梔子黃色素提取工藝及品質(zhì)評(píng)價(jià)

付滿玲1 周 科2 劉珉甬3 李亞玲4

1.西南醫(yī)科大學(xué)護(hù)理器械研發(fā)實(shí)驗(yàn)室，四川 瀘州 646000； 2.四川眾鼎中藥發(fā)展有限公司，四川 瀘州 646000； 3.瀘州岷宏科技有限公司，四川 瀘州 646000； 4.西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院藥學(xué)部，四川 瀘州 646000

梔子是茜草科(Rubiaceae)植物梔子(GardeniajasminoidesEllis)的干燥成熟果實(shí)，具有護(hù)肝、利膽、降壓等多種藥理作用，是我國傳統(tǒng)中藥，在我國四川等地廣泛分布。梔子黃色素是從梔子中提取的一種優(yōu)良水溶性天然色素，屬類胡蘿卜素，其在梔子成熟果實(shí)的含量為3%～8%[1]。梔子黃色素主要成分是藏花素，其著色自然；具有具有清熱去火、利膽護(hù)肝、降低膽固醇等功效[2]；在人體內(nèi)可以轉(zhuǎn)化為維生素A，因此它是一種集著色、營養(yǎng)和保健等功能為一體的天然色素，在醫(yī)藥和食品行業(yè)中具有廣泛應(yīng)用[3]。梔子黃色素粗品在保藏或使用過程中容易發(fā)生褪色或綠變現(xiàn)象，其主要原因是色素中存在大量的梔子苷，其在葡萄糖酶或蛋白酶的作用下與氨基酸反應(yīng)生成梔子藍(lán)色素，從而導(dǎo)致梔子黃色素綠變現(xiàn)象的發(fā)生，由此限制了梔子黃色素產(chǎn)品的廣泛應(yīng)用[4]。因此，研究梔子黃色素的提取和純化工藝對(duì)于提高梔子黃色素的品質(zhì)，以及實(shí)現(xiàn)梔子黃色素的高效優(yōu)質(zhì)生產(chǎn)具有重要意義。

1 材料

1.1 藥材 梔子由四川眾鼎中藥發(fā)展有限公司提供，經(jīng)西南醫(yī)科大學(xué)稅丕先教授鑒定為GardeniajasminoidesEllis的成熟果實(shí)。

1.2 試劑 HPD-100A大孔樹脂：安徽三星樹脂科技有限公司。

1.3 儀器 RE52CS-1旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器廠；SP-1901紫外可見分光光度計(jì)，上海光譜儀器有限公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 梔子黃色素提取工藝優(yōu)化

2.1.1 前處理 梔子經(jīng)剔除雜物、次果，于45 ℃烘干至恒重，粉碎，過40目篩，密封避光保存?zhèn)溆谩?/p>

2.1.2 梔子黃色素的提取工藝

2.1.2.1 乙醇濃度 精密稱取5份梔子果粗粉，每份1 g。分別加入15%、35%、55%、75%、95%乙醇10 mL加熱回流提取1 h，補(bǔ)足減失的重量，過濾，旋干，轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶中并以純水溶解和定容，440 nm 處測(cè)吸光度。結(jié)果以15%、35%、55%、75%、95%乙醇分別加熱回流提取時(shí)，以樣品吸光度為指標(biāo)，5份梔子果粗粉在440nm處的吸光度分別為0.22、0.35、0.50、0.44和0.32，因此選取第3份樣品，即55%的乙醇溶液作為提取溶劑。

2.1.2.2 料液比 精密稱取5份梔子果粗粉，每份1 g。分別以料液比1∶6、1∶8、1∶10、1∶12和1:14(m∶v)加入55% 的乙醇溶液，回流提取1 h，補(bǔ)足減失的重量，過濾，旋干，轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶中并以純水溶解和定容，440 nm 處測(cè)吸光度。結(jié)果以料液比1∶6、1∶8、1∶10、1∶12和1∶14分別提取時(shí)，藏紅花素在440 nm處的吸光度分別為0.15、0.36、0.52、0.45和0.36，因此選取料液比為1∶10提取梔子黃色素。

2.1.2.3 提取時(shí)間 精密稱取5份梔子果粗粉，每份1 g。均以料液比1:10加入55% 的乙醇溶液，分別回流提取0.5、1、1.5、2、2.5h，補(bǔ)足減失的重量，過濾，旋干，轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶中并以純水溶解和定容，440 nm處測(cè)吸光度。結(jié)果提取時(shí)間分別為0.5、1、1.5、2、2.5 h時(shí)，藏紅花素在440 nm處的吸光度分別為0.1、0.51、0.62、0.50和0.45，因此選取1.5 h提取梔子黃色素。

