渝東北地區(qū)不同孕周的孕婦血小板抗體篩查分析

李賢見 黃裕林 黎妮 朱興春

重慶市開州區(qū)人民醫(yī)院檢驗科，重慶 405499

人類血小板表面含有許多復雜的血型抗原，機體在輸血、妊娠、器官移植等情況下刺激免疫系統(tǒng)產生血小板同種抗體[1]。母嬰間如存在血型不合，可刺激母體產生針對胎兒血小板的血小板抗體，導致流產和新生兒同種免疫性血小板減少癥的發(fā)生[2-4]。因此對孕婦進行產前血小板抗體的篩查相當必要。為了解孕期孕婦體內血小板抗體狀況，本研究采用問卷調查、實驗室指標檢測等方法對984例不同孕周的孕婦進行了調查，分析引起孕婦產生血小板抗體的危險因素。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選擇2016年1月至2018年12月來本院進行產檢的孕期大于12周的984例孕婦為研究對象。年齡18～45歲，中位年齡27歲；其中年齡≤20歲8例，20～29歲630例，30～39歲285例，≥40歲61例；孕12～16周208例，孕17～21周264例，孕22～26周265例，孕27～31周164例，≥32周83例；經問卷調查：無流產史者904例，有流產史者80例，其中1次流產45例，2次流產21例，2次以上流產14例；1次妊娠者450例，2次妊娠者250例，3次妊娠者200例，3次以上妊娠者84例；有分娩史的孕婦284例，其中經陰道產170例，經剖宮產114例；A型血孕婦217例，B型血孕婦246例，AB型血孕婦283例，O型血孕婦238例。所有研究對象均無輸血史，意外抗體篩查均為陰性。

1.2 儀器與試劑

血小板抗體檢測采用美國BD公司產的流式細胞儀FACSCalibur，一次性用Falcon 管，PBS緩沖液（1g/L疊氮鈉），固定液（0.1%多聚甲醛），美國BD公司購買的FITC-羊抗人IgG，實驗室自備的血小板抗原譜細胞。

1.3 血小板檢測方法

選取O型血小板供給者，利用聚合酶鏈反應-序列特異引物技術（PCR-SSP）對其進行HPA-1、HPA-2、HPA-3、HPA-4、HPA-5、HPA-15的系統(tǒng)分型，盡量選擇純合子（a/a和b/b）的O型血小板抗原譜細胞，組成可鑒定HPA-1、HPA-2、HPA-3、HPA-4、HPA-5、HPA-15抗體特異性的血小板譜抗原。將Falcon 管中加入事先制備好的實驗室自備血小板抗原譜細胞[5]，每管加入1.5×107個血小板，然后加入50uL患者血清并室溫孵育30min，800r/min離心5min，加入PBS緩沖液洗滌2次，再加入10uLFITC-羊抗人IgG混勻避光孵育25min后加入PBS緩沖液和固定液上流式細胞儀進行檢測。實驗陰性對照管為空白管，陽性對照管加入血小板和陽性血清。

1.4 結果判讀

以FSC/SSC設置血小板門，調節(jié)FSC閾值，去除碎片干擾，獲取血小板的熒光強度。FSC/SSC散點圖的100～101區(qū)域為陰性對照細胞群著落點，為排除細胞碎片和熒光染料非特異性吸附的干擾，血小板抗體陽性結果為檢測的熒光強度幾何均數值大于陰性對照的2倍。

1.5 問卷調查

自制調查問卷，調查孕婦年齡、孕產史、分娩方式等情況。

1.6 統(tǒng)計分析

采用spss21.0統(tǒng)計軟件分析，計數資料比較采用χ2檢驗；組間比較采用單因素方差分析，多因素分析采用Logistic回歸分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 血小板抗體檢測結果

984例孕婦中58例檢出血小板抗體陽性，陽性率為5.89%。

2.2 引起孕婦產生血小板抗體的相關因素的單因素分析

不同年齡、不同分娩方式、不同血型間血小板抗體檢出率差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。不同流產次數、妊娠次數、孕周之間血小板抗體檢出率差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 血小板抗體影響因素的單因素分析

表2 多因素Logistic回歸分析

2.3 多因素分析

將單因素分析篩選出來的3個危險因素流產次數、妊娠次數、孕周為自變量，以是否產生血小板抗體為因變量，進行多因素Logistic回歸分析。結果顯示流產次數、妊娠次數、孕周是孕婦產生血小板抗體的獨立危險因素（P＜0.05）。見表2。

