鐘雅云 楊 敏 何沁峰 劉思岐 王傲然 汪秋寬 武 龍
(大連海洋大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院 遼寧大連116023)
膳食纖維是食物中不能被人體內(nèi)源酶分解消化的植物性成分的總稱[1]。在以精制食品為主、過量攝入能量日趨普遍的當(dāng)今社會(huì),膳食纖維因能有效增進(jìn)健康,預(yù)防現(xiàn)代“文明病”的重要特性,被視為“第七大營養(yǎng)素”。大量研究證實(shí),合理攝入膳食纖維有助于改善消化道健康,輔助降血脂,調(diào)節(jié)血糖,控制體重等[2]。
大型海藻富含多糖類物質(zhì),被公認(rèn)為膳食纖維的優(yōu)質(zhì)來源。常見可食性海藻的總膳食纖維含量可達(dá)32.7%~74.6%[3]。近年來,海藻膳食纖維的提取、功能評(píng)價(jià)及應(yīng)用開發(fā)研究廣受關(guān)注[4]。我國是經(jīng)濟(jì)海藻養(yǎng)殖大國,特別是大型褐藻(如:海帶及裙帶菜)產(chǎn)量長期居世界首位。2015年全國海藻養(yǎng)殖總產(chǎn)量近209 萬t,其中海帶產(chǎn)量占67.6%[5]。作為我國褐藻工業(yè)的重要原料,海帶在用于提取褐藻膠等物質(zhì)后產(chǎn)生大量富含纖維質(zhì)殘?jiān)烧荚细芍氐?0%),這部分資源尚未得到有效開發(fā)利用[6]。
膳食纖維可分為水溶性膳食纖維(soluble dietary fiber,SDF)和水不溶性膳食纖維(insoluble dietary fiber,IDF)兩大類。一般認(rèn)為SDF 更多發(fā)揮調(diào)節(jié)代謝相關(guān)功能,更具生理活性;IDF 主要起促進(jìn)腸道蠕動(dòng)作用[7]。盡管如此,最近研究表明IDF 成分也可發(fā)揮諸如降血脂[8]、調(diào)節(jié)血糖[9]、抗炎[10]、抗氧化[11]等多種生理功能,因而正受到越來越多的關(guān)注。高等植物由來IDF 一般為細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)性成分,主要含纖維素、半纖維素及木質(zhì)素等[12],而大型海藻細(xì)胞壁不含賦予高等植物結(jié)構(gòu)強(qiáng)度以及降解拮抗性的芳香性高聚物——木質(zhì)素,其多糖類有效成分具有更高的酶可及性及反應(yīng)活性[13],并且更易得到分離純化[14]。目前,海藻與高等植物由來IDF 的功能特性差異及其組成、結(jié)構(gòu)與其功能特性之間的內(nèi)在聯(lián)系尚未得到深入研究。
本研究通過酶輔助化學(xué)法提取海帶和麩皮IDF,并對(duì)其主要膳食纖維功能特性進(jìn)行評(píng)價(jià)比較,旨在拓展優(yōu)質(zhì)膳食纖維資源,為海藻膳食纖維的開發(fā)利用提供依據(jù),并為海藻資源的高效、高值化、可持續(xù)開發(fā)利用提供思路。
干制海帶(Saccharina japonica),購自本地市場,產(chǎn)地大連;小麥(Triticum aestivum L.)麩皮(以下簡稱麩皮),由企業(yè)提供,產(chǎn)地吉林。原料用小型粉碎機(jī)粉碎,樣品密封保存于干燥器中備用。
α-淀粉酶(4 000 U/g),上海源葉生物科技有限公司;糖化酶(10 萬U/g),上海源葉生物科技有限公司;中性蛋白酶(10 萬U/g),上海源葉生物科技有限公司;鎘離子、鉛離子標(biāo)準(zhǔn)溶液,西化儀(北京)科技有限公司;鹽酸、無水乙醚、氫氧化鈉、冰醋酸、乙酰丙酮、高碘酸鉀等均為分析純?cè)噭?/p>
