超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測雞蛋中8種喹諾酮類藥物殘留研究

曹騫 代立勤 張曉偉 于宏杰 郭輝

摘要? ? 本文建立了雞蛋中8種喹諾酮類藥物殘留檢測方法。樣品經(jīng)過1%乙酸乙腈提取、C18柱凈化，經(jīng)超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測分析，優(yōu)化了質(zhì)譜的分離參數(shù)。結(jié)果表明，8種喹諾酮類藥物在1.0～100.0 μg/L范圍內(nèi)線性滿足要求，相關(guān)系數(shù)r均大于0.995，定量限為1.0 μg/kg。該方法簡單、靈敏度高、穩(wěn)定性好，能夠滿足雞蛋中喹諾酮類藥物殘留檢測要求。

關(guān)鍵詞? ? 喹諾酮類藥物;雞蛋;超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

中圖分類號? ? S859.84? ? ? ? 文獻標(biāo)識碼? ? A

文章編號? ?1007-5739（2019）22-0183-02? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）

喹諾酮類藥物是一類人工合成的抗菌藥，因具有高效譜廣、價格低廉和無交叉耐藥性等優(yōu)點而被廣泛用于動物疾病治療、預(yù)防及促生長方面[1]。此類藥物在體內(nèi)消除緩慢，在家禽飼養(yǎng)過程中該類藥物不合理使用會導(dǎo)致其殘留在動物源食品中，從而危害人類健康[2]。

2002年，我國農(nóng)業(yè)部第235公告中對動物性食品中獸藥最高殘留限量進行了要求，其中對喹諾酮藥物在動物性食品中殘留限量進行了明確，2015年農(nóng)業(yè)部第2292號公告決定在食品動物中停止使用洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星和諾氟沙星等4種獸藥。雖然我國對家禽養(yǎng)殖環(huán)節(jié)喹諾酮藥物的使用和禁用有明確規(guī)定，但從歷年監(jiān)測數(shù)據(jù)可以看出，雞蛋及雞肉中喹諾酮類藥物殘留問題仍然比較突出，同時隨著對喹諾酮類藥物禁用藥物范圍的擴大，新型喹諾酮藥物用于動物生產(chǎn)的風(fēng)險也越來越大。目前雞蛋喹諾酮類藥物殘留檢測文獻較多[1-4]，本文旨在建立用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時檢測雞蛋中8種喹諾酮類藥物的多殘留檢測方法，以期為在雞蛋中開展喹諾酮類藥物的多殘留檢測提供參考。

1? ? 材料與方法

1.1? ? 試驗材料

供試儀器有Waters ACQUITY UPLC H-Class Xevo TQD超高效液相色譜-三重四級桿質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國Waters公司）、高速冷凍離心機（湖南湘儀公司）、渦旋混合器（德國IKA公司）、氮吹儀（上海安譜公司）、百分之一電子天平（德國賽多利斯公司）。

供試試劑有乙腈、甲醇、正己烷、甲酸，均為HPLC級，由上海安譜公司生產(chǎn);實驗用水為屈臣氏蒸餾水;C18固相萃取柱（60 mg/3 mL），購自上海安譜公司;恩諾沙星、諾氟沙星、培氟沙星、環(huán)丙沙星、氧氟沙星、沙拉沙星、洛美沙星、達氟沙星8種氟喹諾酮類藥物，均購自農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所，濃度為100 μg/mL。

1.2? ? 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

1.2.1? ? 單獨標(biāo)準(zhǔn)品儲備液。分別吸取8種喹諾酮類藥物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（100 μg/mL）0.1 mL于10 mL容量瓶，以甲醇定容至10 mL，得1 μg/mL單獨準(zhǔn)品儲備液，置于0～5 ℃冰箱中保存[5]。

1.2.2? ? 混合標(biāo)準(zhǔn)品儲備液。分別吸取8種喹諾酮類藥物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（100 μg/mL）0.1 mL于同一10 mL容量瓶，以甲醇定容至10 mL，得1 μg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)品儲備液，置于0～5 ℃冰箱中保存。

1.2.3? ? 混合標(biāo)準(zhǔn)品工作液。準(zhǔn)確移取適量混合標(biāo)準(zhǔn)品儲備液用0.1%甲酸乙腈/水（3/7，體積比）溶液配置成目標(biāo)藥物濃度為1、2、5、10、20、50、100、200 μg/L，同位素內(nèi)標(biāo)濃度均為20 μg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。

1.3? ? 試劑配制

1.3.1? ? 5.0 mol/L氫氧化鈉溶液。稱取10 g氫氧化鈉，溶解于50 mL水中。

1.3.2? ? 1%乙酸乙腈溶液。取5 mL乙酸，用乙腈稀釋至500 mL。

1.3.3? ? 0.1 mol/L磷酸鹽緩沖溶液。稱取6.8 g磷酸二氫鉀，用水溶解，定容至500 mL，用5.0 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0±0.05。

