金龜子綠僵菌破壞素A與5種殺蟲(chóng)劑混配對(duì)蘋(píng)果黃蚜的聯(lián)合毒力

郭卓瓊 弓奇田 張建珍

摘要 為了更科學(xué)合理地選擇防治蘋(píng)果黃蚜的藥劑，采用浸漬法測(cè)定了蟲(chóng)生真菌毒素-破壞素A和殺蟲(chóng)劑1.8%阿維菌素EC、4.5%高效氯氰菊酯EC、10%吡蟲(chóng)啉WP、40%啶蟲(chóng)脒WG、10%烯啶蟲(chóng)胺AS等對(duì)蘋(píng)果黃蚜的毒力，結(jié)果顯示，上述藥劑對(duì)蘋(píng)果黃蚜的致死中濃度（LC50）分別為0.016、0.221、0.221、2.242、9.793和8.247 mg/L，表明破壞素A對(duì)蘋(píng)果黃蚜具有較高的毒力，1.8%阿維菌素EC和4.5%高效氯氰菊酯EC次之。進(jìn)一步篩選破壞素A與殺蟲(chóng)劑的最佳混配比例，結(jié)果表明，當(dāng)破壞素A和1.8%阿維菌素EC以4∶6、5∶5、6∶4、7∶3、8∶2、9∶1的比例混配時(shí)均具有顯著的增效作用，混配比為9∶1時(shí)共毒系數(shù)為176.36，毒力效果最佳。生物殺蟲(chóng)劑破壞素A與阿維菌素的混配施用在蘋(píng)果黃蚜的防治中具有較好的應(yīng)用前景。

關(guān)鍵詞 蘋(píng)果黃蚜; 破壞素A; 農(nóng)藥混配; 毒力測(cè)定

中圖分類(lèi)號(hào)： S 435 ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： B ?DOI： 10.16688/j.zwbh.2018429

Abstract In order to reasonably choose insecticides against Aphis citricola， toxicity of Metarhizium anisopliae destruxin A， abamectin 1.8% EC， beta-cypermethrin 4.5% EC， imidacloprid 10% WP， acetamiprid 40% WG and 10% nitenpyram AS was determined by insect dipping method. The results showed that the median lethal concentrations （LC50） were 0.016， 0.221， 0.221， 2.242， and 9.793 mg/L and 8.247 mg/L， respectively. M.anisopliae destruxin A had the highest insecticidal activity， followed by abamectin 1.8% EC and beta-cypermethrin 4.5% EC. Furthermore， the optimal proportion of destruxin A and insecticides was determined. Destruxin A and abamectin 1.8% EC at the proportion from 4∶6 to 9∶1 had a significant synergistic effect. When the proportion was 9∶1， the co-toxicity was the highest with the co-toxicity coefficient of 176.36. The mixture of the two biological insecticides has good application prospect for controlling A.citricola in the field.

Key words Aphis citricola; destruxin A; pesticides mixture; toxicity test

蘋(píng)果黃蚜Aphis citricola van der Goot又名繡線菊蚜，屬半翅目Hemiptera蚜科Aphididae，分布于北美、日本、朝鮮以及中國(guó)，在我國(guó)廣泛分布于陜西、山西、內(nèi)蒙古、河北、河南等地區(qū)[1]。蘋(píng)果黃蚜可對(duì)蘋(píng)果、沙果、海棠等果樹(shù)造成嚴(yán)重危害。我國(guó)北方果樹(shù)種植較多，因此，蘋(píng)果黃蚜是北方常見(jiàn)的果樹(shù)害蟲(chóng)[2]。蘋(píng)果黃蚜的若蚜、成蚜常常聚集在較嫩的樹(shù)梢和樹(shù)葉背面，在吸食樹(shù)葉汁液的過(guò)程中破壞植物細(xì)胞，使果樹(shù)生長(zhǎng)失去平衡。受害果樹(shù)樹(shù)葉向背面彎曲皺縮;嚴(yán)重時(shí)整枝樹(shù)枝死亡，甚至全株枯亡，果品品質(zhì)下降[3]。

