一種野生菌地下菌核的ITS-DNA 分子鑒定

李素玲，劉 虹

（山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所，山西太原030031）

菌核是真菌的一種休眠結(jié)構(gòu)，它可以幫助物種在不利環(huán)境或逆境中生存，如低溫、干旱、營養(yǎng)物質(zhì)缺乏等。不是每種真菌都可形成菌核，已有研究表明，全世界已知可以產(chǎn)生菌核的真菌有20 個目85 個屬，分布在子囊菌和擔(dān)子菌門中[1]。我國相關(guān)文獻中對能產(chǎn)生地下菌核的物種鮮有記載，僅有的記錄為豬苓、茯苓和雷丸等少數(shù)大型藥用物種[2-3]。2017 年夏秋季節(jié)，筆者在山西省管涔山調(diào)查野生地下菌資源時，在一處50～70 a 樹齡的落葉松人工林內(nèi)土壤中發(fā)現(xiàn)了許多松露狀物體，形態(tài)學(xué)觀察沒有發(fā)現(xiàn)任何產(chǎn)孢組織結(jié)構(gòu)，不是嚴(yán)格意義上的地下菌（Hypogeous fungi），而是一種菌核。為確認(rèn)這種小型松露狀物體的分類學(xué)名稱，山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所野生菌研究課題組提取了這些物體的ITS-DNA 片段，并在NCBI 數(shù)據(jù)庫進行了DNA 比對分析，結(jié)果顯示這是一種蘑菇產(chǎn)生的地下菌核。

1 材料和方法

1.1 供試樣本

樣本是2017 年10 月采自山西省管涔山華北落葉松林（Larix sp.）50～70 a 樹齡的樹下土壤中。新鮮標(biāo)本經(jīng)45 ℃烘干后保存于首都師范大學(xué)標(biāo)本館（BJTC）。每份標(biāo)本均制備2 份，一份采用食物烘干器烘干，用作憑證標(biāo)本，另一份采用硅膠干燥，以備后續(xù)分子鑒定所用。

1.2 形態(tài)學(xué)方法

在體視顯微鏡下觀察樣本的宏觀特征，包括菌核的形狀、大小、顏色、表面有無絨毛、光滑度等。在光學(xué)顯微鏡下觀察樣本的顯微結(jié)構(gòu)，包括組織類型、顏色等[4-9]。

1.3 分子鑒定方法

本研究樣本的DNA 提取、PCR 擴增以及測序采用FAN 等[10-11]的方法。本樣本ITS 序列在NCBI上用Blast 工具進行比對。

2 結(jié)果與分析

2.1 形態(tài)學(xué)特征觀察

從圖1 可以看出，樣本近球形、橢圓形、長橢圓形或不規(guī)則塊狀，直徑0.5～1.8 cm，乳白色，表面平滑，無絨毛，未見菌索狀結(jié)構(gòu)；內(nèi)部白色，質(zhì)地密實，無產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)分化現(xiàn)象，由擬薄壁組織和交錯絲組織構(gòu)成。

2.2 DNA-ITS 分析結(jié)果

Blast 比對分析顯示，山西省管涔山落葉松林土壤中的菌核樣本（FAN1043）的ITS 序列在NCBI 數(shù)據(jù)庫中匹配到Entoloma hirtipes，相似度為99%。這表明本樣本序列和JX454867 序列高度同源，源于同一個分類學(xué)物種，是毛腳粉褶菌（Entoloma hirtipes（Schumach.）M.M.Moser）的菌核。

2.3 分類學(xué)結(jié)果

毛腳粉褶菌（新擬中文名）

Entoloma hirtipes （Schumach.）M. M. Moser，Gams，Kl. Krypt.-Fl.，Bd II b/2，ed. 4（Stuttgart）2b/2：206（1978）

中國分布：山西省。

引證標(biāo)本：山西省管涔山秋千溝，2017 年10 月8 日，華北落葉松林（Larix sp.）樹下土壤中，閆向遠(yuǎn)（FAN1043）。

3 結(jié)論與討論

有關(guān)粉褶菌屬（Entoloma）物種產(chǎn)生地下菌核的研究很少，僅1 份，是在南美洲圭亞那以豆科植物為優(yōu)勢種的熱帶雨林中發(fā)現(xiàn)的一種在Entoloma sp.名下的菌核[1]。本研究為毛腳粉褶菌這一蘑菇物種在山西省的首次報道，同時也是世界范圍內(nèi)毛腳粉褶菌產(chǎn)生地下菌核的首次發(fā)現(xiàn)。

本研究的小松露ITS-DNA 片段與毛腳粉褶菌高度吻合，可以認(rèn)定為同一個分類學(xué)物種。菌核在秋、冬季形成，意味著這個物種可能是依靠菌核來越冬的，然而菌核是否是這個物種生活史中必經(jīng)的階段以及它是否與落葉松形成外生菌根等，還需進一步研究。

志謝：曹晉忠博士提供有價值的意見，首都師范大學(xué)研究生閆向遠(yuǎn)等參加標(biāo)本采集，在此一并致謝。