HC-1000Y2 高速組織搗碎機(jī),永康市綠可食品機(jī)械有限公司;HH-6 數(shù)顯恒溫水浴鍋,國華電器有限公司;單層玻璃反應(yīng)器,滎陽市中浮儀器設(shè)備有限公司;SCIENTZ-10N 冷凍干燥機(jī),寧波新芝生物科技股份有限公司;PHS-3C 精密pH 計(jì),上海精學(xué)科學(xué)儀器有限公司;721 型可見分光光度計(jì),上海光譜儀器有限公司;Optima 8000 電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀,美國PE 公司。
1.3.1 原料基本成分的測定 原料基本成分的測定主要參考食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)方法。水分:參考GB/T5009.3-2016 《食品中水分的測定》,采用直接干燥法測定[15]??偦曳郑簠⒖糋B/T5009.4-2016《食品中灰分的測定》,采用高溫灼燒法測定[16]。粗蛋白含量:參考GB/T5009.5-2016 《食品中蛋白質(zhì)的測定》,采用凱氏定氮法測定[17]。粗脂肪含量:參考GB/T5009.6-2016 《食品中脂肪的測定》,采用索氏抽提法測定[18]。淀粉含量:參考GB/T5009.9-2016《食品中淀粉的測定》,采用酶水解法測定[19],其中水解產(chǎn)生的還原糖采用3,5-二硝基水楊酸(DNS)法進(jìn)行定量[20]。
海帶中甘露醇含量采用分光光度法[21]測定;褐藻膠含量采用質(zhì)量法[22]測定。
1.3.2 不溶性膳食纖維的提取
1.3.2.1 海帶不溶性膳食纖維的提取 取5 g 海帶樣品,按固液比1∶30 加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的碳酸鈉溶液,在70 ℃條件下攪拌處理2 h,真空抽濾,以上步驟重復(fù)2 次。將所得濾渣用過量去離子水洗至中性,加入pH7.5 的檸檬酸鹽緩沖溶液及2 000 U/g 的中性蛋白酶,在固液比1∶10、45 ℃條件下酶解120 min,離心分離 (9 000 r/min,20 min),棄上清;殘?jiān)萌ルx子水充分洗滌,再以體積分?jǐn)?shù)0.35%的鹽酸在室溫下攪拌處理2 h,用去離子水抽濾,洗凈至中性后冷凍干燥,得海帶不溶性膳食纖維樣品,密封保存于干燥器中備用。
1.3.2.2 麩皮不溶性膳食纖維的提取 參考Garbelotti 等[23]的方法,并加以改進(jìn)。麩皮樣品用過量無水乙醚反復(fù)洗滌、抽濾,再以過量去離子水反復(fù)洗滌、抽濾;向?yàn)V渣中加入pH6.9 的檸檬酸鹽緩沖溶液及1 000 U/g 的α-淀粉酶,在固液比1∶10、60℃條件下酶解120 min,再以檸檬酸鹽緩沖溶液調(diào)節(jié)pH 值至4.5,加入1 000 U/g 的糖化酶在55 ℃條件下酶解120 min,對(duì)反應(yīng)物取樣加入I2-KI 溶液,確認(rèn)不變藍(lán)后離心分離,棄上清;殘?jiān)詐H7.5 檸檬酸鹽緩沖溶液洗滌、離心,加入1 200 U/g 中性蛋白酶,在固液比1∶10、45 ℃條件下酶解120 min;最后將所得殘?jiān)赃^量去離子水抽濾洗凈后冷凍干燥,得麩皮不溶性膳食纖維,密封保存于干燥器中備用。
1.3.3 不溶性膳食纖維功能特性分析
1.3.3.1 膨脹力 分別稱量0.5 g 凍干海帶及麩皮膳食纖維樣品于量筒中,加入50 mL 去離子水,劇烈振蕩,在37 ℃水浴條件下放置24 h,記錄床層體積變化,按下式計(jì)算樣品膨脹力[24]。
式中,V1——樣品初始床層體積(mL);V2——樣品最終床層體積(mL);M——樣品干重(g)。
