γ分泌酶抑制劑阻斷Notch-Hes1信號(hào)通路對銀屑病樣皮炎小鼠γδT17細(xì)胞表達(dá)的影響

王燕芹 李新新 薛海波 紀(jì)洪 孫大康 馬蕾

1濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院皮膚科，山東 256603；2濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院內(nèi)分泌與代謝病科，山東 256603；3濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科，山東 256603；4濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院臨床醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室，山東 256603

銀屑病是一種免疫介導(dǎo)的慢性炎癥性皮膚病，近來研究發(fā)現(xiàn)，白細(xì)胞介素17A（IL-17A）在銀屑病的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮關(guān)鍵作用［1-3］，且臨床試驗(yàn)證實(shí)，IL-17A及IL-17受體拮抗劑治療中重度斑塊狀銀屑病療效確切［4-5］。在銀屑病皮損中，許多免疫細(xì)胞分泌IL-17A，T 細(xì)胞是其最主要來源［6］。以往研究提示，IL-17A 主要由 Th17 細(xì)胞產(chǎn)生［7-8］。新近研究顯示，γδ T17 細(xì)胞亦是銀屑病皮損中IL-17A 的主要來源T細(xì)胞［6，9］。Notch信號(hào)通路是一種高度保守的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，在銀屑病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用［10］，且 Notch 信號(hào)通路下游靶基因 Hes1 對γδT17 細(xì)胞分化發(fā)育及 IL-17A 產(chǎn)生至關(guān)重要［11］。目前尚無Notch-Hes1 信號(hào)通路對銀屑病γδT17 細(xì)胞表達(dá)及其IL-17A分泌影響的研究報(bào)道。我們用5%咪喹莫特構(gòu)建小鼠銀屑病樣皮炎模型，以γ 分泌酶抑制劑阻斷Notch-Hes1信號(hào)通路，探討在銀屑病狀態(tài)下，阻斷Notch-Hes1信號(hào)通路對γδT17細(xì)胞表達(dá)及IL-17A分泌的影響。

材料與方法

一、材料

1.小鼠：雄性健康 SPF 級(jí) BALB/c 小鼠產(chǎn)自濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司（動(dòng)物合格證號(hào)：37009200014339），6 周齡，體重（18 ± 2）g，飼養(yǎng)于濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院SPF 動(dòng)物房［動(dòng)物實(shí)驗(yàn)許可證號(hào)SYXK（魯）20180022］，室溫23 ℃ ± 1 ℃，照度15 ～20 Lx，晝夜明暗交替時(shí)間12 h/12 h（光照時(shí)間為每天7：00 ～ 19：00），自由取食（標(biāo)準(zhǔn)滅菌飼料和高壓蒸氣滅菌用水），實(shí)驗(yàn)過程遵循減少、替代、優(yōu)化的3R原則。

2.主要試劑和儀器：5%咪喹莫特乳膏（英國3M Health Care Limited 公司），γ 分泌酶抑制劑（2S）-N-N-（3，5-二氟苯乙?；?L-丙氨酰-2-苯基甘氨酸叔丁酯（DAPT，純度99%，美國Selleck 公司），異硫氰酸熒光素標(biāo)記的CD3單克隆抗體、藻青蛋白標(biāo)記的γδT 單克隆抗體、藻紅蛋白標(biāo)記的IL-17A 單克隆抗體、細(xì)胞刺激劑（美國eBioscience 公司），固定/破膜劑、脫氧核糖核酸酶Ⅰ（DNaseⅠ）（美國Thermo Fisher 公司），膠原蛋白酶Ⅳ（美國Sigma 公司），Trizol RNA 提取試劑（美國Invitrogen公司），GoScript ?逆轉(zhuǎn)錄酶系統(tǒng)、GoTaq?qPCR Master Mix（美國Promega公司），IL-17A酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）試劑盒（上海酶聯(lián)生物科技有限公司），玉米油（美國Sigma公司），DMEM培養(yǎng)基、紅細(xì)胞裂解液、胎牛血清（FBS）、磷酸鹽緩沖液（PBS，上海生工生物工程股份有限公司），F(xiàn)ACS Calibur 流式細(xì)胞儀（美國BD 公司），Rotor-Gene 3000 實(shí)時(shí)PCR儀（澳大利亞Corbett Research公司），酶聯(lián)免疫檢測儀（美國Thermo公司）。

