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    自身免疫疾病相關(guān)檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)要點(diǎn)分析

    2019-12-05 00:37:33
    標(biāo)記免疫分析與臨床 2019年7期
    關(guān)鍵詞:臨床試驗(yàn)試劑特異性

    解 怡

    (國(guó)家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心,北京100081)

    自身免疫疾病主要是指機(jī)體免疫系統(tǒng)發(fā)生異常,對(duì)自身抗原類物質(zhì)產(chǎn)生免疫反應(yīng),從而導(dǎo)致組織細(xì)胞損害的一類疾病。自身免疫疾病目前已知的有100多種,主要包括兩大類,一類是器官特異性的疾病,例如原發(fā)性膽汁性肝硬化,另一類是多器官參與的系統(tǒng)性免疫障礙,例如系統(tǒng)性紅斑狼瘡等[1]。自身免疫疾病的發(fā)病機(jī)制尚不清楚,但最新研究認(rèn)為,遺傳易感性和環(huán)境影響是產(chǎn)生異常免疫應(yīng)答的兩大因素。在正常機(jī)體內(nèi)存在少量自身抗體[2],這有助于消除退化的自身和外來抗原,以維持體內(nèi)平衡。當(dāng)免疫系統(tǒng)失衡時(shí),自身抗體和自身反應(yīng)性淋巴細(xì)胞參與炎癥,產(chǎn)生病理性的自身免疫,大量免疫細(xì)胞和代謝物堆積,最終導(dǎo)致組織損傷[3-5]。如果病變發(fā)生在皮膚,往往導(dǎo)致各種皮膚炎;發(fā)生在關(guān)節(jié)處,可導(dǎo)致關(guān)節(jié)炎;發(fā)生在腎臟可導(dǎo)致腎炎,等等[6]。

    自身免疫疾病的總發(fā)病率在普通人群中約為3%~5%[7-8],且大多數(shù)自身免疫疾病受地域、性別、年齡因素的影響很大,例如,多發(fā)性硬化癥在世界范圍內(nèi)分布極為不均,其發(fā)病率在溫帶地區(qū)是熱帶地區(qū)的40倍;女性自身免疫疾病患者比例高于男性,男女比例一般在10∶1到1∶1之間[3]。近年來,自身免疫疾病的發(fā)病率呈逐年增長(zhǎng)趨勢(shì),極大的影響了患者的生活質(zhì)量,給社會(huì)和家庭帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān),已成為重要的公共衛(wèi)生問題[9]。利用相關(guān)檢測(cè)試劑對(duì)自身免疫疾病進(jìn)行輔助診斷,并進(jìn)一步采取積極有效的治療,可使大部分患者避免死亡或傷殘的發(fā)生,提高治愈率,改善生活質(zhì)量,節(jié)約社會(huì)醫(yī)療成本。

    自身免疫疾病可通過檢測(cè)相關(guān)的特異性自身抗體并結(jié)合患者的臨床癥狀進(jìn)行診斷。自身抗體的異常通常是自身免疫疾病最常見的特征,其在疾病診斷和預(yù)測(cè)評(píng)估等方面也具有重要意義。特異性自身抗體的異常升高或降低,往往提示可能患有某種自身免疫性疾病。例如,抗雙鏈DNA的自身抗體是系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾?。⊿LE)的重要評(píng)價(jià)指標(biāo);抗甲狀腺球蛋白抗體、抗甲狀腺過氧化物酶抗體對(duì)甲狀腺疾病的臨床診斷起輔助作用;抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體的檢測(cè)有助于評(píng)價(jià)系統(tǒng)性血管炎、韋格納肉芽腫和新月體性腎小球腎炎等自身免疫性疾?。?0-12]。

