結(jié)核桿菌核酸定量檢測(cè)與T-SPOT.TB檢測(cè)在肺外結(jié)核病診斷中的應(yīng)用分析

王慧

吉林省疾病預(yù)防控制中心結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室，吉林長(zhǎng)春 130000

結(jié)核病是一種傳染性疾病，包含肺外結(jié)核與肺結(jié)核，發(fā)病率較高，嚴(yán)重威脅人們的健康安全。常見(jiàn)的肺外結(jié)核疾病有結(jié)核性腦炎、結(jié)核性胸膜炎、腎結(jié)核等，病因復(fù)雜，如結(jié)核性胸膜炎的病因包括淋巴引流障礙、胸膜受感染病原體侵入、感染病原體由血液與淋巴侵入胸膜等[1]。結(jié)核病的傳統(tǒng)這怒單方法為涂片鏡檢、結(jié)核桿菌培養(yǎng)、血清結(jié)合抗體檢驗(yàn)等，而肺外結(jié)核疾病在診斷時(shí)受到很多因素影響，如自身因素等，在短時(shí)間內(nèi)無(wú)法明確診斷。近年來(lái)，隨著我國(guó)的醫(yī)療技術(shù)發(fā)展迅猛，更多的肺外疾病診斷方法應(yīng)用于臨床，如結(jié)核桿菌核酸定量檢測(cè)、T-SPOT.TB等，均具有顯著的診斷效果。該文將以2018年2月—2019年2月的200例患者為對(duì)象，探究結(jié)核桿菌核酸定量檢測(cè)與結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)（T-SPOT.TB）在肺外結(jié)核病診斷中的應(yīng)用，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

該研究涉及對(duì)象為肺外感染患者200例。所有患者中，男、女患者分別為122例與78例；年齡在18～80歲之間，平均年齡為（43.85±6.71）歲；結(jié)核性腦炎、結(jié)核性胸膜炎、腎結(jié)核分別為46例、116例、38例。納入標(biāo)準(zhǔn)：資料齊全；以《臨床診療指南：結(jié)核病分冊(cè)》為診斷標(biāo)準(zhǔn)；胸腔積液、尿液、腦脊液中可見(jiàn)結(jié)核分枝桿菌；病理活檢可見(jiàn)干酪性肉芽腫；影像學(xué)診斷具備肺外感染疾病特征；臨床特點(diǎn)與肺外感染疾病相符合。排除標(biāo)準(zhǔn)：惡性腫瘤；精神障礙；不配合研究者[2]。研究組和參照組患者的基本信息組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 設(shè)備選擇 T-SPOT．TB試劑盒 (生產(chǎn)廠家：英國(guó)Immunotec公司)，DA-7600PCR擴(kuò)增儀及配套試劑 （生產(chǎn)廠家：中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司）。

1.2.2 T-SPOT.TB 樣本處理：取40～50 mL胸腹水、尿液、腦脊液，加入0.2 mL肝素進(jìn)行抗凝；富集T淋巴細(xì)胞，使用1640培養(yǎng)液將其調(diào)整至7 mL，隨后洗滌，并調(diào)整技術(shù)后細(xì)胞濃度為1.0×106個(gè)／mL[4]。判斷標(biāo)準(zhǔn)：陽(yáng)性：空白對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)0～5個(gè)，抗原A（抗原B）斑點(diǎn)數(shù)超過(guò)空白對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)6個(gè)及以上；空白對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)6～10，抗原A（抗原B）斑點(diǎn)數(shù)超過(guò)超過(guò)空白對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)的2倍及以上。陰性：不符合陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)，陽(yáng)性質(zhì)控對(duì)照孔正常[5]。

1.2.3 結(jié)核桿菌涂片鏡檢 樣本處理：取尿液、胸腹水、腦脊液標(biāo)本置入1.0～1.5 mL離心管，進(jìn)行離心操作，將上清液去掉，待沉淀以后加入DNA提取物50 μL充分混勻，在100℃的恒溫水中，水浴10 min，隨后離心操作5 min，使用50 uL陰性質(zhì)控品與50 μL陽(yáng)性質(zhì)控品，加入等量的DNA提取液混合均勻。在鏡檢之前，取標(biāo)本離心處理，20 mL離心操作5 min，取沉淀物進(jìn)行涂片操作，應(yīng)用抗酸染色液進(jìn)行染色。

PCR結(jié)果若超過(guò)50copies則表示診斷有意義；抗酸染色結(jié)果：1 000倍顯微鏡下對(duì)100個(gè)視野進(jìn)行觀察，可見(jiàn)抗酸桿菌1～9條即為陽(yáng)性。

1.3 觀察指標(biāo)

對(duì)比T-SPOT.TB、結(jié)核桿菌涂片、結(jié)核桿菌核酸定量檢測(cè)的檢測(cè)結(jié)果，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