破壞素（destruxin）是由金龜子綠僵菌Metarhizium anisopliae產(chǎn)生的一類(lèi)六元環(huán)縮肽化合物，是一類(lèi)環(huán)境友好型生物源農(nóng)藥，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的種類(lèi)高達(dá)39種[4]，研究表明，破壞素具有多種生物活性和很多重要的功能，比如免疫抑制、抗病毒以及抗增殖等[5]。破壞素具有廣譜的殺蟲(chóng)活性，可以通過(guò)飼喂、注射的方式進(jìn)入昆蟲(chóng)體內(nèi)，對(duì)半翅目、直翅目、鱗翅目、鞘翅目等多種昆蟲(chóng)具有拒食作用和胃毒作用[5-6]。由于目前破壞素生產(chǎn)成本仍較高，所以破壞素單劑只用于室內(nèi)毒力測(cè)定，在大田試驗(yàn)中主要與常規(guī)化學(xué)殺蟲(chóng)劑復(fù)配使用，達(dá)到化學(xué)農(nóng)藥減施增效的目的。如破壞素與甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽（甲維鹽）混配對(duì)西花薊馬Frankliniella occidentalis的聯(lián)合毒力明顯高于單劑[5];1.5%甲維·綠僵菌素懸浮劑在有效劑量2.4 g/hm2下對(duì)甘藍(lán)斜紋夜蛾Spodoptera litura的田間藥效最長(zhǎng)持效期可達(dá)14 d[7];2%阿維·綠僵菌素懸浮劑對(duì)朱砂葉螨Tetranychus cinnabarinus有較好的生物活性[8]。

在蘋(píng)果黃蚜A.citricola的防治過(guò)程中，化學(xué)農(nóng)藥的大量使用，導(dǎo)致農(nóng)藥殘留超標(biāo)，果品品質(zhì)下降，同時(shí)使得蘋(píng)果黃蚜產(chǎn)生了抗性，出現(xiàn)了防治效果逐年減弱的現(xiàn)象。為了更加有效地防治蘋(píng)果黃蚜，降低農(nóng)藥殘留，延緩害蟲(chóng)的抗藥性，本研究測(cè)定了破壞素A與阿維菌素、高效氯氰菊酯、吡蟲(chóng)啉等農(nóng)藥混配對(duì)蘋(píng)果黃蚜的毒力，篩選出破壞素A與化學(xué)農(nóng)藥混用的最佳復(fù)配比例，為破壞素復(fù)配制劑的開(kāi)發(fā)、蘋(píng)果黃蚜的防治提供參考，對(duì)減少化學(xué)農(nóng)藥的使用量，提高果品品質(zhì)，保證食品安全，保護(hù)生態(tài)環(huán)境、生產(chǎn)無(wú)公害或綠色食品具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試藥劑

1.8%阿維菌素乳油（abamectin），山東惠民中聯(lián)生物科技有限公司;4.5%高效氯氰菊酯乳油（beta-cypermethrin），江蘇克勝集團(tuán)股份有限公司;10%吡蟲(chóng)啉可濕性粉劑（imidacloprid），山東麒麟農(nóng)化有限公司;10%烯啶蟲(chóng)胺水劑（nitenpyram），山東惠民中聯(lián)生物科技有限公司;40%啶蟲(chóng)脒水分散粒劑（acetamiprid），山東濱農(nóng)科技有限公司。

破壞素A標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)于Sigma-Aldrich公司，純度為96.5%，試驗(yàn)所用破壞素A溶液參照胡瓊波等[9]的方法制備。

1.1.2 供試害蟲(chóng)

2017年5月在山西省太原市山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院試驗(yàn)田，選擇栽培管理?xiàng)l件一致的蘋(píng)果園（品種為‘富士），于試驗(yàn)當(dāng)天采集帶有蘋(píng)果黃蚜的嫩梢、嫩葉，帶回備用。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 藥劑毒力測(cè)定

供試試劑用丙酮配制成母液，然后再將藥劑等比稀釋到試驗(yàn)濃度（表1）。稀釋溶液盡量在通風(fēng)櫥或者超凈工作臺(tái)中進(jìn)行。稀釋后的溶液可放置在50 mL離心管中，于4℃冰箱中保存，備用。配制的所有溶液放置不得超過(guò)一周，以避免溶液污染等因素造成試驗(yàn)結(jié)果的不準(zhǔn)確性。

采用浸漬法測(cè)定藥劑對(duì)蘋(píng)果黃蚜的毒力。將帶有蘋(píng)果黃蚜的嫩葉（梢）用鑷子夾住，浸入不同濃度的藥液中5～10 s后取出，迅速用吸水紙吸去多余藥液，挑選個(gè)體大小一致的無(wú)翅蚜放于鋪有保濕濾紙的一次性培養(yǎng)皿中飼養(yǎng)，并用吸水性較好的脫脂棉球包裹葉柄以防嫩葉（梢）失水，用扎有透氣孔的保鮮膜覆蓋培養(yǎng)皿。每個(gè)濃度重復(fù)3次，每次重復(fù)30頭蘋(píng)果黃蚜，以清水為空白對(duì)照。24 h后觀察記錄蘋(píng)果黃蚜死亡情況，用毛筆輕觸蟲(chóng)體，不動(dòng)則判定為死亡。用SPSS軟件計(jì)算致死中濃度LC50、斜率和標(biāo)準(zhǔn)誤差等數(shù)據(jù)。

