哺乳期乳房膿腫患者膿液涂片鏡檢與培養(yǎng)結果的一致性分析及主要致病菌的藥敏結果

張麗娜, 朱衛(wèi)金, 潘美珍

(江蘇省常州市中醫(yī)醫(yī)院 檢驗科, 江蘇 常州, 213000)

產(chǎn)后哺乳的婦女，尤其是初產(chǎn)婦，在產(chǎn)后3、4周容易形成乳房膿腫。嚴重的膿腫需要及時行引流治療，但傳統(tǒng)引流術切口大，每天需要更換敷料，且愈合后易留有明顯瘢痕，部分患者甚至要停止哺乳，更有甚者可并發(fā)膿毒癥，嚴重影響母嬰安全[1-3]。若采取膿液常規(guī)微生物培養(yǎng)的方法，將至少需要2～3 d才能確定病原菌及其藥敏情況。涂片檢查是臨床常用的微生物檢驗方法之一[4]。本研究擬將送檢的哺乳期乳房膿腫患者膿液先進行涂片革蘭染色鏡檢，并與最終的培養(yǎng)結果進行一致性比較，同時對近幾年最終培養(yǎng)出的金黃色葡萄球菌進行藥敏分析，為臨床醫(yī)師經(jīng)驗性使用抗生素治療提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇常州市中醫(yī)醫(yī)院2014—2017年就診的哺乳期乳房膿腫患者123例，均經(jīng)穿刺或切口引流獲取膿液標本，其中2014年25例, 2015年35例, 2016年33例, 2017年30例。

1.2 儀器與試劑

快速革蘭染液(珠海貝索生物科技有限公司)，哥倫比亞血瓊脂平板、巧克力瓊脂平板(安圖生物有限公司), VITEK 2-compact全自動細菌鑒定藥敏儀及配套板卡(法國生物梅里埃公司)，顯微鏡(日本奧林巴斯公司)，金黃色葡萄球菌ATCC29213、ATCC25923、銅綠假單胞菌ATCC27853、大腸埃希菌ATCC25922為本實驗室保存。

1.3 方法

1.3.1 標本處理和鏡檢: 將膿液標本用無菌棉簽均勻涂布于玻片上，自然干燥后火焰固定革蘭染色鏡檢。至少觀察100個油鏡視野，觀察到有中性粒細胞內吞噬或伴行細菌，記為涂片陽性(+)，未觀察到中性粒細胞內吞噬或伴行細菌，記為涂片陰性(-)。

1.3.2 膿液標本接種: 用無菌棉簽刮取少量膿液分別涂布于哥倫比亞血瓊脂平板和巧克力瓊脂平板第1區(qū)，然后用接種環(huán)采用四區(qū)劃線法接種。接種完的平板立刻置于35 ℃、5%～10% CO2環(huán)境中培養(yǎng)18～24 h。

1.3.3 藥敏試驗: 采用VITEK 2-compact 全自動細菌鑒定藥敏儀配套板卡，按儀器操作規(guī)程進行藥敏檢測。

1.3.4 質量控制: 革蘭染色采用大腸埃希菌ATCC25922、金黃色葡萄球菌ATCC25923作為陰、陽性質控, VITEK 2-compact全自動細菌鑒定藥敏儀采用金黃色葡萄球菌ATCC29213、銅綠假單胞菌ATCC27853、大腸埃希菌ATCC25922作為質控菌株。

1.4 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 19.0軟件進行統(tǒng)計學分析，定性資料以率表示，比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

123例膿液標本涂片結果為(+) 103例，與相應培養(yǎng)結果一致率為92.2%; 涂片結果為(-) 20例，與相應培養(yǎng)結果一致率為55.0%，見圖1、表1。最終培養(yǎng)結果陽性106例，檢出金黃色葡萄球菌89株，占84.0%，其中2014年培養(yǎng)結果陽性23例，檢出金黃色葡萄球菌20株，占87.0%; 2015年培養(yǎng)結果陽性28例，檢出金黃色葡萄球菌21株，占75.0%; 2016年培養(yǎng)結果陽性25例，檢出金黃色葡萄球菌22株，占88.0%; 2017年培養(yǎng)結果陽性30例，檢出金黃色葡萄球菌26株，占86.7%。各年份金黃色葡萄球菌占培養(yǎng)陽性比例的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。檢出的89株金黃色葡萄球菌對常用抗生素青霉素G、苯唑西林、紅霉素、萬古霉素的耐藥率依次為95.5%、37.1%、39.3%、0%, 每種抗生素各年份耐藥率差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05), 見表2。