1.3.3.2 持水力 分別稱量1.0 g 凍干樣品于已知質(zhì)量的50 mL 離心管中,加入蒸餾水至45 mL刻度線處,在37 ℃振蕩24 h,離心(5 000 r/min,10 min),棄上清并用濾紙吸干管壁殘留水分,稱量離心管加樣品最終量,按下式計(jì)算樣品持水力[24]。
式中,m1——樣品干 質(zhì)量(g);m2——離心管質(zhì)量(g);m3——離心管加樣品終質(zhì)量(g)。
1.3.3.3 持油力 分別稱量1.0 g 凍干樣品于已知質(zhì)量的50 mL 離心管中,加入食用油至45 mL刻度線處,在37 ℃振蕩24 h,離心(5 000 r/min,10 min),棄上層食用油并用濾紙吸干附著在管壁及樣品表面的油分,稱量離心管加樣品最終質(zhì)量,按下式計(jì)算樣品持油力[24]。
式中,m1——樣品初始質(zhì)量(g);m2——離心管質(zhì)量(g);m3——離心管加樣品終質(zhì)量(g)。
1.3.3.4 吸附重金屬離子能力 分別配制0.1~0.5 μg/mL 的鎘離子、鉛離子標(biāo)準(zhǔn)溶液,用電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀(ICP-OES)對(duì)標(biāo)樣進(jìn)行分析;設(shè)備主要參數(shù):等離子冷卻氣流量8.0 L/min,輔助氣體流速0.2 L/min,霧化器流量0.55 L/min,功率1.30 kW,觀測高度15,觀測方式為軸式,測定波長:228.802 nm(Cd)和220.353 nm(Pb);根據(jù)目標(biāo)元素信號(hào)強(qiáng)度及離子濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線[25]。
稱量1 g 凍干膳食纖維樣品于三角瓶中,分別加入50 μmol/L 的氯化鎘、氯化鉛溶液100 mL,于37 ℃水浴振蕩培養(yǎng)4 h,真空抽濾;濾液適當(dāng)稀釋并測鹽度合格后 (鹽度值應(yīng)小于1),使用ICPOES 在上述儀器參數(shù)條件下分析,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線確定目標(biāo)離子最終濃度,按下式計(jì)算樣品吸附金屬離子能力[26]。
式中,C1——目標(biāo)離子初始質(zhì)量濃度(μg/mL);C2——目標(biāo)離子最終質(zhì)量濃度(μg/mL);V——加入含目標(biāo)離子溶液的體積(mL);m——膳食纖維樣品質(zhì)量(g)。
通過成分分析,明確了本研究用海帶和小麥麩皮樣品的基本組成,結(jié)果見表1及表2。表1數(shù)據(jù)顯示:大型褐藻海帶含有較為豐富的礦物質(zhì)、甘露醇、褐藻膠,以及一定量的不溶性膳食纖維(IDF)和蛋白質(zhì),其脂肪類及淀粉類物質(zhì)含量可忽略不計(jì),證明海帶是一種低能量、高纖維的“功能性”食物原料。海帶樣品總膳食纖維含量(褐藻膠加不溶性膳食纖維)可達(dá)原料干質(zhì)量的32.7%,與文獻(xiàn)[3]報(bào)道的結(jié)果相符。當(dāng)海帶被直接食用時(shí),褐藻膠占總膳食纖維的大部分,其在消化道內(nèi)發(fā)揮可溶性膳食纖維(SDF)的生理功效;海帶不溶性膳食纖維含量相對(duì)較低,尚未引起足夠的研究關(guān)注。付慧等[8]對(duì)比了多肋藻(Costaria costata,大型褐藻)由來IDF 和SDF 降低高血脂模型小鼠血脂的功效,發(fā)現(xiàn)IDF 降血脂效果比SDF 顯著,且總膳食纖維中IDF 比例越高,降血脂作用越顯著。在我國,海帶被用于工業(yè)提取褐藻膠、甘露醇和碘等化學(xué)品[27],而提取過程產(chǎn)生的殘?jiān)懈患舜罅康睦w維類物質(zhì)[6],有望作為食物源不溶性膳食纖維添加成分得到進(jìn)一步開發(fā)利用。
