• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    臭氧處理對交鏈孢菌生長及其毒素積累的抑制作用

    2019-12-03 01:08:00王劉慶李祖梁
    食品科學 2019年21期
    關(guān)鍵詞:孢子臭氧菌絲

    姜 楠,王劉慶,李祖梁,王 多,王 蒙,*

    (1.北京農(nóng)業(yè)質(zhì)量標準與檢測技術(shù)研究中心,農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風險評估實驗室(北京),農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)地環(huán)境監(jiān)測北京市重點實驗室,北京 100097;2.新疆農(nóng)業(yè)大學食品科學與藥學學院,新疆 烏魯木齊 830052)

    交鏈孢菌(Alternariaspp.)是污染農(nóng)產(chǎn)品及其制品最普遍的真菌之一,廣泛分布于自然界,其中互隔交鏈孢(Alternaria alternata)是主要的病原菌,其不僅能夠侵染多種農(nóng)作物,引起植物病害(如番茄黑斑病等),而且能夠產(chǎn)生交鏈孢毒素。檢出率較高的交鏈孢毒素包括細交鏈孢酮酸(tenuazonic acid,TeA)、交鏈孢酚(alternariol,AOH)、交鏈孢酚單甲醚(alternariol monomethyl ether,AME)等[1-3]。交鏈孢毒素對動植物具有一定的潛在危害,其中AOH具有遺傳毒性和致突變性,還可促使機體產(chǎn)生氧化應(yīng)激反應(yīng)[4-6]。TeA與AOH、AME具有協(xié)同作用,且均具有動物急性毒性[7]。歐洲食品安全局的數(shù)據(jù)顯示隨膳食攝入的AOH對公眾健康存在風險[8-10],研究顯示河南省林縣地區(qū)食管癌高發(fā)可能與糧食作物中交鏈孢毒素污染,特別是AOH及其甲基化產(chǎn)物AME含量較高有關(guān)[11-12]。目前食品中的交鏈孢毒素污染已成為一個重要的公共衛(wèi)生問題,因此掌握有效抑制交鏈孢菌生長及其產(chǎn)毒的防控方法具有重要意義。

    臭氧作為強氧化劑,可迅速破壞有機物中的雙鍵,形成含雙鍵少、分子質(zhì)量較低的物質(zhì);且低劑量臭氧作用于糧食、果蔬等農(nóng)產(chǎn)品表面即可起到殺菌消毒的作用[13]。臭氧可自動分解為氧氣,無毒性殘留,早在1997年,美國食品藥品監(jiān)督管理局就將臭氧作為一種普遍認為安全的方法應(yīng)用于食品加工過程中,目前臭氧已在食品加工貯藏、果蔬保鮮、廢水處理等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用[14]。臭氧處理還可以殺滅真菌、有效破壞毒素的化學結(jié)構(gòu),從而實現(xiàn)降解毒素的目的。近年來,臭氧用于防控產(chǎn)毒真菌、降解真菌毒素的研究多有報道。Mylona等研究發(fā)現(xiàn)臭氧氣體不僅在體外可抑制輪枝鐮刀菌菌絲的生長和孢子的萌發(fā),同時可抑制在玉米粉中伏馬毒素(fumonisin B,F(xiàn)B)的積累[15]。Savi等的研究表明臭氧處理可以抑制禾谷鐮刀菌的生長,同時可有效降解小麥粒中的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)[16]。此外,還有研究報道臭氧用于降解花生及紅辣椒中的黃曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)[17-18]、蘋果汁中的展青霉素[19]、玉米中的玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)以及赭曲霉毒素(ochratoxin A,OTA)[20]等。一些臭氧對互隔交鏈孢影響的研究也表明臭氧處理可抑制互隔交鏈孢的孢子萌發(fā)及菌絲生物量生長[21-22]。然而,鮮見臭氧處理拮抗交鏈孢產(chǎn)毒以及其直接降解毒素的研究。鑒于此,本研究不僅考察不同劑量的臭氧處理對體外互隔交鏈孢生長及產(chǎn)毒能力的影響;而且通過接種番茄研究臭氧處理后互隔交鏈孢在番茄活體內(nèi)的致病能力及產(chǎn)毒情況,同時分析了臭氧對交鏈孢毒素的直接降解效果,以期為利用臭氧防控互隔交鏈孢侵染及其毒素積累提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    紅熟番茄(Solanum lycopersicumcv. Shengfan15)采于北京天安農(nóng)業(yè)有限公司的番茄園,當天運回實驗室,選擇大小均一、同一成熟度、果形端正、無機械損傷和病蟲害的番茄果實作為實驗用果。將番茄果實經(jīng)體積分數(shù)1%次氯酸鈉溶液浸泡1 min,隨后沖洗,自然晾干備用。

    交鏈孢毒素標準品(AOH、AME、TeA)(純度均大于99%) 美國Sigma-Aldrich公司;乙腈、甲醇、甲酸、乙酸銨(均為質(zhì)譜級) 美國Fisher公司;馬鈴薯葡萄糖瓊脂(potato dextrose agar,PDA) 美國Becton公司。

    1.2 儀器與設(shè)備

    AcquityTM超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)儀、電噴霧電離(electron spray ionization,ESI)檢測器 美國Waters公司;3-30k臺式高速冷凍離心機 德國Sigma公司;N-EVA-112P氮吹儀 美國Organomation公司;A11分析研磨機、漩渦混合器 德國IKA公司;Milli-Q A10超純水器 美國Millipore公司;QJ-8006K臭氧發(fā)生器 廣州銓聚臭氧科技有限公司;APES-O3臭氧檢測儀 深圳安帕爾科技有限公司;S-3400N掃描電子顯微鏡 日本Hitachi公司。

    1.3 方法

    1.3.1 互隔交鏈孢培養(yǎng)及孢子懸浮液配制

    本研究所用的互隔交鏈孢為本實驗室前期從番茄上分離純化得到的菌株,將互隔交鏈孢接種于PDA培養(yǎng)基上,25 ℃條件下恒溫避光培養(yǎng)10 d。然后用體積分數(shù)為0.05%的Tween-80溶液沖洗平板,采用血球計數(shù)板法制成濃度約為1×105個/mL的孢子懸浮液。