二、方法

1.小鼠分組：將45 只雄性SPF 級(jí)健康BALB/c小鼠按照簡單隨機(jī)抽樣法分為對照組、模型組和干預(yù)組，每組15只，用動(dòng)物專用剃刀剃去小鼠背部約2 cm×3 cm范圍的被毛，電動(dòng)剃須刀剃去毳毛。模型組和干預(yù)組小鼠每天涂抹5%咪喹莫特乳膏62.5 mg 于脫毛處，對照組小鼠涂抹等劑量白凡士林；先將DAPT 溶解于二甲基亞砜配成儲(chǔ)存液（10 g/L），再以玉米油溶解DAPT 儲(chǔ)存液配成工作液（0.2 g/L），在涂抹咪喹莫特后立即給予干預(yù)組小鼠腹腔注射DAPT（10 mg/kg）工作液，模型組及對照組小鼠腹腔注射等劑量玉米油。以上處理每天1次，連續(xù)6 d。每天記錄3組小鼠皮損變化，第7天麻醉小鼠，剪破心臟取血，取脾臟及皮膚組織完成實(shí)驗(yàn)。本研究經(jīng)醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)討論通過（編號(hào)20190104-15）。

2.各組小鼠銀屑病樣皮炎嚴(yán)重程度評分：用數(shù)碼相機(jī)每天拍照記錄小鼠皮損變化，計(jì)算銀屑病皮損嚴(yán)重程度指數(shù)（psoriasis area and severity index，PASI）。紅斑、鱗屑、浸潤厚度按0 ～ 4 分計(jì)分，0 分為與處理前相比無變化，1 分為輕度，2 分為中度，3分為重度，4分為極重度，累加后得到總積分［12］。

3.小鼠皮膚組織病理學(xué)檢查：剪取背部0.5 cm×0.5 cm 的皮膚組織，4%多聚甲醛固定，經(jīng)石蠟包埋、切片、蘇木精-伊紅（HE）染色后于顯微鏡下觀察。

4.脾指數(shù)計(jì)算：稱量小鼠體重及脾重，計(jì)算脾指數(shù)（脾重/體重，mg/g）。

5.小鼠脾臟單細(xì)胞懸液制備：取出脾臟，用5 ml注射器芯在200目鋼網(wǎng)上研磨，將細(xì)胞懸液移入離心管中，4 ℃、400 × g 離心10 min，棄上清液，加入紅細(xì)胞裂解液重懸細(xì)胞，加入預(yù)冷PBS終止反應(yīng)，4 ℃、400× g離心10 min，棄上清液，再次加PBS重懸細(xì)胞，重復(fù)1 次上述離心步驟，加入含15%FBS 和1%青鏈霉素的DMEM 重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)并調(diào)至1 × 106細(xì)胞/ml。

6.小鼠皮膚組織單細(xì)胞懸液制備：將皮膚組織剪成0.5 cm×0.5 cm 大小置于培養(yǎng)皿中，加入胰蛋白酶，37 ℃孵育2 h。進(jìn)一步剪碎皮膚組織并轉(zhuǎn)移至離心管中，依次加入DMEM 培養(yǎng)基、含10%FBS的DMEM 培養(yǎng)基、膠原蛋白酶Ⅳ、PBS、DNaseⅠ，37 ℃、90 r/min（振幅29 mm）振蕩1 h。加入含10%FBS 的DMEM 培養(yǎng)基終止反應(yīng)，過濾，1 250 r/min（半徑18 cm）離心6 min，棄上清液。加PBS重懸細(xì)胞，1 250 r/min（半徑18 cm）離心6 min，棄上清液。PBS重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)并調(diào)至1×106細(xì)胞/ml。