小麥麩皮為子粒外側(cè)硬殼,是加工面粉過程的副產(chǎn)物。表2數(shù)據(jù)表明麩皮樣品成分與海帶差異顯著。麩皮作為高等植物由來生物質(zhì),主要含有由纖維素、半纖維素及木質(zhì)素組成的不溶性細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)性成分,這也由其高達(dá)78%(干基)的IDF含量所印證。由于麩皮緊貼胚乳,在加工過程中會(huì)帶入一定量的蛋白質(zhì)及淀粉(表2)。與文獻(xiàn)[28]、[29]報(bào)道的15%~20%的淀粉含量相比,本研究所得數(shù)據(jù)偏低,應(yīng)與原料品種及加工方式有關(guān)[30]。麩皮樣品中的灰分及脂肪含量相對(duì)較低。麩皮雖然不可直接食用,但其膳食纖維含量高,得到食品科技領(lǐng)域的廣泛關(guān)注,其可用于制備膳食纖維補(bǔ)充成分添加到膳食當(dāng)中,發(fā)揮調(diào)節(jié)脂肪代謝[31]、抗氧化[32]、益生元[33]、吸附[34],以及改變面制品加工特性與產(chǎn)品品質(zhì)[35-36]等作用。
表1 海帶樣品基本組成(%)Table 1 Chemical composition of kelp sample(%)
表2 小麥麩皮樣品的化學(xué)基本組成(%)Table 2 Chemical composition of wheat bran sample(%)
目前,不溶性膳食纖維的提取主要依據(jù)重量法原理,即通過酶及化學(xué)處理實(shí)現(xiàn)淀粉及蛋白質(zhì)等非目標(biāo)組分的去除,如基于美國分析化學(xué)家協(xié)會(huì)AOAC 991.43 的提取方法[37]。本研究采用酶輔助化學(xué)方法,針對(duì)原料成分特點(diǎn)對(duì)提取方法進(jìn)行改進(jìn),以盡可能減少對(duì)原料結(jié)構(gòu)的破壞,提升膳食纖維的功能特性。
如前所述,海帶中主要含有甘露醇、褐藻膠、蛋白質(zhì)及礦物質(zhì)等“雜質(zhì)”,而淀粉及脂肪等含量可忽略不計(jì)。本研究采用提取褐藻膠常用的弱堿處理實(shí)現(xiàn)褐藻酸鹽的溶解、分離。由圖1可以看出,以質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%以上的Na2CO3溶液在70 ℃下處理樣品2h,重復(fù)兩次后,不溶性膳食纖維的提取率趨于穩(wěn)定,判斷褐藻膠被完全去除。為減少樣品活性損失,保持其“天然”特性,在蛋白酶水解后未對(duì)樣品按文獻(xiàn)[38]中采用的含氯化合物漂白處理,最終得到的海帶不溶性膳食纖維呈灰褐色,占原料干重的8.5%,灰分(0.25±0.03)%(干基),未檢出蛋白質(zhì)。
本試驗(yàn)原料為市售食用干海帶。適于食用的海帶的纖維素含量一般較低,而工業(yè)用海帶的粗纖維含量高[39],如以工業(yè)提膠殘?jiān)鼮樵希赏〉酶叩牟蝗苄陨攀忱w維得率并降低提取成本。
在提取麩皮不溶性膳食纖維時(shí),鑒于樣品淀粉含量偏低,對(duì)提取條件進(jìn)行調(diào)整。按照預(yù)先測定的酶活力,研究確定淀粉酶及蛋白酶酶解過程的酶底比,控制酶用量。在所用淀粉酶酶解條件下,反應(yīng)結(jié)束后向酶解液及濾渣中加入I2-KI 溶液,均未觀察到顏色變藍(lán),表明淀粉被完全去除。所得殘?jiān)?jīng)中性蛋白酶酶解,得未經(jīng)化學(xué)漂白處理的麩皮不溶性膳食纖維,占原料干重的77.9%,提取率與文獻(xiàn)[40]報(bào)道的結(jié)果接近,且樣品中未檢出蛋白質(zhì)及淀粉。
