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    CD97和CD55在三陰性乳腺癌中的表達及其臨床意義*

    2019-11-22 01:49:54鄔攀余幼林劉程浩沈浩元戴一菲胡超華周宏眾武慶林
    關(guān)鍵詞:配體陰性受體

    ,鄔攀 ,余幼林 ,劉程浩 ,沈浩元,戴一菲,胡超華,周宏眾,武慶林

    (武漢科技大學(xué)附屬孝感醫(yī)院 1.普外科,2.病理科,湖北 孝感 432000;3.溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 甲狀腺乳腺外科,浙江 溫州 325000)

    三陰性乳腺癌(triple negative breast cancer, TNBC)是一類雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)及人類表皮生長因子受體2(human epidermal growth factorreceptor-2, HER-2)表達為陰性的乳腺癌,占所有乳腺癌病理類型的15%~20%,總體預(yù)后較差[1-2]。TNBC缺乏臨床治療的有效靶點,因此探索TNBC相關(guān)發(fā)生、發(fā)展機制尤為重要。CD97及CD55作為跨膜蛋白的黏附分子受體及配體,在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用[3-4]。研究顯示,CD97和CD55在直腸癌[5]、膽囊癌[6]及膽管癌[7]中高表達,并與臨床預(yù)后相關(guān)。本研究通過對TNBC組織中CD97和CD55的表達進行檢測,分析其與TNBC臨床病理特征的關(guān)系,探討其在TNBC發(fā)展中的作用。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    選取2016年6月—2018年6月在武漢科技大學(xué)附屬孝感醫(yī)院進行手術(shù)并病理檢查證實為TNBC的70例患者的組織蠟塊及完整病例資料,同時選取50例切除腫瘤標(biāo)本周圍正常乳腺組織(距腫瘤邊緣≥5 cm)作為對照組。所有患者為女性,年齡21~78歲,中位年齡43.5歲;全部患者術(shù)前未進行新輔助化療;所有患者免疫組織化學(xué)檢測ER、PR及HER-2為陰性;對免疫組織化學(xué)檢測HER-2為陽性(++)的患者同時進行FISH檢測,排除HER-2陽性患者。臨床分期:Ⅰ期14例,Ⅱ期39例,Ⅲ期17例;組織學(xué)分級:Ⅰ級20例,Ⅱ級39例,Ⅲ級11例;腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者35例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35例;脈管癌栓38例,脈管無癌栓32例;Ki-67高表達45例,低表達25例。本研究通過醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn),患者簽署知情同意書。

    1.2 方法

    兔抗CD97多克隆抗體(13071-1-AP)及兔抗CD55單克隆抗體(26580-1-AP)采用Envision二步法,免疫組織化學(xué)試劑盒Proteintech Group Brand購自武漢珈源生物醫(yī)學(xué)工程有限公司,工作濃度均為1:1 000),CD97及CD55分別以已知的淋巴瘤作陽性對照,用磷酸鹽緩沖液代替一抗作陰性對照。細胞質(zhì)、細胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒判定為陽性染色。嚴(yán)格按免疫組織化學(xué)法試劑盒說明書進行操作。染色結(jié)果由2位病理醫(yī)師進行隨機閱片。在400倍視野下,每張切片隨機取5個視野,每個視野隨機計數(shù)100個腫瘤細胞,采用二次計分法計算目的蛋白的相對表達量。細胞膜或細胞漿內(nèi)出現(xiàn)黃或棕黃色顆粒為染色陽性。參照Remmele半定量計數(shù)的方法進行結(jié)果評分:免疫反應(yīng)評分(IRS)=陽性細胞百分率×染色強度。陽性細胞<10%為1分,10%~<51%為2分,51%~<80%為3分,≥80%為4分;染色強度等級:陰性為0分,弱陽性為1分,中度陽性為2分,強陽性為3分;將兩者的結(jié)果綜合分析:IRS≥2為陽性表達,IRS>6為高表達,IRS≤6為低表達。

    1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

    數(shù)據(jù)分析采用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料以率(%)表示,比較用χ2檢驗;相關(guān)分析用Spearman法,P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 CD97與CD55在TNBC和正常乳腺組織中的表達

    CD97與CD55蛋白染色定位于細胞質(zhì)及細胞膜,在癌組織中高表達,在正常乳腺組織中低表達。TNBC組CD97和CD55蛋白陽性表達率與對照組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),TNBC組高于對照組。另外可見CD97及CD55在癌組織中部分高表達在細胞間質(zhì)、腫瘤中央表達較少。見表1和圖1。

    2.2 CD97、CD55蛋白表達與TNBC臨床病理特征的關(guān)系

    CD97、CD55蛋白的表達與患者年齡、組織學(xué)分級無關(guān)(P>0.05),與Ki-67表達、腫瘤大小、臨床分期、脈管癌栓及腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)。見表2。

    表1 兩組CD97和CD55蛋白陽性表達率比較 例(%)