7.流式細(xì)胞儀檢測γδT17 細(xì)胞比例：取脾臟、皮膚組織單細(xì)胞懸液各1 ml（約106個(gè)細(xì)胞）置于24 孔板，加入細(xì)胞刺激劑即佛波醇-十四酸酯-乙酸酯和離子霉素的混合物，37 ℃、5%CO2環(huán)境下共刺激培養(yǎng)4 h。取約105個(gè)細(xì)胞于流式管中，加入異硫氰酸熒光素-CD3、藻青蛋白-γδT 單克隆抗體室溫下避光15 min 標(biāo)記細(xì)胞膜；加入固定劑，室溫下避光15 min，洗滌重懸細(xì)胞；加入透膜劑、藻紅蛋白-IL-17A 室溫下避光20 min，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測。

8.實(shí)時(shí)定量反轉(zhuǎn)錄PCR 檢測脾臟Hes1 mRNA表達(dá)水平：采用Trizol RNA 提取試劑抽提小鼠脾細(xì)胞總RNA，1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA完整性，紫外分光光度儀測定其純度，吸光度比值（A260/A280）在1.8 ～ 2.0之間為合格樣本。采用GoScript?逆轉(zhuǎn)錄酶系統(tǒng)將RNA 逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，以β 肌動(dòng)蛋白為內(nèi)參照，采用GoTaq?qPCR Master Mix試劑盒于Rotor-Gene 3000 real-time PCR 儀上進(jìn)行檢測。PCR 反應(yīng)體系：cDNA 模板 1 μl，正向引物（2 μmol/L）2 μl，反向引物（2 μmol/L）2 μl，GoTaq?qPCR Master Mix（2×）10 μl，RNase-free 去離子水5 μl；反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性2 min，95 ℃變性15 s、56 ℃退火30 s、72 ℃延伸30 s，共擴(kuò)增40 個(gè)循環(huán)。以目的基因和內(nèi)參基因拷貝數(shù)的比值表示Hes1 mRNA表達(dá)水平。

9.ELISA檢測血清IL-17A含量：將血液標(biāo)本室溫下靜置2 h，收集上層血清，按照小鼠IL-17A ELISA試劑盒說明書的操作標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測。

10.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：PASI 評分比較采用單因素重復(fù)測量方差分析；其他指標(biāo)比較采用單因素方差分析，組間比較采用最小顯著差法。不同指標(biāo)間相關(guān)性評價(jià)采用Pearson相關(guān)分析。采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、小鼠一般情況及皮損形態(tài)、組織病理學(xué)改變

圖1 咪喹莫特乳膏單獨(dú)或聯(lián)合γ分泌酶抑制劑處理6 d后小鼠背部皮膚表現(xiàn) 1A：對照組；1B：模型組；1C：干預(yù)組

所有實(shí)驗(yàn)鼠完成全部造模及干預(yù)過程，無死亡及其他特殊情況發(fā)生。末次處理24 h 后對照組小鼠皮膚較薄，無紅斑、鱗屑及皮膚增厚改變；模型組小鼠皮膚出現(xiàn)明顯紅斑、鱗屑及浸潤增厚；干預(yù)組小鼠皮膚紅斑、鱗屑及浸潤增厚現(xiàn)象較模型組明顯減輕，見圖1。PASI評分見圖2。對照組PASI評分始終為0，模型組造模第2 天開始持續(xù)增加，至第6天達(dá)到最高值，干預(yù)組PASI評分與模型組變化趨勢相似，但較模型組顯著降低。重復(fù)測量方差分析顯示，對照組、模型組、干預(yù)組3組間PASI評分差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=602.15，P ＜ 0.01），且組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P ＜0.01）；不同觀察時(shí)間點(diǎn)差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F = 615.70，P ＜0.01），進(jìn)一步組間比較顯示，除PASI 評分在第5、6天之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外，其他各觀察點(diǎn)之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P ＜0.05）。并且，時(shí)間和組別對PASI 評分的影響具有交互作用（F =170.47，P ＜ 0.01）。