將研究中的各項(xiàng)數(shù)據(jù)結(jié)果輸入SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料用（±s）表示，用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以[n(%)]表示，用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 T-SPOT.TB、結(jié)核桿菌涂片陽(yáng)性率比較

T-SPOT.TB檢測(cè)陽(yáng)性率（90.50%）明顯高于結(jié)核桿菌涂片陽(yáng)性率（21.00%），組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=195.799，P＜0.05）。 見(jiàn)表 1。

表1 T-SPOT.TB、結(jié)核桿菌涂片陽(yáng)性率比較

2.2 結(jié)核桿菌核酸定量、結(jié)核桿菌涂片陽(yáng)性率比較

結(jié)核桿菌核酸定量檢測(cè)陽(yáng)性率（94.00%）明顯高于結(jié)核桿菌涂片陽(yáng)性率（21.00%），組間差有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=221.4094，P＜0.05）。 見(jiàn)表 2。

表2 結(jié)核桿菌核酸定量、結(jié)核桿菌涂片陽(yáng)性率比較

2.3 T-SPOT.TB、結(jié)核桿菌核酸定量陽(yáng)性率分析

T-SPOT.TB檢出陽(yáng)性率（90.50%）與結(jié)核桿菌核酸定量檢測(cè)（94.00%）相比，組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.306，P＞0.05）。 見(jiàn)表 3。

表3 T-SPOT.TB、結(jié)核桿菌核酸定量陽(yáng)性率分析

3 討論

T-SPOT.TB診斷所運(yùn)用的技術(shù)為酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)，是對(duì)效應(yīng)T淋巴細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)核性胸膜炎患者由于受到結(jié)核分枝桿菌的特異性抗原的刺激[3]，從而造成IFN-γ釋放效應(yīng)T淋巴細(xì)胞。大量臨床實(shí)踐表明，TSPOT.TB診斷具有較高的敏感度，約為90%[4]，可在臨床中推廣使用。在肺外結(jié)核患者中，伴隨胸腔積液、腦脊液等產(chǎn)生，在發(fā)病期間，結(jié)核分枝桿菌對(duì)局部感染容易產(chǎn)生隔室效應(yīng)，效應(yīng)T淋巴細(xì)胞由血液進(jìn)入至胸腔積液、腦脊液，發(fā)揮其免疫學(xué)效應(yīng)[5]，而結(jié)核分枝桿菌的潛伏感染對(duì)肺外積液內(nèi)的效應(yīng)T淋巴細(xì)胞影響小，因此肺外積液TSPOT.TB診斷在結(jié)核性胸膜炎的診斷價(jià)值更高。有學(xué)者[6]對(duì)T-SPOT.TB的胸腔積液與外周血分別進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明前者特異性T淋巴細(xì)胞數(shù)量為后者的4.6倍，證實(shí)了特異性T淋巴細(xì)胞在發(fā)生結(jié)核性胸膜炎時(shí)由外周血遷移至胸膜腔，以及胸腔積液T-SPOT.TB診斷在結(jié)核性胸膜炎患者中具有較高的診斷價(jià)值。由此可見(jiàn)，胸腔積液、腦脊液中行T-SPOT.TB診斷的肺外結(jié)核病檢出率較高。該次研究結(jié)果可見(jiàn)，T-SPOT.TB檢測(cè)陽(yáng)性率（90.50%）明顯高于結(jié)核桿菌涂片陽(yáng)性率（90.50%），組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=195.799，P＜0.05）。 與張忠原[7]學(xué)者研究結(jié)果:非結(jié)核病 64例，其中陽(yáng)性 5例，占7.81%，陰性 59例，占92.19%。熒光定量核酸擴(kuò)增技術(shù)檢查結(jié)核病陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.005)，保持一致。

大量臨床實(shí)踐表明[8]，結(jié)核桿菌核酸具有良好的特異性，且敏感度較高，在胸腹、腦脊液、尿液、痰液等標(biāo)本均可行PCR診斷，若結(jié)果為陽(yáng)性，則可歐威結(jié)核病診斷重要依據(jù)。該次研究結(jié)果可見(jiàn)，結(jié)核桿菌核酸定量檢測(cè)陽(yáng)性率明顯高于結(jié)核桿菌涂片陽(yáng)性率，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。有學(xué)者[9]選取109例肺外結(jié)核病患者進(jìn)行研究，結(jié)核桿菌涂片診斷陽(yáng)性率為20.1%，全血T-SPOT診斷陽(yáng)性率為99.10%，結(jié)核桿菌核酸定量結(jié)果陽(yáng)性率為95.4%，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。該次研究中，T-SPOT.TB檢出陽(yáng)性率與結(jié)核桿菌核酸定量檢測(cè)相比，組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

綜上所述，結(jié)核桿菌核酸定量檢測(cè)與T-SPOT.TB均可用于肺外結(jié)核病的診斷中，具有較高的檢出率，有利于肺外結(jié)核疾病患者的治療，值得臨床上推廣及使用。