箭頭所指為中性粒細胞內吞噬革蘭陽性球菌

圖1 革蘭染色膿液標本中性粒細胞吞噬現(xiàn)象(1 000倍)

表1 膿液涂片與細菌培養(yǎng)結果的相符性[n(%)]

3 討 論

有研究[5]表明，分析前錯誤占總檢驗錯誤的71.0%。本研究中，涂片結果為(+)與最終的培養(yǎng)結果為(+)的符合率達92.2%, 一致性較高?？紤]原因可能與下列因素有關: 一是送檢標本類型為乳房膿腫患者的膿液，中性粒細胞與細菌較多，且主要致病菌金黃色葡萄球菌在鏡下較易辨認，不易漏檢; 二是與主要致病菌培養(yǎng)條件不高，常規(guī)培養(yǎng)條件很容易培養(yǎng)得到。細菌形態(tài)學已成為一種快速診斷的方法，在感染性疾病的診斷中具有一定的價值[6]。一旦涂片檢驗發(fā)現(xiàn)中性粒細胞內吞噬或伴行細菌，可以快速告知臨床醫(yī)師，發(fā)初級診斷報告，臨床醫(yī)生經(jīng)驗性選用合理抗生素，縮短患者病程，減輕患者痛苦。同時，涂片檢查還能及時排除不合格標本，保證致病菌的準確性，提高臨床療效[7]。

表2 檢出的金黃色葡萄球菌對常用抗生素的耐藥情況[n(%)]

n表示株數(shù)。

多數(shù)情況下，涂片鏡檢見到的細菌都應該能在合適的條件下培養(yǎng)出來。出現(xiàn)涂片發(fā)現(xiàn)細菌而未培養(yǎng)出的情況，可能原因有: ① 抽取或引流的膿液標本未在膿腫的邊緣部位取樣，膿液中細菌和中性粒細胞相互作用，已經(jīng)死亡; ② 患者在留取標本前已用過抗生素，殘留的藥物濃度抑制了細菌的生長; ③膿液標本中可能存在寄養(yǎng)菌或者細菌生長速度緩慢，或者標本未及時送檢，細菌已經(jīng)死亡; ④ 有可能為厭氧菌感染，而只進行了常規(guī)需氧培養(yǎng)，并不能培養(yǎng)出厭氧菌。如果涂片中見到兩端尖細的革蘭陰性桿菌或是有芽孢的革蘭陽性桿菌，但需氧培養(yǎng)結果為陰性，則要考慮厭氧菌的可能性。對于第①、②種原因，臨床微生物實驗室人員應與臨床醫(yī)師耐心溝通，讓臨床醫(yī)師認識正確采取標本的重要性，做好微生物學檢驗的第1步。對于第③、④種原因，由于例數(shù)較少、經(jīng)驗不夠，還有待于在今后的工作中繼續(xù)探討。出現(xiàn)涂片未見細菌而培養(yǎng)出細菌、涂片結果與培養(yǎng)結果不一致的情況，在排除接種時樣本污染的可能外，還可能與標本本身細菌載量較低、制片較薄、工作人員鏡檢不仔細有關; 或者細菌混雜在中性粒細胞和纖維中，不易被發(fā)現(xiàn)。涂片雖然直觀、快捷，但對標本的質量以及工作人員的閱片能力要求較高[8]。因此，嚴格控制涂片質量、加強閱片能力是降低這種不一致情況發(fā)生的關鍵。

本研究結果顯示，來本院就診的哺乳期乳房膿腫患者近年來的主要致病菌為金黃色葡萄球菌，且各年份間的檢出率無顯著差異(P>0.05), 并對常用抗生素的耐藥率比較穩(wěn)定。研究[9]表明，目前從人體分離的金黃色葡萄球菌對青霉素G的耐藥率已經(jīng)超過90.0%, 本實驗室結果與其一致。鑒于哺乳期乳房膿腫主要由金黃色葡萄球菌引起，說明臨床醫(yī)師已經(jīng)不能經(jīng)驗性使用青霉素G來治療此類患者了，應根據(jù)藥敏結果合理使用抗菌素。據(jù)研究[10]統(tǒng)計，中國抗生素使用不合理的情況約占抗生素總量的55.0%，因此合理使用抗生素、防止抗菌素的濫用及耐藥株的增加刻不容緩。

綜上所述，對哺乳期乳房膿腫患者的膿液標本進行革蘭染色涂片鏡檢后，細菌檢出率高，與培養(yǎng)結果的一致性也較高，可以及早給予臨床醫(yī)師提示，在快速診斷中能夠發(fā)揮重要作用。