1.2.2 篩選最佳的混配組合

根據(jù)單劑毒力測(cè)定的結(jié)果，將破壞素A分別與1.8%阿維菌素乳油、4.5%高效氯氰菊酯乳油、10%吡蟲(chóng)啉可濕性粉劑、40%啶蟲(chóng)脒水分散粒劑、10%烯啶蟲(chóng)胺水劑進(jìn)行混配，混配比例為1∶5、1∶2、1∶1、2∶1、5∶1。利用所得到的數(shù)據(jù)計(jì)算毒力比率。毒力比率（toxicity ratio：TR）小于0.75為減效作用;毒力比率在0.75～1.25之間為相加作用;毒力比率大于1.25為增效作用[5]。

毒力比率=實(shí)際死亡率/預(yù)期死亡率;

預(yù)期死亡率=MRA×PA+MRB×PB。

其中，MRA代表A農(nóng)藥LC50下實(shí)際死亡率，PA代表A農(nóng)藥所占比例;MRB代表B農(nóng)藥LC50下實(shí)際死亡率，PB代表B農(nóng)藥所占比例。

1.2.3 最佳的混配比例篩選

根據(jù)1.2.2中毒力測(cè)定結(jié)果，選出毒力最強(qiáng)的混配組合進(jìn)行配比篩選?；炫錆舛冗x擇兩種藥劑的LC50，按照1∶9、2∶8、3∶7、4∶6、5∶5、6∶4、7∶3、8∶2、9∶1的比例混配，采用浸漬法測(cè)定混劑對(duì)蘋(píng)果黃蚜的毒力，從中篩選出最佳的混配比例?；炫渌巹┑亩玖τ霉捕鞠禂?shù)（CTC）來(lái)表示。共毒系數(shù)小于80為拮抗作用，共毒系數(shù)在80到120之間為相加作用，共毒系數(shù)大于120為增效作用。

混配藥劑的共毒系數(shù)采用孫云沛法計(jì)算[10]。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同藥劑對(duì)蘋(píng)果黃蚜的毒力

各藥劑對(duì)蘋(píng)果黃蚜的毒力測(cè)定結(jié)果（表2）表明，破壞素A、1.8%阿維菌素EC、4.5%高效氯氰菊酯EC、10%吡蟲(chóng)啉WP、40%啶蟲(chóng)脒WG、10%烯啶蟲(chóng)胺AS對(duì)蘋(píng)果黃蚜的LC50分別是0.016、0.221、0.221、2.242、9.793、8.247 mg/L;說(shuō)明蘋(píng)果黃蚜對(duì)破壞素A最敏感，其次是4.5%高效氯氰菊酯EC和1.8%阿維菌素EC，然后是10%吡蟲(chóng)啉WP，而對(duì)10%烯啶蟲(chóng)胺AS和40%啶蟲(chóng)脒WG敏感性較差; 4.5%高效氯氰菊酯EC和1.8%阿維菌素EC，10%烯啶蟲(chóng)胺AS和40%啶蟲(chóng)脒WG對(duì)蘋(píng)果黃蚜LC50的95%置信區(qū)間有重疊 （表2）;表明4.5%高效氯氰菊酯EC和1.8%阿維菌素EC，10%烯啶蟲(chóng)胺AS和40%啶蟲(chóng)脒WG對(duì)蘋(píng)果黃蚜的毒力差異不顯著。

2.2 最佳混配組合篩選結(jié)果

從表3中可以看出，破壞素A分別與1.8%阿維菌素EC、4.5%效氯氰菊酯EC、40%啶蟲(chóng)脒WG混配時(shí)，當(dāng)混配比例為1∶5和1∶2時(shí)表現(xiàn)為相加作用，其余均為增效作用;破壞素A與10%吡蟲(chóng)啉WP混配表現(xiàn)為增效作用的比例分別是2∶1和5∶1，破壞素A和10%烯啶蟲(chóng)胺AS混配表現(xiàn)為增效作用的比例分別是1∶1、2∶1和5∶1，其他的表現(xiàn)為相加作用。5組混配組合中，綜合各項(xiàng)因素初篩到最佳的混配組合為破壞素A與1.8%阿維菌素EC，其次是破壞素A與4.5%高效氯氰菊酯EC。

