液相色譜法同時(shí)檢測(cè)肉制品中4種食品添加劑

厲建軍，王迎迎，侯世松，朱希敏，曹福紅

（煙臺(tái)喜旺肉類食品有限公司，山東煙臺(tái) 264000）

肉制品中主要含有蛋白質(zhì)、脂肪和少量碳水化合物，同時(shí)還含有少量維生素和無機(jī)鹽等，營(yíng)養(yǎng)十分豐富，通常在適宜的情況下蛋白質(zhì)會(huì)被微生物污染而發(fā)生變質(zhì)[1]；脂肪也會(huì)因?yàn)楸谎趸晃⑸锓纸猓瑥亩鴮?dǎo)致腐敗變質(zhì)；人們?cè)诔Ｄ甑慕?jīng)驗(yàn)和知識(shí)的積累中找到了很多防止變質(zhì)的方法，如低溫冷藏、隔絕空氣[2]、降低水活度、調(diào)節(jié)pH值[3]等方法來殺菌或抑菌。在生產(chǎn)加工過程中，企業(yè)通常采用添加山梨酸、苯甲酸、脫氫乙酸等防腐劑，來達(dá)到保鮮和防腐的目的，通過添加苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸等防腐劑進(jìn)行防腐保鮮。但是，有些不法商販為牟取暴利，存在濫用食品添加劑或者超范圍超標(biāo)準(zhǔn)使用添加劑等問題，其中最為普遍的是濫用防腐劑和甜味劑。長(zhǎng)期食用過量防腐劑和甜味劑等食品添加劑會(huì)嚴(yán)重?fù)p害肝腎功能，影響身體健康。因此，建立一種快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)肉制品中防腐劑和甜味劑等食品添加劑的方法尤為重要。

當(dāng)前對(duì)防腐劑（苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸）和甜味劑（糖精鈉）的測(cè)定方法主要采用GB 5009.28和GB 5009.121這2種。對(duì)1份樣品同時(shí)檢測(cè)防腐劑和甜味劑時(shí)，需要分開檢測(cè)，這樣就存在檢測(cè)效率低下等突出問題。為提高檢測(cè)效率，滿足高效、快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)需求，采用高效液相色譜法（High performance liquid chromatography，HPLC） 同時(shí)檢測(cè)肉制品中常見甜味劑和防腐劑的方法進(jìn)行了研究，可同時(shí)檢測(cè)苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸等4種常見甜味劑和防腐劑[4]。該方法操作簡(jiǎn)便，可實(shí)現(xiàn)同時(shí)檢測(cè)，是一種快速、高效、準(zhǔn)確度高的方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Waters 2695型高效液相色譜儀，配Waters 2998 PDA檢測(cè)器；DS-8510型超聲波發(fā)生器，上海生析超聲儀器有限公司產(chǎn)品；離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠產(chǎn)品。

甲醇（HPLC），F(xiàn)isher公司提供；乙酸銨（HPLC），天津科密歐化學(xué)試劑有限公司提供；亞鐵氰化鉀（分析純）、乙酸鋅（分析純），天津福晨有限公司提供；娃哈哈水，杭州娃哈哈公司提供；苯甲酸（1.00 mg/mL）、脫氫乙酸 （1.00 mg/mL）、山梨酸（1.00 mg/mL)、糖精鈉（1.00 mg/mL），中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院提供。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱：XDB-C18型（4.6 mm×250 mm，5 μm），柱溫35℃，流動(dòng)相：甲醇+乙酸銨溶液，流速1.0 mL/min，進(jìn)樣量20 μL，檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm，流動(dòng)相比例[5]：甲醇∶0.2 mmol/L乙酸銨溶液=3∶97，流速1.0 mL/min，等度洗脫。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液和工作溶液配制

苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸、糖精鈉混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（100 mg/L）：分別準(zhǔn)確量取5 mL質(zhì)量濃度為1 000 mg/L標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，用娃哈哈水定容至50.0 mL。0～7℃儲(chǔ)存，有效期6個(gè)月。

苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸、糖精鈉混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液：分別準(zhǔn)確吸取苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸、糖精鈉混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液0，0.1，0.5，1.0，2.0，5.0 mL，娃哈哈水定容至10 mL，配制成質(zhì)量濃度分別為0，1.00，5.00， 10.0，20.0，50.0 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液。現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.2.3 樣品前處理[5]

稱取1 g（精確到0.001 g） 樣品于50 mL具塞離心管中，加水約25 mL，渦旋均勻，于50℃水浴超聲處理20 min，冷卻至室溫后加亞鐵氰化鉀溶液（106 g/L）、乙酸鋅溶液（220 g/L） 各2 mL，混勻，以轉(zhuǎn)速8 000 r/min離心5 min，將水相轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，于殘?jiān)屑铀?0 mL，渦旋混勻后超聲5 min，以轉(zhuǎn)速8 000 r/min離心5 min，將水相轉(zhuǎn)移至同一支100 mL容量瓶中，并用水定容至刻度，混勻。取適量上清液，過0.22 μm濾膜后待上機(jī)測(cè)試。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜柱的條件優(yōu)化

當(dāng)色譜條件為XDB-C18型（4.6 mm×250 mm×5 μm），流動(dòng)相：0.2 mmol/L乙酸銨 - 甲醇 （97∶3）等梯度，柱溫35℃，流速1.0 mL/min，進(jìn)樣量20 μL，檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm時(shí)，4種目標(biāo)化合物均能有效分離，但總分析時(shí)間較長(zhǎng)，研究發(fā)現(xiàn)，乙酸銨溶液pH值對(duì)目標(biāo)物的分離時(shí)間影響顯著，通過向乙酸銨溶液中加入乙酸降低pH值，能顯著減少總分析時(shí)間[6]。當(dāng)乙酸銨pH值為7.8～8.0時(shí)，4種目標(biāo)化合物能在15 min內(nèi)進(jìn)行有效分離。

4種防腐劑和甜味劑的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖見圖1。

圖1 4種防腐劑和甜味劑的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線、線性范圍、相關(guān)系數(shù)及檢出限[7]

將1 000 mg/L的各種添加劑單標(biāo)準(zhǔn)溶液依次稀釋配制成質(zhì)量濃度為1.0，2.0，5.0，7.0，10.0 mg/L的系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，根據(jù)各峰面積（Y）對(duì)質(zhì)量濃度（X，mg/L）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性回歸方程。

4種添加劑的回歸方程、線性相關(guān)系數(shù)、線性范圍及檢出限（信噪比S/N=3） 見表1。

結(jié)果表明，在0.01～10.00 mg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，各添加劑的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)（R）不小于0.999 5，檢出限為0.000 8～0.001 8 g/kg。

表1 4種添加劑的回歸方程、線性相關(guān)系數(shù)、線性范圍及檢出限

2.3 回收率及精密度試驗(yàn)

以陰性控制樣品為測(cè)試樣品，苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸及糖精鈉用量水平分別為0.01，0.04，0.075 g/kg，每個(gè)水平在相同試驗(yàn)條件下做6個(gè)平行樣，計(jì)算回收率、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

4種添加劑樣品加標(biāo)回收率見表2。

2.4 重復(fù)性試驗(yàn)

表2 4種添加劑樣品加標(biāo)回收率 /%

取陰性控制樣品6份，苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸及糖精鈉用量水平均為0.04 g/kg，按1.2.3前處理方法處理，樣品中所測(cè)4種化合物的峰面積的RSD為3.6%～5.3%。

3 結(jié)論

建立了液相色譜法同時(shí)測(cè)定肉制品中常見的3種防腐劑和1種甜味劑的檢測(cè)方法，確定了色譜條件。該方法測(cè)定苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸在線性范圍1.0～10.0 mg/L，定量限分別為0.001 8，0.001 1，0.000 5，0.000 8 g/kg，回收率為 85.5%～101.0%。通過試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法操作簡(jiǎn)單、分析速度快、重現(xiàn)性好、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，滿足肉制品中多種添加劑快速分離檢測(cè)要求，具有較高的實(shí)用價(jià)值和應(yīng)用前景。