    1.3.2 樣品制備

    1.3.2.1 臭氧處理互隔交鏈孢孢子懸浮液

    參考文獻[23]的方法并有所修改。分別吸取2 mL交鏈孢菌孢子懸浮液置于25 mL小燒杯中(燒杯直徑為5 cm),將裝有孢子懸浮液的小燒杯放入已消毒的密閉貯藏箱(48 cm×28 cm×28 cm)中,同時將臭氧檢測器置于貯藏箱中,在室溫條件下通入臭氧氣體,控制臭氧發(fā)生器使箱內(nèi)臭氧質(zhì)量濃度分別為5、10、20 mg/L,處理30 min。處理結(jié)束后回收燒杯內(nèi)的孢子懸浮液,以不經(jīng)臭氧處理的孢子懸浮液作為對照,分別接種于PDA培養(yǎng)基及番茄果實上。

    接種PDA培養(yǎng)基:分別吸取對照及不同質(zhì)量濃度臭氧處理后的交鏈孢菌孢子懸浮液20 μL接種于PDA平板上,25 ℃條件下恒溫避光培養(yǎng)7 d,每組接種5 個平板,分別于第3、5、7天用游標卡尺十字交叉測量菌落直徑,并于第7天取1/4培養(yǎng)基進行交鏈孢毒素的提取及測定,實驗重復3 次。

    接種番茄果實:接種前用直徑3 mm、已滅菌的不銹鋼釘子在番茄赤道部位刺入1 個傷口(3 mm×3 mm),待傷口表面晾干后分別吸取對照及不同質(zhì)量濃度臭氧處理后的交鏈孢菌孢子懸浮液20 μL接種于番茄果實上,每組設(shè)置15 個番茄,接種后放置在室溫為20 ℃的環(huán)境中貯藏7 d,分別于第3、5、7天用游標卡尺十字交叉測量病斑部位的直徑,并于第7天在病斑部位處取樣。將病斑部位樣品用研磨機混合勻漿,貯存于-20 ℃待測定交鏈孢毒素含量,實驗重復3 次。

    1.3.2.2 臭氧處理交鏈孢毒素標準品

    參考文獻[14]的方法并有所修改。將TeA、AOH、AME 3 種交鏈孢毒素標準品用乙腈稀釋定容,配制成質(zhì)量濃度為1 μg/mL的標準溶液,分別吸取1 mL標準溶液置于25 mL小燒杯中(燒杯直徑為5 cm)。將裝有毒素標準溶液的小燒杯放入已消毒的密閉貯藏箱(48 cm×28 cm×28 cm)中,同時將臭氧檢測器置于貯藏箱中,在室溫條件下通入臭氧氣體,控制臭氧發(fā)生器使箱內(nèi)臭氧質(zhì)量濃度分別為2、5、10、20、40 mg/L,處理30 min;另外,固定臭氧質(zhì)量濃度為20 mg/L,分別處理毒素標準溶液15、30、45、60、90、120 min。處理結(jié)束后,回收燒杯內(nèi)的毒素標準溶液,利用UPLC-MS/MS進行測定,以不經(jīng)臭氧處理的毒素標準溶液作為對照,每個處理組設(shè)置3 個平行,實驗重復3 次,考察不同臭氧質(zhì)量濃度及處理時間對交鏈孢毒素的降解作用。臭氧處理交鏈孢毒素降解率按下式計算。

    式中:c(A,t)為交鏈孢毒素經(jīng)臭氧處理時間t后的含量/(μg/kg);c(A,0)為交鏈孢毒素的初始含量/(μg/kg)。

    1.3.3 掃描電子顯微鏡觀察互隔交鏈孢的微觀形態(tài)

    參考文獻[24]的方法并有所修改。為進一步研究臭氧對互隔交鏈孢孢子和菌絲形態(tài)的影響,對其進行掃描電子顯微鏡觀察。選擇10、20 mg/L臭氧處理后的孢子懸浮液接種于PDA培養(yǎng)基上,25 ℃條件下恒溫避光培養(yǎng)24 h后在菌落周圍插入滅菌的玻璃片,培養(yǎng)24 h后取出玻璃片。將長有交鏈孢菌的玻璃片置于戊二醛溶液中固定2~12 h,用0.1 mol/L pH值為6.8的磷酸鹽緩沖液沖洗2 次,每次10 min;依次用體積分數(shù)20%、50%、70%、80%、90%乙醇溶液梯度洗脫,每次15 min,再用無水乙醇洗脫2 次,每次15 min;最后用叔丁醇置換,每次30 min,共置換3 次,最后一次置于4 ℃冰箱里,待叔丁醇凝固后冷凍干燥,隨后進行掃描電子顯微鏡觀察,以不經(jīng)臭氧處理組為對照,實驗重復3 次。

    1.3.4 交鏈孢毒素含量的測定

    交鏈孢毒素的提取及含量測定參考本課題組前期研究的方法[25],并略有修改。取番茄病斑樣品(5 g)及1/4 PDA培養(yǎng)基樣品于50 mL離心管內(nèi),加入20 mL含有體積分數(shù)1%甲酸的乙腈溶液,漩渦混勻,經(jīng)150 r/min常溫振蕩提取30 min,漩渦振蕩后經(jīng)高速冷凍離心機離心(1 000 r/min、10 min、10 ℃),離心完成后取1 mL上清液于40~50 ℃條件下氮氣吹至近干,隨后用1 mL乙腈溶液(體積比3∶7)復溶,混勻后過0.22 μm PTFE微孔濾膜,經(jīng)UPLC-MS/MS測定,每個樣品設(shè)定3 個平行,實驗重復3 次。

    1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計及分析

    實驗中所有數(shù)據(jù)的方差分析及多重比較均采用SPSS 23.0軟件進行,用Duncan’s法進行差異顯著性檢驗(P<0.05),采用Gaphpad prism軟件作圖。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 臭氧處理對互隔交鏈孢菌落直徑的抑制