為了評(píng)價(jià)兩種不溶性膳食纖維樣品的功能特性,首先考察樣品的膨脹力 (swelling capacity,SC)、持水力(Water holding capacity,WHC) 及持油力(Oil holding capacity,OHC),結(jié)果見圖2。
圖1 堿處理對(duì)海帶不溶性膳食纖維提取率的影響Fig.1 Effect of sodium carbonate treatment on extraction yield of insoluble dietary fiber from kelp sample
圖2 海帶與麩皮不溶性膳食纖維樣品的膨脹力、持水力及持油力Fig.2 Swelling,water-holding and oil-holding capacity of kelp and wheat bran IDF samples
膳食纖維在消化道內(nèi)吸水后膨脹,發(fā)揮填充、吸附、刺激腸道蠕動(dòng)等重要作用。膳食纖維與水分相互作用的能力一般通過其膨脹力和持水力來衡量,且兩個(gè)指標(biāo)間存在高度的相關(guān)性[41]。由圖2可見,海帶IDF 樣品的SC 及WHC 均為麩皮IDF 的近2 倍,兩種樣品的數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[29]、[42]報(bào)道的結(jié)果基本相符,表明前者與水分相互作用的能力明顯強(qiáng)于后者,其原因與海帶IDF 中不含木質(zhì)素等疏水性物質(zhì)有關(guān),尚待進(jìn)一步確認(rèn)。一些研究以大型褐藻為原料提取膳食纖維,據(jù)報(bào)道高于本研究數(shù)倍的SC 及WHC 值[43-45]。由分析報(bào)道的提取方法及提取率數(shù)據(jù),推測所得樣品中應(yīng)含有相當(dāng)量的SDF 成分——褐藻膠,而褐藻膠的存在會(huì)顯著提升膳食纖維SC 及WHC 水平[4,41,46],造成與本研究結(jié)果的差異。隨著海藻膳食纖維相關(guān)研究的不斷深入,在評(píng)價(jià)功能特性時(shí)有必要對(duì)SDF 及IDF加以區(qū)分。
在持油力方面,海帶IDF 樣品的表現(xiàn)明顯優(yōu)于麩皮IDF。向琴等[29]報(bào)道的麥麩IDF 持油力為4.57 g/g,與本研究結(jié)果接近。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,海藻由來膳食纖維因其組分的親水性,OHC 值一般在0.9~1.67 g/g,特別是當(dāng)SDF 成分(藻膠及其它多糖)含量較高時(shí),其值較低[42,46-47]。本研究中海帶IDF 樣品OHC 偏高的原因,除其中不含SDF 成分外,因相關(guān)領(lǐng)域尚未建立標(biāo)準(zhǔn)化的評(píng)價(jià)程序,故可能與樣品狀態(tài)及分析條件等有關(guān)。
以上結(jié)果表明,海帶不溶性膳食纖維樣品具有更高的膨脹力、持水力和持油力,有助其發(fā)揮其健康功效。此外,上述功能特性在食品加工中也具有重要的意義,可以起到改善加工特性及產(chǎn)品感官等作用[48]。
當(dāng)今社會(huì)環(huán)境問題備受矚目,水體及因生物富集而導(dǎo)致的食物原料重金屬含量超標(biāo)成為對(duì)人類健康的潛在威脅。在有毒重金屬中,鉛和鎘一直是研究重點(diǎn),膳食纖維成分對(duì)其吸附作用早有報(bào)道[49]。本研究通過ICP-OES 方法考察兩種IDF 樣品對(duì)鉛離子和鎘離子的吸附能力。表3為目標(biāo)元素的ICP-OES 標(biāo)準(zhǔn)曲線,可見離子濃度與信號(hào)強(qiáng)度線性關(guān)系良好。不同IDF 樣品對(duì)目標(biāo)離子的吸附能力結(jié)果如圖3所示。