3 討論

血小板表面具有復雜的血型抗原，這些血型抗原通常分為兩類：一類為主要與紅細胞ABO血型系統(tǒng)和人類白細胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）有關的血小板相關抗原；另一類為由血小板特有的抗原決定簇組成的血小板特異性抗原(human platelet antigen，HPA)。血小板抗體也分為兩類：一類為針對紅細胞ABO血型系統(tǒng)和HLA系統(tǒng)產生的血小板抗體；另一類為針對HPA產生的特異性抗體。血小板血型抗原不合可引起機體針對HLA抗原和HPA抗原發(fā)生免疫反應而產生血小板抗體，輸血和妊娠可誘導這種免疫反應的發(fā)生[6-9]。當母胎間血小板表面抗原不合時，如胎兒的血小板進入母體血液循環(huán)，可刺激母體免疫系統(tǒng)產生血小板抗體，這種抗體主要為IgG類抗體，該類抗體又可通過胎盤屏障被吸收到胎兒體內，并與胎兒血小板表面的抗原相結合，后者又被體內的單核-巨噬細胞系統(tǒng)清除使胎兒的血小板數目減少，引起早期流產或者新生兒同種免疫性血小板減少癥。血小板抗體是引起流產和新生兒同種免疫性血小板減少癥的直接致病抗體，新生兒同種免疫性血小板減少癥發(fā)病較急，常導致胎兒或新生兒出現血小板嚴重減少及顱內出血[10],病死率可達9%～46%[11]。

血小板抗體有多種檢測方法，例如單克隆抗體固相血小板抗體實驗（MASPAT法）、改良單克隆抗體血小板抗原固定實驗（MAIPA法）、流式細胞術等。MAIPA法是血小板抗體檢測的金標準，流式細胞術法與MAIPA法的敏感性和特異性幾乎相同[12]，且耗時短、成本低。因此本次研究采用流式細胞術作為血小板抗體檢測的初篩方法，對984例孕12周以后的孕婦進行血小板抗體檢測，有58例檢出血小板抗體陽性，陽性率為5.89%，這與國內的相關報道相符合[13]。

多因素分析顯示流產次數、妊娠次數、孕周是孕婦產生血小板抗體的獨立危險因素（P＜0.05）。有文獻報道，有流產史和妊娠史的孕婦血小板抗體陽性率顯著高于無流產史和初次妊娠的孕婦[14-15]。本次研究顯示有流產史和多次妊娠史的孕婦血小板抗體陽性率分別為26.25%、8.24%，高于無流產史和初次妊娠的孕婦血小板抗體陽性率的4.09%、3.11%，與上述報道相符。進一步證實了孕婦血小板抗體的產生與其流產史和妊娠史密切相關，并隨著流產次數和妊娠次數的增多，其血小板抗體產生的幾率也隨著增高。其原因是孕婦因多次流產和妊娠，使機體受到血小板抗原刺激的量和頻率增大，更容易引起機體發(fā)生同種免疫反應而產生血小板抗體。本次研究還發(fā)現孕婦血小板抗體的產生與孕婦的孕周相關，孕中期隨著孕周增加，血小板抗體陽性率逐漸增高。據報道，在妊娠第10周以后胎兒就具有了刺激母體免疫系統(tǒng)的抗原[16]，孕婦的孕周越大，胎兒的血小板抗原刺激母體免疫系統(tǒng)的時間和頻率就越多，極易使母體產生血小板抗體。第27周以后血小板抗體陽性率有所降低，考慮可能因為血小板抗體效價低造成漏檢所致，有待于擴大樣本量進行進一步研究。另外，本次研究有1例無流產史且為初次妊娠的孕婦檢出有血小板相關抗體，經詢問也無輸血史，此情況考慮可能為某些藥物引起血小板相關抗體的產生。

綜上所述，隨著二胎政策的開放，為確保優(yōu)生優(yōu)育，對孕婦特別是有流產史和妊娠史的孕婦進行血小板抗體篩查非常必要，可早期評估流產和新生兒同種免疫性血小板減少癥的風險。另外，通過血小板抗體檢測，可指導臨床對需輸注血小板的血小板抗體陽性的孕產婦進行血小板配型輸注，提高輸注有效率；避免采集攜帶有血小板抗體的血液制品應用于臨床，造成血小板輸注無效、輸血后紫癜等輸血不良反應的發(fā)生。