    表1所示為臭氧處理互隔交鏈孢孢子懸浮液后接種到PDA培養(yǎng)基上,隨著貯藏時間的延長不同臭氧質(zhì)量濃度處理對互隔交鏈孢菌落直徑的抑制情況。從表1可以看出,臭氧氣體對互隔交鏈孢菌絲的生長有較大程度的延緩和抑制作用,處理組的菌落比對照組生長顯著減慢(P<0.05)。同時可以看出,抑制作用與臭氧質(zhì)量濃度有關(guān),隨著臭氧質(zhì)量濃度的增加,其對互隔交鏈孢菌落直徑的抑制作用明顯加強,互隔交鏈孢菌絲生物量積累逐漸減小。在培養(yǎng)第7天,對照組的菌落直徑為6.88 cm,此時臭氧質(zhì)量濃度為10 mg/L的處理組菌落直徑為5.58 cm,臭氧質(zhì)量濃度為20 mg/L的處理組菌落直徑僅為5.10 cm,顯著低于對照組及低質(zhì)量濃度的臭氧處理組(P<0.05),其對互隔交鏈孢生長的抑制率分別為18.9%和25.9%。

    表 1 臭氧處理對交鏈孢菌生長的抑制情況Table 1 Inhibitory effect of ozone on mycelial growth of A. alternata

    臭氧直接作用于互隔交鏈孢孢子懸浮液,導致其生長受到抑制,這可能是因為臭氧的強氧化作用直接使分生孢子失活,使其完全喪失萌發(fā)能力;或者臭氧破壞了分生孢子的細胞結(jié)構(gòu),從而使健康的分生孢子數(shù)量減小,進而導致菌落生長緩慢。本研究結(jié)果與文獻報道一致,Ames等[21]將互隔交鏈孢長期置于低含量臭氧氣體(150 nL/L)中,隨著暴露時間的延長,互隔交鏈孢的菌落直徑生長逐漸減慢、分生孢子數(shù)量逐漸減小,在100 d時分生孢子全部失活。Tzortzakis等也研究了不同濃度的臭氧熏蒸對交鏈孢菌的菌絲生物量及分生孢子的影響,結(jié)果表明臭氧處理后互隔交鏈孢的菌絲生物量及分生孢子活力均受到顯著抑制,且隨著臭氧質(zhì)量濃度的增加抑制作用顯著增強;同時,他們指出臭氧對真菌孢子的抑制作用也與孢子形態(tài)、水分含量、生長基質(zhì)有關(guān),具體的抑制機理還有待研究[22]。

    2.2 臭氧處理對互隔交鏈孢菌絲及孢子形態(tài)的影響

    為了進一步考察臭氧處理對互隔交鏈孢造成的破壞,采用掃描電子顯微鏡觀察臭氧處理后的互隔交鏈孢菌絲及孢子的形態(tài)變化情況。如圖1所示,與對照相比,臭氧處理后的互隔交鏈孢形態(tài)發(fā)生異常。正常的互隔交鏈孢孢子呈完整、豐滿的卵形、倒梨形或近似橢球形,表面光滑或具微刺,菌絲表面濃厚光滑,自然伸長。經(jīng)10 mg/L臭氧處理30 min后互隔交鏈孢孢子發(fā)生很明顯的凹陷、褶皺,菌絲變得干癟、萎縮、粗糙,同時出現(xiàn)斷裂的情況;臭氧質(zhì)量濃度增大到20 mg/L時,菌絲和孢子形態(tài)異常程度也逐漸增大,除了明顯的凹陷和褶皺外,孢子表面還發(fā)生破裂,菌絲更加干癟粗糙,且出現(xiàn)不規(guī)則的折疊、皺縮,同時有些孢子和菌絲表面出現(xiàn)小囊泡,由此可見臭氧對互隔交鏈孢的菌絲及孢子的破壞作用與臭氧質(zhì)量濃度有關(guān)。

    圖 1 掃描電子顯微鏡觀察臭氧處理后互隔交鏈孢的微觀形態(tài)Fig. 1 SEM observation of A. alternata after ozone treatment

    當真菌暴露在不利于生長的環(huán)境(如化學處理、低溫、高濕等)中就會出現(xiàn)分生孢子減少、菌落生長緩慢等現(xiàn)象[26-27]。雖然目前尚鮮見臭氧對互隔交鏈孢形態(tài)學影響的研究報道,但Savi等[28]研究了臭氧對鐮刀菌(Fusarium)、曲霉菌(Aspergillus)以及青霉菌(Penicillium)等真菌形態(tài)學的影響,以上3 種真菌經(jīng)過臭氧處理后在形態(tài)上均表現(xiàn)出異常,菌絲出現(xiàn)變形、破裂。郭宇歡等[23]將灰葡萄孢(Botrytis cinerea)暴露于臭氧氣體中,發(fā)現(xiàn)菌絲表面出現(xiàn)溝壑,說明臭氧處理對灰葡萄孢菌絲造成傷害。在本研究中,一方面,臭氧對互隔交鏈孢的破壞可能是因為強氧化作用直接導致大量孢子及菌絲發(fā)生破壞,進而引起真菌死亡;另一方面,臭氧的強氧化作用可能使細胞壁上的蛋白質(zhì)、幾丁質(zhì)、葡聚糖等物質(zhì)發(fā)生化學作用,改變細胞壁的完整性,使細胞內(nèi)容物釋放,進而導致真菌細胞遭到破壞[29]。

    2.3 臭氧處理對體外互隔交鏈孢產(chǎn)毒能力的影響

    圖 2 經(jīng)臭氧處理后互隔交鏈孢在體外PDA培養(yǎng)基上所產(chǎn)毒素含量Fig. 2 Concentrations of various mycotoxins produced by A. alternata with ozone treatment when cultured on PDA plates

