中，采用常用輸精方法將金屬管套插入患病奶牛子宮內(nèi)，用50ml 一次性滅菌注射器在金屬管另一端抽吸數(shù)次，迅速取出輸精管套，將金屬管頂部的分泌物快速注入無菌玻璃瓶中，嚴(yán)密封口，標(biāo)記病牛號和采集日期、時(shí)間，迅速送病料到微生物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)[2]。另取患病奶牛子宮分泌物進(jìn)行涂片染色鏡檢，在采集病料時(shí)切記不能污染病料。

2.3 細(xì)菌分離

利用超凈工作臺將患病奶牛子宮洗出液用無菌生理鹽水稀釋一倍后，分別接種到普通營養(yǎng)培養(yǎng)基、血瓊脂培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基和甘露醇高鹽瓊脂培養(yǎng)基平板內(nèi)，然后放置37℃溫箱內(nèi)分別培養(yǎng)24h[3]。根據(jù)細(xì)菌生長狀況、溶血與否、菌落形態(tài)、顏色等分別挑取單菌落進(jìn)行進(jìn)一步的劃線分離純化，平板37℃倒置培養(yǎng)24h。如發(fā)現(xiàn)雜菌需繼續(xù)純化，直到獲得純培養(yǎng)為止。菌種用含20%甘油的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，低溫保存。

2.4 細(xì)菌鑒定

將純化的各菌株接種于細(xì)菌生化鑒定管中，然后放入滅菌平皿，置37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h，觀察并記錄生化反應(yīng)結(jié)果[4]。根據(jù)奶牛子宮內(nèi)膜炎致病細(xì)菌的生物學(xué)特性、培養(yǎng)特性和染色特性等進(jìn)行歸類，再根據(jù)奶牛子宮內(nèi)膜炎致病細(xì)菌生化反應(yīng)特性進(jìn)行鑒定。

2.5 藥敏試驗(yàn)

采用濾紙片瓊脂擴(kuò)散法。藥敏試驗(yàn)結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：抑菌圈直徑(包含濾紙片直徑) 用游標(biāo)卡尺進(jìn)行精密測量。藥敏試驗(yàn)敏感性標(biāo)準(zhǔn)分為3 級：抑菌圈直徑≥20mm 為非常敏感(++)、在10～20mm 是中敏(+)，＜10mm 為耐藥(-)。

3 結(jié)果

3.1 奶牛子宮內(nèi)膜炎發(fā)病情況

表1 銀川市各縣區(qū)7 家奶牛養(yǎng)殖園區(qū)奶牛子宮內(nèi)膜炎發(fā)生情況統(tǒng)計(jì)

表1 表明，銀川市各區(qū)縣7 家奶牛養(yǎng)殖園區(qū)奶牛子宮內(nèi)膜炎的發(fā)病率為20.65%。

3.2 細(xì)菌分離鑒定結(jié)果

本試驗(yàn)采集銀川市各縣區(qū)7 家奶牛養(yǎng)殖園區(qū)69 頭患子宮內(nèi)膜炎的奶牛的子宮洗出液病料樣品，有效分離并鑒定出6 種類型病原細(xì)菌共計(jì)102 株。

表2 奶牛子宮內(nèi)所分離細(xì)菌種類及數(shù)量

由表2 可知，本次分離出的患牛奶牛子宮內(nèi)膜炎的主要致病菌為大腸桿菌、葡萄球菌、鏈球菌。

3.3 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

表3 藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果（單位：mm）

藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，分離出的葡萄球菌對慶大霉素、環(huán)丙沙星非常敏感，分離出的大腸桿菌對慶大霉素、氟苯尼考、環(huán)丙沙星、卡那霉素非常敏感；分離出來的鏈球菌對青毒素、環(huán)丙沙星非常敏感；分離出的沙門氏菌對慶大霉素、氟苯尼考、環(huán)丙沙星、卡那霉素非常敏感；分離出的消化鏈球菌對氨芐西林鈉、慶大霉素、氟苯尼考非常敏感[5]，參見表3。綜上所述，治療奶牛子宮內(nèi)膜炎的首選藥物是環(huán)丙沙星、慶大霉素、氟苯尼考、卡那霉素?？肆置顾亍⑶嗝顾?、氨芐西林鈉效果欠佳，究其原因很大程度上與臨床治療過程中長期反復(fù)使用這些藥物產(chǎn)生耐藥性有一定關(guān)系。