    依據(jù)《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》[13],自身抗體檢測(cè)類試劑的管理類別為Ⅱ類。目前,已有多種自身抗體檢測(cè)試劑盒在國(guó)內(nèi)外獲批,并廣泛應(yīng)用于臨床,包括進(jìn)口產(chǎn)品和國(guó)產(chǎn)產(chǎn)品。同時(shí)有大量的產(chǎn)品正處于研發(fā)或申報(bào)階段。隨著自身免疫性疾病研究的深入,越來越多的相關(guān)抗體被發(fā)現(xiàn)并用于臨床診斷。相關(guān)的產(chǎn)品品種多、數(shù)量大,所以一直是注冊(cè)申報(bào)的熱點(diǎn)。結(jié)合注冊(cè)申報(bào)過程中的實(shí)際情況,許多生產(chǎn)企業(yè)仍存在對(duì)性能評(píng)估的缺乏全面把握,對(duì)臨床研究的認(rèn)識(shí)不夠充分等問題。為指導(dǎo)該類試劑的注冊(cè)申報(bào),結(jié)合該類試劑的特點(diǎn),并參考國(guó)內(nèi)外法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)和技術(shù)文件,下面對(duì)該類試劑注冊(cè)申報(bào)資料中的重點(diǎn)技術(shù)問題進(jìn)行闡述。

    1 分析性能評(píng)估

    該類試劑的分析性能評(píng)價(jià)一般包括準(zhǔn)確度、靈敏度、線性研究、特異性、HOOK效應(yīng)等。

    準(zhǔn)確度包括正確度和精密度。若產(chǎn)品無相應(yīng)的國(guó)際/國(guó)家參考品,可使用生產(chǎn)企業(yè)自行制備的企業(yè)參考品進(jìn)行正確度的評(píng)價(jià),企業(yè)參考品必須具有溯源性,配制和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定。也可采用回收實(shí)驗(yàn)或者方法學(xué)比對(duì)的形式進(jìn)行。在進(jìn)行精密度的評(píng)估時(shí),應(yīng)對(duì)可能影響檢測(cè)精密度的主要變量進(jìn)行驗(yàn)證,除檢測(cè)試劑本身的影響外,還需要對(duì)不同儀器、操作者、地點(diǎn)、精密度評(píng)價(jià)周期等要素進(jìn)行相關(guān)的驗(yàn)證。應(yīng)使用含不同濃度被測(cè)物的樣本,尤其是醫(yī)學(xué)決定水平附近或異常高/低值水平的樣本進(jìn)行準(zhǔn)確度的評(píng)價(jià)。由于溯源性的差別,不同廠家試劑盒在檢測(cè)同一被測(cè)物時(shí),其結(jié)果和參考區(qū)間可能存在差異,橫向比較的可能性不大。

    反映試劑靈敏度的指標(biāo)一般包括空白限、檢出限和定量限等,空白限的研究可使用零濃度校準(zhǔn)品(或樣品稀釋液)進(jìn)行多次(至少20次)重復(fù)檢測(cè),平均值加(或減)2倍SD(≥95%置信區(qū)間)計(jì)算試劑空白限。進(jìn)行檢出限的評(píng)價(jià)時(shí),可對(duì)每一濃度樣本進(jìn)行多次重復(fù)檢測(cè),選取一定(例如95%)穩(wěn)定檢出率的濃度水平作為檢出限。定量限一般為定量試劑的線性范圍下限濃度或者準(zhǔn)確度滿足要求時(shí)的最低濃度,可根據(jù)產(chǎn)品特性進(jìn)行相關(guān)研究,確定產(chǎn)品的定量限。

    在特異性方面,應(yīng)考慮其他血液中易存的物質(zhì)和結(jié)構(gòu)類似物質(zhì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾,常見的干擾/交叉反應(yīng)物質(zhì)包括:血紅蛋白、脂類、膽紅素、類風(fēng)濕因子、抗核抗體、非特異性抗體、常見藥物等。除此以外還應(yīng)對(duì)是否存在HAMA效應(yīng)進(jìn)行研究。由于該類試劑的方法原理一般為抗原抗體反應(yīng),所以可能會(huì)存在HOOK效應(yīng)或平臺(tái)期,建議對(duì)不會(huì)產(chǎn)生該效應(yīng)的最大濃度進(jìn)行研究,并在說明書中明確。