    不同質(zhì)量濃度臭氧處理互隔交鏈孢孢子懸浮液后接種于PDA培養(yǎng)基上,25 ℃條件下避光生長7 d,第7天進行交鏈孢毒素的提取及含量測定,圖2所示為體外PDA培養(yǎng)基上交鏈孢毒素含量的變化情況。對照組互隔交鏈孢高產(chǎn)TeA(1.08 mg/cm2),AOH(0.071 mg/cm2)、AME(0.009 mg/cm2)含量相對較低。本研究結(jié)果表明臭氧處理可顯著抑制A.alternata產(chǎn)TeA、AOH、AME這3 種交鏈孢毒素,且與臭氧質(zhì)量濃度呈正相關(guān)。在低質(zhì)量濃度臭氧(5 mg/L)處理時,TeA含量為0.88 mg/cm2,AOH含量為0.065 mg/cm2,均低于對照組,而AME不再產(chǎn)生。隨著臭氧質(zhì)量濃度的增加,TeA和AOH的含量也逐漸降低,當臭氧質(zhì)量濃度增加至20 mg/L時,TeA含量減少至0.71 mg/cm2,與對照組相比減少了34.3%;AOH的含量減少至0.033 mg/cm2,比對照減少了53.5%。

    交鏈孢毒素含量的降低可能是因為互隔交鏈孢經(jīng)臭氧處理后菌絲和孢子受到損傷,導致總的生物量減少,進而導致產(chǎn)生毒素的含量有所降低。目前尚鮮見臭氧處理對互隔交鏈孢體外產(chǎn)毒影響的研究,但有臭氧對其他真菌產(chǎn)毒的文獻報道。Mylona等[15]將長有輪枝鐮刀菌的培養(yǎng)基暴露于臭氧氣體中(100×10-6、200×10-6,1 h),10 d后,與對照相比輪枝鐮刀菌FB產(chǎn)量顯著降低。關(guān)于臭氧能抑制真菌產(chǎn)毒的機理,有研究認為是因為臭氧作用使真菌的細胞膜完整性以及參與多種化學反應(yīng)的酶遭到破壞[30],而本研究也發(fā)現(xiàn)臭氧能夠有效地破壞互隔交鏈孢細胞結(jié)構(gòu),進而減少毒素的合成,然而關(guān)于臭氧抑制互隔交鏈孢產(chǎn)毒的詳細機制還有待進一步研究。

    2.4 臭氧處理對互隔交鏈孢致病能力及產(chǎn)毒能力的影響

    互隔交鏈孢是引起番茄黑斑病的主要病害之一,并且會在番茄果實體內(nèi)積累產(chǎn)生交鏈孢毒素,這對番茄及其加工制品的食用安全造成較大威脅。基于此,本研究選擇番茄為基質(zhì),將臭氧處理后的互隔交鏈孢接種到健康番茄體內(nèi),觀察互隔交鏈孢在番茄上生長的病斑直徑大小以及產(chǎn)毒的變化情況。

    表 2 經(jīng)臭氧處理后的交鏈孢菌在番茄上的生長情況Table 2 Mycelial growth of A. alternata with ozone treatment on tomato fruit

    不同質(zhì)量濃度臭氧處理互隔交鏈孢后接種到番茄果實上,第3、5、7天的病斑直徑如表2所示。隨著生長時間的延長,互隔交鏈孢病斑直徑逐漸擴大,臭氧處理導致病斑延伸較對照顯著放緩(P<0.05),且不同質(zhì)量濃度的臭氧處理組之間也表現(xiàn)出顯著差異(P<0.05)。隨著臭氧質(zhì)量濃度的增大,互隔交鏈孢在番茄果實上生長受抑制程度逐漸增大,說明臭氧處理對互隔交鏈孢致病力有較明顯的抑制作用,且臭氧質(zhì)量濃度與致病力呈負相關(guān)。龍君[31]用不同質(zhì)量濃度(50、100、150、200 mg/m3)臭氧氣體熏蒸意大利青霉(Penicillium italicum),隨后接種到柑橘上觀察柑橘的發(fā)病情況,實驗結(jié)果表明臭氧熏蒸后柑橘青霉菌分生孢子的致病力與對照組相比有顯著差異,臭氧氣體既能夠抑制柑橘發(fā)病,也能夠延緩病斑的擴展。這與本研究結(jié)果類似,臭氧處理組均表現(xiàn)出對果蔬病原菌的拮抗作用,能夠抑制病害的發(fā)生。

    圖 3 臭氧處理后番茄病斑部位的交鏈孢毒素含量Fig. 3 Concentrations of various Alternaria toxins in lesions of tomato fruit inoculated with A. alternata with ozone treatment

    圖3所示為臭氧處理后的互隔交鏈孢在番茄果實上生長第7天的產(chǎn)毒情況。對照組互隔交鏈孢在番茄基質(zhì)上產(chǎn)TeA、AOH、AME的含量分別為172.50、3.18、2.22 mg/kg。與對照組相比,臭氧處理組中3 種交鏈孢毒素的含量均有所下降,且隨著臭氧質(zhì)量濃度的增大,毒素含量顯著降低(P<0.05),說明臭氧處理對互隔交鏈孢產(chǎn)毒能力具有干預(yù)作用,且隨著臭氧質(zhì)量濃度的增大,抑制產(chǎn)毒能力逐漸增強。然而,臭氧處理對互隔交鏈孢產(chǎn)3 種毒素的抑制能力有所差異,經(jīng)20 mg/L臭氧處理的番茄果實貯藏7 d后,TeA的含量為110.2 mg/kg,比對照組減少了36.1%;而AOH和AME的含量分別為0.32 mg/kg和0.15 mg/kg,分別比對照組減少了89.9%和93.2%,可見臭氧處理抑制該菌株產(chǎn)AOH和AME毒素的作用更明顯。這說明臭氧處理對互隔交鏈孢的菌絲和孢子造成破壞,導致其不能在番茄上正常生長,進而引起交鏈孢毒素的積累減少;而不同交鏈孢毒素之間抑制率的明顯差異又顯示出臭氧處理對互隔交鏈孢產(chǎn)毒的影響不單是緣于對互隔交鏈孢的抑制,也可能存在其他機制影響毒素的合成。