1.3.4? ? 0.1%甲酸乙腈/水溶液。取0.5 mL甲酸，用乙腈/水（3/7，體積比）稀釋至500 mL。

1.4? ? 試驗方法

1.4.1? ? 提取。準(zhǔn)確稱取2.0 g（精確至0.01 g）均質(zhì)的雞蛋樣品于50 mL離心管中，加入5 mL 1%乙酸乙腈，渦旋提取2 min，10 000 r/min離心5 min（建議溫度設(shè)為4 ℃），上清液轉(zhuǎn)入另一50 mL離心管中。重復(fù)提取1次，離心后合并上清液，加入10 mL正己烷，渦旋混合1 min，10 000 r/min離心1 min（建議溫度設(shè)為4 ℃），移去正己烷，將乙腈層轉(zhuǎn)入于氮吹管中，40 ℃水浴氮吹至近干，用3 mL磷酸鹽緩沖液溶解殘渣，待凈化。

1.4.2? ? 凈化。C18固相萃取柱（100 mg/3 mL），分別用2 mL乙腈、2 mL磷酸鹽緩沖液活化和平衡，將待凈化的溶液以自然滴液速度過柱，用2 mL水淋洗，真空抽干。用1 mL 0.1%甲酸乙腈/水（3/7，體積比）溶液洗脫，真空抽干，收集洗脫液，過0.22 μm濾膜后上機測定[6]。

1.5? ? LC-MS/MS條件

1.5.1? ? 色譜條件。色譜柱：Waters ACQURRY UPLC BEHC18（2.1 mm×50 mm，1.7 μm），柱溫：40 ℃;樣品室溫度：20 ℃;進樣量：5 μL;流速：0.4 mL/min;流動相A：0.1%甲酸水溶液;B：乙腈溶液。梯度洗脫條件：0～0.5 min，維持95% A、5% B;0.5～4.0 min，95% A線性變化至5%，5% B線性變化至95%;4.1 min線性變化至95% A、5% B，4.1～6.0 min維持95% A、5% B。

1.5.2? ? 質(zhì)譜條件。電噴霧電壓為3.00 kV，離子源溫度為120 ℃，色譜柱溫度為40 ℃，洗脫溶劑溫度為450 ℃，氣體流量（N2）為1 000 L/h，錐孔氣流量（N2）為50 L/h。

2? ? 結(jié)果與分析

2.1? ? 質(zhì)譜條件優(yōu)化

分別將8種喹諾酮類化合物的單獨標(biāo)準(zhǔn)品儲備液配制成0.5 μg/mL濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，以5 μL/min的流速注入質(zhì)譜儀，在正離子模式下進行掃描，確定目標(biāo)化合物的分子離子、定性及定量離子并優(yōu)化質(zhì)譜的各項參數(shù)。8種化合物質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化結(jié)果見表1。

2.2? ? 線性范圍和檢出限

分別將8種喹諾酮類化合物配制成1、2、5、10、20、50、100 μg/L溶液，各類化合物的檢出限為0.3 μg/kg，定量限為1.0 μg/kg，線性范圍為1～100 μg/L，對應(yīng)化合物的線性方程、相關(guān)系數(shù)見表2。

2.3? ? 加標(biāo)回收率

在空白雞蛋樣品中添加20 ng/mL 8種喹諾酮類藥物進行回收試驗，結(jié)果見表3，從中可以看出8種藥物的平均回收率范圍為83.0%～108.5%。

3? ? 結(jié)論與討論

本文建立了雞蛋中恩諾沙星、諾氟沙星、培氟沙星、環(huán)丙沙星、氧氟沙星、沙拉沙星、洛美沙星、丹諾沙星8種氟喹諾酮類藥物同時檢測分析的LC-MS/MS分析方法。該方法簡單、靈敏度高、穩(wěn)定性好，能夠滿足雞蛋中喹諾酮類藥物殘留檢測要求，可為雞蛋中多種喹諾酮類藥物的同時檢測提供參考。

4? ? 參考文獻

[1] 楊盛茹，張恒業(yè)，張煌，等.UPLC-MS/MS 檢測雞蛋中22中喹諾酮類藥物殘留方法的研究[J].現(xiàn)代食品科技，2017，133（8）：262-268.

[2] 楊朝琳，黃方取，洪華嫦，等.液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法檢測雞蛋中8種氟喹諾酮類藥物殘留[J].浙江師范大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2016，39（1）：53-59.

[3] 劉媛，謝孟峽，丁嵐，等.高效液相色譜同時測定雞蛋中 4 種氟喹諾酮類藥物殘留[J].分析化學(xué)，2004，35（3）：352-355.

[4] 彭濤，雍煒，安娟，等.反相高效液相色譜/質(zhì)譜法同時測定雞肉中5種喹諾酮藥物殘留[J].分析化學(xué)，2006，34（9）：10-14.

[5] 廖艷華，周劭桓，林文斯，等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定雞蛋中11種喹諾酮類抗生素殘留的樣品前處理方法優(yōu)化[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2018，28（8）：910-914.

[6] 秦麗娟.離子對-HPLC測定牛奶和雞肉中氟喹諾酮藥物殘留[D].保定：河北大學(xué)，2011.