    2 陽性判斷值或參考區(qū)間

    自身抗體在正常人體內(nèi)也會(huì)相應(yīng)存在,所以在進(jìn)行陽性判斷值/參考區(qū)間的研究時(shí),建議首先選擇ROC曲線方法,根據(jù)產(chǎn)品預(yù)期用途選擇目標(biāo)人群,對(duì)臨床靈敏度和臨床特異性進(jìn)行分析,進(jìn)而設(shè)定合理的陽性判斷值/參考區(qū)間。也可選擇百分位數(shù)或正態(tài)分布法,通過研究正常人體內(nèi)被測(cè)物水平并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,最終確定試劑的陽性判斷值/參考區(qū)間。

    3 臨床評(píng)價(jià)

    根據(jù)《免于進(jìn)行臨床試驗(yàn)醫(yī)療器械目錄》[14],該類試劑一般屬于目錄中所列的產(chǎn)品,可依照《免于進(jìn)行臨床試驗(yàn)的體外診斷試劑臨床評(píng)價(jià)資料基本要求(試行)》[15]的要求,進(jìn)行臨床評(píng)價(jià),也可選擇臨床試驗(yàn)的方式進(jìn)行評(píng)價(jià)。

    在進(jìn)行臨床試驗(yàn)時(shí),根據(jù)目前法規(guī)要求[16],臨床試驗(yàn)的總樣本量應(yīng)不少于200例,且應(yīng)在2家或2家以上的臨床機(jī)構(gòu)進(jìn)行。應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的預(yù)期用途設(shè)定合理、統(tǒng)一的樣本入組標(biāo)準(zhǔn),并包含一定量的干擾樣本。定量產(chǎn)品的樣本應(yīng)盡量覆蓋線性范圍,定性產(chǎn)品的陽性例數(shù)應(yīng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)等相應(yīng)要求。若適用于不同的樣本類型,臨床試驗(yàn)應(yīng)選擇每種樣本類型進(jìn)行研究。應(yīng)注意,臨床試驗(yàn)的操作步驟、樣本處理和保存、結(jié)果的判斷等均應(yīng)嚴(yán)格按照試劑的說明書中相關(guān)內(nèi)容進(jìn)行。

    生產(chǎn)企業(yè)在注冊(cè)申報(bào)時(shí),可采用境外臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)作為臨床評(píng)價(jià)資料進(jìn)行申報(bào)工作。具體要求可參照《接受醫(yī)療器械境外臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)技術(shù)指導(dǎo)原則》[17]的內(nèi)容。

    4 產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)分析

    應(yīng)對(duì)產(chǎn)品生命周期的各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分析、風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)和風(fēng)險(xiǎn)控制,對(duì)每項(xiàng)風(fēng)險(xiǎn)的具體內(nèi)容、頻率、等級(jí)和剩余風(fēng)險(xiǎn)情況等進(jìn)行分析描述,具體可參照YY/T 0316[18]或國(guó)際相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的要求。

    5 產(chǎn)品說明書

    在預(yù)期用途項(xiàng)下,明確產(chǎn)品適用的樣本類型、定性/半定量/定量檢測(cè)、被測(cè)物等,并介紹產(chǎn)品的預(yù)期用途背景情況。

    在主要組成成分中,抗體應(yīng)明確生物學(xué)來源,校準(zhǔn)品明確溯源性,質(zhì)控品明確靶值范圍。

    適用儀器一項(xiàng),應(yīng)明確使用儀器的具體型號(hào),避免“系列”、“等”之類的字眼,且每一個(gè)機(jī)型都需要經(jīng)過前期驗(yàn)證。

    檢驗(yàn)方法中,應(yīng)寫明試驗(yàn)整體操作流程。主要包括試劑的配制,實(shí)驗(yàn)條件、技術(shù)參數(shù)、校準(zhǔn)及質(zhì)控程序、結(jié)果的計(jì)算或讀取等。

    在陽性判斷值或參考區(qū)間項(xiàng)下,應(yīng)明確其確定方法,介紹樣本情況(適用人群),實(shí)驗(yàn)方法,統(tǒng)計(jì)方法等,并對(duì)是否有局限性進(jìn)行說明。

    分析性能指標(biāo)項(xiàng)下,說明產(chǎn)品的主要性能指標(biāo),評(píng)價(jià)條件和結(jié)論。如有臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù),則應(yīng)在此項(xiàng)進(jìn)行概括描述。

    所有內(nèi)容都應(yīng)滿足《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》[19]的相關(guān)要求。