    番茄果實富含酚酸,主要有綠原酸、咖啡酸、對香豆酸、阿魏酸、4-羥基苯甲酸等[32],同時有研究表明互隔交鏈孢接種到番茄上會引起酚酸含量的變化,而且體外抑菌實驗也表明綠原酸及咖啡酸對互隔交鏈孢生長的抑制率分別是16%、30%[33]。Pane等的研究表明花椒中多酚提取物對采后互隔交鏈孢侵染櫻桃番茄具有抑制作用[34]。酚酸不僅抑制病原真菌生長,對真菌毒素的積累也具有抑制作用,本課題組前期的研究結(jié)果表明,對香豆酸、咖啡酸可以顯著抑制互隔交鏈孢的生長及TeA的產(chǎn)生[35]。另外也有研究表明0.5 mmol/L綠原酸及阿魏酸可使輪枝鐮刀菌產(chǎn)T-2毒素分別減少23.1%及26.5%[36]。酚酸是植物防御體系的組成部分,互隔交鏈孢在番茄上的致病力及產(chǎn)毒能力受到抑制可能是由于臭氧和酚酸協(xié)同作用的結(jié)果,但是不同酚酸成分對交鏈孢毒素的抑制效果及防御機理還需進一步研究。

    2.5 臭氧處理對交鏈孢毒素的降解作用

    圖 4 臭氧處理交鏈孢毒素的降解效果Fig. 4 Degradation of Alternaria toxins by ozone treatment

    臭氧因其強氧化作用可以降解真菌毒素或改變其化學結(jié)構(gòu),使其毒性基團遭到破壞,從而起到解毒作用。目前眾多研究都表明臭氧對谷物中的AFB1、OTA、ZEN等具有良好的降解效果,但是對交鏈孢毒素的降解效果鮮見報道。圖4為不同臭氧質(zhì)量濃度及處理時間對TeA、AOH、AME 3 種交鏈孢毒素的降解效果。從圖4A可以看出,TeA、AOH、AME 3 種交鏈孢毒素的降解率隨臭氧質(zhì)量濃度的增大而逐漸升高,其中TeA經(jīng)20 mg/L臭氧處理30 min后已檢測不到;AOH在較低臭氧質(zhì)量濃度下降解效果就比較顯著,臭氧質(zhì)量濃度為2 mg/L時降解率為56.0%,臭氧質(zhì)量濃度增大至40 mg/L時降解率為75.0%,降解率變化幅度不明顯;而AME在較低臭氧質(zhì)量濃度時降解效果不明顯,臭氧質(zhì)量濃度增大至40 mg/L時降解率為63.3%。從圖4B中可以看出,當臭氧質(zhì)量濃度固定為20 mg/L時,隨著處理時間的延長,交鏈孢毒素的降解率也逐漸增大,對TeA的降解效果最顯著,在15 min時降解率達63.5%,隨著時間延長,到30 min時可被完全降解;AOH在45 min時降解率為78.8%,在60 min時降解率為79.5%,在此時間段降解率變化不顯著,隨著時間進一步延長,至120 min時降解率達91.9%;AME在較短時間內(nèi)降解效果較差,45 min時降解率僅為47.6%,長時間臭氧處理可較大程度上降解AME,臭氧處理120 min時其降解率達到90.0%。

    從兩組實驗結(jié)果來看,處理時間對3 種交鏈孢毒素降解效率的影響占主導因素,除了TeA在較短時間就可降解以外,AOH及AME在20 mg/L處理60 min時降解率即可達70%以上。與文獻報道的臭氧處理其他真菌毒素相比,3 種交鏈孢毒素的臭氧處理時間較長、所需臭氧質(zhì)量濃度較高。Qi Lijun等[20]研究了不同質(zhì)量濃度臭氧及時間處理ZEN及OTA的效果,5 mg/L臭氧處理ZEN標準溶液5 s,其降解率超過90%;10 mg/L臭氧處理OTA標準溶液10 s,其降解率接近50%。王莉等[14]用質(zhì)量濃度為10 mg/L的臭氧氣體降解DON,結(jié)果表明隨著處理時間的延長,DON的降解率也隨之提高,處理5 min后DON降解率達到88%。由此可見,臭氧質(zhì)量濃度、處理時間、毒素的初始濃度、水分含量、pH值等因素都會不同程度地影響臭氧降解真菌毒素的效果[37]。另外,臭氧對真菌毒素的降解效果也與其結(jié)構(gòu)和特性有關(guān),臭氧具有強氧化作用,一般會攻擊雙鍵結(jié)構(gòu)發(fā)生加成反應(yīng),也可能會破壞苯環(huán)結(jié)構(gòu)。現(xiàn)有研究認為關(guān)于臭氧降解AFB1、DON、ZEN的機理主要為Criegee機制[14,38-39],但是關(guān)于交鏈孢毒素的臭氧降解產(chǎn)物鑒定、降解路徑解析、產(chǎn)物安全性評價等方面還需開展深入研究。

    3 結(jié) 論

    臭氧作為一種強效的氧化劑,因其極易分解生成氧氣、無污染殘留等優(yōu)點,已廣泛應(yīng)用于食品加工貯藏、果蔬保鮮等領(lǐng)域。本研究結(jié)果表明臭氧處理可導致互隔交鏈孢菌絲干癟萎縮和孢子凹陷褶皺,從而導致其在離體時表現(xiàn)為生長受到抑制,番茄果實上表現(xiàn)為致病力減弱,進而引起互隔交鏈孢產(chǎn)TeA、AOH、AME 3 種毒素能力的降低。同時,臭氧處理還能降解3 種交鏈孢毒素,隨臭氧質(zhì)量濃度的增加及作用時間的延長,其對交鏈孢毒素的降解能力逐漸增加,如TeA經(jīng)過20 mg/L臭氧處理15 min就可以被大量降解,降解率為63.5%,AOH及AME在20 mg/L時臭氧處理60 min,降解率可達70%以上。此外,眾多研究已表明臭氧對病原真菌的生長及其毒素積累均具有較強的抑制作用。因此,臭氧技術(shù)可以作為農(nóng)產(chǎn)品及其制品中互隔交鏈孢及其毒素污染的防治手段。本研究初步探索了臭氧技術(shù)對互隔交鏈孢及其產(chǎn)毒能力的影響,下一步將深入研究臭氧抑制互隔交鏈孢產(chǎn)毒的機理,鑒定臭氧降解交鏈孢毒素的降解產(chǎn)物,解析降解路徑并評價降解產(chǎn)物的安全性,以期為開展果蔬貯藏加工過程中利用臭氧防控交鏈孢毒素污染提供科學依據(jù)和技術(shù)支撐。

