甘草-黃芪組方中美白成分的提取及活性檢測

權(quán)彥 馬天柱 王梟洋

摘? ? ? 要：利用超聲提取技術(shù)提取甘草中有效美白成分甘草酸和甘草總黃酮、黃芪中有效美白成分黃芪總黃酮和黃芪總皂苷，將4種提取物按比例進(jìn)行配伍，發(fā)現(xiàn)（甘草酸∶甘草總黃酮（8∶1））∶（黃芪總黃酮配伍黃芪總皂苷（4∶1））為1∶2時(shí)，配伍溶液有較高的清除羥自由基能力，同時(shí)具有顯著的防曬效果;基于此，與甘油、去離子水等配制成天然、保濕、美白潤膚水。

關(guān)? 鍵? 詞：超聲提取;甘草;黃芪;羥自由基;配伍

中圖分類號：TQ 895? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識碼： A? ? ? ?文章編號： 1671-0460（2019）09-1945-04

Abstract： The effective whitening ingredients including glycyrrhizic acid and total flavonoids were extracted from Radix Glycyrrhizae，and astragalus total flavonoids and astragalus total saponins were extracted from Astragalus Radix Astragalus by ultrasonic extraction technology. The 4 kinds of extracts were mixed in proportion.When （glycyrrhizic acid∶glycyrrhizic total flavonoids =8∶1） ∶（astragalus total flavonoids∶astragalus total saponins =4∶1） was 1∶2， prepared solution had a higher ability to scavenge hydroxyl radicals and had a significant sunscreen effect.So the prepared solution can be used to compound natural moisturizing and whitening lotion by mixing glycerine and deionized water.

Key words： Ultrasonic extraction;Licorice;Astragalus membranaceus;Hydroxyl radical;Compatibility

隨著生活水平的提高，人民追求美的方式更加多樣化，對天然藥物開發(fā)的美白護(hù)膚品關(guān)注度也更高[1]。目前新一代美白護(hù)膚品更注重將多種美白活性物質(zhì)復(fù)配以產(chǎn)生增效作用[2]。而從中草藥中提取的美白成分因其對皮膚溫和、刺激性小、藥性穩(wěn)定、安全性高、藥力持久等特點(diǎn)，逐漸成為化妝品行業(yè)的熱點(diǎn)[3]。本次實(shí)驗(yàn)擬采用甘草與黃芪組方，制備具有美白保濕于一體及抗氧化作用等多效合一的美白保濕水。

1? 實(shí)驗(yàn)部分

1.1? 實(shí)驗(yàn)儀器

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（西安予輝）、紫外可見分光光度計(jì)（上海天美uv1102）、高功率數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司KQ-400KDE型）。

1.2? 實(shí)驗(yàn)試劑及藥材

乙醇（95%）、甲醇、乙酸乙酯、冰乙酸、甲酸、氨水均購于天津市天力化學(xué)試劑有限公司，硫酸購于洛陽昊華化學(xué)試劑有限公司，水楊酸、硫酸亞鐵、過氧化氫購于天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，試劑均為分析純。

甘草酸標(biāo)準(zhǔn)品（批號：P01J8F38991）、黃芪皂苷標(biāo)準(zhǔn)品（批號：J20F7T9819）均購于上海源葉生物科技有限公司。乙醇（95%）、甲醇、乙酸乙酯，水楊酸、硫酸亞鐵、過氧化氫購于天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，試劑均為分析純。

2? 實(shí)驗(yàn)方法

2.1? 甘草中有效成分的提取

2.1.1? 甘草酸的提取

通過查閱相關(guān)文獻(xiàn)，趙茜[4]等在超聲強(qiáng)化甘草酸的提取根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)備進(jìn)行方案改進(jìn)，最終確定甘草酸的提取方法為：過3號篩的甘草粗粉用0.5%氨水（固液比1∶20）提取1 h，過濾，重復(fù)1次，合并濾液;加入95%乙醇使含醇量至75%，過夜沉淀，過濾，濾液在50～60 ℃濃縮至五分之一;濃縮液用3.5 moL/l濃硫酸調(diào)pH至2～3，沉淀離心，50～60 ℃下干燥，得到甘草酸粗品。