    6 新研制試劑的注冊(cè)技術(shù)要點(diǎn)

    隨著人類對(duì)自身免疫疾病的研究逐漸深入,以及相關(guān)檢測(cè)手段的飛速發(fā)展,新研制試劑也不斷被研發(fā)并投入市場(chǎng)。新研制產(chǎn)品主要是指預(yù)期用途或檢測(cè)原理等全新的產(chǎn)品。結(jié)合該類新產(chǎn)品的特點(diǎn)以及筆者近年來從事相關(guān)新產(chǎn)品技術(shù)審評(píng)工作的經(jīng)驗(yàn)總結(jié),下面對(duì)自身抗體檢測(cè)類新研制試劑申報(bào)時(shí)的特殊關(guān)注點(diǎn)進(jìn)行闡述。

    6.1 主要原材料

    該類試劑的主要原材料主要為疾病相關(guān)的抗原或自身抗體,若其為首次研發(fā),應(yīng)說明其基本原理及技術(shù)創(chuàng)新點(diǎn),以及是否能表現(xiàn)出良好的特異性、設(shè)計(jì)是否合理、工藝是否相對(duì)穩(wěn)定等,這些信息及相關(guān)依據(jù)需體現(xiàn)在原材料的研究資料中。

    6.2 分析性能評(píng)估

    在特異性方面,由于其為新研制產(chǎn)品,需盡量擴(kuò)大干擾物質(zhì)的范圍,研究待測(cè)樣本中易存的物質(zhì)和其他結(jié)構(gòu)類似物質(zhì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾,以充分證明其具有良好的特異性。

    對(duì)于線性研究來說,由于自身抗體的異質(zhì)性[20],往往無法呈現(xiàn)精確的線性關(guān)系,即無法做到定量檢測(cè)。若產(chǎn)品聲稱可用于定量檢測(cè),則需要提供詳細(xì)的線性范圍研究資料進(jìn)行支持。

    6.3 臨床試驗(yàn)

    根據(jù)法規(guī)要求[16],新研制產(chǎn)品的臨床樣本量應(yīng)不少于1000例。臨床樣本需覆蓋該疾病確診陽性病例、易混淆的干擾病例、正常人群等,且應(yīng)考慮病程的不同階段、不同性別、不同年齡層次的均勻分布。

    試驗(yàn)方法為將考核產(chǎn)品與診斷該疾病的“金標(biāo)準(zhǔn)”進(jìn)行比較,以考察其臨床性能指標(biāo)(臨床靈敏度、臨床特異性等),若預(yù)期用于病情及療效監(jiān)測(cè)、早期診斷、預(yù)后判斷等,還必須對(duì)受試者進(jìn)行跟蹤研究?!敖饦?biāo)準(zhǔn)”即為在現(xiàn)有條件下,公認(rèn)的、可靠的、權(quán)威的診斷方法,各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的診斷標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)統(tǒng)一并有相應(yīng)依據(jù)。應(yīng)選擇合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行分析,并說明方法的合理性。

    若產(chǎn)品預(yù)期用于定量或半定量檢測(cè),應(yīng)在試驗(yàn)中證明被檢測(cè)物定量檢測(cè)的臨床意義,如被檢測(cè)物量值的高低是否反映疾病的嚴(yán)重程度、是否與疾病進(jìn)程相關(guān);治療前后量值的變化是否能反映治療效果,等等。

    7 結(jié)語

    近年來,隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展,特異性自身抗體與自身免疫性疾病關(guān)系的研究也更加深入,可預(yù)見的是將來會(huì)有更多的自身抗體檢測(cè)試劑進(jìn)行注冊(cè)申報(bào),產(chǎn)品的情況也會(huì)更加復(fù)雜。生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)在產(chǎn)品研發(fā)時(shí)盡量拓寬思路,對(duì)產(chǎn)品性能進(jìn)行完善,以獲得更佳的安全有效性;在進(jìn)行注冊(cè)申報(bào)時(shí),應(yīng)根據(jù)法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)和指導(dǎo)原則的要求,結(jié)合產(chǎn)品自身的特點(diǎn),對(duì)其進(jìn)行全面的評(píng)價(jià),提高注冊(cè)申報(bào)資料的質(zhì)量。

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