    猜你喜歡
    孢子臭氧菌絲
    羊肚菌母種培養(yǎng)基配方的優(yōu)化研究
    文印室內(nèi)臭氧散發(fā)實測分析及模擬
    中國被毛孢三種菌絲形態(tài)的超顯微特征觀察
    看不見的污染源——臭氧
    甘露醇對低溫下草菇菌絲的保護效應(yīng)研究
    利用臭氧水防治韭菜遲眼蕈蚊
    中國蔬菜(2016年8期)2017-01-15 14:23:43
    新型抗菌肽菌絲霉素純化工藝研究
    廣東飼料(2016年5期)2016-12-01 03:43:21
    鯽魚黏孢子蟲病的診斷與防治
    制作孢子印
    臭氧分子如是說
    黄色日韩在线| 国产亚洲欧美98| 别揉我奶头 嗯啊视频| 美女被艹到高潮喷水动态| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 日韩人妻高清精品专区| 久久久久久国产a免费观看| 亚洲精品粉嫩美女一区| 亚洲av熟女| 啦啦啦啦在线视频资源| 亚洲无线观看免费| 此物有八面人人有两片| 久久久精品欧美日韩精品| 精品久久久久久久末码| 一本精品99久久精品77| 国产乱人伦免费视频| 91av网一区二区| 免费大片18禁| 亚洲一区高清亚洲精品| 伊人久久精品亚洲午夜| 亚洲真实伦在线观看| 欧美精品国产亚洲| 国产精品久久久久久av不卡| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 国产午夜精品论理片| 男女啪啪激烈高潮av片| 我要看日韩黄色一级片| 又爽又黄无遮挡网站| 免费av观看视频| 国产乱人视频| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 国产麻豆成人av免费视频| 国内精品久久久久精免费| 中文亚洲av片在线观看爽| 草草在线视频免费看| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 啦啦啦啦在线视频资源| 在线观看舔阴道视频| 又粗又爽又猛毛片免费看| 亚洲熟妇熟女久久| 亚洲人成伊人成综合网2020| 成人永久免费在线观看视频| 国产男靠女视频免费网站| 亚洲无线在线观看| 欧美3d第一页| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 男女之事视频高清在线观看| 人妻久久中文字幕网| 欧美日韩国产亚洲二区| 精品久久久久久久久亚洲 | 国产精品亚洲一级av第二区| 日本精品一区二区三区蜜桃| 午夜激情欧美在线| 伦精品一区二区三区| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 精品久久国产蜜桃| 国产亚洲欧美98| 搡老熟女国产l中国老女人| 久久欧美精品欧美久久欧美| 亚洲精品在线观看二区| 国产黄色小视频在线观看| 久久久国产成人精品二区| 91在线观看av| 国产不卡一卡二| 成人午夜高清在线视频| 一本精品99久久精品77| 日韩人妻高清精品专区| 嫩草影院新地址| 国产精品伦人一区二区| 成人国产综合亚洲| 国产高清激情床上av| 男女视频在线观看网站免费| 真实男女啪啪啪动态图| 亚洲专区中文字幕在线| 久久久久久大精品| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 在线国产一区二区在线| 亚洲成人中文字幕在线播放| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 日本在线视频免费播放| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 国产一区二区激情短视频| 国产美女午夜福利| 国产精品人妻久久久久久| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产69精品久久久久777片| 国产成人一区二区在线| 亚洲精品成人久久久久久| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 免费黄网站久久成人精品| 成年版毛片免费区| 天堂动漫精品| 桃色一区二区三区在线观看| 欧美精品啪啪一区二区三区| 他把我摸到了高潮在线观看| 乱系列少妇在线播放| 精品国内亚洲2022精品成人| 最好的美女福利视频网| 最近中文字幕高清免费大全6 | 悠悠久久av| 精品久久国产蜜桃| 亚洲欧美精品综合久久99| 日本熟妇午夜| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 色精品久久人妻99蜜桃| 免费在线观看日本一区| 久久欧美精品欧美久久欧美| 免费看美女性在线毛片视频| 日韩欧美在线二视频| 亚洲成人免费电影在线观看| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 精品无人区乱码1区二区| 在线观看舔阴道视频| 五月伊人婷婷丁香| 给我免费播放毛片高清在线观看| 18+在线观看网站| 亚洲自拍偷在线| 成人午夜高清在线视频| 亚洲av成人精品一区久久| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 中文字幕熟女人妻在线| 亚洲不卡免费看| 免费观看在线日韩| 黄色视频,在线免费观看| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 色综合色国产| 99在线人妻在线中文字幕| 热99re8久久精品国产| 中文字幕高清在线视频| 国产 一区精品| 欧美黑人巨大hd| 久久国产精品人妻蜜桃| 亚洲精品亚洲一区二区| 亚洲黑人精品在线| 联通29元200g的流量卡| 日本色播在线视频| 午夜精品在线福利| 国产精品99久久久久久久久| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片 | 国产高清三级在线| 免费看a级黄色片| 久久6这里有精品| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 国内精品美女久久久久久| 九九热线精品视视频播放| 亚洲一区高清亚洲精品| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 免费看美女性在线毛片视频| 国产精品一区二区免费欧美| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 日韩高清综合在线| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 日日撸夜夜添| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 精品久久久久久久久av| 中文字幕免费在线视频6| 在线天堂最新版资源| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 99久国产av精品| 99视频精品全部免费 在线| 哪里可以看免费的av片| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 动漫黄色视频在线观看| 搡老妇女老女人老熟妇| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 免费看a级黄色片| 嫩草影院入口| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 精品久久久久久久末码| 尾随美女入室| 国产精品人妻久久久影院| 亚洲人成伊人成综合网2020| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 露出奶头的视频| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 狠狠狠狠99中文字幕| 观看免费一级毛片| 精品人妻1区二区| 啪啪无遮挡十八禁网站| 国产色婷婷99| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 成年女人毛片免费观看观看9| 