HE 染色顯示，對照組小鼠表皮層菲薄，僅由1 ～2層表皮細(xì)胞構(gòu)成。模型組小鼠表皮層明顯增厚，可見角化過度伴角化不全，部分區(qū)域可見Munro 微膿腫，表皮層細(xì)胞數(shù)量增加，表皮突向下延伸，真皮炎癥細(xì)胞大量浸潤，真皮淺層可見血管擴(kuò)張。干預(yù)組小鼠表皮增厚及真皮炎癥細(xì)胞浸潤程度較模型組明顯減輕。見圖3。

二、小鼠脾指數(shù)及脾臟γδT17 細(xì)胞比例、Hes1 mRNA表達(dá)水平

1.脾指數(shù)：見表1。3 組間小鼠脾指數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.01），組間兩兩比較顯示，模型組小鼠脾指數(shù)明顯高于對照組（t=14.20，P＜ 0.01），干預(yù)組顯著低于模型組（t=-6.37，P＜ 0.01），干預(yù)組與對照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=7.83，P＜0.01）。

圖2 銀屑病樣皮炎小鼠背部皮膚銀屑病皮損嚴(yán)重程度指數(shù)（PASI）隨時(shí)間變化曲線

圖3 銀屑病樣皮炎小鼠皮膚組織病理學(xué)變化（HE×200） 3A：對照組小鼠表皮層菲薄，僅由1 ～2層表皮細(xì)胞構(gòu)成；3B：模型組小鼠表皮層明顯增厚，角化過度伴角化不全，表皮突向下延伸，真皮炎癥細(xì)胞大量浸潤，真皮淺層可見血管擴(kuò)張；3C：干預(yù)組小鼠表皮增厚及真皮炎細(xì)胞浸潤較模型組明顯減輕

2.γδT17 細(xì)胞比例：見表 1、圖 4。3 組間小鼠脾臟γδT17 細(xì)胞比例差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），而且組間兩兩比較顯示，模型組顯著高于對照組（t= 9.40，P＜ 0.01），干預(yù)組明顯低于模型組（t=-5.77，P＜ 0.01），干預(yù)組與對照組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.64，P＜ 0.01）。

3.Hes1 mRNA表達(dá)水平：3組間小鼠脾臟單細(xì)胞懸液中Hes1 mRNA表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），組間兩兩比較顯示，模型組顯著高于對照組（t= 20.43，P＜ 0.01），干預(yù)組低于模型組（t=-14.23，P＜ 0.01），干預(yù)組與對照組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=6.19，P＜ 0.01），見表1。

表1 銀屑病樣皮炎小鼠脾指數(shù)、γδT17細(xì)胞比例、脾臟Hes1 mRNA表達(dá)水平及血清白細(xì)胞介素17A含量（±s）

表1 銀屑病樣皮炎小鼠脾指數(shù)、γδT17細(xì)胞比例、脾臟Hes1 mRNA表達(dá)水平及血清白細(xì)胞介素17A含量（±s）

組別對照組模型組干預(yù)組F值P值只數(shù)15 15 15脾指數(shù)5.658±1.232 12.534±1.636 9.449±1.040 101.15＜0.01 γδT17細(xì)胞比例（%）脾臟8.858±3.009 24.659±4.603 14.966±5.770 44.97＜0.01皮膚9.399±3.529 22.127±5.670 13.631±5.946 23.65＜0.01 Hes1 mRNA 1.581±0.396 4.867±0.543 2.541±0.347 219.40＜0.01血清白細(xì)胞介素17A（ng/L）14.767±1.400 22.478±2.776 18.639±1.816 51.60＜0.01

圖4 流式細(xì)胞儀檢測銀屑病樣皮炎小鼠脾臟γδT17 細(xì)胞比例 γδTCR-APC，藻青蛋白標(biāo)記的γδT 細(xì)胞受體單克隆抗體；IL-17A-PE，藻紅蛋白標(biāo)記的白細(xì)胞介素17A單克隆抗體

圖5 銀屑病樣皮炎小鼠脾臟γδT17 細(xì)胞比例與血清白細(xì)胞介素17A（IL-17A）水平相關(guān)性分析（n=15）

三、小鼠皮膚組織中γδT17細(xì)胞比例

3組小鼠皮膚組織中γδT17細(xì)胞比例差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），組間兩兩比較顯示，模型組明顯高于對照組（t=6.75，P＜ 0.01），干預(yù)組較模型組顯著降低（t=-4.51，P＜ 0.01），見表1。