2.1.2? 甘草總黃酮的提取[5]

甘草粉碎過20目篩，分別加入10倍、8倍量50%乙醇，400 W超聲提取1 h，過濾，合并濾液，沉淀過夜;將提取液減壓濃縮至原來的三分之一，離心，合并上清液，調(diào)pH至5，上樣至活化過的AB-8大孔樹脂柱中，分別用水、60%乙醇洗脫，收集60%乙醇洗脫液，回收乙醇后得到甘草總黃酮。

2.2? 甘草中有效成分的鑒定[6]

2.2.1? 對照品溶液的配置

精密稱取干燥恒重的甘草酸標(biāo)準(zhǔn)品14 mg，置于10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，使成1.4 mg/mL的溶液，作為對照品溶液。

2.2.2? 供試品溶液的配置

用10%乙醇溶解定量2.1.1提取的甘草酸粗品粉末，使成2.0 mg/mL的溶液，作為供試品溶液。

2.2.3? 薄層鑒定

取上述溶液各適量點(diǎn)在硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯：甲酸：冰醋酸：水（15∶1∶1∶2）為展開劑，展開，取出晾干，噴10%硫酸-乙醇顯色，在105 ℃烘至斑點(diǎn)清晰。供試品與對照品在同一位置有相同顏色的斑點(diǎn)見圖1。

2.2.4? 甘草黃酮的化學(xué)鑒定

鹽酸-鎂粉反應(yīng)：提取的甘草總黃酮加適量甲醇溶解，制成供試品溶液，取供試品溶液5 mL，加入少許鎂粉，再滴加幾滴濃鹽酸，振搖，溶液顯紅色，表明含有黃酮類物質(zhì)。

2.3? 黃芪中有效成分的提取

2.3.1? 黃芪總皂苷的提取[7]

黃芪粗粉加入15倍量75%乙醇，超聲提取40 min，濾過除去沉淀，濾液減壓濃縮至0.5 g/mL，濃縮液上處理好的AB-8大孔樹脂柱，依次用0.2%氫氧化鈉、40%乙醇、95%乙醇洗脫，收集95%乙醇洗脫液，低溫濃縮至干加水復(fù)溶離心，取沉淀與60 ℃干燥3 h至恒重，得黃芪總皂苷。

2.3.2? 黃芪總黃酮的提取[8]

黃芪粉碎過三號篩加入10倍量75%乙醇，400 W超聲提取30 min，過濾，重復(fù)1次，合并濾液，過夜沉淀，抽濾;濾液減壓濃縮至浸膏狀，干燥粉碎后得到黃芪總黃酮粗粉。

2.4? 黃芪中有效成分的鑒定

2.4.1? 對照品溶液的配置

精密稱取干燥恒重的黃芪總皂苷標(biāo)準(zhǔn)品10 mg，置于10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，使成1.0 mg/mL的溶液，作為對照品溶液。

2.4.2? 供試品溶液的配置

用甲醇溶解定量提取的黃芪總皂苷，使成1.8 mg/mL的溶液，作為供試品溶液。

2.4.3? 薄層鑒定

取上述溶液適量點(diǎn)在硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯：甲酸：冰醋酸：水（15∶1∶1∶2）為展開劑，展開，取出晾干，噴10%硫酸-乙醇顯色，在105 ℃烘至斑點(diǎn)清晰。供試品與對照品在同一位置有相同顏色的斑點(diǎn)見圖2。

2.4.4? 黃芪黃酮的化學(xué)鑒定

提取的黃芪總黃酮加適量甲醇溶解，制成供試品溶液。進(jìn)行鹽酸-鎂粉反應(yīng)，反映后溶液顯紅色，證明含有黃酮類成分。

2.5? 清除羥自由基能力測定[9]