欧美日韩综合久久久久久 | 十八禁国产超污无遮挡网站| 人人妻人人澡欧美一区二区| 成年人黄色毛片网站| 在线观看舔阴道视频| 久久99热这里只有精品18| 亚洲国产色片| 成年版毛片免费区| 偷拍熟女少妇极品色| 精品久久久久久久久久久久久| 精品日产1卡2卡| 九九在线视频观看精品| 国产伦人伦偷精品视频| 免费一级毛片在线播放高清视频| 一级a爱片免费观看的视频| 国产精华一区二区三区| 国产毛片a区久久久久| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 日本在线视频免费播放| 亚洲国产精品sss在线观看| 99久久精品国产国产毛片| 中文资源天堂在线| 久久99热这里只有精品18| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 白带黄色成豆腐渣| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 亚洲天堂国产精品一区在线| av在线观看视频网站免费| 国模一区二区三区四区视频| 少妇的逼水好多| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 免费黄网站久久成人精品| 国产高清视频在线播放一区| 国模一区二区三区四区视频| 看免费成人av毛片| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 最近最新中文字幕大全电影3| av天堂在线播放| 男人的好看免费观看在线视频| 搡老熟女国产l中国老女人| 在线免费观看的www视频| 欧美中文日本在线观看视频| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 在线观看舔阴道视频| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 搡老熟女国产l中国老女人| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 99国产极品粉嫩在线观看| 亚洲va在线va天堂va国产| 在线国产一区二区在线| 床上黄色一级片| 亚洲图色成人| 久久精品国产自在天天线| 国产麻豆成人av免费视频| 波野结衣二区三区在线| 日日干狠狠操夜夜爽| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产中年淑女户外野战色| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 99热精品在线国产| 色吧在线观看| 日韩欧美在线二视频| 亚洲精品在线观看二区| 国产精品美女特级片免费视频播放器| av.在线天堂| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 午夜视频国产福利| 欧美精品国产亚洲| 男女那种视频在线观看| 一a级毛片在线观看| 51国产日韩欧美| 在线天堂最新版资源| 日本爱情动作片www.在线观看 | 大型黄色视频在线免费观看| 亚洲最大成人手机在线| 国产精品98久久久久久宅男小说| 欧美zozozo另类| 久久久久久久久中文| 国产精品,欧美在线| 婷婷丁香在线五月| 无遮挡黄片免费观看| 熟女人妻精品中文字幕| 1000部很黄的大片| 国内精品宾馆在线| 一区二区三区激情视频| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 一个人看视频在线观看www免费| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 国产探花在线观看一区二区| 久久久久久久久大av| 91麻豆av在线| 美女大奶头视频| 熟女人妻精品中文字幕| 一进一出抽搐gif免费好疼| 色播亚洲综合网| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 淫秽高清视频在线观看| 成人精品一区二区免费| 日本精品一区二区三区蜜桃| 日本一本二区三区精品| 久久精品国产清高在天天线| 老司机福利观看| 国产av在哪里看| 日韩亚洲欧美综合| 日本黄大片高清| 夜夜爽天天搞| 亚洲性久久影院| 国产黄a三级三级三级人| 午夜久久久久精精品| 久久精品国产自在天天线| 成年免费大片在线观看| 神马国产精品三级电影在线观看| 久99久视频精品免费| 欧美三级亚洲精品| 国产精华一区二区三区| 在线观看66精品国产| 欧美激情在线99| av在线亚洲专区| 有码 亚洲区| 99热这里只有是精品50| 国产精品人妻久久久影院| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 久久精品影院6| 国产精品永久免费网站| 国产精品久久久久久精品电影| 色av中文字幕| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 精品无人区乱码1区二区| 一区二区三区高清视频在线| 1024手机看黄色片| 人妻夜夜爽99麻豆av| 免费观看的影片在线观看| 婷婷亚洲欧美| 日本 欧美在线| 国产毛片a区久久久久| 制服丝袜大香蕉在线| 中文字幕av在线有码专区| 深夜精品福利| 欧美一级a爱片免费观看看| 久久中文看片网| 亚洲第一电影网av| 我的女老师完整版在线观看| 真实男女啪啪啪动态图| 亚洲18禁久久av| 久久国产精品人妻蜜桃| 久久久久久伊人网av| 精品久久久久久成人av| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 欧美3d第一页| av国产免费在线观看| 国产单亲对白刺激| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 桃色一区二区三区在线观看| 精品人妻视频免费看| 免费在线观看成人毛片| 精品人妻1区二区| 免费在线观看成人毛片| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 男人的好看免费观看在线视频| 一级黄色大片毛片| 日韩高清综合在线| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 久久这里只有精品中国| 黄色丝袜av网址大全| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 欧美高清性xxxxhd video| 在线观看一区二区三区| 亚洲第一电影网av| 精品乱码久久久久久99久播| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 久久精品国产鲁丝片午夜精品 | 在现免费观看毛片| 成人av一区二区三区在线看| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 波多野结衣高清无吗| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 男女啪啪激烈高潮av片| 两人在一起打扑克的视频| 日韩欧美国产一区二区入口| 最新在线观看一区二区三区| 婷婷色综合大香蕉| 亚洲国产精品久久男人天堂| 香蕉av资源在线| 乱码一卡2卡4卡精品| 国产精品一及| 精品一区二区三区av网在线观看| 久久精品影院6| 免费人成在线观看视频色| 长腿黑丝高跟| 在线国产一区二区在线| 一个人免费在线观看电影| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 成人特级av手机在线观看| 少妇的逼水好多| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 国产免费男女视频| 亚洲国产精品成人综合色| 国语自产精品视频在线第100页| 91久久精品国产一区二区成人| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 丝袜美腿在线中文| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 亚洲最大成人手机在线| 亚洲专区中文字幕在线| 美女高潮的动态| 