四、小鼠血清中IL-17A含量

方差分析顯示，3組間小鼠血清中IL-17A含量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），而且組間兩兩比較顯示，模型組明顯高于對照組（t=10.16，P＜ 0.01），干預(yù)組則較模型組降低（t=-5.06，P＜ 0.01），見表1。

五、相關(guān)性評價(jià)

模型組及干預(yù)組小鼠脾臟γδT17 細(xì)胞比例與血清IL-17A 含量均呈正相關(guān)（r值分別為0.56 和0.53，均P＜ 0.05），見圖5；皮膚組織中γδT17 細(xì)胞比例與 PASI 均呈正相關(guān)（r值分別為 0.56 和 0.52，均P＜ 0.05），見圖6。

模型組及干預(yù)組小鼠脾臟Hes1 mRNA表達(dá)水平與γδT17 細(xì)胞比例均呈正相關(guān)（r值分別為0.61和0.58，均P＜ 0.05），與血清IL-17A 水平亦均呈正相關(guān)（r值分別為0.60和0.54，均P＜ 0.05）。見圖7。

圖6 銀屑病樣皮炎小鼠皮膚組織γδT17 細(xì)胞比例與銀屑病皮損嚴(yán)重程度指數(shù)（PASI）相關(guān)性分析（n=15）

討 論

免疫系統(tǒng)應(yīng)答失調(diào)在銀屑病疾病過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，目前認(rèn)為T17細(xì)胞是最重要的致病因素之一［6，12-13］。T17 細(xì)胞包括 Th17、Tc17 和 γδT17 細(xì)胞，均能分泌IL-17等細(xì)胞因子。IL-17細(xì)胞因子家族包括6個(gè)成員，IL-17A是該家族最先發(fā)現(xiàn)也是最具標(biāo)志性的細(xì)胞因子。大量研究已證實(shí)，IL-17A在銀屑病發(fā)生及發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用，能夠促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞增殖，抑制角質(zhì)形成細(xì)胞分化，破壞皮膚屏障，誘導(dǎo)多種前炎癥細(xì)胞因子和趨化因子的表達(dá)分泌，啟動(dòng)并加重炎癥反應(yīng)［2-3，14-15］。在銀屑病樣皮炎動(dòng)物模型研究中，同樣證實(shí)了IL-17A 的致病作用［16］。臨床試驗(yàn)證實(shí)，阻斷IL-17A 或其受體對中重度斑塊狀銀屑病療效確切［4-5］。本研究結(jié)果顯示，銀屑病樣皮炎小鼠脾臟及皮膚組織中γδT17細(xì)胞比例均明顯高于對照組，且脾臟γδT17細(xì)胞比例與血清IL-17A含量呈正相關(guān)，皮膚組織中γδT17細(xì)胞比例與皮損PASI呈正相關(guān)，進(jìn)一步證實(shí)γδT17細(xì)胞在銀屑病發(fā)病機(jī)制中的重要作用［6］。

圖7 銀屑病樣皮炎小鼠脾臟Hes1 mRNA表達(dá)水平與γδT17細(xì)胞比例、血清白細(xì)胞介素17A（IL-17A）含量相關(guān)性分析（n=15）