    圖1 兩組CD97和CD55蛋白的表達 (免疫組織化學(xué)×400)

    表2 不同影響因素TNBC患者CD97和CD55蛋白陽性表達率比較 例(%)

    2.3 CD97和CD55蛋白表達的相關(guān)性

    TNBC中CD97表達強陽性30例,中度陽性15例,弱陽性18例,陰性7例;CD55表達強陽性28例,中度陽性14例,弱陽性15例,陰性13例,Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示,兩者陽性表達率呈正相關(guān)(rs=0.334,P=0.005)。

    3 討論

    腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是多基因、多步驟、多階段的病理過程,轉(zhuǎn)移是腫瘤的最根本惡性特征,也是腫瘤患者的最主要死亡原因[8];腫瘤細胞的進展包括黏附特性的改變,癌細胞與基底膜、細胞間質(zhì)緊密附著,基底膜的降解,腫瘤血管生成,腫瘤細胞遷移等過程,其中黏附分子在腫瘤的進展中起重要作用。

    CD97屬于黏附分子受體的跨膜蛋白,通過胞外的EGF樣功能區(qū)與細胞外基質(zhì)成份或其他細胞表面分子結(jié)合,發(fā)揮黏附作用,通過7次跨膜區(qū)介導(dǎo)激素受體功能傳遞信號,是一個具有細胞黏附及信號傳導(dǎo)雙重作用蛋白[3]。CD55為CD97的配體,屬于膜結(jié)合型補體調(diào)節(jié)蛋白,通過抑制補體攻膜復(fù)合物的形成,從而使腫瘤細胞逃脫補體攻擊。相關(guān)動物、細胞、臨床實驗研究表明,CD97分子的表達與腫瘤生長、遷移、侵襲相關(guān)[9-12],并且研究至CD97亞基水平。AUST等[13]表明,CD97在惡性腫瘤中的陽性表達與腫瘤的浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征相關(guān),是腫瘤治療及預(yù)后的標(biāo)志物。另外,CD55在胃間質(zhì)瘤、結(jié)腸癌中高表達并與腫瘤的臨床病理特征相關(guān),可表明CD55在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起相應(yīng)作用[14-15]。結(jié)合筆者的研究結(jié)果,在TNBC組織中CD97和CD55蛋白陽性表達率與正常乳腺組織相比較有差異,在癌組織中高表達與上述研究結(jié)論一致,提示CD97及CD55在腫瘤的進展中起一定的作用;另外,CD97蛋白表達在細胞膜及細胞外間質(zhì),瘤體中央?yún)^(qū)表達較少,表明腫瘤細胞可能利用CD97作為黏附性受體與周圍細胞及間質(zhì)增強識別環(huán)境的能力,通過“芽生”不斷地向外侵襲、浸潤及轉(zhuǎn)移。

    CD97與CD55兩者表達在TNBC中呈正相關(guān),表明CD97與CD55在腫瘤表達具有一致性。CD97與CD55以受體及配體結(jié)合的形式參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展,并與TNBC腫瘤的大小、Ki-67表達、脈管癌栓、臨床分期及腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān),并且腫瘤越大、Ki-67表達越強、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率越高、臨床分期越高,CD97與CD55蛋白表達越強。綜上表明CD97與CD55以受體及配體復(fù)合體參與腫瘤的遷徙、浸潤、轉(zhuǎn)移,可能的機制為:①CD55為補體調(diào)節(jié)蛋白,在腫瘤中高表達,是保護腫瘤細胞免遭補體介導(dǎo)的溶解破壞,在腫瘤免疫中起重要作用;另外,有研究表明,CD55直接與腫瘤細胞的運動、血管生成、腫瘤細胞的侵襲、轉(zhuǎn)移相關(guān)[16]。HOLLA等[17]研究表明,CD55與前列腺素E2表達相關(guān),而前列腺素E2可促進腫瘤侵襲及轉(zhuǎn)移;抑制CD55基因的表達可影響腫瘤細胞的增殖,可影響腫瘤的細胞周期[18]。②CD97根據(jù)胞外其N端糖基化位點及數(shù)量不同,可分為CD97EGF和CD97Stalk,這2種表型可直接影響腫瘤細胞增殖、遷徙、細胞周期[19];另有研究顯示:CD97在腫瘤細胞中的表達與MMPs和β-catenin相關(guān):MMPs表達升高一般與腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移相關(guān),β-catenin與腫瘤細胞的遷移和侵襲相關(guān)[9,20]。③CD97與其配體CD55結(jié)合后可能激活細胞核相關(guān)信號通路和細胞間質(zhì)相關(guān)信號,促進腫瘤細胞黏附性改變、侵襲、轉(zhuǎn)移[21]。

    綜上所述,CD97及其配體CD55高表達與TNBC的大小、Ki-67表達、脈管癌栓、臨床分期及腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān),表明CD97與CD55可能與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān),參與腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移,為腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)研究提供新的方向。

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