4 討論

4.1 奶牛子宮內(nèi)膜炎發(fā)病率

奶牛子宮內(nèi)膜炎發(fā)病原因有很多，主要有病原菌感染、飼養(yǎng)管理、環(huán)境因素、機(jī)體自身抵抗力等，多數(shù)情況下是由于奶牛在產(chǎn)犢過程中感染傳染性致病菌所致，本試驗(yàn)對銀川市各縣區(qū)7 家奶牛場患病牛只進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查得知，銀川市各區(qū)縣奶牛養(yǎng)殖園區(qū)奶牛子宮內(nèi)膜炎的發(fā)病率為20.65%，與其他地區(qū)相關(guān)研究資料相比，銀川地區(qū)奶牛子宮內(nèi)膜炎發(fā)病率不低。

4.2 奶牛子宮內(nèi)膜炎病原菌

病原菌經(jīng)產(chǎn)道進(jìn)入奶牛子宮，引起奶牛子宮內(nèi)膜炎的病原菌種類較多，本次試驗(yàn)分離出的6 類病原細(xì)菌分別是大腸桿菌、鏈球菌、葡萄球菌、沙門氏菌、消化鏈球菌、棒狀桿菌。由于試驗(yàn)存在一定誤差，子宮分泌物是否還有其他種類細(xì)菌還需進(jìn)一步探討。

4.3 病原菌藥敏試驗(yàn)

本次分離出的病原菌有大腸桿菌、葡萄球菌、鏈球菌、沙門氏菌、消化鏈球菌、棒狀桿菌，經(jīng)過藥敏試驗(yàn)得出主要致病菌為大腸桿菌、葡萄球菌、鏈球菌；治療奶牛子宮內(nèi)膜炎的首選理想藥物有慶大霉素、環(huán)丙沙星、氟苯尼考、卡那霉素。氨芐西林鈉、青霉素、克林霉素效果不明顯，抗菌藥子宮灌注投藥是治療奶牛子宮內(nèi)膜炎的主要方法，如長期用藥或不規(guī)范用藥，引起抗藥性、耐藥性等不良因素的發(fā)生，從而影響藥物治療效果，導(dǎo)致給藥劑量增大，用藥次數(shù)增加，治療成本提高[6]。同時(shí)可導(dǎo)致藥物殘留，牛奶無法食用，導(dǎo)致此類常規(guī)藥物的應(yīng)用受到限制。

5 小結(jié)

綜上所述，導(dǎo)致奶牛子宮內(nèi)膜炎的病原菌種類較多，從銀川地區(qū)7 家奶牛養(yǎng)殖園區(qū)患子宮內(nèi)膜炎的病牛子宮洗出液中分離出的6 種類型病原菌，與其他地區(qū)分離到的細(xì)菌種類和比例有一定差異，這與省市奶牛養(yǎng)殖區(qū)域的環(huán)境、飼養(yǎng)管理、奶牛體況、預(yù)防和治療情況等有較大關(guān)系。本試驗(yàn)結(jié)果可以看出，從患奶牛子宮洗出液分離出的大腸桿菌、葡萄球菌、鏈球菌是本地區(qū)奶子宮內(nèi)膜炎的主要病原菌。根據(jù)葡萄球菌、鏈球菌和大腸桿菌的特性得知，這3 類細(xì)菌具備高傳染性、高致病性等特點(diǎn)，奶牛子宮內(nèi)膜炎主要在母牛生產(chǎn)過程中發(fā)生傳播，大多數(shù)情況下經(jīng)地下水源、工作人員的手、手術(shù)剪刀等途徑混入產(chǎn)道和子宮。高傳染性、高致病性病原菌對奶牛損傷非常大，一旦感染奶牛會形成傳染源，如是隱性感染也會感染養(yǎng)殖場其他牛只，導(dǎo)致傳染病的發(fā)生。因此，對于導(dǎo)致奶牛子宮內(nèi)膜炎的病原菌應(yīng)及早發(fā)現(xiàn)，快速治療，采取有效防控措施控制傳染源，最大限度減少感染機(jī)會，更要采取相應(yīng)措施阻斷傳播途徑。

本次試驗(yàn)還分離到環(huán)境性致病細(xì)菌，環(huán)境性致病菌一般存在于養(yǎng)殖區(qū)周圍環(huán)境中，采取消毒措施也不能徹底撲滅，如飼養(yǎng)管理不當(dāng)，奶牛抵抗能力下降，環(huán)境性病原細(xì)菌會乘虛而入，導(dǎo)致奶牛發(fā)病。因此，養(yǎng)殖場要及時(shí)清潔、保持干燥，可有效降低環(huán)境性致病細(xì)菌的傳播感染，減少奶牛子宮內(nèi)膜炎的發(fā)病概率。在傳染病臨床治療實(shí)踐過程中多采用聯(lián)合用藥或交替使用藥物，減小單純藥物的用藥劑量或用藥時(shí)間，以預(yù)防耐藥菌株的產(chǎn)生。