Notch信號(hào)通路作為一種高度保守的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，在細(xì)胞分化、發(fā)育過程中尤其是在T 淋巴細(xì)胞分化中起關(guān)鍵作用［17］。Notch 信號(hào)通路由 4 種Notch 受體、5 種 Notch 配體、CSL（CBF1/Suppressor of hairless/Lag1）DNA 結(jié)合蛋白、其他效應(yīng)物和Notch 調(diào)節(jié)分子等組成。Notch 配體與受體相互作用，在Notch受體分子的S2和S3兩個(gè)位點(diǎn)發(fā)生連續(xù)切割，S3 被依賴早老素、包含γ 分泌酶的復(fù)合物切割后，釋放出具有核定位信號(hào)的胞質(zhì)區(qū)（Notch intracellular domain，NICD），NICD 轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核并形成NICD/CSL轉(zhuǎn)錄激活復(fù)合體，從而激活靶基因，發(fā)揮生物學(xué)作用。γ 分泌酶抑制劑能夠作用于早老素分子，從而阻斷γ分泌酶的作用，減少NICD的產(chǎn)生，下游信號(hào)分子由于NICD 的啟動(dòng)作用缺少或減弱而處于靜止或下調(diào)狀態(tài)。Notch信號(hào)通路在銀屑病發(fā)病機(jī)制中的作用已有諸多報(bào)道［10］，本研究結(jié)果證實(shí)，γ 分泌酶抑制劑DAPT 阻斷Notch 信號(hào)后，銀屑病樣皮炎小鼠皮損嚴(yán)重程度明顯改善，PASI降低，組織病理檢查亦表明其表皮增厚及真皮炎癥細(xì)胞浸潤程度較模型組明顯減輕。

在小鼠和人促Th17細(xì)胞分化的細(xì)胞因子環(huán)境中均有Notch 信號(hào)通路的活化，以γ 分泌酶抑制劑及siRNA 特異性阻斷Notch1 信號(hào)通路能夠降低Th17 細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子RORγt 的表達(dá)，抑制其產(chǎn)生IL-17A 及相關(guān)炎癥反應(yīng)進(jìn)程［18-19］。本課題組前期研究表明，用γ分泌酶抑制劑DAPT阻斷Notch信號(hào)通路能夠降低銀屑病患者及模型小鼠外周血與脾臟單個(gè)核細(xì)胞中Th17 細(xì)胞比例、RORγt 及IL-17A 的表達(dá)［20-21］。RORγt 對于 Th17 細(xì)胞的分化必不可少，然而γδT17細(xì)胞在胸腺內(nèi)的發(fā)育分化僅部分依賴RORγt［11，22］。Hes1是Notch信號(hào)通路下游的重要靶基因，對γδT17細(xì)胞的分化發(fā)育及其產(chǎn)生IL-17A 至關(guān)重要：在Hes1 基因缺陷的小鼠胸腺內(nèi)γδT細(xì)胞數(shù)量較正常小鼠降低，且具備分泌IL-17A能力的γδT17 細(xì)胞數(shù)量降低更顯著，脾臟內(nèi)產(chǎn)生IL-17A 的γδT17 細(xì)胞數(shù)量亦明顯降低；將轉(zhuǎn)染有Notch1 胞內(nèi)段NICD1 的胎肝細(xì)胞移至經(jīng)放射線照射的小鼠，其胸腺內(nèi)Hes1 表達(dá)水平及γδT17 細(xì)胞數(shù)量顯著增加［11］。本研究結(jié)果顯示，銀屑病樣皮炎小鼠脾臟Hes1 mRNA 表達(dá)水平、脾臟及皮膚組織中γδT17 細(xì)胞比例均顯著增高，DAPT 能明顯降低Hes1的表達(dá)水平及γδT17細(xì)胞比例，且模型組和干預(yù)組小鼠脾臟Hes1 表達(dá)水平均與γδT17 細(xì)胞比例及IL-17A 血清含量呈正相關(guān)，進(jìn)一步說明銀屑病狀態(tài)下Notch-Hes1 信號(hào)通路對γδT17 細(xì)胞表達(dá)及分泌IL-17A的調(diào)控作用。

結(jié)合以往及本次研究結(jié)果，我們認(rèn)為Notch-Hes1信號(hào)通路分別通過不同的轉(zhuǎn)錄因子途徑對銀屑病IL-17A 兩大主要來源細(xì)胞即Th17 細(xì)胞和γδT17細(xì)胞進(jìn)行表達(dá)調(diào)控，促進(jìn)其產(chǎn)生分泌IL-17A，增強(qiáng)其致炎效應(yīng)，加重銀屑病皮損的炎癥反應(yīng)，阻斷Notch-Hes1 信號(hào)通路可能是銀屑病免疫治療的新策略。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突