利用fenton反應(yīng)，測定甘草酸清除羥自由基作用。即在試管中加入一定濃度的待測液，按順序加入0.3 ml 6 mmol/mL FeSO4、1.5 mL 6 mmol/mL水楊酸、蒸餾水至4.8 mL，搖勻，最后加入0.3 mL 6 mmol/mL H2O2，靜置10 min后與510 nm處測定吸光度A。

根據(jù)公式計(jì)算清除率：

清除率=（A0-A1+A2）/A0

式中：A0——未加提取液時(shí)溶液的吸光度;

A1——加提取液時(shí)溶液的吸光度;

A2——提取液的吸光度。

將提取的有效成分粗品溶于50%乙醇中，甘草酸分別制成0.15、0.175、0.2、0.225、0.25 mg/mL溶液;甘草總黃酮制成0.004、0.008、0.01、0.04、0.08 mg/mL的溶液;黃芪總皂苷制成0.60、0.75、1.25、1.50、1.75 mg/mL的溶液，黃芪總黃酮制成0.6、0.75、1.25、1.5、1.75 mg/mL的溶液，按上述方法測定其清除率，結(jié)果見圖3-圖9。

當(dāng)甘草酸濃度為0.225 mg/mL時(shí)清除羥自由基作用最顯著見圖3。

當(dāng)甘草總黃酮濃度為0.04 mg/ml時(shí)清除羥自由基作用最顯著見圖4。

當(dāng)黃芪總黃酮濃度為1.5 mg/mL時(shí)清除羥自由基作用最顯著見圖5。

當(dāng)黃芪總皂苷濃度為2.5 mg/mL時(shí)清除羥自由基作用最顯著見圖6。

2.6? 有效成分最佳配伍比例

將甘草、黃芪中提取的有效成分按比例配伍，按清除羥自由基能力的強(qiáng)弱找出最佳配伍比例（圖7-9）。

2.7? 防曬效果測定[10]

參照文獻(xiàn)葛仙米活性成分的提取及護(hù)膚性能的研究，通過測定溶液在波長320～400 nm的透光率，計(jì)算該溶液對紫外線的吸收率。吸收率在80%以上時(shí)具有防曬效果，吸收率在90%以上時(shí)防曬效果顯著。

3? 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1? 各提取成分最佳濃度確定

根據(jù)各有效成分清除羥自由基能力，優(yōu)選出最佳濃度。比例為甘草酸∶甘草總皂苷為8∶1，黃芪總黃酮∶黃芪總皂苷為4∶1。甘草∶黃芪為1∶2時(shí)甘草黃芪組方的有效成分清除羥自由基能力最強(qiáng)。

3.2? 各成分及配伍溶液的防曬效果驗(yàn)證

甘草、黃芪中有效成分及其配伍溶液其紫外吸收率結(jié)果顯示在320～400 nm區(qū)間中，各組分溶液均有不同程度的防曬效果，且配伍溶液的紫外吸收率均高于90%，即甘草與黃酮配伍有顯著的防曬效果。

3.3? 保濕水保濕能力

按比例配伍的提取液、甘油、去離子水配伍的保濕水的保濕能力如圖10所示。

結(jié)果顯示保濕率：甘油>保濕水>去離子水，保濕水有較好保濕性能。

4? 討 論

本實(shí)驗(yàn)提示甘草、黃芪中的有效成分均有抗氧化性、抗過敏、防止皮膚老化且安全無毒，可美容護(hù)膚，二者配伍使用，抗氧化作用增強(qiáng)，防曬效果顯著。

甘草、黃芪提取物配伍甘油、去離子水制成的保濕水，pH為5.6，在皮膚可接受的范圍內(nèi)，不會傷害皮膚。保留了甘油良好的保濕能力，加上去離子水，分子量小易于皮膚吸收，發(fā)揮出良好的保濕能力。加之提取物有一定的防曬效果，制得的保濕水能集美白保濕于一體。但保濕水的配方相對簡單，希望后面的研究能改進(jìn)配伍，找到更合適的輔料制出更穩(wěn)定安全易吸收的美白制劑。

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