海帶IDF 樣品對(duì)Pb2+的吸附能力顯著高于小麥麩皮IDF,對(duì)Cd2+的吸附能力二者接近。楊賢慶等[26]對(duì)比了小麥麩皮與4 種海藻由來膳食纖維對(duì)Pb2+、Cd2+及Hg2+的吸附作用,發(fā)現(xiàn)各膳食纖維對(duì)重金屬離子的吸附能力從大到小依次為:海帶、麒麟菜、麥麩、江蘺及馬尾藻。雖然結(jié)論基本一致,但是該文獻(xiàn)報(bào)道的吸附力數(shù)據(jù)遠(yuǎn)高于本研究結(jié)果。例如:其海帶膳食纖維對(duì)Pb2+的吸附力達(dá)160 mg/g。分析造成差異的主要原因有二,本研究選擇了相對(duì)較低的標(biāo)準(zhǔn)溶液初始濃度,遠(yuǎn)低于上述文獻(xiàn)報(bào)道水平,然而已超出我國生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)[50]規(guī)定的鉛及鎘離子質(zhì)量濃度上限(0.01 mg/L 及0.005 mg/L)千余倍。另外,根據(jù)文獻(xiàn)[49]、[51]、[52]報(bào)道,當(dāng)膳食纖維中存在SDF 組分(藻膠、果膠等),其對(duì)上述重金屬離子的吸附能力會(huì)明顯提升,而本研究所制備樣品不含SDF 組分,是導(dǎo)致數(shù)據(jù)偏低的另一原因。Nawirska[52]和Hu 等[53]均報(bào)道纖維素對(duì)Pb2+的吸附力要顯著高于木質(zhì)素,這也可以解釋海帶IDF 更好地吸附Pb2+的表現(xiàn)。兩種IDF 樣品對(duì)Pb2+的吸附作用總體要強(qiáng)于Cd2+,與楊賢慶等[26]的報(bào)道一致,應(yīng)與生物質(zhì)與不同金屬離子間的相互作用機(jī)制有關(guān)[54]。此外,Rose 等[49]研究表明,SDF(褐藻膠、果膠、瓊脂等)的體外重金屬離子的吸附能力較強(qiáng),然而其存在會(huì)延長離子在大鼠體內(nèi)的滯留時(shí)間,進(jìn)而導(dǎo)致重金屬在骨質(zhì)、肝臟、腎臟內(nèi)沉積量的顯著增加;飼喂纖維素則可有效促進(jìn)重金屬離子的排出,減少其體內(nèi)沉積量。以上分析表明,海帶IDF 對(duì)有毒重金屬離子具有較強(qiáng)的吸附能力,同時(shí)有助于促進(jìn)此類物質(zhì)從體內(nèi)排出,減輕其對(duì)人體的危害。
表3 鉛及鎘離子的ICP-OES 標(biāo)準(zhǔn)曲線Table 3 ICP-OES calibration equations for cadmium and lead ions
圖3 海帶與麩皮不溶性膳食纖維樣品吸附鉛離子及鎘離子的能力Fig.2 Cadmium and lead ion-binding capacity of kelp and wheat bran IDF samples
海帶中含有的不溶性膳食纖維可以通過相對(duì)簡單的提取方法,在較為溫和的處理?xiàng)l件下得到分離。與高等植物不溶性膳食纖維相比,海帶不溶性膳食纖維具有優(yōu)良的功能特性,其膨脹力、持水力、持油力和對(duì)有毒重金屬離子的吸附能力均較高。如能將其作為海洋源健康食品原料加以開發(fā)利用,可望發(fā)揮良好的增進(jìn)健康,預(yù)防疾病功效。海藻由來不溶性膳食纖維的更多生理功能還有待進(jìn)一步挖掘。我國作為海帶養(yǎng)殖加工大國,如何將膳食纖維開發(fā)與現(xiàn)有褐藻工業(yè)有機(jī)結(jié)合,進(jìn)一步提高資源利用率與產(chǎn)品附加值,應(yīng)得到更多研究關(guān)注。