日本色播在线视频| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 久久久久久久久大av| av在线老鸭窝| 哪里可以看免费的av片| netflix在线观看网站| 欧美一区二区亚洲| 黄色配什么色好看| 国产精品久久视频播放| 色哟哟哟哟哟哟| 亚洲国产色片| 最好的美女福利视频网| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 日韩欧美免费精品| 伦理电影大哥的女人| 精品久久久久久久末码| 身体一侧抽搐| 一进一出抽搐动态| 国产精品福利在线免费观看| 亚洲avbb在线观看| 国产私拍福利视频在线观看| 国产探花在线观看一区二区| 国产精品精品国产色婷婷| 一个人看视频在线观看www免费| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 波野结衣二区三区在线| 真人一进一出gif抽搐免费| 欧美一区二区精品小视频在线| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 午夜福利在线在线| 人妻久久中文字幕网| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 国内精品久久久久精免费| 成人特级av手机在线观看| 国产中年淑女户外野战色| 午夜福利高清视频| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 精品久久久久久久久亚洲 | 久久久久久久午夜电影| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 亚洲七黄色美女视频| 黄色日韩在线| 麻豆成人午夜福利视频| 午夜福利18| 亚洲久久久久久中文字幕| 色吧在线观看| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 91在线精品国自产拍蜜月| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 亚洲四区av| 日本免费一区二区三区高清不卡| 欧美丝袜亚洲另类 | 亚洲人成伊人成综合网2020| 欧美bdsm另类| 真实男女啪啪啪动态图| 日韩强制内射视频| 国产毛片a区久久久久| 亚洲va在线va天堂va国产| 成人毛片a级毛片在线播放| 三级毛片av免费| 国产 一区精品| 黄色丝袜av网址大全| 天堂√8在线中文| 午夜日韩欧美国产| 久久久久久久精品吃奶| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 日韩亚洲欧美综合| 村上凉子中文字幕在线| 欧美国产日韩亚洲一区| 有码 亚洲区| 特级一级黄色大片| 在线观看午夜福利视频| 男女啪啪激烈高潮av片| 色av中文字幕| 十八禁网站免费在线| 在线观看舔阴道视频| 啪啪无遮挡十八禁网站| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 啦啦啦啦在线视频资源| 91麻豆精品激情在线观看国产| 中文字幕久久专区| 免费看美女性在线毛片视频| 女同久久另类99精品国产91| 精品人妻熟女av久视频| 黄片wwwwww| 观看免费一级毛片| 舔av片在线| 国语自产精品视频在线第100页| 午夜精品在线福利| 无遮挡黄片免费观看| 天堂影院成人在线观看| 欧美性猛交黑人性爽| 国产精品乱码一区二三区的特点| 久久久久九九精品影院| 亚洲精品亚洲一区二区| 国产久久久一区二区三区| 亚洲熟妇熟女久久| 国内精品一区二区在线观看| 精品欧美国产一区二区三| 亚洲精品在线观看二区| 高清在线国产一区| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 国产精品国产高清国产av| 男人的好看免费观看在线视频| 波多野结衣高清无吗| 亚洲不卡免费看| 亚洲精品粉嫩美女一区| 成人国产综合亚洲| 成人性生交大片免费视频hd| eeuss影院久久| 国产色婷婷99| а√天堂www在线а√下载| 亚洲成人免费电影在线观看| 国产视频内射| 国产精品免费一区二区三区在线| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片 | 日韩一本色道免费dvd| 亚洲欧美精品综合久久99| 久久久久久久久久黄片| 久久久久免费精品人妻一区二区| a在线观看视频网站| av天堂在线播放| 久久久久精品国产欧美久久久| 男女边吃奶边做爰视频| 看十八女毛片水多多多| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 亚洲在线自拍视频| 日本爱情动作片www.在线观看 | 精品久久久久久久久av| 少妇高潮的动态图| 国产人妻一区二区三区在| 精华霜和精华液先用哪个| 淫妇啪啪啪对白视频| 超碰av人人做人人爽久久| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 一级黄片播放器| 国产精品久久久久久精品电影| 日韩欧美在线乱码| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 亚洲真实伦在线观看| 国产大屁股一区二区在线视频| 国产精品爽爽va在线观看网站| 亚洲专区国产一区二区| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 99久久中文字幕三级久久日本| 久久久久免费精品人妻一区二区| 99久久精品国产国产毛片| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产精品一区二区免费欧美| 校园人妻丝袜中文字幕| 12—13女人毛片做爰片一| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 精品久久久久久久久av| h日本视频在线播放| 在线免费观看不下载黄p国产 | 免费一级毛片在线播放高清视频| 毛片一级片免费看久久久久 | 成年人黄色毛片网站| 一级a爱片免费观看的视频| 免费在线观看日本一区| 国产精品久久久久久av不卡| 欧美又色又爽又黄视频| 日韩欧美国产在线观看| 一级毛片久久久久久久久女| 欧美日韩黄片免| 国产精品久久久久久久久免| 五月玫瑰六月丁香| 少妇高潮的动态图| 午夜激情欧美在线| 免费电影在线观看免费观看| h日本视频在线播放| 欧美xxxx性猛交bbbb| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片 | 亚洲自拍偷在线| 国产色婷婷99| 夜夜爽天天搞| 国产男靠女视频免费网站| 亚洲在线自拍视频| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 国产高潮美女av| 亚洲人成网站在线播| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 亚洲中文字幕日韩| 人妻久久中文字幕网| 亚洲无线在线观看| 日本黄色视频三级网站网址| 亚洲精品456在线播放app | 不卡视频在线观看欧美| 乱系列少妇在线播放| 香蕉av资源在线| 日韩国内少妇激情av| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 亚洲av.av天堂| 伊人久久精品亚洲午夜| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产91精品成人一区二区三区| 日本熟妇午夜| 热99re8久久精品国产| 久久久久久久久久黄片| 欧美不卡视频在线免费观看| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产亚洲91精品色在线| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 啦啦啦啦在线视频资源| 国产精品,欧美在线| 国内精品一区二区在线观看| x7x7x7水蜜桃| 国产亚洲91精品色在线| .国产精品久久| 久久草成人影院| 色综合站精品国产| 亚洲电影在线观看av|