2.3 最佳混配比例篩選結(jié)果

根據(jù)孫云沛提出的共毒系數(shù)法計(jì)算破壞素A與1.8%阿維菌素EC混配不同配比對(duì)蘋(píng)果黃蚜的聯(lián)合毒力結(jié)果見(jiàn)表4。從表中可知，混配比例為1∶9時(shí)共毒系數(shù)是76.89，兩者之間為拮抗作用;混配比例為2∶8和3∶7時(shí)共毒系數(shù)分別為83.83和91.25，兩者表現(xiàn)為相加作用;其他幾組配比均為增效作用，其中配比為9∶1時(shí)共毒系數(shù)值為176.36，增效最明顯。

3 結(jié)論與討論

不同類(lèi)型的殺蟲(chóng)劑適用于不同類(lèi)的昆蟲(chóng)，尤其是高效氯氰菊酯、阿維菌素，都是近些年來(lái)防治果蔬害蟲(chóng)的主力殺蟲(chóng)劑，具有高效、低毒等優(yōu)點(diǎn)。破壞素作為一種生物源綠色殺蟲(chóng)劑越來(lái)越受到關(guān)注，本研究使用的破壞素A對(duì)蘋(píng)果黃蚜具有較高的毒力，其LC50為0.016 mg/L，對(duì)蘋(píng)果黃蚜的防治效果明顯優(yōu)于市售高效低毒化學(xué)合成農(nóng)藥，如阿維菌素和高效氯氰菊酯。破壞素的作用方式多樣，具有胃毒作用、觸殺作用、拒食作用，本試驗(yàn)采用浸漬法進(jìn)行毒力測(cè)定，證明了破壞素A對(duì)蘋(píng)果黃蚜具有觸殺作用，其他作用方式還需要進(jìn)一步研究。由于破壞素的生產(chǎn)成本較高，目前只能通過(guò)與常規(guī)殺蟲(chóng)劑混配來(lái)使用。另一方面，由于大量化學(xué)農(nóng)藥的頻繁使用已導(dǎo)致蘋(píng)果黃蚜對(duì)多種農(nóng)藥產(chǎn)生了抗性，農(nóng)藥的混用也是解決這一問(wèn)題的有效途徑。本研究將破壞素A與不同的化學(xué)殺蟲(chóng)劑混配之后，發(fā)現(xiàn)對(duì)蘋(píng)果黃蚜具有較高防效的組合是破壞素A與阿維菌素。王興民等[5]將破壞素與不同的農(nóng)藥進(jìn)行混配，發(fā)現(xiàn)破壞素與甲維鹽混用對(duì)西花薊馬的聯(lián)合毒力最佳，這表明破壞素與阿維菌素或甲維鹽混配后對(duì)取食植物汁液的害蟲(chóng)具有很好的防治效果。共毒系數(shù)是用來(lái)衡量混劑是否具有增效作用、相加作用和拮抗作用的指標(biāo)，本研究中，當(dāng)破壞素A與阿維菌素的比例為2∶8和3∶7時(shí)表現(xiàn)出明顯的相加作用，比例為4∶6時(shí)具有顯著地增效作用（CTC=164.01），在兩者以9∶1混配時(shí)，增效作用最佳（CTC=176.36）。破壞素與阿維菌素都屬于生物源殺蟲(chóng)劑，對(duì)環(huán)境友好，這兩種藥劑混配使用對(duì)于大幅減少化學(xué)農(nóng)藥的使用，提高防治效果，降低害蟲(chóng)抗藥性的發(fā)生具有重要意義。但是由于目前破壞素的產(chǎn)量不高，造成成本偏高，從成本以及使用方法等方面考慮，建議以4∶6的比例進(jìn)行混配。

本研究的試驗(yàn)結(jié)果為蘋(píng)果黃蚜的綠色高效防治提供了理論依據(jù)，但由于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)飼養(yǎng)與田間實(shí)際情況的差異，以及試驗(yàn)方法等因素的影響，其在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)應(yīng)用中的效果還需田間藥效試驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證。目前國(guó)內(nèi)外學(xué)者已經(jīng)找到控制綠僵菌毒素分泌的相關(guān)基因，通過(guò)對(duì)綠僵菌的改造以及破壞素制備工藝的優(yōu)化，相信很快就可以降低破壞素的生產(chǎn)成本并運(yùn)用到農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，為害蟲(chóng)綠色防控提供有力支持，為農(nóng)業(yè)生產(chǎn)可持續(xù)發(fā)展保駕護(hù)航。

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（責(zé)任編輯： 楊明麗）