2.1.2.4 提取次數(shù)的考察 精密稱取3份梔子果粗粉，每份1 g。以55%乙醇作溶劑，料液比1∶10，分別提取1、2、3次，每次 1.5 h，補(bǔ)足減失的重量，過濾，合并濾液，旋干，轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶中并以純水溶解和定容，440 nm處測(cè)吸光度。結(jié)果分別提取1、2、3次時(shí)，藏紅花素在440 nm處的吸光度分別為0.38、0.75和0.64，因此選取提取2次提取梔子黃色素。

2.1.3 梔子黃色素的最佳提取工藝 根據(jù)2.1.2項(xiàng)下試驗(yàn)結(jié)果，選擇最優(yōu)條件下提取方法，故本試驗(yàn)選用55%乙醇，料液比1∶10，加熱回流提取2次，每次1.5 h，作為梔子黃色素最佳提取工藝。

2.1.4 最佳提取工藝驗(yàn)證 精密稱取5份梔子果粗粉，每份1 g，分別加入55%乙醇10 mL回流提取2次，每次1.5 h，補(bǔ)足減失的重量，過濾，合并濾液，旋干，轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶中并以純水溶解和定容，于440 nm處測(cè)吸光度。結(jié)果5次重復(fù)實(shí)驗(yàn)的平均吸光度0.76，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為1.01%，表明該提取工藝合理可行。

2.2 梔子黃色素精制品與色價(jià)測(cè)定

2.2.1 梔子黃色素的提取 精密稱取10 g梔子果粗粉，加入55%乙醇100 mL加熱回流提取2次，每次1.5 h，補(bǔ)足減失的重量，過濾，合并濾液，旋干,干燥，即得梔子黃色素粗品。將粗品溶于200 mL水中，濕法上柱于已經(jīng)過預(yù)處理的HPD-100A大孔樹脂柱，先以水洗，再分別以20%和75%乙醇洗脫，收集75%乙醇洗脫液，減壓回收溶劑，干燥，即得梔子黃色素精制品。

2.2.2 梔子黃色素色價(jià)和OD值的測(cè)定

梔子黃色素OD值為238 nm 和440 nm 處吸光度的比值。

OD=A238 nm/A440 nm

梔子黃色素粗品和精制品均按國標(biāo)GB7912-2010 法測(cè)定色價(jià)和OD值。測(cè)得的梔子黃色素粗品的色價(jià)為78.2，OD值為1.3；梔子黃色素精制品的色價(jià)為360，OD值為0.25。因此，利用HPD-100A大孔樹脂柱色譜法可以大大地提高梔子黃色素的品質(zhì)。

3 討論

梔子主要含藏花素和梔子苷，藏花素是梔子黃色素的主要成分，而梔子苷的存在常會(huì)引起梔子黃色素的綠變。梔子苷和藏花素分別在 238 nm和440 nm 處有最大吸收峰，梔子苷的最大吸光值A(chǔ)238 nm與藏花素的最大吸光值 A440 nm 比值即OD比值小于0.4時(shí)，可防止梔子黃色素的綠變[5]。因此，優(yōu)化梔子黃色素提取工藝，提高色素提取效率，減少其中梔子苷的含量，從而提高色素的純度，對(duì)于提高梔子黃色素的品質(zhì)具有重要意義。

本研究考察了梔子加熱回流提取時(shí)乙醇濃度、料液比、提取時(shí)間和提取次數(shù)對(duì)梔子黃色素提取率的影響，結(jié)果最佳提取條件為:乙醇濃度55%、料液比1∶10、提取時(shí)間1.5 h 、提取次數(shù)2次。初步提取后，利用HPD-100A大孔樹脂柱色譜法進(jìn)行精制，依次采用水、20%乙醇和75%乙醇洗脫，其中用水洗可除掉氨基酸、多肽、無機(jī)鹽、多糖等水溶性雜質(zhì)；采用20%乙醇溶液洗脫可除掉梔子苷；最后用75% 乙醇洗脫即得梔子黃色素，經(jīng)減壓回收溶劑，并干燥即得梔子黃色素精制品。

大孔樹脂吸附精制梔子黃色素具有吸附速度快、吸附容量大、選擇性好、簡單高效等優(yōu)點(diǎn)，適合制備高色價(jià)的梔子黃色素。有研究表明，HPD-100A型大孔樹脂適宜純化梔子黃色素，精制后得到的產(chǎn)品質(zhì)量較高[4]。本試驗(yàn)利用HPD-100A大孔樹脂柱色譜法精制梔子黃色素，精制后的梔子黃色素的色價(jià)由原來的78.2 提高到360，OD值由原來的1.3降到0.25， HPD-100A大孔樹脂柱色譜法可以大大地提高梔子黃色素的品質(zhì)。